急性实验性应激状态下大鼠胃粘膜NOS变化及与胃粘膜损伤的关系
作者：聂时南 李兆申 许国铭 湛先保 屠振兴 龚燕芳
单位：第二军医大学长海医院消化内科，上海 200433
关键词：一氧化氮合酶；胃粘膜损伤；急性应激
中国临床心理学杂志000408 【摘要】 目的：探讨躯体性及心理性应激状态下大鼠胃粘膜NOS变 化及与胃粘膜损伤发生的关系。方法：采用高压恒流脉冲刺激器复 制胃粘膜损伤模型，将96只雄性SD大鼠随机分为3组：对照组(C)，规则光组(R)及不规则光组(I)，分光光度法检测NOS活性和Nils Lambecht法测 定胃粘膜损伤指数，使用兔源大鼠NOSⅠ，NOSⅡ，NOSⅢ多抗，采用免疫组化方法研究NOS的分布规律。结果：正常情况下NOS活性平稳，心理性 应激后，大鼠胃粘膜NOS活性明显升高(P<0.05)；与对照组比较，R，I组胃粘膜损伤指 数均较高，且I组较R组变化显著(P<0.05)；NOSⅠ，NOSⅢ在3组中均有表达，而NOSⅡ 只在R，I组中表达，且其表达无明显差异(P>0.05)。结论：心 理性应激程度愈高，胃粘膜损伤愈严重，胃粘膜损伤程度及NOS活性变化与心理应激程度关系密切，其分布变化似乎与心理应激程度无关。
, 百拇医药
中图分类号：R573 文献标识码：A 文章编号：1005-3611(2000)04-0 221-04
Relationship between Change of Nitric Qxide Synthase (NOS) in Gastric Mucosa Induced
by Acute Experimental Stress and Acute Gastric Mucosal Lesion in Rats
NIE Shi-nan LI Zhao-shen XU Guo-ming
(Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433，China)
【Abstract】 Objective: To explore the relationshi p betwe en change of nitric oxide synthase in gastric mucosa and acute gastric mucosal l esion in rats under acute induced stress. Methods: Experim ental stress was induced in rats by impulse stimulator of high voltage and stabl e currency. Ninety-six male SD rats were randomly divided into three groups: con trol, regular and irregular group. NOS activity was measured by spectrophotometr y; degree of injury of gastric mucosa was measured by method of Nils Lambecht im munohistochemistry; and polyantibodies of NOSⅠ，NOSⅡ，NOSⅢ were employed to i nvestigate locations of NOS. Results: NOS activity was sta ble under normal condition but increased significantly upon acute stress inducti on (P<0.05). As compared to the control group, damage to gastric mucosa was observed for both the regular and irregular groups, and the degree of damage wa s found to be more severe in the irregular group (P<0.05). NOSI and NOSⅢ we re found in gastric mucosa of rats under both normal and stress conditions. By c ontrast, NOSⅡ was found only under the stress conditions and there was no relia ble difference between the regular and irregular groups. Conculsion: The degree of increased NOS activity and gastric mucosa damage were p ositively correlated with levels of experimentally induced stress. The location of NOS under stress did not produce any significant impact on the levels of stress response.
, 百拇医药
【Key words】 Nitric oxide synthase; Gastric mucosal inju ry; Acute stress
一氧化氮合酶(NOS)广泛存在于胃粘膜中，它所合成的一氧化氮(NO)作 为一种细胞间及细胞内的信息物质，在机体的病理生理过程中有重要作用，尤其对胃肠道各种活动有重 要意义，如调节胃部的血液循环，胃液分泌及参与粘膜损伤的保护和修复。目前对于NOS与 急性胃粘膜损伤关系的研究，多限于水浸、冷刺激、盐酸、乙醇、烧伤、外伤等躯体应激方 面，对于躯体性和心理性并存应激状态的大鼠胃粘膜NOS变化少见报道。本研究旨在探讨躯 体性和心理性应激状态下胃粘膜损伤与NOS变化的关系，为临床诊断和治疗提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 主要仪器、试剂及动物
高压恒流脉冲刺激器为第二军医大学数理教研室研制；UV754型分光光度计为上海第三分析仪器厂产品；RM2035冰冻切片机为瑞典Leica公司产品；EU861 3-V12深低温冰箱为美国Puffer Hubbard公司产品；Universal 16R低温高速离心机为德国Hettich公司产品；TGL-16G台式高速离心机为上海安亭科学仪器厂产品；NOS活性测试盒 购自北京东亚免疫技术研究所；兔源大鼠NOSⅠ，NOSⅡ，NOSⅢ多抗购自Sjgma公司，ABC试剂盒购自华美生物工程公司；pH7.2磷酸钾缓冲液20%(W/V)为本室自己配制；雄性SD大 鼠购自上海计生所西普尔-必凯公司。
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1.2 方法
雄性SD大鼠96只，体质量180～200g，自然光照，食用标准丸状饲料，饲养与实验隔音隔间 。高压恒流脉冲刺激器作为模型制作的核心部分，它能够同时输出三路光信号和二路电击信号，可发出规则光和非规则光两种光。所谓规则是指光信号与电击的次序和间隔是不 变的，这里是光闪2 s后进行电击。非规则是光与电击的次序与间隔是不同的，即次序不定 ，间隔随机。电击大鼠足爪。氖泡亮时强度为35 Lux，电刺激参数为波宽2 ms，频率250 Hz ，串长1 s，电流3.0 mA。实验分3期顺序进行[1]。
1.2.1 适应期1-7 d 此期内每天将每只鼠分别在实验盒内放置25 mi n，动物在第4天可自行钻入实验盒，主要是消除实验盒所造成的应激因素。
1.2.2 心理性应激形成期8-14 d 动物在第8天随机分3组，每组32 只(每组又分4个亚组，每亚组为8只)：对照(C)组仅给不规则光；规则光(R)组给光后再给电 刺激，光与电间隔恒定；不规则光(Ⅰ)组给光和电刺激的间隔随机。每天给予相同实验，每 次30 min。
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1.2.3 心理性应激记忆期 第15天起各组动物均无电刺激，余同第2期。
1.3 测定指标
于实验前10h禁食，分别在给予相应刺激后的第9、11、13及15天取胃粘膜，计算刺激后胃粘 膜损伤指数，因损伤多为点状出血，偶有线状溃疡，故采用Nils Lambecht法(0：无损伤，0 .1：<1 mm,0.2:2-4 mm,0.3:>4 mm)。NOS活性检测用分光光度法，由于氧合血红蛋白(HbO 2)可与NO迅速而不可逆地反应，生成高铁血红蛋白(MG)，因而，通过分光光度法检测形成的 MG，可反映由NOS催化生成的NO量，从而间接测定NOS的活性。具体步骤是：① 取胃粘膜组 织加入40 mmol/L，pH7.2磷酸钾缓冲液(20%W/V)，匀浆器搅拌10000r/min离心，20 min 后取上清液。② 取含CaCl2，MgCl2，缬氨酸和血红蛋白的硝酸缓冲液0.8 ml，NADPH 溶液0.8 ml，组织上清液0.6 ml混合，振荡，加入精氨酸溶液0.8 ml立即振荡，UV754型 分光光度计比色，用401和421 nm两波长分别测定，间隔30 s后重测，对照用40 mmol/L，pH 7.2磷酸钾缓冲液。以每克组织每分钟产生一氧化氮1 nmol作为1个NOS活性单位，即nmol/ min/gtissue。免疫组化采用ABC法，结果判断以细胞浆呈清晰棕色为阳性，阳性细跑比例 为：+：阳性细胞数<25%，++：阳性细胞数25%～50%，+++：阳性细胞数>50%。
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2 结果
2.1 NOS活性变化情况
正常状态下，NOS活性平稳，应激后酶活性变化明显，与C组比较，从第8天开始，同一时间 点R组即有变化，其中第13，15天较高(P<0.05)，而Ⅰ组从第11天起，活性升高，均 有统计学意义，其中第13，15天升高明显(P<0.01)。虽然R组酶活性各时间点均高于C 组 ，但Ⅰ组酶活性在实验过程中维持在高于R组的水平上(表1)。两应激组总酶活性均显著高于 C组(P<0.01)，而两者相比较，虽I组高于R组，但无统计学意义。
表1 在不同刺激条件下NOS活性
(n=8,
±s nmol min-1g-1)
, 百拇医药
第9天
第11天
第13 天
第15天
对照组
1.42±1.26
1.58±0.78
1.45±1.31
1.38±0.83
规则光组
2.20±1.21
2.40±1.67
, 百拇医药
3.46±2.17*
2.46±1.87*
不规则光
组
2.67±1.45
2.88±1.15
3.63±1.30**
3.42±1.01**
注：* P<0.05，** P<0.01与对照组比较
2.2 胃粘膜损伤情况
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C组未见损伤，R组损伤指数为16.2±2.68，I组为24.2±0.73，I组损伤明显重于R组(P<0.05)。NOSⅠ，NOSⅢ在C，R，I组中均有表达，NOSⅡ只在R，I组中表达且无显 著性意义(P>0.05，表2)。
表2 在不同刺激条件下iNOS分布
表达情况
阳性率
+
++
+++
规则光组(n=32)
6
9
, 百拇医药
13
8 7.5%
不规则光组(n=32)
8
10
12
93.8%
3 讨论
大量的事实说明，心理社会因素是现代社会中重要的应激源，职业的竞争，工作的压力，紧张的生活、工作节奏，人际关系的复杂、拥挤、孤独等等皆可引起应激反应，因此，对 心理性应激所造成的胃粘膜损伤的研究显得尤为重要。
研究表明：NOS在胃粘膜损伤中起重要作用。NOS主要分为两大类，即依赖钙离子、 钙调素的原生型NOS(cNOS，即NOSⅠ，NOSⅢ)和不依赖钙离子、钙调素的诱生型NOS(iNOS， 即NOSⅡ)。cNOS主要分布于神经元和内皮细跑，具有稳定的活性，持续释放少量NO作为神经递质和起局部血流调节作用，而iNOS正常情况下在细跑内不表达，而在病理状态下如感染时，内毒素(LPS)，TNF和IL-1等都可刺激巨噬细胞、中性粒细胞、T淋巴细胞和血管平滑肌细胞等表达iNOS。iNOS可持续大量释放NO。iNOS活性的变化可直接影响NO的生成量和生物效应[2，3]。NO具有双重作用，可增加胃粘膜血流、刺激胃粘液分泌、细胞保护及杀 灭微生物等，但NO，又可与氧自由基形成过氧亚硝酸盐导致细胞脂质过氧化损伤[3] 。机体对NO不同性质的调节作用主要是通过机体对不同NOS的精细调控，使NO在不同细胞 内外的不同介质中达到不同的累积程度来实现的。cNOS是通过机体对Ca2+水平的控制 使其维持在低水平的持续表达状态，而iNOS则是通过诱导后合成，一旦合成即大量产生NO， 直到底物耗尽，从而导致NO在体内泛滥成灾，产生广泛的损害。iNOS的mRNA半衰期特别长， 一旦诱导合成即可持续长时间翻译、合成iNOS。与cNOS比较，iNOS是引起体内NO过量产生的 主要基础，大量NO可以造成组织和细胞的损害甚至死亡，所以iNOS的诱导合成就成为众多疾 病的发病关键。Keiji Nishida 等[4]报道在水浸应激大鼠胃粘膜cNOS和iNOS活性的变化与胃粘膜损伤发生有密切的关系，在水浸应激期间发现大鼠胃粘膜损伤发展时，胃粘膜iNOS活性显著增加，相反，cNOS活性在水浸应激损伤的胃粘膜发现是轻度减低的。在消化系统，由cNOS产生的NO有细跑保护作用，而由iNOS产生的过量的NO起细胞毒作用[5]。由cNOS和iNOS产生的内源性NO在应激胃粘 膜损伤中起重要作用，胃粘膜损伤发生的加强是由于胃粘膜cNOS的过度抑制及胃粘膜iNOS活性维持在正常水平之上。
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在本实验的Ⅱ期，R组与I组所接受的躯体性刺激量相同，但只要刺激参数适宜，两者的血浆皮质酮表现出显著差异，这两者的区别反映了动物内部的神经活动过程不同。光刺激是 视觉信号，电刺激如同水浸，烧伤等均为躯体性刺激，而这些都使大鼠体内内毒素，IL-1 ，IL-6及TNF明显增高并持续很长时间，在其不断刺激下iNOS活性始终处于高水平，而iNOS的增高产生高 浓度NO而致细胞毒作用，从而最终使胃粘膜损伤。从心理学角度看，两者的区别在于R组大鼠 可根据光信号预见电刺激的时间，因为其间隔是恒定的；I组则不能，因此I组动物在实验时较R组更加紧张，I组心理应激程度高于R组。当然也可以认为R组大鼠已建立心理性适应，因光与电刺激间隔恒定，如同建立条件反射，I组则不能。而在心理高度紧张状态下，NOS活 性较高，则其主要构成成份iNOS必然较高，使胃粘膜损伤严重；而另一方面，胃粘膜损伤状态下，各种使iNOS活性增高的细胞如炎症细胞增多，则必然iNOS活性处于较高水平，从而使NOS维持在一个很高的水平。对于应激组间酶活性无明显变化，可能与刺激饱和或酶诱导饱 和状态有关。
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另有研究指出，烧伤及内毒素休克后iNOS表达异常增多[6，7]，但未指出其表达程 度与烧伤或休克程度之间的关系。在本实验中，虽然I组NOS活性及损伤程度均高于R组，但其分布未见明显差别，这与iNOS催化NO合成后活性迅速下降，其不是因为蛋白的丧失，而似乎是酶催化活性的丧失有关。
总之，心理性应激程度愈高，胃粘膜损伤愈严重，胃粘膜损伤程度及NOS活性变化与心理应激程度关系密切，但从其分布的变化看似乎不能反应应激程度。
【基金项目】 97全军医药卫生杰出中青年人才基金资助项目(1996卫科训字95号)
参 考 文 献
1，严，进，王春安，叶阿莉，等.躯体性和心理性应激对大鼠血浆皮质酮变化的影 响.心理学报，1991，23(4)：417-425
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2，Herry Y，Lepoivre M，Drapier JC，et al.EPR characterization of mloecular tar gets for NO in mammalian cells and organelles.FASEBJ，1993，7(12)：1124-1134
3，Knowles RG，Moncada S.Nitric oxide synthase in mammals.Biocham J，1994，2 98(2)：249-258
4，Nishida K，ohta Y，Ishiguro I.Role of gastric mucosa constitutive and i nducible nitric oxide synthases in the development of stress-induced gastric muc osal lesion in rats.Biochemical and biophysical reasearch communications，1997 ，236(2)，275-279
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5，Konturek SK，Konturek PC.Role of nitric oxide in the digestive system.Diges tion，1995，56(1)：1-13
6，Cook TH，Bune AJ,Jansen AS，et al.Celluclar localization of inducible nitric oxide synthase in experimental endotoxic shock in rat.Clini Sci,1994,87：179- 184
7，Sato K，Miyakawak，Takeya M，et al.Immunohistochemical expresion of inducib le nitric oxide synthase in reversible endotoxic shock studied by a novel monocl onal antibody against rat iNOS.J Leukoc Bio,1995,57(1)：36-42
(收稿日期：2000-03-07), http://www.100md.com
单位：第二军医大学长海医院消化内科，上海 200433
关键词：一氧化氮合酶；胃粘膜损伤；急性应激
中国临床心理学杂志000408 【摘要】 目的：探讨躯体性及心理性应激状态下大鼠胃粘膜NOS变 化及与胃粘膜损伤发生的关系。方法：采用高压恒流脉冲刺激器复 制胃粘膜损伤模型，将96只雄性SD大鼠随机分为3组：对照组(C)，规则光组(R)及不规则光组(I)，分光光度法检测NOS活性和Nils Lambecht法测 定胃粘膜损伤指数，使用兔源大鼠NOSⅠ，NOSⅡ，NOSⅢ多抗，采用免疫组化方法研究NOS的分布规律。结果：正常情况下NOS活性平稳，心理性 应激后，大鼠胃粘膜NOS活性明显升高(P<0.05)；与对照组比较，R，I组胃粘膜损伤指 数均较高，且I组较R组变化显著(P<0.05)；NOSⅠ，NOSⅢ在3组中均有表达，而NOSⅡ 只在R，I组中表达，且其表达无明显差异(P>0.05)。结论：心 理性应激程度愈高，胃粘膜损伤愈严重，胃粘膜损伤程度及NOS活性变化与心理应激程度关系密切，其分布变化似乎与心理应激程度无关。
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中图分类号：R573 文献标识码：A 文章编号：1005-3611(2000)04-0 221-04
Relationship between Change of Nitric Qxide Synthase (NOS) in Gastric Mucosa Induced
by Acute Experimental Stress and Acute Gastric Mucosal Lesion in Rats
NIE Shi-nan LI Zhao-shen XU Guo-ming
(Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433，China)
【Abstract】 Objective: To explore the relationshi p betwe en change of nitric oxide synthase in gastric mucosa and acute gastric mucosal l esion in rats under acute induced stress. Methods: Experim ental stress was induced in rats by impulse stimulator of high voltage and stabl e currency. Ninety-six male SD rats were randomly divided into three groups: con trol, regular and irregular group. NOS activity was measured by spectrophotometr y; degree of injury of gastric mucosa was measured by method of Nils Lambecht im munohistochemistry; and polyantibodies of NOSⅠ，NOSⅡ，NOSⅢ were employed to i nvestigate locations of NOS. Results: NOS activity was sta ble under normal condition but increased significantly upon acute stress inducti on (P<0.05). As compared to the control group, damage to gastric mucosa was observed for both the regular and irregular groups, and the degree of damage wa s found to be more severe in the irregular group (P<0.05). NOSI and NOSⅢ we re found in gastric mucosa of rats under both normal and stress conditions. By c ontrast, NOSⅡ was found only under the stress conditions and there was no relia ble difference between the regular and irregular groups. Conculsion: The degree of increased NOS activity and gastric mucosa damage were p ositively correlated with levels of experimentally induced stress. The location of NOS under stress did not produce any significant impact on the levels of stress response.
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【Key words】 Nitric oxide synthase; Gastric mucosal inju ry; Acute stress
一氧化氮合酶(NOS)广泛存在于胃粘膜中，它所合成的一氧化氮(NO)作 为一种细胞间及细胞内的信息物质，在机体的病理生理过程中有重要作用，尤其对胃肠道各种活动有重 要意义，如调节胃部的血液循环，胃液分泌及参与粘膜损伤的保护和修复。目前对于NOS与 急性胃粘膜损伤关系的研究，多限于水浸、冷刺激、盐酸、乙醇、烧伤、外伤等躯体应激方 面，对于躯体性和心理性并存应激状态的大鼠胃粘膜NOS变化少见报道。本研究旨在探讨躯 体性和心理性应激状态下胃粘膜损伤与NOS变化的关系，为临床诊断和治疗提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 主要仪器、试剂及动物
高压恒流脉冲刺激器为第二军医大学数理教研室研制；UV754型分光光度计为上海第三分析仪器厂产品；RM2035冰冻切片机为瑞典Leica公司产品；EU861 3-V12深低温冰箱为美国Puffer Hubbard公司产品；Universal 16R低温高速离心机为德国Hettich公司产品；TGL-16G台式高速离心机为上海安亭科学仪器厂产品；NOS活性测试盒 购自北京东亚免疫技术研究所；兔源大鼠NOSⅠ，NOSⅡ，NOSⅢ多抗购自Sjgma公司，ABC试剂盒购自华美生物工程公司；pH7.2磷酸钾缓冲液20%(W/V)为本室自己配制；雄性SD大 鼠购自上海计生所西普尔-必凯公司。
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1.2 方法
雄性SD大鼠96只，体质量180～200g，自然光照，食用标准丸状饲料，饲养与实验隔音隔间 。高压恒流脉冲刺激器作为模型制作的核心部分，它能够同时输出三路光信号和二路电击信号，可发出规则光和非规则光两种光。所谓规则是指光信号与电击的次序和间隔是不 变的，这里是光闪2 s后进行电击。非规则是光与电击的次序与间隔是不同的，即次序不定 ，间隔随机。电击大鼠足爪。氖泡亮时强度为35 Lux，电刺激参数为波宽2 ms，频率250 Hz ，串长1 s，电流3.0 mA。实验分3期顺序进行[1]。
1.2.1 适应期1-7 d 此期内每天将每只鼠分别在实验盒内放置25 mi n，动物在第4天可自行钻入实验盒，主要是消除实验盒所造成的应激因素。
1.2.2 心理性应激形成期8-14 d 动物在第8天随机分3组，每组32 只(每组又分4个亚组，每亚组为8只)：对照(C)组仅给不规则光；规则光(R)组给光后再给电 刺激，光与电间隔恒定；不规则光(Ⅰ)组给光和电刺激的间隔随机。每天给予相同实验，每 次30 min。
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1.2.3 心理性应激记忆期 第15天起各组动物均无电刺激，余同第2期。
1.3 测定指标
于实验前10h禁食，分别在给予相应刺激后的第9、11、13及15天取胃粘膜，计算刺激后胃粘 膜损伤指数，因损伤多为点状出血，偶有线状溃疡，故采用Nils Lambecht法(0：无损伤，0 .1：<1 mm,0.2:2-4 mm,0.3:>4 mm)。NOS活性检测用分光光度法，由于氧合血红蛋白(HbO 2)可与NO迅速而不可逆地反应，生成高铁血红蛋白(MG)，因而，通过分光光度法检测形成的 MG，可反映由NOS催化生成的NO量，从而间接测定NOS的活性。具体步骤是：① 取胃粘膜组 织加入40 mmol/L，pH7.2磷酸钾缓冲液(20%W/V)，匀浆器搅拌10000r/min离心，20 min 后取上清液。② 取含CaCl2，MgCl2，缬氨酸和血红蛋白的硝酸缓冲液0.8 ml，NADPH 溶液0.8 ml，组织上清液0.6 ml混合，振荡，加入精氨酸溶液0.8 ml立即振荡，UV754型 分光光度计比色，用401和421 nm两波长分别测定，间隔30 s后重测，对照用40 mmol/L，pH 7.2磷酸钾缓冲液。以每克组织每分钟产生一氧化氮1 nmol作为1个NOS活性单位，即nmol/ min/gtissue。免疫组化采用ABC法，结果判断以细胞浆呈清晰棕色为阳性，阳性细跑比例 为：+：阳性细胞数<25%，++：阳性细胞数25%～50%，+++：阳性细胞数>50%。
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2 结果
2.1 NOS活性变化情况
正常状态下，NOS活性平稳，应激后酶活性变化明显，与C组比较，从第8天开始，同一时间 点R组即有变化，其中第13，15天较高(P<0.05)，而Ⅰ组从第11天起，活性升高，均 有统计学意义，其中第13，15天升高明显(P<0.01)。虽然R组酶活性各时间点均高于C 组 ，但Ⅰ组酶活性在实验过程中维持在高于R组的水平上(表1)。两应激组总酶活性均显著高于 C组(P<0.01)，而两者相比较，虽I组高于R组，但无统计学意义。
表1 在不同刺激条件下NOS活性
(n=8,
±s nmol min-1g-1), 百拇医药
第9天
第11天
第13 天
第15天
对照组
1.42±1.26
1.58±0.78
1.45±1.31
1.38±0.83
规则光组
2.20±1.21
2.40±1.67
, 百拇医药
3.46±2.17*
2.46±1.87*
不规则光
组
2.67±1.45
2.88±1.15
3.63±1.30**
3.42±1.01**
注：* P<0.05，** P<0.01与对照组比较
2.2 胃粘膜损伤情况
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C组未见损伤，R组损伤指数为16.2±2.68，I组为24.2±0.73，I组损伤明显重于R组(P<0.05)。NOSⅠ，NOSⅢ在C，R，I组中均有表达，NOSⅡ只在R，I组中表达且无显 著性意义(P>0.05，表2)。
表2 在不同刺激条件下iNOS分布
表达情况
阳性率
+
++
+++
规则光组(n=32)
6
9
, 百拇医药
13
8 7.5%
不规则光组(n=32)
8
10
12
93.8%
3 讨论
大量的事实说明，心理社会因素是现代社会中重要的应激源，职业的竞争，工作的压力，紧张的生活、工作节奏，人际关系的复杂、拥挤、孤独等等皆可引起应激反应，因此，对 心理性应激所造成的胃粘膜损伤的研究显得尤为重要。
研究表明：NOS在胃粘膜损伤中起重要作用。NOS主要分为两大类，即依赖钙离子、 钙调素的原生型NOS(cNOS，即NOSⅠ，NOSⅢ)和不依赖钙离子、钙调素的诱生型NOS(iNOS， 即NOSⅡ)。cNOS主要分布于神经元和内皮细跑，具有稳定的活性，持续释放少量NO作为神经递质和起局部血流调节作用，而iNOS正常情况下在细跑内不表达，而在病理状态下如感染时，内毒素(LPS)，TNF和IL-1等都可刺激巨噬细胞、中性粒细胞、T淋巴细胞和血管平滑肌细胞等表达iNOS。iNOS可持续大量释放NO。iNOS活性的变化可直接影响NO的生成量和生物效应[2，3]。NO具有双重作用，可增加胃粘膜血流、刺激胃粘液分泌、细胞保护及杀 灭微生物等，但NO，又可与氧自由基形成过氧亚硝酸盐导致细胞脂质过氧化损伤[3] 。机体对NO不同性质的调节作用主要是通过机体对不同NOS的精细调控，使NO在不同细胞 内外的不同介质中达到不同的累积程度来实现的。cNOS是通过机体对Ca2+水平的控制 使其维持在低水平的持续表达状态，而iNOS则是通过诱导后合成，一旦合成即大量产生NO， 直到底物耗尽，从而导致NO在体内泛滥成灾，产生广泛的损害。iNOS的mRNA半衰期特别长， 一旦诱导合成即可持续长时间翻译、合成iNOS。与cNOS比较，iNOS是引起体内NO过量产生的 主要基础，大量NO可以造成组织和细胞的损害甚至死亡，所以iNOS的诱导合成就成为众多疾 病的发病关键。Keiji Nishida 等[4]报道在水浸应激大鼠胃粘膜cNOS和iNOS活性的变化与胃粘膜损伤发生有密切的关系，在水浸应激期间发现大鼠胃粘膜损伤发展时，胃粘膜iNOS活性显著增加，相反，cNOS活性在水浸应激损伤的胃粘膜发现是轻度减低的。在消化系统，由cNOS产生的NO有细跑保护作用，而由iNOS产生的过量的NO起细胞毒作用[5]。由cNOS和iNOS产生的内源性NO在应激胃粘 膜损伤中起重要作用，胃粘膜损伤发生的加强是由于胃粘膜cNOS的过度抑制及胃粘膜iNOS活性维持在正常水平之上。
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在本实验的Ⅱ期，R组与I组所接受的躯体性刺激量相同，但只要刺激参数适宜，两者的血浆皮质酮表现出显著差异，这两者的区别反映了动物内部的神经活动过程不同。光刺激是 视觉信号，电刺激如同水浸，烧伤等均为躯体性刺激，而这些都使大鼠体内内毒素，IL-1 ，IL-6及TNF明显增高并持续很长时间，在其不断刺激下iNOS活性始终处于高水平，而iNOS的增高产生高 浓度NO而致细胞毒作用，从而最终使胃粘膜损伤。从心理学角度看，两者的区别在于R组大鼠 可根据光信号预见电刺激的时间，因为其间隔是恒定的；I组则不能，因此I组动物在实验时较R组更加紧张，I组心理应激程度高于R组。当然也可以认为R组大鼠已建立心理性适应，因光与电刺激间隔恒定，如同建立条件反射，I组则不能。而在心理高度紧张状态下，NOS活 性较高，则其主要构成成份iNOS必然较高，使胃粘膜损伤严重；而另一方面，胃粘膜损伤状态下，各种使iNOS活性增高的细胞如炎症细胞增多，则必然iNOS活性处于较高水平，从而使NOS维持在一个很高的水平。对于应激组间酶活性无明显变化，可能与刺激饱和或酶诱导饱 和状态有关。
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另有研究指出，烧伤及内毒素休克后iNOS表达异常增多[6，7]，但未指出其表达程 度与烧伤或休克程度之间的关系。在本实验中，虽然I组NOS活性及损伤程度均高于R组，但其分布未见明显差别，这与iNOS催化NO合成后活性迅速下降，其不是因为蛋白的丧失，而似乎是酶催化活性的丧失有关。
总之，心理性应激程度愈高，胃粘膜损伤愈严重，胃粘膜损伤程度及NOS活性变化与心理应激程度关系密切，但从其分布的变化看似乎不能反应应激程度。
【基金项目】 97全军医药卫生杰出中青年人才基金资助项目(1996卫科训字95号)
参 考 文 献
1，严，进，王春安，叶阿莉，等.躯体性和心理性应激对大鼠血浆皮质酮变化的影 响.心理学报，1991，23(4)：417-425
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2，Herry Y，Lepoivre M，Drapier JC，et al.EPR characterization of mloecular tar gets for NO in mammalian cells and organelles.FASEBJ，1993，7(12)：1124-1134
3，Knowles RG，Moncada S.Nitric oxide synthase in mammals.Biocham J，1994，2 98(2)：249-258
4，Nishida K，ohta Y，Ishiguro I.Role of gastric mucosa constitutive and i nducible nitric oxide synthases in the development of stress-induced gastric muc osal lesion in rats.Biochemical and biophysical reasearch communications，1997 ，236(2)，275-279
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5，Konturek SK，Konturek PC.Role of nitric oxide in the digestive system.Diges tion，1995，56(1)：1-13
6，Cook TH，Bune AJ,Jansen AS，et al.Celluclar localization of inducible nitric oxide synthase in experimental endotoxic shock in rat.Clini Sci,1994,87：179- 184
7，Sato K，Miyakawak，Takeya M，et al.Immunohistochemical expresion of inducib le nitric oxide synthase in reversible endotoxic shock studied by a novel monocl onal antibody against rat iNOS.J Leukoc Bio,1995,57(1)：36-42
(收稿日期：2000-03-07), http://www.100md.com