载脂蛋白B基因XbaI多态性与单纯肥胖症关系的研究
作者：吴淑群 陈能 曾华松 江钟炎 麦根荣
单位：430060武汉,湖北省人民医院儿科(第一作者现在430022武汉市第一医院儿科)
关键词：
中华儿科杂志/980918 作者利用聚合酶链反应(PCR)技术检测武汉地区汉族单纯性肥胖症患儿载脂蛋白B(apoB)基因XbaI限制性片段长度多态性(RFLP)及血清脂质水平，并与健康儿相比较。现报道如下。
对象和方法：按超过身长计算的应有体重20%以上且无任何原发性疾病者为小儿单纯性肥胖症[1]。从五所中小学筛选102例单纯性肥胖儿童(肥胖症组)，男64例、女38例；年龄6～15岁，平均10.2±3.6岁。正常对照组100例健康体检者，男58例、女42例，年龄6～15岁，平均9.8±4.1岁。检测方法：(1)PCR体外基因扩增。受检儿童均空腹12小时抽外周静脉血2.5 ml，取0.5 ml经EDTA抗凝，提取白细胞基因组DNA。引物设计参照文献[2]，由中科院上海生化所合成，序列为XbaⅠ-5′GGAGACTATTCAGAAGCTAA-3′，XbaⅠ-3′GAAGAGCCTGAAGAACTGACT-5′。特异性扩增apoB基因含XbaⅠ酶切位点的基因片段。经PCR 30个循环后，1.5%琼脂糖凝胶电泳检查PCR扩增产物。(2)PCR扩增产物分析。在20 μl含XbaⅠ酶切片段的PCR扩增液中加入限制性内切酶XbaⅠ 20μl(promega公司产品)，37℃消化4小时，2%琼脂糖凝胶电泳判断酶切结果。仅见一条710 bp片段者为X-等位基因，见二条分别为433bp和277bp片段者为X+等位基因。(3)血清脂质及载脂蛋白测定。
, 百拇医药
统计方法：肥胖症组与正常对照组间基因频率及等位基因频率的差异用χ2检验，两组间和不同基因型间血清脂质、载脂蛋白水平的差异用t检验。
结果：肥胖症组与正常对照组间基因频率比较。两组儿童的XbaⅠ RFLP均以 X-等位基因占优势，相对频率分别为0.902和0.980，绝大多数基因为
表1单纯性肥胖儿组与正常对照组的基因频率比较
组列
例数
XbaI
x+等位基因频率
x+x+
x+x-
, 百拇医药
x-x-
正常组
100
0
4
96
0.020
肥胖组
102
0
20
82
0.098
, http://www.100md.com x2值
11.75
5.50
P值
<0.01
<0.05
表2 单纯性肥胖儿组与正常对照组血脂、载脂蛋白比较(
±s) 组别
例数
TG(mmol/L)
TC(mmol/L)
HDL(mmol/L)
, 百拇医药
LDL-C(mmol/L)
apoAⅠ(g/L)
apoB(g/L)
正常组
100
0.96±0.35
3.41±0.51
1.32±0.31
1.59±0.42
1.12±0.24
0.65±0.13
肥胖组
, 百拇医药
102
1.37±0.64
4.35±0.64
1.31±0.27
1.87±0.66
1.13±0.12
0.87±0.11
t值
5.66
11.56
0.24
3.60
, http://www.100md.com
0.37
12.97
P值
<0.01
<0.01
>0.05
<0.01
>0.05
<0.01
X- X-纯合子。肥胖症组中少见基因X+等位基因明显高于正常对照组，其频率为0.098、0.020(P<0.05)，见表1。
血清脂质、载脂蛋白水平比较：肥胖症组与正常对照组间甘油三脂(TG)、胆固醇(TC)、低密度-胆固醇 (LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL)、apoB水平均有显著性差异(P<0.01)见表2。肥胖症组内X+X-基因型与X-X-基因型之间血清TG浓度存在显著性差异(1.83±0.37 mmol/L、1.26±0.56 mmol/L，t=5.52，P<0.01)。而正常对照X+X-基因型与X-X-基因型间血清脂质、载脂蛋白各指标差异均无显著性(P>0.05)。
, http://www.100md.com
讨论：apoB基因位于人类第二号染色体短臂末端的P23-24区，全长约43 kb，含有29个外显子和28个内含子，编码apoB肽链。apoB基因XbaⅠ酶切位点位于第26个外显子上，系cDNA序列上第2673位核苷酸C→T突变，从而产生一个XbaⅠ限制性内切酶识别序列，即X+等位基因。1988年Rajput等[3]首次报道在白种人群中apoB XbaⅠ RFLP与肥胖症具有密切的相关性，作者的研究显示突变了的X+等位基因相对频率在汉族人种中单纯性肥胖儿明显高于正常健康儿。提示X+等位基因与汉族小儿单纯性肥胖症的发生有一定的关联。
血清脂质分析不仅显示肥胖症组存在血脂代谢紊乱，而且肥胖症组中X+X-基因型者血清TG浓度明显高于X-X-基因型者，提示X+等位基因可能通过影响血清TG代谢，导致小儿单纯性肥胖症的发生。
, http://www.100md.com
参考文献
1 李永昶.小儿单纯性肥胖症(综述).国外医学儿科学分册, 1978，5：292-298.
2 Boverwinkle E, Lee SS, Buter R, et al. Rapid typing of apoB DNA polymorphisms by DNA amplofication: association between Ag epitopes of human apoB100, aigal peptide insertion/deletion polymorphism and a 3′flanking DNA Variable number of tandem repeats polymorphism of the apoB gene. Atheroscl Erosis, 1990,81:225-232.
3 Rajput WJ, Knott TJ, Wallis SC, et al. Variation of apoB gene is associated with obesity, high blood cholesterol levels, and increased risk of coronary heart disease. Lancet, 1988,ii:1442-1446.
(收稿：1997-10-20 修回：1998-05-06), http://www.100md.com
单位：430060武汉,湖北省人民医院儿科(第一作者现在430022武汉市第一医院儿科)
关键词：
中华儿科杂志/980918 作者利用聚合酶链反应(PCR)技术检测武汉地区汉族单纯性肥胖症患儿载脂蛋白B(apoB)基因XbaI限制性片段长度多态性(RFLP)及血清脂质水平，并与健康儿相比较。现报道如下。
对象和方法：按超过身长计算的应有体重20%以上且无任何原发性疾病者为小儿单纯性肥胖症[1]。从五所中小学筛选102例单纯性肥胖儿童(肥胖症组)，男64例、女38例；年龄6～15岁，平均10.2±3.6岁。正常对照组100例健康体检者，男58例、女42例，年龄6～15岁，平均9.8±4.1岁。检测方法：(1)PCR体外基因扩增。受检儿童均空腹12小时抽外周静脉血2.5 ml，取0.5 ml经EDTA抗凝，提取白细胞基因组DNA。引物设计参照文献[2]，由中科院上海生化所合成，序列为XbaⅠ-5′GGAGACTATTCAGAAGCTAA-3′，XbaⅠ-3′GAAGAGCCTGAAGAACTGACT-5′。特异性扩增apoB基因含XbaⅠ酶切位点的基因片段。经PCR 30个循环后，1.5%琼脂糖凝胶电泳检查PCR扩增产物。(2)PCR扩增产物分析。在20 μl含XbaⅠ酶切片段的PCR扩增液中加入限制性内切酶XbaⅠ 20μl(promega公司产品)，37℃消化4小时，2%琼脂糖凝胶电泳判断酶切结果。仅见一条710 bp片段者为X-等位基因，见二条分别为433bp和277bp片段者为X+等位基因。(3)血清脂质及载脂蛋白测定。
, 百拇医药
统计方法：肥胖症组与正常对照组间基因频率及等位基因频率的差异用χ2检验，两组间和不同基因型间血清脂质、载脂蛋白水平的差异用t检验。
结果：肥胖症组与正常对照组间基因频率比较。两组儿童的XbaⅠ RFLP均以 X-等位基因占优势，相对频率分别为0.902和0.980，绝大多数基因为
表1单纯性肥胖儿组与正常对照组的基因频率比较
组列
例数
XbaI
x+等位基因频率
x+x+
x+x-
, 百拇医药
x-x-
正常组
100
0
4
96
0.020
肥胖组
102
0
20
82
0.098
, http://www.100md.com x2值
11.75
5.50
P值
<0.01
<0.05
表2 单纯性肥胖儿组与正常对照组血脂、载脂蛋白比较(
±s) 组别例数
TG(mmol/L)
TC(mmol/L)
HDL(mmol/L)
, 百拇医药
LDL-C(mmol/L)
apoAⅠ(g/L)
apoB(g/L)
正常组
100
0.96±0.35
3.41±0.51
1.32±0.31
1.59±0.42
1.12±0.24
0.65±0.13
肥胖组
, 百拇医药
102
1.37±0.64
4.35±0.64
1.31±0.27
1.87±0.66
1.13±0.12
0.87±0.11
t值
5.66
11.56
0.24
3.60
, http://www.100md.com
0.37
12.97
P值
<0.01
<0.01
>0.05
<0.01
>0.05
<0.01
X- X-纯合子。肥胖症组中少见基因X+等位基因明显高于正常对照组，其频率为0.098、0.020(P<0.05)，见表1。
血清脂质、载脂蛋白水平比较：肥胖症组与正常对照组间甘油三脂(TG)、胆固醇(TC)、低密度-胆固醇 (LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL)、apoB水平均有显著性差异(P<0.01)见表2。肥胖症组内X+X-基因型与X-X-基因型之间血清TG浓度存在显著性差异(1.83±0.37 mmol/L、1.26±0.56 mmol/L，t=5.52，P<0.01)。而正常对照X+X-基因型与X-X-基因型间血清脂质、载脂蛋白各指标差异均无显著性(P>0.05)。
, http://www.100md.com
讨论：apoB基因位于人类第二号染色体短臂末端的P23-24区，全长约43 kb，含有29个外显子和28个内含子，编码apoB肽链。apoB基因XbaⅠ酶切位点位于第26个外显子上，系cDNA序列上第2673位核苷酸C→T突变，从而产生一个XbaⅠ限制性内切酶识别序列，即X+等位基因。1988年Rajput等[3]首次报道在白种人群中apoB XbaⅠ RFLP与肥胖症具有密切的相关性，作者的研究显示突变了的X+等位基因相对频率在汉族人种中单纯性肥胖儿明显高于正常健康儿。提示X+等位基因与汉族小儿单纯性肥胖症的发生有一定的关联。
血清脂质分析不仅显示肥胖症组存在血脂代谢紊乱，而且肥胖症组中X+X-基因型者血清TG浓度明显高于X-X-基因型者，提示X+等位基因可能通过影响血清TG代谢，导致小儿单纯性肥胖症的发生。
, http://www.100md.com
参考文献
1 李永昶.小儿单纯性肥胖症(综述).国外医学儿科学分册, 1978，5：292-298.
2 Boverwinkle E, Lee SS, Buter R, et al. Rapid typing of apoB DNA polymorphisms by DNA amplofication: association between Ag epitopes of human apoB100, aigal peptide insertion/deletion polymorphism and a 3′flanking DNA Variable number of tandem repeats polymorphism of the apoB gene. Atheroscl Erosis, 1990,81:225-232.
3 Rajput WJ, Knott TJ, Wallis SC, et al. Variation of apoB gene is associated with obesity, high blood cholesterol levels, and increased risk of coronary heart disease. Lancet, 1988,ii:1442-1446.
(收稿：1997-10-20 修回：1998-05-06), http://www.100md.com