子宫内膜异位症患者血清与腹腔液中肿瘤坏死因子α及白细胞介素6的测定
作者：李斌 金福明 杨来春 朱关珍
单位：李斌(200011 上海医科大学妇产科医院妇科)；金福明(200011 上海医科大学妇产科医院妇科)；杨来春(现在上海医科大学附属中山医院妇产科)；朱关珍(200011 上海医科大学妇产科医院妇科)
关键词：子宫内膜异位症；细胞活素类；肿瘤坏死因子；白细胞介素6；腹腔镜手术
中华妇产科杂志000312 【摘要】 目的 了解子宫内膜异位症(内异症)患者血清及腹腔液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的水平以及在腹腔镜保守性手术治疗后的变化。方法 收集内异症Ⅰ、Ⅱ期及Ⅲ、Ⅳ期患者各10例(共20例)的腹腔镜手术前后的血清和腹腔液，并以经腹腔镜检查确诊为与内异症无关病例10例为对照，应用放射免疫双抗体夹心法与放射免疫固相包被法分别测定其TNF-α及IL-6水平。结果 内异症患者血清和腹腔液TNF-α、IL-6水平，均与疾病分期呈正相关(r值分别为：血清：0.80，0.52；腹腔液：0.79，0.49；P均<0.05)，且随腹腔镜保守性手术后内异灶的清除而有明显下降。结论 血清和腹腔液TNF-α、IL-6水平对术后随访、监测及手术效果的评价有重要价值。
, 百拇医药
Evaluation of Tumor Necrosis Factor-alpha and Interleukin-6 Levels in Serum and Peritoneal Fluid of Patients with Endometriosis
LI Bin*, JIN Fuming*, YANG Laichun, et al.
* Department of Obstetrics, Hospital of Obstetrics and Gynecology, Shanghai Medical University, Shanghai 200011, China
【Abstract】 Objectives To evaluate the levels of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α)and interleukin-6 (IL-6) before and after conservative laparoscopic surgery in patients with endometriosis. Methods The TNF-α and IL-6 levels in serum and peritoneal fluid of 20 endometriotic patients and 10 control patients were determined by radioimmunoassay. Results Significant parallel relationship existed between the stage of endometriosis and the TNF-α and IL-6 levels in serum and peritoneal fluid in endometriosis patients (r values: serum: 0.80,0.52; peritoneal fluid: 0.79,0.49, P<0.05). After clearance of endometriosis foci with laparoscopic conservative surgery, the TNF-α and IL-6 levels decreased significantly. Conclusion Measuring TNF-α and IL-6 level may have important value in postoperative follow-up, surveillance and evaluation of the effectiveness of surgery.
, 百拇医药
【Key words】 Endometriosis; Cytokines;Tumor necrosis factor;Interleukin-6; Laparoscopic surgery
细胞因子是由免疫活性细胞等合成和分泌的一类介导炎症和免疫反应的多肽类蛋白，在宿主抵御组织损伤过程中起重要作用，涉及机体内许多生理和病理的复杂过程，与临床许多重要疾病的发生和转归密切相关[1]。我们测定了子宫内膜异位症(内异症)患者血清和腹腔液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平，以了解在血清与腹腔液内TNF-α、IL-6水平之间的关系，并随访观察腹腔镜术后其水平的变化，以期作为内异症保守性手术后的随访监测及判断手术有效性的指标。
资料与方法
一、研究对象
1.内异症组：1997年7至12月在我院经腹腔镜手术确诊为内异症的患者，20例，年龄20～40岁，半年内未接受激素类药物治疗。按1985年美国生殖协会分期标准(R-AFS)分期：Ⅰ、Ⅱ期10例，Ⅲ、Ⅳ期10例。
, 百拇医药
2.对照组：收集同期住院经腹腔镜检查诊断为与内异症无关病例10例作为对照组，年龄24～35岁。其中盆腔未见明显异常5例、多囊卵巢综合征2例、中肾管囊肿1例、卵巢单纯性囊肿2例。
二、方法
1. 标本收集：腹腔镜手术前在月经周期的卵泡期取内异症组和对照组患者的外周血2 ml，同时从腹腔镜下取腹腔液2 ml，术后3～4个月在月经周期的卵泡期取内异症组患者的外周血2 ml，并在B超监视下行后穹窿穿刺取腹腔液1～2 ml(共穿刺16例，成功14例)。标本以3 500 r/min离心10 min，取上清液分2管贮存在-20℃冰箱内待测。
2.血清、腹腔液TNF-α、IL-6测定：TNF-α采用放射免疫双抗体夹心法测定 (放射免疫测定盒购自中外合资上海长征医学科学有限公司)；IL-6采用放射免疫固相包被法测定(药盒由比利时Medgenix Diagnostics公司提供)。
, 百拇医药
三、统计学方法
实验数值采用t检验，将TNF-α、IL-6测定值与R-AFS评分作直线相关分析。
结果
一、血清和腹腔液TNF-α、IL-6的水平
血清TNF-α水平在Ⅰ、Ⅱ期、Ⅲ、Ⅳ期内异症患者与对照组患者之间两两比较，差异均有显著性(P<0.05)；腹腔液TNF-α以及血清、腹腔液IL-6水平，Ⅰ、Ⅱ期内异症患者与对照组相比，差异无显著性(P>0.05)；Ⅲ、Ⅳ期内异症患者与对照组及Ⅰ、Ⅱ期内异症患者比较，差异均有显著性(P<0.05)；对照组中有8例血清检测不到IL-6。见表1。
表1 两组患者血清和腹腔液TNF-α、IL-6 的水平比较(ng/L，
±s) 组别
, http://www.100md.com
总
例
数
血清
腹腔液
TNF-α
IL-6
TNF-α
IL-6
内异症组
Ⅰ、Ⅱ期
10
1 624±277
, http://www.100md.com
54±91
1 534±277
259±〓379
Ⅲ、Ⅳ期
10
2 116±249
164±138
2 236±392
1 088±1 115
对照组
10
1 300±295
, 百拇医药
3± 6
1 432±523
72± 85
二、R-AFS评分与血清、腹腔液TNF-α、IL-6水平的关系
内异症患者R-AFS评分与血清、腹腔液TNF-α、IL-6水平呈直线相关，r值分别为血清：0.80，0.52，腹腔液：0.79，0.49(P均<0.05)。
三、腹腔镜保守性手术治疗前后TNF-α、IL-6水平的变化
Ⅰ、Ⅱ期内异症患者血清TNF-α及IL-6水平手术前后相比，差异均无显著性(P>0.05)，而Ⅲ、Ⅳ期内异症患者血清TNF-α和IL-6水平手术前后相比，差异均有显著与极显著性(P<0.05，P<0.001)；而腹腔液TNF-α、IL-6水平手术前后相比，差异均有显著与极显著性(P<0.05，P<0.001)。见表2。
, http://www.100md.com
表2 内异症患者手术前后血清和腹腔液TNF-α、IL-6水平变化(ng/L，±s) 期别
血清
腹腔液
例数
TNF-α
IL-6
例数
TNF-α
IL-6
术前
术后
, 百拇医药
术前
术后
术前
术后
术前
术后
Ⅰ、Ⅱ期
7
1 541±259
1 442±299
21±24
2± 5
7
, http://www.100md.com
1 614±288
1 196±288
156± 102
79±73
Ⅲ、Ⅳ期
7
2 186±263
1 627±456
134±37
38±47
7
2 319±406
, 百拇医药
1 156±152
1 431±1 183
158±66
讨论
一、内异症患者血清及腹腔液中TNF-α、IL-6的水平
TNF-α是由免疫活性细胞等合成和分泌的一类介导炎症和免疫反应的多肽类蛋白。本研究发现,内异症患者血清及腹腔液TNF-α水平随内异症期别的增加而升高，且与R-AFS评分呈正相关。说明两者均随病情加重而升高[2]。IL-6是急性炎症反应的主要标志之一，具有多种生物学活性。Berek等[3]发现,70%的正常人血清IL-6无法测出。本研究对照组10例中8例血清IL-6水平为0，而内异症患者血清、腹腔液中IL-6水平随内异症期别的增加而升高，而且与R-AFS评分呈正相关，说明血清和腹腔液中IL-6水平同样随病情加重而升高。由此推测，血清、腹腔液IL-6的升高与活化的腹膜单核巨噬细胞增加密切相关。
, http://www.100md.com
内异症腹腔液TNF-α、IL-6水平增加与内膜异位病灶及伴有炎症有关[4]，表明单核巨噬细胞合成这些因子的能力增强，经循环使血中细胞因子增加，介导吸引活化的单核巨噬细胞和炎症细胞进入腹腔[5]。为抑制内异症的发展，局部免疫系统可能使单核巨噬细胞合成细胞因子能力加强，同样有可能使活化的单核巨噬细胞增加，刺激异位种植的内膜生长，在内异症病理发生中起一定的作用。
轻度内异症患者腹腔液中TNF-α水平略高于对照组[6]。血清和腹腔液中IL-6水平也存在类似现象。其原因是否轻度内异症的细胞因子活性较低所致，尚待进一步探讨。
二、腹腔镜手术后内异症患者血清及腹腔液中TNF-α、IL-6水平的变化
由于内膜异位灶的清除及炎症好转，腹膜逐渐修复，细胞因子数量大为减少，使 Ⅲ、Ⅳ期患者血清、腹腔液与Ⅰ、Ⅱ期患者腹腔液TNF-α、IL-6水平均明显或极明显地下降，表明内异症患者病情明显好转，腹腔镜保守性手术治疗效果满意。Ⅰ、Ⅱ期患者手术后血清TNF-α、IL-6水平虽较术前下降，但差异无显著性，可能与Ⅰ、Ⅱ期患者术前和对照组无差异，及病情轻、异位灶少，分泌功能不强，甚至还可能存在一些隐匿的极轻度病变等因素有关。
, 百拇医药
三、B超监视下行后穹窿穿刺取腹腔液
我们在B超监视下经后穹窿穿刺获取腹腔液标本，成功率为87.5%(开始2例穿刺因经验不足而失败)，为内异症患者通过腹腔液标本进行监测、随访提供了又一个确实可行的途径。
参考文献
1，Harada T, Yoshioka H, Yoshida S, et al. Incrased interleukin-6 levels in peritoneal fluid of infertile patients with active endometriosis. Am J Obstet Gynecol, 1997,176:593-597.
2，Rana N, Braun DP, House R, et al. Basal and stimulated scretion of cytokines by peritoneal macrophages in women with endometriosis. Fertil Steril, 1996,65:925-930.
, 百拇医药
3，Berek JS, Chung C, Kaldi K, et al. Serum interleukin-6 levels correlate with disease status in patients with epithelial ovarian cancer. Am J Obstet Gynecol, 1991,164:1038-1042.
4，Rier SE, Zarmakoupis PN, Hu X, et al. Dysregulation of interleukin-6 responses in ectopic endometrial stromal cells: correlation with decreased soluble receptor levels in peritoneal fluid of women with endometriosis. J Clin Endocrinol Metab, 1995,80:1431-1437.
, http://www.100md.com
5，Khorram O, Taylor RN, Ryan IP, et al. Peritoneal fluid concentrations of the cytokine RANTES correlate with the severity of endometriosis. Am J Obstet Gynecol, 1993,69:1545-1549.
6，Eisermann J, Gast MJ,Pineda J, et al. Tumor necrosis factor in peritoneal fluid of women under going laparoscopic surgery. Fertil Steril, 1988,50:573-579.
(收稿日期:1999-01-28), 百拇医药
单位：李斌(200011 上海医科大学妇产科医院妇科)；金福明(200011 上海医科大学妇产科医院妇科)；杨来春(现在上海医科大学附属中山医院妇产科)；朱关珍(200011 上海医科大学妇产科医院妇科)
关键词：子宫内膜异位症；细胞活素类；肿瘤坏死因子；白细胞介素6；腹腔镜手术
中华妇产科杂志000312 【摘要】 目的 了解子宫内膜异位症(内异症)患者血清及腹腔液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的水平以及在腹腔镜保守性手术治疗后的变化。方法 收集内异症Ⅰ、Ⅱ期及Ⅲ、Ⅳ期患者各10例(共20例)的腹腔镜手术前后的血清和腹腔液，并以经腹腔镜检查确诊为与内异症无关病例10例为对照，应用放射免疫双抗体夹心法与放射免疫固相包被法分别测定其TNF-α及IL-6水平。结果 内异症患者血清和腹腔液TNF-α、IL-6水平，均与疾病分期呈正相关(r值分别为：血清：0.80，0.52；腹腔液：0.79，0.49；P均<0.05)，且随腹腔镜保守性手术后内异灶的清除而有明显下降。结论 血清和腹腔液TNF-α、IL-6水平对术后随访、监测及手术效果的评价有重要价值。
, 百拇医药
Evaluation of Tumor Necrosis Factor-alpha and Interleukin-6 Levels in Serum and Peritoneal Fluid of Patients with Endometriosis
LI Bin*, JIN Fuming*, YANG Laichun, et al.
* Department of Obstetrics, Hospital of Obstetrics and Gynecology, Shanghai Medical University, Shanghai 200011, China
【Abstract】 Objectives To evaluate the levels of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α)and interleukin-6 (IL-6) before and after conservative laparoscopic surgery in patients with endometriosis. Methods The TNF-α and IL-6 levels in serum and peritoneal fluid of 20 endometriotic patients and 10 control patients were determined by radioimmunoassay. Results Significant parallel relationship existed between the stage of endometriosis and the TNF-α and IL-6 levels in serum and peritoneal fluid in endometriosis patients (r values: serum: 0.80,0.52; peritoneal fluid: 0.79,0.49, P<0.05). After clearance of endometriosis foci with laparoscopic conservative surgery, the TNF-α and IL-6 levels decreased significantly. Conclusion Measuring TNF-α and IL-6 level may have important value in postoperative follow-up, surveillance and evaluation of the effectiveness of surgery.
, 百拇医药
【Key words】 Endometriosis; Cytokines;Tumor necrosis factor;Interleukin-6; Laparoscopic surgery
细胞因子是由免疫活性细胞等合成和分泌的一类介导炎症和免疫反应的多肽类蛋白，在宿主抵御组织损伤过程中起重要作用，涉及机体内许多生理和病理的复杂过程，与临床许多重要疾病的发生和转归密切相关[1]。我们测定了子宫内膜异位症(内异症)患者血清和腹腔液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平，以了解在血清与腹腔液内TNF-α、IL-6水平之间的关系，并随访观察腹腔镜术后其水平的变化，以期作为内异症保守性手术后的随访监测及判断手术有效性的指标。
资料与方法
一、研究对象
1.内异症组：1997年7至12月在我院经腹腔镜手术确诊为内异症的患者，20例，年龄20～40岁，半年内未接受激素类药物治疗。按1985年美国生殖协会分期标准(R-AFS)分期：Ⅰ、Ⅱ期10例，Ⅲ、Ⅳ期10例。
, 百拇医药
2.对照组：收集同期住院经腹腔镜检查诊断为与内异症无关病例10例作为对照组，年龄24～35岁。其中盆腔未见明显异常5例、多囊卵巢综合征2例、中肾管囊肿1例、卵巢单纯性囊肿2例。
二、方法
1. 标本收集：腹腔镜手术前在月经周期的卵泡期取内异症组和对照组患者的外周血2 ml，同时从腹腔镜下取腹腔液2 ml，术后3～4个月在月经周期的卵泡期取内异症组患者的外周血2 ml，并在B超监视下行后穹窿穿刺取腹腔液1～2 ml(共穿刺16例，成功14例)。标本以3 500 r/min离心10 min，取上清液分2管贮存在-20℃冰箱内待测。
2.血清、腹腔液TNF-α、IL-6测定：TNF-α采用放射免疫双抗体夹心法测定 (放射免疫测定盒购自中外合资上海长征医学科学有限公司)；IL-6采用放射免疫固相包被法测定(药盒由比利时Medgenix Diagnostics公司提供)。
, 百拇医药
三、统计学方法
实验数值采用t检验，将TNF-α、IL-6测定值与R-AFS评分作直线相关分析。
结果
一、血清和腹腔液TNF-α、IL-6的水平
血清TNF-α水平在Ⅰ、Ⅱ期、Ⅲ、Ⅳ期内异症患者与对照组患者之间两两比较，差异均有显著性(P<0.05)；腹腔液TNF-α以及血清、腹腔液IL-6水平，Ⅰ、Ⅱ期内异症患者与对照组相比，差异无显著性(P>0.05)；Ⅲ、Ⅳ期内异症患者与对照组及Ⅰ、Ⅱ期内异症患者比较，差异均有显著性(P<0.05)；对照组中有8例血清检测不到IL-6。见表1。
表1 两组患者血清和腹腔液TNF-α、IL-6 的水平比较(ng/L，
±s) 组别, http://www.100md.com
总
例
数
血清
腹腔液
TNF-α
IL-6
TNF-α
IL-6
内异症组
Ⅰ、Ⅱ期
10
1 624±277
, http://www.100md.com
54±91
1 534±277
259±〓379
Ⅲ、Ⅳ期
10
2 116±249
164±138
2 236±392
1 088±1 115
对照组
10
1 300±295
, 百拇医药
3± 6
1 432±523
72± 85
二、R-AFS评分与血清、腹腔液TNF-α、IL-6水平的关系
内异症患者R-AFS评分与血清、腹腔液TNF-α、IL-6水平呈直线相关，r值分别为血清：0.80，0.52，腹腔液：0.79，0.49(P均<0.05)。
三、腹腔镜保守性手术治疗前后TNF-α、IL-6水平的变化
Ⅰ、Ⅱ期内异症患者血清TNF-α及IL-6水平手术前后相比，差异均无显著性(P>0.05)，而Ⅲ、Ⅳ期内异症患者血清TNF-α和IL-6水平手术前后相比，差异均有显著与极显著性(P<0.05，P<0.001)；而腹腔液TNF-α、IL-6水平手术前后相比，差异均有显著与极显著性(P<0.05，P<0.001)。见表2。
, http://www.100md.com
表2 内异症患者手术前后血清和腹腔液TNF-α、IL-6水平变化(ng/L，
±s) 期别血清
腹腔液
例数
TNF-α
IL-6
例数
TNF-α
IL-6
术前
术后
, 百拇医药
术前
术后
术前
术后
术前
术后
Ⅰ、Ⅱ期
7
1 541±259
1 442±299
21±24
2± 5
7
, http://www.100md.com
1 614±288
1 196±288
156± 102
79±73
Ⅲ、Ⅳ期
7
2 186±263
1 627±456
134±37
38±47
7
2 319±406
, 百拇医药
1 156±152
1 431±1 183
158±66
讨论
一、内异症患者血清及腹腔液中TNF-α、IL-6的水平
TNF-α是由免疫活性细胞等合成和分泌的一类介导炎症和免疫反应的多肽类蛋白。本研究发现,内异症患者血清及腹腔液TNF-α水平随内异症期别的增加而升高，且与R-AFS评分呈正相关。说明两者均随病情加重而升高[2]。IL-6是急性炎症反应的主要标志之一，具有多种生物学活性。Berek等[3]发现,70%的正常人血清IL-6无法测出。本研究对照组10例中8例血清IL-6水平为0，而内异症患者血清、腹腔液中IL-6水平随内异症期别的增加而升高，而且与R-AFS评分呈正相关，说明血清和腹腔液中IL-6水平同样随病情加重而升高。由此推测，血清、腹腔液IL-6的升高与活化的腹膜单核巨噬细胞增加密切相关。
, http://www.100md.com
内异症腹腔液TNF-α、IL-6水平增加与内膜异位病灶及伴有炎症有关[4]，表明单核巨噬细胞合成这些因子的能力增强，经循环使血中细胞因子增加，介导吸引活化的单核巨噬细胞和炎症细胞进入腹腔[5]。为抑制内异症的发展，局部免疫系统可能使单核巨噬细胞合成细胞因子能力加强，同样有可能使活化的单核巨噬细胞增加，刺激异位种植的内膜生长，在内异症病理发生中起一定的作用。
轻度内异症患者腹腔液中TNF-α水平略高于对照组[6]。血清和腹腔液中IL-6水平也存在类似现象。其原因是否轻度内异症的细胞因子活性较低所致，尚待进一步探讨。
二、腹腔镜手术后内异症患者血清及腹腔液中TNF-α、IL-6水平的变化
由于内膜异位灶的清除及炎症好转，腹膜逐渐修复，细胞因子数量大为减少，使 Ⅲ、Ⅳ期患者血清、腹腔液与Ⅰ、Ⅱ期患者腹腔液TNF-α、IL-6水平均明显或极明显地下降，表明内异症患者病情明显好转，腹腔镜保守性手术治疗效果满意。Ⅰ、Ⅱ期患者手术后血清TNF-α、IL-6水平虽较术前下降，但差异无显著性，可能与Ⅰ、Ⅱ期患者术前和对照组无差异，及病情轻、异位灶少，分泌功能不强，甚至还可能存在一些隐匿的极轻度病变等因素有关。
, 百拇医药
三、B超监视下行后穹窿穿刺取腹腔液
我们在B超监视下经后穹窿穿刺获取腹腔液标本，成功率为87.5%(开始2例穿刺因经验不足而失败)，为内异症患者通过腹腔液标本进行监测、随访提供了又一个确实可行的途径。
参考文献
1，Harada T, Yoshioka H, Yoshida S, et al. Incrased interleukin-6 levels in peritoneal fluid of infertile patients with active endometriosis. Am J Obstet Gynecol, 1997,176:593-597.
2，Rana N, Braun DP, House R, et al. Basal and stimulated scretion of cytokines by peritoneal macrophages in women with endometriosis. Fertil Steril, 1996,65:925-930.
, 百拇医药
3，Berek JS, Chung C, Kaldi K, et al. Serum interleukin-6 levels correlate with disease status in patients with epithelial ovarian cancer. Am J Obstet Gynecol, 1991,164:1038-1042.
4，Rier SE, Zarmakoupis PN, Hu X, et al. Dysregulation of interleukin-6 responses in ectopic endometrial stromal cells: correlation with decreased soluble receptor levels in peritoneal fluid of women with endometriosis. J Clin Endocrinol Metab, 1995,80:1431-1437.
, http://www.100md.com
5，Khorram O, Taylor RN, Ryan IP, et al. Peritoneal fluid concentrations of the cytokine RANTES correlate with the severity of endometriosis. Am J Obstet Gynecol, 1993,69:1545-1549.
6，Eisermann J, Gast MJ,Pineda J, et al. Tumor necrosis factor in peritoneal fluid of women under going laparoscopic surgery. Fertil Steril, 1988,50:573-579.
(收稿日期:1999-01-28), 百拇医药