缺血性脑血管病患者血浆和血小板提取液神经肽Y与神经降压素的改变
作者：罗南萍 杨道理 陈青 武翠华 齐法莲
单位：济南军区总医院免疫科(济南 250031)
关键词：脑缺血；脑血管意外；神经肽Y；神经降压肽；血小板；血浆
中国病理生理杂志990823 摘 要 目的和方法：采用放射免疫分析法，观察58例不同病因的缺血性脑血管病(ICVD)患者血小板提取液和血浆中神经肽Y(NPY)与神经降压素(NT)的含量变化。结果：在ICVD患者血小板提取液中NPY含量明显低于对照组，血浆中NPY则明显高于对照组。血小板中NPY减少与血浆浓度的增高呈明显负相关(r=-0.60， P<0.01)。NT含量在患者血小板液中显著增高。结论：NPY与NT在ICVD病理过程中，由血小板大量释放并积极参与了以缩血管效应为主的病理反应，是造成血栓形成、局部血管痉挛的重要病理因素。
Change of neuropeptide Y and neurotensin of plasma and platelet
, http://www.100md.com
extract liquid in patients with ischemic cerebrovascular disease
LUO Nan-Ping, YANG Dao-Li, CHEN Qing, WU Cui-Hua, QI Fa-Lian
Department of Immunology, Jinan Military General Hospital, Jinan (250031)
Abstract AIM and METHODS: Content of neuropeptide Y, neurotensin in platelet extract liquid and in plasma were detected by radia-immunity Analysis (RIA) in 58 patients with ischemic cerebrovascular disease. RESULTS: Levels of neuropeptide Y were significantly lower in platelet extract liquid and were significantly higher in plasma of patients than that of controls. Decreasing of the neuropeptide Y in platelet extract liquid was negatively correlated to increasing of the neuropeptide Y in plasma (r=-0.60, P<0.01). Neurotensin of platelet extract liquid increased significantly in patients. CONCLUSIONS: Neuropeptide Y, neurotensin, which is in antagonism, are released from platelet and participate in pathological reaction mainly in vasoconstrictive action in the pathologic process of ischemic cerebrovascular disease. This is an important pathologic factor of thrombus formation and local vasospasm.
, 百拇医药
MeSH Cerebral ischemia; Cerebrovascular disorders; Neuropeptide Y; Neurotensin; Blood platelet; Plasma
神经肽Y(neuropeptide Y, NPY)与神经降压素(neurotensin, NT)是一组生物学作用相拮抗的活性多肽，一直被认为仅分布于神经系统中[1]。1987年Ericsson等[2]首先发现大鼠等巨核细胞具有合成NPY的能力，并储存于血小板，在血小板聚集时释放，并参与其它活性物质的缩血管效应。至今对血小板储存、释放NPY与NT的功能及其病理生理作用了解甚少。本工作首先从缺血性脑血管病(ischemic cerebrovascular disease, ICVD)患者血浆中分离出血小板，对血小板提取液和贫血小板血浆中NPY与NT进行放射免疫定量检测，旨在探讨ICVD时由血小板释放的NPY和NT的变化特点及其在病理过程中的意义。
, 百拇医药
资料与方法
一、临床资料：
ICVD患者58例，均为老年男性患者。年龄53～77岁，平均65岁。按第二届全国脑血管病会议制定的诊断标准，将患者分为急性脑梗塞(acute cerebral infarction, ACI) 13例，脑梗塞后遗症(sequel of cerebral infarction, SCI) 20例，椎基底动脉供血不足(vertebrobasislar ischemia, VBI) 13例，脑动脉硬化(cerebral arteriosclerosis, CA) 12例。急性脑梗塞患者发病后4 h收入院治疗，而慢性脑梗塞病程达6年。
正常人组45例，选择男性健康献血员及经健康查体的老干部，年龄28～75岁，平均51.5岁。排除心、脑、肺、肝、肾等疾病。
二、方法：
, 百拇医药
1.血小板提取液的制备：抽取ICVD患者及正常人空腹静脉血3 mL，立即注入含有EDTA-Na2的塑料试管中，轻轻混匀，于4℃ 500 r/min离心30 min后，将血浆移至另一硅化塑料试管中，置4℃ 2 000 r/min再次离心30 min，取上清作为贫血小板的血浆标本，沉淀即为血小板。以生理盐水洗涤沉淀一次，离心倾去上清，于沉淀中加入1 mL生理盐水，充分混匀后在F800血球计数仪上行血小板计数，调整血小板数为1×109/L。将血小板混悬液与血浆置-30℃以下待测。
2.样品NPY与NT含量测定：①将血小板混悬液于-37℃～37℃反复冻融3～4次，镜下观察血小板形态大部分裂解，破碎，再以抽干机浓缩抽干后，取1 mL生理盐水复溶，待充分溶解后进行NPY与NT含量的放射免疫测定。②人工合成的NPY、NT与相应抗体均为Sigma公司产品。NPY碘标记物为美国Amersham公司产品，[125 I]-NPY稀释后为14 000 counts*min-1，NPY与NT抗血清与7种常见多肽类化合物交叉反应<1%。[125 I]-NT稀释后为17 000 counts*min-1。采用放射免疫分析非平衡法进行标准曲线及样品的复管检测。NPY与NT试剂均由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供。测量仪器由中国工业部北京核仪器厂提供的FT-630G微机多探头γ计数仪。
, 百拇医药
三、数据处理：
1.样品浓度计算：
2.所有数据以
±s表示，均数之间比较采用t检验。
结 果
(一)ICVD患者与正常人血小板及血浆中NPY、NT水平见表1。
表1 ICVD患者与正常人血小板及血浆中NPY、NT水平
Tab 1 The level of platelet and plasma NPY，NT in ICVD patients and control (±s) Group
, 百拇医药
n
Platelet
Plasma
NPY
NT
NPY
NT
ICVD
58
29.36±15.13**
40.53±43.37
119.11±51.46**
, 百拇医药
47.79±19.92**
Control
45
59.52±22.38
22.46±10.27
90.31±12.9
63.15±26.15
*P<0.05, **P<0.01, vs control
(二)不同病因组ICVD患者血小板提取液与血浆中NPY、NT含量见表2。
表2 不同病因ICVD患者血小板、血浆中NPY与NT含量变化
, 百拇医药
Tab 2 Alteration of platelet and plasma NPY，NT content in ICVD patients with different cause of disease (±s) Group
n
Platelet
Plasma
NPY
NT
NPY
NT
ACI
, http://www.100md.com
13
27.9±8.16**
33.39±29.45
102.25±60.38**
30.87±10.37**
SCI
20
38.42±17.12**
53.09±55.68**
138.22±38.61**
, 百拇医药
43.19±18.7*
CA
13
24.34±11.43**
45.44±53.39
99.10±50.36
49.85±19.9*
VBI
12
29.51±19.42**
20.41±5.44
, 百拇医药
105.37±30.05
52.41±20.8**
Control
45
59.52±22.38
22.46±10.27
90.31±12.9
63.15±26.15**
*P<0.05, **P<0.01, vs control
(三)使用第二军医大学卫生统计教研室编写的“实用医学统计学”中直线相关回归分析显示，ICVD患者血小板NPY含量明显减少与血浆浓度增高呈显著负相关(r=-0.60， P<0.01)。血小板中NPY与NT水平、血浆NPY与NT水平之间无明显相关性(P>0.05)。
, http://www.100md.com
讨 论
Myety[3]发现血循环中NPY大部分来自血小板。1991年Erisson[4]又进一步证实大鼠血小板中存在与NPY合成相关联的mRNA，表明血小板是合成NPY的主要细胞。在本实验中，采用放射免疫分析法从ICVD患者与正常人血小板提取液中均能测出NPY与NT，推测在血小板上可能存在NPY和NT的结合位点。而血小板释放的NPY可引起血管收缩，心肌抑制和血栓形成[5]。58例ICVD患者血小板中NPY含量明显低于对照组，差异十分显著(P<0.01)，而测得ICVD患者血浆中NPY含量明显增高，提示在脑梗塞、动脉硬化等病理因素所致的ICVD过程中，经常有血管内膜的损伤，进而引起血小板聚集并伴有NPY大量释放入血，致使血浆中NPY增高。血小板激活后由其释放的NPY可引起血管的收缩，持久的血管平滑肌收缩，加之组织缺血，血栓形成，进一步改变血液动力学，从而成为局部血管痉挛的重要发病环节。
, http://www.100md.com NT是由13个氨基酸组成的脑肠肽，首先从哺乳动物的脑组织中分离出来，在脑组织含量较高[6]。其主要生物学效应是强烈舒张血管、降低血压。有实验证实[7]，NT降血压作用是促进肥大细胞释放组织胺等生物活性物质引起，它可在体内拮抗NPY并与5羟色胺、血栓烷等缩血管肽的作用，从而降低血压。在本组ICVD患者中，血小板提取液中NT水平增高，是由于患者血浆中含有高水平的NPY，为拮抗NPY强烈的缩血管作用，交感神经兴奋，从而促使血小板合成分泌NT增多，是血小板中NT增高的重要原因。在脑血栓形成所致的ICVD时，血浆中NT较对照组浓度减少，可能与血栓堵塞血管后，使脑组织供血量减少有关，高血压病入均有小动脉口径变细，脑组织和消化道供血量减少，导致NT的合成与释放入血浆的量减少。
从相关实验中看出，ICVD患者血小板提取液和血浆中NPY关系十分密切，充分证实血浆中大量增加的NPY均来自血小板的释放。血小板释放NPY、NT可作为血管间的一种传递者，直接或与其它缩血管物质(如5-羟色胺等)协同作用，发挥缩血管效应。这种显著的反向变化提示NPY与NT在ICVD中起十分重要的作用。
, 百拇医药
(致谢：解放军总医院李振甲教授给予指导与帮助，深表谢意)
参考文献
1 Ailen JM, Bloom SR. Neuopeptide Y: a putative neurotransmsitter. Neurochem,1986,8:8.
2 Ericsson A, Schalling M, Mcintyre KR, et al. Detection of neuopeptide Y and its mRNA in megakaryocytes: Enhanced levels in artain autoimmune mice. Proc Natl Acad Sci USA,1987,84:5585.
3 Myers AK, Farhat MY, Vaz CA, et al. Release of immunoreactive-neuropeptide by rat platelets. Bionchem Biophys Res Commun,1988,155(1):118.
, 百拇医药
4 Ericsson A, Hemsen A, Lundberg JM, et al. Detection of neuropeptide Y-like immunoreactivity and messenger RNA in rat platelets: The effects of vinblastine reserpine and dexamethasone on NPY expression in blood cells. Exp Cell Res,1991,192(2):604.
5 杨耀芳，杨丽华，施广璞.血小板释放的一种多肽-神经肽Y.国外医学输血及血液分册，1992，15：197.
6 陈家津，吕秀文，徐珞.脑血管病脑脊液神经降压素含量的改变.基础医学与临床，1991，11：58.
7 蔡强.神经降压素.国外医学消化系统疾病分册，1986，3：129.
(1998年4月6日收稿，1998年11月6日修回), 百拇医药
单位：济南军区总医院免疫科(济南 250031)
关键词：脑缺血；脑血管意外；神经肽Y；神经降压肽；血小板；血浆
中国病理生理杂志990823 摘 要 目的和方法：采用放射免疫分析法，观察58例不同病因的缺血性脑血管病(ICVD)患者血小板提取液和血浆中神经肽Y(NPY)与神经降压素(NT)的含量变化。结果：在ICVD患者血小板提取液中NPY含量明显低于对照组，血浆中NPY则明显高于对照组。血小板中NPY减少与血浆浓度的增高呈明显负相关(r=-0.60， P<0.01)。NT含量在患者血小板液中显著增高。结论：NPY与NT在ICVD病理过程中，由血小板大量释放并积极参与了以缩血管效应为主的病理反应，是造成血栓形成、局部血管痉挛的重要病理因素。
Change of neuropeptide Y and neurotensin of plasma and platelet
, http://www.100md.com
extract liquid in patients with ischemic cerebrovascular disease
LUO Nan-Ping, YANG Dao-Li, CHEN Qing, WU Cui-Hua, QI Fa-Lian
Department of Immunology, Jinan Military General Hospital, Jinan (250031)
Abstract AIM and METHODS: Content of neuropeptide Y, neurotensin in platelet extract liquid and in plasma were detected by radia-immunity Analysis (RIA) in 58 patients with ischemic cerebrovascular disease. RESULTS: Levels of neuropeptide Y were significantly lower in platelet extract liquid and were significantly higher in plasma of patients than that of controls. Decreasing of the neuropeptide Y in platelet extract liquid was negatively correlated to increasing of the neuropeptide Y in plasma (r=-0.60, P<0.01). Neurotensin of platelet extract liquid increased significantly in patients. CONCLUSIONS: Neuropeptide Y, neurotensin, which is in antagonism, are released from platelet and participate in pathological reaction mainly in vasoconstrictive action in the pathologic process of ischemic cerebrovascular disease. This is an important pathologic factor of thrombus formation and local vasospasm.
, 百拇医药
MeSH Cerebral ischemia; Cerebrovascular disorders; Neuropeptide Y; Neurotensin; Blood platelet; Plasma
神经肽Y(neuropeptide Y, NPY)与神经降压素(neurotensin, NT)是一组生物学作用相拮抗的活性多肽，一直被认为仅分布于神经系统中[1]。1987年Ericsson等[2]首先发现大鼠等巨核细胞具有合成NPY的能力，并储存于血小板，在血小板聚集时释放，并参与其它活性物质的缩血管效应。至今对血小板储存、释放NPY与NT的功能及其病理生理作用了解甚少。本工作首先从缺血性脑血管病(ischemic cerebrovascular disease, ICVD)患者血浆中分离出血小板，对血小板提取液和贫血小板血浆中NPY与NT进行放射免疫定量检测，旨在探讨ICVD时由血小板释放的NPY和NT的变化特点及其在病理过程中的意义。
, 百拇医药
资料与方法
一、临床资料：
ICVD患者58例，均为老年男性患者。年龄53～77岁，平均65岁。按第二届全国脑血管病会议制定的诊断标准，将患者分为急性脑梗塞(acute cerebral infarction, ACI) 13例，脑梗塞后遗症(sequel of cerebral infarction, SCI) 20例，椎基底动脉供血不足(vertebrobasislar ischemia, VBI) 13例，脑动脉硬化(cerebral arteriosclerosis, CA) 12例。急性脑梗塞患者发病后4 h收入院治疗，而慢性脑梗塞病程达6年。
正常人组45例，选择男性健康献血员及经健康查体的老干部，年龄28～75岁，平均51.5岁。排除心、脑、肺、肝、肾等疾病。
二、方法：
, 百拇医药
1.血小板提取液的制备：抽取ICVD患者及正常人空腹静脉血3 mL，立即注入含有EDTA-Na2的塑料试管中，轻轻混匀，于4℃ 500 r/min离心30 min后，将血浆移至另一硅化塑料试管中，置4℃ 2 000 r/min再次离心30 min，取上清作为贫血小板的血浆标本，沉淀即为血小板。以生理盐水洗涤沉淀一次，离心倾去上清，于沉淀中加入1 mL生理盐水，充分混匀后在F800血球计数仪上行血小板计数，调整血小板数为1×109/L。将血小板混悬液与血浆置-30℃以下待测。
2.样品NPY与NT含量测定：①将血小板混悬液于-37℃～37℃反复冻融3～4次，镜下观察血小板形态大部分裂解，破碎，再以抽干机浓缩抽干后，取1 mL生理盐水复溶，待充分溶解后进行NPY与NT含量的放射免疫测定。②人工合成的NPY、NT与相应抗体均为Sigma公司产品。NPY碘标记物为美国Amersham公司产品，[125 I]-NPY稀释后为14 000 counts*min-1，NPY与NT抗血清与7种常见多肽类化合物交叉反应<1%。[125 I]-NT稀释后为17 000 counts*min-1。采用放射免疫分析非平衡法进行标准曲线及样品的复管检测。NPY与NT试剂均由解放军总医院东亚免疫技术研究所提供。测量仪器由中国工业部北京核仪器厂提供的FT-630G微机多探头γ计数仪。
, 百拇医药
三、数据处理：
1.样品浓度计算：
2.所有数据以
±s表示，均数之间比较采用t检验。结 果
(一)ICVD患者与正常人血小板及血浆中NPY、NT水平见表1。
表1 ICVD患者与正常人血小板及血浆中NPY、NT水平
Tab 1 The level of platelet and plasma NPY，NT in ICVD patients and control (
±s) Group, 百拇医药
n
Platelet
Plasma
NPY
NT
NPY
NT
ICVD
58
29.36±15.13**
40.53±43.37
119.11±51.46**
, 百拇医药
47.79±19.92**
Control
45
59.52±22.38
22.46±10.27
90.31±12.9
63.15±26.15
*P<0.05, **P<0.01, vs control
(二)不同病因组ICVD患者血小板提取液与血浆中NPY、NT含量见表2。
表2 不同病因ICVD患者血小板、血浆中NPY与NT含量变化
, 百拇医药
Tab 2 Alteration of platelet and plasma NPY，NT content in ICVD patients with different cause of disease (
±s) Groupn
Platelet
Plasma
NPY
NT
NPY
NT
ACI
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13
27.9±8.16**
33.39±29.45
102.25±60.38**
30.87±10.37**
SCI
20
38.42±17.12**
53.09±55.68**
138.22±38.61**
, 百拇医药
43.19±18.7*
CA
13
24.34±11.43**
45.44±53.39
99.10±50.36
49.85±19.9*
VBI
12
29.51±19.42**
20.41±5.44
, 百拇医药
105.37±30.05
52.41±20.8**
Control
45
59.52±22.38
22.46±10.27
90.31±12.9
63.15±26.15**
*P<0.05, **P<0.01, vs control
(三)使用第二军医大学卫生统计教研室编写的“实用医学统计学”中直线相关回归分析显示，ICVD患者血小板NPY含量明显减少与血浆浓度增高呈显著负相关(r=-0.60， P<0.01)。血小板中NPY与NT水平、血浆NPY与NT水平之间无明显相关性(P>0.05)。
, http://www.100md.com
讨 论
Myety[3]发现血循环中NPY大部分来自血小板。1991年Erisson[4]又进一步证实大鼠血小板中存在与NPY合成相关联的mRNA，表明血小板是合成NPY的主要细胞。在本实验中，采用放射免疫分析法从ICVD患者与正常人血小板提取液中均能测出NPY与NT，推测在血小板上可能存在NPY和NT的结合位点。而血小板释放的NPY可引起血管收缩，心肌抑制和血栓形成[5]。58例ICVD患者血小板中NPY含量明显低于对照组，差异十分显著(P<0.01)，而测得ICVD患者血浆中NPY含量明显增高，提示在脑梗塞、动脉硬化等病理因素所致的ICVD过程中，经常有血管内膜的损伤，进而引起血小板聚集并伴有NPY大量释放入血，致使血浆中NPY增高。血小板激活后由其释放的NPY可引起血管的收缩，持久的血管平滑肌收缩，加之组织缺血，血栓形成，进一步改变血液动力学，从而成为局部血管痉挛的重要发病环节。
, http://www.100md.com NT是由13个氨基酸组成的脑肠肽，首先从哺乳动物的脑组织中分离出来，在脑组织含量较高[6]。其主要生物学效应是强烈舒张血管、降低血压。有实验证实[7]，NT降血压作用是促进肥大细胞释放组织胺等生物活性物质引起，它可在体内拮抗NPY并与5羟色胺、血栓烷等缩血管肽的作用，从而降低血压。在本组ICVD患者中，血小板提取液中NT水平增高，是由于患者血浆中含有高水平的NPY，为拮抗NPY强烈的缩血管作用，交感神经兴奋，从而促使血小板合成分泌NT增多，是血小板中NT增高的重要原因。在脑血栓形成所致的ICVD时，血浆中NT较对照组浓度减少，可能与血栓堵塞血管后，使脑组织供血量减少有关，高血压病入均有小动脉口径变细，脑组织和消化道供血量减少，导致NT的合成与释放入血浆的量减少。
从相关实验中看出，ICVD患者血小板提取液和血浆中NPY关系十分密切，充分证实血浆中大量增加的NPY均来自血小板的释放。血小板释放NPY、NT可作为血管间的一种传递者，直接或与其它缩血管物质(如5-羟色胺等)协同作用，发挥缩血管效应。这种显著的反向变化提示NPY与NT在ICVD中起十分重要的作用。
, 百拇医药
(致谢：解放军总医院李振甲教授给予指导与帮助，深表谢意)
参考文献
1 Ailen JM, Bloom SR. Neuopeptide Y: a putative neurotransmsitter. Neurochem,1986,8:8.
2 Ericsson A, Schalling M, Mcintyre KR, et al. Detection of neuopeptide Y and its mRNA in megakaryocytes: Enhanced levels in artain autoimmune mice. Proc Natl Acad Sci USA,1987,84:5585.
3 Myers AK, Farhat MY, Vaz CA, et al. Release of immunoreactive-neuropeptide by rat platelets. Bionchem Biophys Res Commun,1988,155(1):118.
, 百拇医药
4 Ericsson A, Hemsen A, Lundberg JM, et al. Detection of neuropeptide Y-like immunoreactivity and messenger RNA in rat platelets: The effects of vinblastine reserpine and dexamethasone on NPY expression in blood cells. Exp Cell Res,1991,192(2):604.
5 杨耀芳，杨丽华，施广璞.血小板释放的一种多肽-神经肽Y.国外医学输血及血液分册，1992，15：197.
6 陈家津，吕秀文，徐珞.脑血管病脑脊液神经降压素含量的改变.基础医学与临床，1991，11：58.
7 蔡强.神经降压素.国外医学消化系统疾病分册，1986，3：129.
(1998年4月6日收稿，1998年11月6日修回), 百拇医药