系统性红斑狼疮患者血栓调节素 白细胞介素-2可溶性白细胞介素-2受体及自然杀伤细胞毒因子的变化
作者：王玉亮 齐文成 穆红 韩峰 黄繁嫱
单位：王玉亮(天津市第一中心医院检验中心 300192)；穆红(天津市第一中心医院检验中心 300192)；黄繁嫱(天津市第一中心医院检验中心 300192)；齐文成(天津市第一中心医院检验中心风湿免疫科)；韩峰(天津市第一中心医院检验中心风湿免疫科)
关键词：
中华风湿病学杂志000615 系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种多系统受累的自身免疫性疾 病。在SLE发病过程中，常伴有不同程度的血管炎，导致血管内皮细胞受损，体内免疫网络 常有明显的缺陷，伴有各种细胞因子的异常。我们对43例SLE病人可溶性血栓调节素(sTM)及 外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液中白细胞介素-2(IL-2)、可溶性白细胞介素-2受体( sIL-2R)及自然杀伤细胞毒因子(NKCF)变化进行检测。
, 百拇医药
1 资料与方法
1.1 病例选择
住院的SLE病人43例，全部为女性，平均年龄(36±11)岁，其中活动期SLE患者25例，稳定期 SLE患者18例。病程2个月～14年，平均病程2.1年。诊断符合美国风湿病 学会1982年标准 。SLE的活动标准参考Urowitz标准[1]。正常对照组选择医院健康查体者18名，其 中男3名，女15名，平均年龄30.2岁。
1.2 试剂
重组IL-2由军事医学科学院中化生物技术研究所提供，sTM试剂盒由法国Stago公司提供，s IL-2R试剂盒由北京邦定公司提供，CTLL细胞系、K562细胞系由本院血栓与止血研究所提供 。
1.3 研究方法
, 百拇医药
1.3.1 PBMC上清液的制备：无菌取静脉血5 ml肝素抗凝，用淋巴细胞分离液分离单个核 细胞，调整细胞至106/ml，将细胞种植在含10%小牛血清的1 ml RPMI 1640培养液中， 加入PHA 100 μg/ml培养48 h，收集上清，-2 ℃保存待测。
1.3.2 IL-2活性检测：采用MTT比色法；sTM检测：采用ELISA法；sIL-2R检测：采用EL ISA法；NKCF检测：采用MTT比色法[2]。
1.4 统计学处理
检测数据以x±s表示，两组均值比较采用t检验。
2 结 果
2.1 正常人及SLE患者血浆sTM、sIL-2水平：见表1。
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2.2 正常人及活动期SLE患者PBMC上清液中IL-2、NKCF水平：见表2。
表1 正常人及SLE患者血浆sTM sIL-2R水平(x±s) 组别
例数
sTMng/ml
sIL-2RU/ml
正常组
18
32.01
257±189
活动期SLE组
25
, http://www.100md.com
65±20**
712±409**
稳定期SLE组
18
36±7
412±181*
注：与正常组比较*P<0.05，**P<0.01
表2 正常人及活动期SLE患者PBMC上清液中
IL-2、NKCF水平(x±s) 组别
例数
, 百拇医药
IL-2U/ml
NKCF%
活动期SLE组
25
3.3±1.7*
17.1±3.5*
正常组
18
4.8±2.3
23.1±5.0
注：*与正常组比较P<0.052.3 正常人及SLE患者sIL-2R水平：正常人PBMC上清液中sIL-2R水平为(710 ±223) U/ml，活动期SLE患者PBMC上清液中sIL-2R水平为(1 346±345) U/ml，两组相比差 异显著(P<0.01)。稳定期SLE患者PBMC上清液中sIL-2R水平(619±151) U/ml，与正 常组相比差异无显著性(P>0.05)。
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3 讨 论
系统性红斑狼疮是一种多系统受累的自身免疫性疾病，已发现SLE病人的T、B淋巴细胞及多 种细胞因子比例异常。血管炎是SLE的基本病变之一，是判定SLE活动性的标准之一。TM是血 管内皮细胞膜表面上的大分子蛋白，是一种对抗凝血过程的蛋白，血管炎导致内皮细胞受损 以使TM脱落入血引起血浆中sTM水平的升高。SLE患者的sTM水平仅在其活动期比正常对照有 显著性升高[3]。有学者比较了SLE患者治疗前后的sTM水平，提出了用sTM水平来观 察SLE治疗是否有效[4]。本试验表明活动期狼疮血浆中sTM水平较稳定期明显升高 ，活动期狼疮病人可能普遍存在由于免疫复合物沉积造成血管内皮细胞的损伤，经治疗病情 稳定后血管内皮细胞得到修复，血浆中sTM恢复接近正常水平。因此检测狼疮活动期与稳定 期血浆中sTM水平对判定病情变化及预后有重要意义。NKCF活性是检测NK细胞功能的主要指 标。NK细胞的主要功能有：参与调节体内的免疫反应，抑制T淋巴细胞特别是Th细胞的功能 ；产生细胞毒因子，攻击和杀伤对其敏感的靶细胞。本组观察结果表明，活动期SLE病人NKC F明显低于正常人群，NKCF降低的原因可能由于NK细胞数量的减少，免疫复合物和一些抗淋 巴细胞抗体在补体存在的情况下可以降低NK细胞毒活性，血清中细胞间黏附分子-1亦可抑 制NK细胞的活性。本文检测结果显示活动期SLE病人PBMC培养上清液中IL-2活性减低，是由 于SLE病人T细胞在体内已经活化，在体外对有丝分裂原的刺激反应性减低而表现为PBMC产生 IL-2活性减低[5]。本组活动期SLE病人血清中sIL-2R水平明显增高，说明SLE病 人体内淋巴细胞都处于高度活动状态[6]。对PBMC培养上清液中sIL-2R水平进行检 测，结果表明无论正常组还是SLE组，经过有丝分裂原刺激后，上清液中IL-2R水平在原有 基础上有明显增高。可认为sIL-2R对判定SLE活动程度有意义。综上所述，检测sTM、并同 时检测IL-2、sIL-2R、NKCF等几种细胞因子对判断SLE活动程度，进一步了解SLE的发病机 制，均有重要意义。
, 百拇医药
参 考 文 献
1，蒋明，田心平，李学旺，等.系统性红斑狼疮的临床.见：蒋明，朱立平，林 孝义，主编.风湿病学.北京：科学技术出版社，1995.1001-1041.
2，丘玉华，廖况诚，付强，等.异丙醇和SDS在MTT比色法检测NKCF活性中的应用比 较.上海免疫学杂志，1994，14：128-129.
3，Hsu CD,Chan DW,Iriye B,et al.Plasma thrombomodulin levels in women wit h systemic lupus erythematosus.Am J Perinatol,1995,12:27-29.
4，Kotajima L,Aotsuka S,Sato T.Clinical significance of serum thrombomodu lin levels in patients with systemic rheumatic diseases.Clin Exp Rheumatol,1997 ,15:59-65.
5，Manoussakis MN.sIL-2R molecule in serum of patient with autoimune dis ease.Clin Immunol Immunopathol,1989,50:321-323.
6，Wolf RE.sIL-2R in SLE.Arthritis Rheum,1988,31:1729-1731.
收稿日期：2000-02-29, 百拇医药
单位：王玉亮(天津市第一中心医院检验中心 300192)；穆红(天津市第一中心医院检验中心 300192)；黄繁嫱(天津市第一中心医院检验中心 300192)；齐文成(天津市第一中心医院检验中心风湿免疫科)；韩峰(天津市第一中心医院检验中心风湿免疫科)
关键词：
中华风湿病学杂志000615 系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种多系统受累的自身免疫性疾 病。在SLE发病过程中，常伴有不同程度的血管炎，导致血管内皮细胞受损，体内免疫网络 常有明显的缺陷，伴有各种细胞因子的异常。我们对43例SLE病人可溶性血栓调节素(sTM)及 外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液中白细胞介素-2(IL-2)、可溶性白细胞介素-2受体( sIL-2R)及自然杀伤细胞毒因子(NKCF)变化进行检测。
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1 资料与方法
1.1 病例选择
住院的SLE病人43例，全部为女性，平均年龄(36±11)岁，其中活动期SLE患者25例，稳定期 SLE患者18例。病程2个月～14年，平均病程2.1年。诊断符合美国风湿病 学会1982年标准 。SLE的活动标准参考Urowitz标准[1]。正常对照组选择医院健康查体者18名，其 中男3名，女15名，平均年龄30.2岁。
1.2 试剂
重组IL-2由军事医学科学院中化生物技术研究所提供，sTM试剂盒由法国Stago公司提供，s IL-2R试剂盒由北京邦定公司提供，CTLL细胞系、K562细胞系由本院血栓与止血研究所提供 。
1.3 研究方法
, 百拇医药
1.3.1 PBMC上清液的制备：无菌取静脉血5 ml肝素抗凝，用淋巴细胞分离液分离单个核 细胞，调整细胞至106/ml，将细胞种植在含10%小牛血清的1 ml RPMI 1640培养液中， 加入PHA 100 μg/ml培养48 h，收集上清，-2 ℃保存待测。
1.3.2 IL-2活性检测：采用MTT比色法；sTM检测：采用ELISA法；sIL-2R检测：采用EL ISA法；NKCF检测：采用MTT比色法[2]。
1.4 统计学处理
检测数据以x±s表示，两组均值比较采用t检验。
2 结 果
2.1 正常人及SLE患者血浆sTM、sIL-2水平：见表1。
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2.2 正常人及活动期SLE患者PBMC上清液中IL-2、NKCF水平：见表2。
表1 正常人及SLE患者血浆sTM sIL-2R水平(x±s) 组别
例数
sTMng/ml
sIL-2RU/ml
正常组
18
32.01
257±189
活动期SLE组
25
, http://www.100md.com
65±20**
712±409**
稳定期SLE组
18
36±7
412±181*
注：与正常组比较*P<0.05，**P<0.01
表2 正常人及活动期SLE患者PBMC上清液中
IL-2、NKCF水平(x±s) 组别
例数
, 百拇医药
IL-2U/ml
NKCF%
活动期SLE组
25
3.3±1.7*
17.1±3.5*
正常组
18
4.8±2.3
23.1±5.0
注：*与正常组比较P<0.052.3 正常人及SLE患者sIL-2R水平：正常人PBMC上清液中sIL-2R水平为(710 ±223) U/ml，活动期SLE患者PBMC上清液中sIL-2R水平为(1 346±345) U/ml，两组相比差 异显著(P<0.01)。稳定期SLE患者PBMC上清液中sIL-2R水平(619±151) U/ml，与正 常组相比差异无显著性(P>0.05)。
, 百拇医药
3 讨 论
系统性红斑狼疮是一种多系统受累的自身免疫性疾病，已发现SLE病人的T、B淋巴细胞及多 种细胞因子比例异常。血管炎是SLE的基本病变之一，是判定SLE活动性的标准之一。TM是血 管内皮细胞膜表面上的大分子蛋白，是一种对抗凝血过程的蛋白，血管炎导致内皮细胞受损 以使TM脱落入血引起血浆中sTM水平的升高。SLE患者的sTM水平仅在其活动期比正常对照有 显著性升高[3]。有学者比较了SLE患者治疗前后的sTM水平，提出了用sTM水平来观 察SLE治疗是否有效[4]。本试验表明活动期狼疮血浆中sTM水平较稳定期明显升高 ，活动期狼疮病人可能普遍存在由于免疫复合物沉积造成血管内皮细胞的损伤，经治疗病情 稳定后血管内皮细胞得到修复，血浆中sTM恢复接近正常水平。因此检测狼疮活动期与稳定 期血浆中sTM水平对判定病情变化及预后有重要意义。NKCF活性是检测NK细胞功能的主要指 标。NK细胞的主要功能有：参与调节体内的免疫反应，抑制T淋巴细胞特别是Th细胞的功能 ；产生细胞毒因子，攻击和杀伤对其敏感的靶细胞。本组观察结果表明，活动期SLE病人NKC F明显低于正常人群，NKCF降低的原因可能由于NK细胞数量的减少，免疫复合物和一些抗淋 巴细胞抗体在补体存在的情况下可以降低NK细胞毒活性，血清中细胞间黏附分子-1亦可抑 制NK细胞的活性。本文检测结果显示活动期SLE病人PBMC培养上清液中IL-2活性减低，是由 于SLE病人T细胞在体内已经活化，在体外对有丝分裂原的刺激反应性减低而表现为PBMC产生 IL-2活性减低[5]。本组活动期SLE病人血清中sIL-2R水平明显增高，说明SLE病 人体内淋巴细胞都处于高度活动状态[6]。对PBMC培养上清液中sIL-2R水平进行检 测，结果表明无论正常组还是SLE组，经过有丝分裂原刺激后，上清液中IL-2R水平在原有 基础上有明显增高。可认为sIL-2R对判定SLE活动程度有意义。综上所述，检测sTM、并同 时检测IL-2、sIL-2R、NKCF等几种细胞因子对判断SLE活动程度，进一步了解SLE的发病机 制，均有重要意义。
, 百拇医药
参 考 文 献
1，蒋明，田心平，李学旺，等.系统性红斑狼疮的临床.见：蒋明，朱立平，林 孝义，主编.风湿病学.北京：科学技术出版社，1995.1001-1041.
2，丘玉华，廖况诚，付强，等.异丙醇和SDS在MTT比色法检测NKCF活性中的应用比 较.上海免疫学杂志，1994，14：128-129.
3，Hsu CD,Chan DW,Iriye B,et al.Plasma thrombomodulin levels in women wit h systemic lupus erythematosus.Am J Perinatol,1995,12:27-29.
4，Kotajima L,Aotsuka S,Sato T.Clinical significance of serum thrombomodu lin levels in patients with systemic rheumatic diseases.Clin Exp Rheumatol,1997 ,15:59-65.
5，Manoussakis MN.sIL-2R molecule in serum of patient with autoimune dis ease.Clin Immunol Immunopathol,1989,50:321-323.
6，Wolf RE.sIL-2R in SLE.Arthritis Rheum,1988,31:1729-1731.
收稿日期：2000-02-29, 百拇医药