维生素A及维生素C对放线菌素D诱发的肺巨噬细胞凋亡的影响
作者：徐世侠 叶广俊 薛彬 马波
单位：徐世侠 马波：北京海军总医院儿科(北京 100037)；叶广俊 薛彬：马波北京医科大学公卫学院
关键词：
维生素A及维生素C对放线菌素D诱发的 肺巨噬细胞凋亡的影响 肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages, AM)具有较强的吞噬和杀菌功能，在肺部免疫中起着重要的作用，细胞凋亡(apoptosis)是细胞生命的特征之一，通过细胞凋亡机体维持着自身的平衡。研究表明维生素A及维生素C可防治呼吸道感染。本研究的目的是观察维生素A及维生素C对肺巨噬细胞凋亡的影响。
材料与方法
(一) 4～6周的Wistar大鼠，体重120～140 g，通过支气管肺灌洗制备AM。
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(二) 细胞培养：AM加入24孔培养板中，在每孔用含2 μg/mL的放线菌素D及不同浓度(10-9～10-5 mol/L)的维生素A及维生素C的RPMI-1640培养基中培养。
(三) 电镜观察：AM用戊二醛及锇酸固定，丙酮固定后包埋，透射电镜观察。
(四) DNA片段的提取及及琼脂糖电泳：细胞悬液1 000 r/min离心，弃上清，加入0.5 mL细胞裂解液，蛋白酶K消化，酚：氯仿：异戊醇提取，乙醇过夜沉淀后1.8%琼脂糖电泳，紫外灯下观察，照相。
(五) 流式细胞仪分析：细胞沉淀加入1 mL的碘化丙啶染液，过夜后用流式细胞仪检测亚二倍体的细胞数。
结果
(一)电镜观察：可见放线菌素D诱发的AM的凋亡，表现为核固缩及膜包备的凋亡小体。见图1。
, 百拇医药
Fig 1 Apoptosis of AM induced by actinomycin D
图1 放线菌素D诱发的肺巨噬细胞的凋亡
(二)DNA琼脂糖电泳：2 μg/mL的放线菌素D培养20 h可诱发肺巨噬细胞的凋亡，琼脂糖电泳可见典型的梯状带，而同时加入不同浓度的维生素A及维生素C对放线菌素D诱发的肺巨噬细胞凋亡无明显影响。见图2-3。
(三)流式细胞仪检测结果：在AM的培养基中加入2 μg/mL放线菌素D培养24 h后，流式细胞仪检测发现了亚二倍体的细胞峰，凋亡细胞占54%，而加入不同浓度的维生素A对放线菌素D诱发的肺巨噬细胞的凋亡无明显影响，凋亡细胞数在49.5%～58.7%之间。
, 百拇医药
Fig 2 Effect of vitamin A on the apoptosis of AM induced by actinomycin D
1 Lane:100bp ladder; 2 Lane:actinomycin D; 3 Lane:negative control; 4 Lane:actinomycin D+10-6 mol/L vitamin A; 5 Lane:actinomycin D+10-7 mol/L vitamin A; 6 Lane:actinomycin D+10-8 mol/L vitamin A;
7 Lane:actinomycin D+10-9 mol/L vitamin A
图2 维生素A对放线菌素D诱发的肺巨噬细胞的凋亡
, 百拇医药
Fig 3 Effect of vitamin C on the apoptosis of AM induced by actinomycin D
1 Lane:100bp ladder; 2 Lane:actinomycin D; 3 4 Lane:negative control; 5 Lane:actinomycin D+10-6 mol/L vitamin C; 6 Lane:actinomycin D+10-7 mol/L vitamin C; 7 Lane:actinomycin D+10-8 mol/L vitamin C;
8 Lane:actinomycin D+10-9 mol/L vitamin C
图3 维生素C对放线菌素D诱发的肺巨噬细胞的凋亡
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讨论
放线菌素D可诱发多种组织细胞的凋亡，但未见对肺巨噬细胞凋亡方面的研究。放线菌素D在凋亡中的作用，文献报道不一，有人认为属于抑制剂，理由是凋亡为一主动过程，需要合成一些相关的酶类和蛋白质，放线菌素D作为蛋白质合成的抑制剂可抑制这一过程，而另有人认为放线菌素D可诱发腹腔巨噬细胞的凋亡。本实验从形态学，DNA琼脂糖电泳及流式细胞仪分析三方面证实了放线菌素D可诱发的肺巨噬细胞的凋亡。本研究结果表明维生素A及维生素C对放线菌素D诱发的肺巨噬细胞的凋亡无明显影响，维生素A及维生素C防治呼吸道感染的作用可能在于促进AM产生细胞因子而对AM的凋亡无明显影响。
(1998年12月7日收稿，1999年5月25日修回), http://www.100md.com
单位：徐世侠 马波：北京海军总医院儿科(北京 100037)；叶广俊 薛彬：马波北京医科大学公卫学院
关键词：
维生素A及维生素C对放线菌素D诱发的 肺巨噬细胞凋亡的影响 肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages, AM)具有较强的吞噬和杀菌功能，在肺部免疫中起着重要的作用，细胞凋亡(apoptosis)是细胞生命的特征之一，通过细胞凋亡机体维持着自身的平衡。研究表明维生素A及维生素C可防治呼吸道感染。本研究的目的是观察维生素A及维生素C对肺巨噬细胞凋亡的影响。
材料与方法
(一) 4～6周的Wistar大鼠，体重120～140 g，通过支气管肺灌洗制备AM。
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(二) 细胞培养：AM加入24孔培养板中，在每孔用含2 μg/mL的放线菌素D及不同浓度(10-9～10-5 mol/L)的维生素A及维生素C的RPMI-1640培养基中培养。
(三) 电镜观察：AM用戊二醛及锇酸固定，丙酮固定后包埋，透射电镜观察。
(四) DNA片段的提取及及琼脂糖电泳：细胞悬液1 000 r/min离心，弃上清，加入0.5 mL细胞裂解液，蛋白酶K消化，酚：氯仿：异戊醇提取，乙醇过夜沉淀后1.8%琼脂糖电泳，紫外灯下观察，照相。
(五) 流式细胞仪分析：细胞沉淀加入1 mL的碘化丙啶染液，过夜后用流式细胞仪检测亚二倍体的细胞数。
结果
(一)电镜观察：可见放线菌素D诱发的AM的凋亡，表现为核固缩及膜包备的凋亡小体。见图1。
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Fig 1 Apoptosis of AM induced by actinomycin D
图1 放线菌素D诱发的肺巨噬细胞的凋亡
(二)DNA琼脂糖电泳：2 μg/mL的放线菌素D培养20 h可诱发肺巨噬细胞的凋亡，琼脂糖电泳可见典型的梯状带，而同时加入不同浓度的维生素A及维生素C对放线菌素D诱发的肺巨噬细胞凋亡无明显影响。见图2-3。
(三)流式细胞仪检测结果：在AM的培养基中加入2 μg/mL放线菌素D培养24 h后，流式细胞仪检测发现了亚二倍体的细胞峰，凋亡细胞占54%，而加入不同浓度的维生素A对放线菌素D诱发的肺巨噬细胞的凋亡无明显影响，凋亡细胞数在49.5%～58.7%之间。
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Fig 2 Effect of vitamin A on the apoptosis of AM induced by actinomycin D
1 Lane:100bp ladder; 2 Lane:actinomycin D; 3 Lane:negative control; 4 Lane:actinomycin D+10-6 mol/L vitamin A; 5 Lane:actinomycin D+10-7 mol/L vitamin A; 6 Lane:actinomycin D+10-8 mol/L vitamin A;
7 Lane:actinomycin D+10-9 mol/L vitamin A
图2 维生素A对放线菌素D诱发的肺巨噬细胞的凋亡
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Fig 3 Effect of vitamin C on the apoptosis of AM induced by actinomycin D
1 Lane:100bp ladder; 2 Lane:actinomycin D; 3 4 Lane:negative control; 5 Lane:actinomycin D+10-6 mol/L vitamin C; 6 Lane:actinomycin D+10-7 mol/L vitamin C; 7 Lane:actinomycin D+10-8 mol/L vitamin C;
8 Lane:actinomycin D+10-9 mol/L vitamin C
图3 维生素C对放线菌素D诱发的肺巨噬细胞的凋亡
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讨论
放线菌素D可诱发多种组织细胞的凋亡，但未见对肺巨噬细胞凋亡方面的研究。放线菌素D在凋亡中的作用，文献报道不一，有人认为属于抑制剂，理由是凋亡为一主动过程，需要合成一些相关的酶类和蛋白质，放线菌素D作为蛋白质合成的抑制剂可抑制这一过程，而另有人认为放线菌素D可诱发腹腔巨噬细胞的凋亡。本实验从形态学，DNA琼脂糖电泳及流式细胞仪分析三方面证实了放线菌素D可诱发的肺巨噬细胞的凋亡。本研究结果表明维生素A及维生素C对放线菌素D诱发的肺巨噬细胞的凋亡无明显影响，维生素A及维生素C防治呼吸道感染的作用可能在于促进AM产生细胞因子而对AM的凋亡无明显影响。
(1998年12月7日收稿，1999年5月25日修回), http://www.100md.com