补肾活血中药对免疫介导再障小鼠骨髓CD+45细胞的影响
作者：张荣华
单位：张荣华(暨南大学医学院中医学系 暨南大学医学院第一附院，广东 广州510630)
关键词：贫血，再生障碍性；骨髓；小鼠；免疫，细胞
中国病理生理杂志000715
[摘 要] 目的：观察补肾活血中药对免疫介导再障小鼠CD+45细胞的影响。方法：建立免疫介导再障小鼠模型，随机分组胃饲生理盐水、高剂量中药、低剂量中药、环孢素A(CsA)，并设正常对照，第10 d分别称体重、计算外周血细胞和骨髓有核细胞数、采用流式细胞技术测定骨髓CD+45细胞。结果：中药组小鼠体重、外周血细胞、骨髓有核细胞数、骨髓CD+45细胞显著高于空白模型组和CsA组，而接近正常对照组。结论：补肾活血中药对免疫介导再障小鼠的骨髓造血细胞有保护作用。
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[中图分类号] R331.2
[文献标识码] A
[文章编号] 1000-4718(2000)07-0633-04
Study on efficacy of the decoction of invigorating kidney and activating blood
circulation in BALB/C mice with immune mediated aplastic anemia
ZHANG Rong-hua
(First Affiliated Hospital, Dept. of TCM of Medical College, Jinan University, Guangzhou 510630， China)
, 百拇医药
[Abstract] AIM and METHODS: To study the efficacy of the decoction of invigorating kidney and activating blood circulation(DIKABC) in BALB/C mice with immune mediated aplastic anemia. 50 female BALB/C mice at 8～12 weeks of age were divided into 5 groups:(1) control,(2) model,(3) model+DIKABC(H), (4) model+DIKABC(L), and (5) model+ciclosporin A(CsA). The model of immune mediated aplastic anemia in BALB/C mice, which received sublethal whole body irradiation, lymph node and thymus cells of DBA/2 mice, was given different liquid from groups and administered appropriately for 9 days, blood cells and bone marrow nucleated cells(BMNC) and CD+45 cells were determined by flow cytomytry(FCM).RESULTS: RBC,WBC,Platelet,BMNC in DIKABC groups were higher than those in model group (P<0.01/0.05), but those in CsA group were lower than those in DIKABC groups (P<0.05).Compared with model group, CD+45 cells in DIKABC groups increased (P<0.05),but were lower than those in control groups (P<0.05). CONCLUSION： The decoction of invigorating kidney and activating blood circulation could increase the percentages of CD+45 cells in bone marrow and prevent immune mediated aplastic anemia in BALB/C mice.
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[MeSH] Anemia, aplastic; Bone marrow; Mice; Immunity, cellular
再生障碍性贫血(aplastic anemia, AA)是一种异质性疾病，发病机制极为复杂，治疗也趋盲目性和经验性。中医理论认为AA之病理机制在于肾虚和瘀滞，我们总结出治疗AA的补肾活血基本方，取得明显疗效[1]。本研究采用有关细胞分子指标(包括CD45抗原检测)，观察补肾活血中药水煎剂(由补肾活血基本方炮制而成)对免疫介导再障小鼠骨髓CD+45细胞的影响。
材 料 和 方 法
一、实验动物
BALB/C小鼠(H-2d，Mlsb)，8～12周龄，17～20 g，雌性，作为受体。由广州中山医科大学实验动物中心提供(合格证书：粤卫动字26-97003)。DBA/2小鼠(H-2d, Mlsa)，8～12周龄，15～20 g，雌雄兼用，作为细胞供体。由北京中国医学科学院实验动物研究所提供(合格证书： 医动字第01-3005号)。
, 百拇医药
二、补肾活血溶液
补肾活血基本方由仙灵脾、骨碎补、枸杞子、当归、黄芪等12味中药组成，制成100%及200%水提取液备用，由本院附属第一医院中药制剂室提供。
三、环孢素A(ciclosporin A，CsA)溶液
由本院附属第一医院药剂科提供SANDOZ生产的sandimmun(新山地明口服液：每毫升含环孢素100 mg)1 mL，用0.9%生理盐水稀释，配制成15%浓度的CsA溶液，备用。
四、胸腺、淋巴结细胞悬液
DBA/2小鼠断颈处死，常规消毒，无菌取出胸腺及颈部、颌下、腋窝、腹股沟、肠系膜等处淋巴结，胸腺和淋巴结分别加少量PBS液，轻轻磨碎后过滤，使成单细胞悬液，台盼蓝鉴定，活性细胞应达95%以上。计数后，胸腺细胞与淋巴细胞以1∶2的比例混合，配成浓度为5×106/mL的单细胞悬液，备用。
, 百拇医药
五、小鼠再生障碍性贫血模型复制
依姚军等[2]方法。BALB/C小鼠经6Gy60Coγ射线亚致死量全身照射后，4 h内经尾静脉输注取自DBA/2小鼠的胸腺、淋巴结混合细胞悬液，注射量0.2 mL/只，注射细胞数1×106/只。模型复制即告完成。
六、动物分组
取正常BALB/C小鼠50只，随机取其中10只，作为正常对照组(I)，胃饲生理盐水0.2 mL/次；其余40只制模后，随机分为4组：模型对照组(II)，胃饲生理盐水0.2 mL/次；中药高剂量组(III)，胃饲200%补肾活血溶液0.2 mL/次；中药低剂量组(IV)，胃饲100%补肾活血溶液0.2 mL/次；CsA组(V)，胃饲15%CsA药液0.2 mL/次(根据人鼠剂量换算关系)。造模第1 d始分别做相应胃饲处理，每天2次，共9 d。
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七、周围血细胞、骨髓有核细胞数
处理后第10 d，全部5组小鼠，称重，取眶静脉血，做常规计数RBC、WBC、PLT。再将小鼠断颈处死，取左侧股骨，用PBS液冲出骨髓细胞，计数，即为1根股骨中的骨髓有核细胞数。并用所取出骨髓细胞制备单个核细胞悬液(bone marrow nucleated cell, BMNC)。
八、骨髓CD+45细胞
取上述BMNC悬液3 mL，适量裂解液裂解红细胞，PBS(加Na2N3, pH7.2)冲洗，用4%的甲醛固定后，再用PBS液冲洗，加入20 μL 1∶100稀释的FITC rat anti-mouseCD45抗体(购自PHARMINGEN公司)，室温下避光孵育30 min，PBS洗3次，流式细胞仪(FACStar plus)分析。测量结果以单参数组方图显示，用与主机联机的HP-300CONSORT300计算机进行数据处理，用道数来表示CD45抗原，在实验前以BALB/C小鼠血液红血球作为标准样品，使变异系数(CV值)<5%。
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九、数据处理
数据均±以均数标准差(
±s)表示，差异显著性以t检验判定。
结 果
一、大体改变
Ⅱ组在第7、9 d各死1只小鼠，剩余8只；V组在第9 d死1只小鼠，剩余9只。处死小鼠前称重发现，Ⅱ组体重明显下降(见表1)，解剖发现各脏器苍白，胸腺、脾脏、淋巴结缩小，部分鼠小肠有出血点；而Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组未发现有小肠出血点，脏器稍有苍白改变，胸腺、脾脏均略有缩小，与I组改变相接近。
二、外周血象
红细胞、白细胞、血小板计数在组Ⅱ均明显少，与其它各组相比有显著差异，见表1。
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表1 各组小鼠体重及外周血象的比较
Tab 1 Changes of weights and peripheral blood cells in rats(±s) Group
n
RBC(×1012/L)
WBC(×109/L)
PLT(×109/L)
Weight(g)
Ⅰ
, http://www.100md.com 10
978.15±96.98* *△
7.25±1.24* *△
82.45±9.51* *△
20.59±1.22*△
Ⅱ
8
254.83±33.91
2.53±0.39
19.35±0.75
14.10±0.91
, http://www.100md.com
Ⅲ
10
879.29±123.56* *△
6.22±2.31* *△
79.56±8.34* *△
19.28±1.13*△
Ⅳ
10
803.46±110.23* *△
5.82±1.95* *△
, 百拇医药
71.58±8.25* *△
18.94±1.20*
Ⅴ
9
678.68±106.37*
5.10±1.64*
65.33±7.96*
16.65±0.71
*P<0.05，* * P<0.01，vs group Ⅱ； △P<0.05，vs group V
, 百拇医药 I:normal+NS;II:model+NS;III:model+DIKABC(H);IV:model+ DIKABC(L);V:model+CsA
DIKABC：decoction of invigoration kidney and activating blood circulation
三、骨髓有核细胞数
在Ⅱ组明显少，与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ组比较，有显著差异。见表2。
表2 各组骨髓有核细胞数、CD45+细胞
Tab 2 Changes of BMNC/ CD45+cells in rats(±s) Group
, http://www.100md.com
n
BMNC(10/thighbone)
CD+45 cells(%)
Ⅰ
10
11.56±0.89* *△
62.40±3.9*△#
Ⅱ
8
1.25±0.13
19.98±3.7
, 百拇医药
Ⅲ
10
9.27±0.56* *△
48.28±4.2*△
Ⅳ
10
8.67±0.51* *△
43.36±3.5*△
Ⅴ
9
6.67±0.68*
, 百拇医药
26.74±3.5
* P<0.05, * * P<0.01，vs group Ⅱ; △P<0.05， vs group V; # P<0.05， vs group Ⅲ,Ⅳ
I:normal+NS;Ⅱ:model+NS;Ⅲ:model+DIKABC(H);Ⅳ:model+DIKABC(L);Ⅴ:model+CsA
四、各组小鼠骨髓CD+45细胞的比较
Ⅱ组骨髓CD+45细胞与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组相比，差异显著(P<0.05)；Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组骨髓CD+45细胞与Ⅴ组相比，差异亦显著(P<0.05)；Ⅲ、Ⅳ组与Ⅰ组之间亦有明显差异(P<0.05),见表2。
, 百拇医药
讨 论
参照姚军等[2]的方法复制了免疫介导的小鼠再障模型。本实验中再障小鼠的大体改变、外周血象变化及骨髓有核细胞变化特点与其报告相符，证明再障模型的建立是成功的。
小鼠经亚致死量γ射线照射后，输入H-2相同而mls抗原不同的小鼠胸腺、淋巴结混合细胞悬液后，可诱发小鼠再生障碍性贫血。该模型发生机制仍不明确，可能与再障小鼠体内出现造血抑制细胞和血浆粒单祖细胞抑制活性密切相关[3，4]。而这种针对宿主的从无到有，逐渐加强的造血抑制效应，最终导致了小鼠再障的发生[4]。
从外周血象的变化可见：补肾活血中药能够使免疫诱导的再障小鼠的周围血细胞增加，血细胞生成过程被认为是从造血细胞逐渐向单细胞分化成熟的过程。CD45抗原由一组分子量较大的跨膜糖蛋白组成[5]，存在于除成熟红细胞外所有造血细胞上[6，7]，属于蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrodine phosphatase，PTH)[5，8]，由于编码基因三个外显子的不同剪接和糖基化程度不同而产生多种分子量各异的CD45，内显子包含二个PTH催化区，在其分子胞浆区域具有蛋白酪氨酸磷酸酯酶活性，可通过负反馈来调节蛋白酪氨酸激酶介导的磷酸化，在细胞的正常信号传递、调控细胞增殖、分化和激活中起重要作用。造模结果，免疫诱导再障小鼠骨髓CD+45细胞明显减少，表明造血细胞减少。本研究结果提示：补肾活血中药能使免疫诱导再障小鼠骨髓CD+45细胞明显增多，其作用机制是否与补肾活血中药促进了造血细胞增殖、分化有关，非常值得进一步探讨。此外，干细胞抑制因子(SCI)即巨噬细胞炎症蛋白(MIP-1α)可抑制造血祖细胞增殖，研究[8]发现AA患者骨髓有核细胞中SCI/hMIP-lαRNA转录水平显著高于正常人。从骨髓有核细胞数的变化可见：补肾活血中药对骨髓有核细胞有保护作用，该复方是否对SCI/hMIP-lαRNA转录水平产生抑制，亦值得进一步研究。
, 百拇医药
补肾活血法治疗AA是随着对其发病机理认识的不断深入，在补肾和活血化瘀法治疗再障的基础上发展而来的。补肾活血中药对免疫诱导再障小鼠的周围血红细胞、白细胞、血小板及骨髓有核细胞等有提高作用，能防治免疫介导再障小鼠的贫血和骨髓衰竭，促进其骨髓造血功能的恢复，能够使免疫诱导再障小鼠骨髓CD+45细胞增多。我们认为：它具有补肾生血、去瘀生新、调节阴阳的作用，能够刺激造血细胞生长，这种作用可能是通过改善骨髓造血微环境和调节机体的免疫功能来实现的。
[参 考 文 献]
[1] 张荣华,丘和明. 补肾活血中药治疗再生障碍性贫血的临床研究[J].新中医， 2000,32(4):25～28.
[2] 姚 军,李树浓.淋巴细胞与再生障碍性贫血关系的实验研究[J].中华血液学杂志, 1991,12(5):229～231.
, 百拇医药
[3] 陈 俊,赵 波,李树浓,等.免疫介导的小鼠再生障碍性贫血骨髓CFU-S的改变及机制探讨[J].中华血液学杂志,1991,12(6):286～287.
[4] Chiu KM, Knospe WH. Inhibitor of granulocyte-mass macrophage colony formation plasma of mice rendered aplastic by allogeneic lymph-node cells[J].Exp Hematol,1989,17(3):335～337.
[5] Trowbridge IS， Thomas ML.CD45: An emerging role as a protein tyrosine phosphatase required for lymphocyte activation and development l[J]. Annu Rev Immunol,1994,12(1):85～116.
, 百拇医药
[6] Ledbetter JA, Herzenberg LA. Xenogenetic monoclonal antibodies to mouse lymphoid differentiation antigens[J].Immunol Rev,1979, 47(1):63～68.
[7] Van Ewijk W, PL van Soest, GJ van den Engh. Fluorescence analysis and anatomic distribution of mouse T lymphocyte subsets defined by monoclonal antibodies to the antigens Thy-1, Lyt-1, Lyt-2,and T-200[J]. J Immunol,1981, 127:2594～2598.
[8] Charbonneau H, Tonks NK.1002 protein phosphatases[J]? Annu Rev Cell Biol,1992,26 (8):463～496.
[收稿日期] 2000-05-25
[修回日期] 2000-06-30, 百拇医药
单位：张荣华(暨南大学医学院中医学系 暨南大学医学院第一附院，广东 广州510630)
关键词：贫血，再生障碍性；骨髓；小鼠；免疫，细胞
中国病理生理杂志000715
[摘 要] 目的：观察补肾活血中药对免疫介导再障小鼠CD+45细胞的影响。方法：建立免疫介导再障小鼠模型，随机分组胃饲生理盐水、高剂量中药、低剂量中药、环孢素A(CsA)，并设正常对照，第10 d分别称体重、计算外周血细胞和骨髓有核细胞数、采用流式细胞技术测定骨髓CD+45细胞。结果：中药组小鼠体重、外周血细胞、骨髓有核细胞数、骨髓CD+45细胞显著高于空白模型组和CsA组，而接近正常对照组。结论：补肾活血中药对免疫介导再障小鼠的骨髓造血细胞有保护作用。
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[中图分类号] R331.2
[文献标识码] A
[文章编号] 1000-4718(2000)07-0633-04
Study on efficacy of the decoction of invigorating kidney and activating blood
circulation in BALB/C mice with immune mediated aplastic anemia
ZHANG Rong-hua
(First Affiliated Hospital, Dept. of TCM of Medical College, Jinan University, Guangzhou 510630， China)
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[Abstract] AIM and METHODS: To study the efficacy of the decoction of invigorating kidney and activating blood circulation(DIKABC) in BALB/C mice with immune mediated aplastic anemia. 50 female BALB/C mice at 8～12 weeks of age were divided into 5 groups:(1) control,(2) model,(3) model+DIKABC(H), (4) model+DIKABC(L), and (5) model+ciclosporin A(CsA). The model of immune mediated aplastic anemia in BALB/C mice, which received sublethal whole body irradiation, lymph node and thymus cells of DBA/2 mice, was given different liquid from groups and administered appropriately for 9 days, blood cells and bone marrow nucleated cells(BMNC) and CD+45 cells were determined by flow cytomytry(FCM).RESULTS: RBC,WBC,Platelet,BMNC in DIKABC groups were higher than those in model group (P<0.01/0.05), but those in CsA group were lower than those in DIKABC groups (P<0.05).Compared with model group, CD+45 cells in DIKABC groups increased (P<0.05),but were lower than those in control groups (P<0.05). CONCLUSION： The decoction of invigorating kidney and activating blood circulation could increase the percentages of CD+45 cells in bone marrow and prevent immune mediated aplastic anemia in BALB/C mice.
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[MeSH] Anemia, aplastic; Bone marrow; Mice; Immunity, cellular
再生障碍性贫血(aplastic anemia, AA)是一种异质性疾病，发病机制极为复杂，治疗也趋盲目性和经验性。中医理论认为AA之病理机制在于肾虚和瘀滞，我们总结出治疗AA的补肾活血基本方，取得明显疗效[1]。本研究采用有关细胞分子指标(包括CD45抗原检测)，观察补肾活血中药水煎剂(由补肾活血基本方炮制而成)对免疫介导再障小鼠骨髓CD+45细胞的影响。
材 料 和 方 法
一、实验动物
BALB/C小鼠(H-2d，Mlsb)，8～12周龄，17～20 g，雌性，作为受体。由广州中山医科大学实验动物中心提供(合格证书：粤卫动字26-97003)。DBA/2小鼠(H-2d, Mlsa)，8～12周龄，15～20 g，雌雄兼用，作为细胞供体。由北京中国医学科学院实验动物研究所提供(合格证书： 医动字第01-3005号)。
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二、补肾活血溶液
补肾活血基本方由仙灵脾、骨碎补、枸杞子、当归、黄芪等12味中药组成，制成100%及200%水提取液备用，由本院附属第一医院中药制剂室提供。
三、环孢素A(ciclosporin A，CsA)溶液
由本院附属第一医院药剂科提供SANDOZ生产的sandimmun(新山地明口服液：每毫升含环孢素100 mg)1 mL，用0.9%生理盐水稀释，配制成15%浓度的CsA溶液，备用。
四、胸腺、淋巴结细胞悬液
DBA/2小鼠断颈处死，常规消毒，无菌取出胸腺及颈部、颌下、腋窝、腹股沟、肠系膜等处淋巴结，胸腺和淋巴结分别加少量PBS液，轻轻磨碎后过滤，使成单细胞悬液，台盼蓝鉴定，活性细胞应达95%以上。计数后，胸腺细胞与淋巴细胞以1∶2的比例混合，配成浓度为5×106/mL的单细胞悬液，备用。
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五、小鼠再生障碍性贫血模型复制
依姚军等[2]方法。BALB/C小鼠经6Gy60Coγ射线亚致死量全身照射后，4 h内经尾静脉输注取自DBA/2小鼠的胸腺、淋巴结混合细胞悬液，注射量0.2 mL/只，注射细胞数1×106/只。模型复制即告完成。
六、动物分组
取正常BALB/C小鼠50只，随机取其中10只，作为正常对照组(I)，胃饲生理盐水0.2 mL/次；其余40只制模后，随机分为4组：模型对照组(II)，胃饲生理盐水0.2 mL/次；中药高剂量组(III)，胃饲200%补肾活血溶液0.2 mL/次；中药低剂量组(IV)，胃饲100%补肾活血溶液0.2 mL/次；CsA组(V)，胃饲15%CsA药液0.2 mL/次(根据人鼠剂量换算关系)。造模第1 d始分别做相应胃饲处理，每天2次，共9 d。
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七、周围血细胞、骨髓有核细胞数
处理后第10 d，全部5组小鼠，称重，取眶静脉血，做常规计数RBC、WBC、PLT。再将小鼠断颈处死，取左侧股骨，用PBS液冲出骨髓细胞，计数，即为1根股骨中的骨髓有核细胞数。并用所取出骨髓细胞制备单个核细胞悬液(bone marrow nucleated cell, BMNC)。
八、骨髓CD+45细胞
取上述BMNC悬液3 mL，适量裂解液裂解红细胞，PBS(加Na2N3, pH7.2)冲洗，用4%的甲醛固定后，再用PBS液冲洗，加入20 μL 1∶100稀释的FITC rat anti-mouseCD45抗体(购自PHARMINGEN公司)，室温下避光孵育30 min，PBS洗3次，流式细胞仪(FACStar plus)分析。测量结果以单参数组方图显示，用与主机联机的HP-300CONSORT300计算机进行数据处理，用道数来表示CD45抗原，在实验前以BALB/C小鼠血液红血球作为标准样品，使变异系数(CV值)<5%。
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九、数据处理
数据均±以均数标准差(
±s)表示，差异显著性以t检验判定。结 果
一、大体改变
Ⅱ组在第7、9 d各死1只小鼠，剩余8只；V组在第9 d死1只小鼠，剩余9只。处死小鼠前称重发现，Ⅱ组体重明显下降(见表1)，解剖发现各脏器苍白，胸腺、脾脏、淋巴结缩小，部分鼠小肠有出血点；而Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组未发现有小肠出血点，脏器稍有苍白改变，胸腺、脾脏均略有缩小，与I组改变相接近。
二、外周血象
红细胞、白细胞、血小板计数在组Ⅱ均明显少，与其它各组相比有显著差异，见表1。
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表1 各组小鼠体重及外周血象的比较
Tab 1 Changes of weights and peripheral blood cells in rats(
±s) Groupn
RBC(×1012/L)
WBC(×109/L)
PLT(×109/L)
Weight(g)
Ⅰ
, http://www.100md.com 10
978.15±96.98* *△
7.25±1.24* *△
82.45±9.51* *△
20.59±1.22*△
Ⅱ
8
254.83±33.91
2.53±0.39
19.35±0.75
14.10±0.91
, http://www.100md.com
Ⅲ
10
879.29±123.56* *△
6.22±2.31* *△
79.56±8.34* *△
19.28±1.13*△
Ⅳ
10
803.46±110.23* *△
5.82±1.95* *△
, 百拇医药
71.58±8.25* *△
18.94±1.20*
Ⅴ
9
678.68±106.37*
5.10±1.64*
65.33±7.96*
16.65±0.71
*P<0.05，* * P<0.01，vs group Ⅱ； △P<0.05，vs group V
, 百拇医药 I:normal+NS;II:model+NS;III:model+DIKABC(H);IV:model+ DIKABC(L);V:model+CsA
DIKABC：decoction of invigoration kidney and activating blood circulation
三、骨髓有核细胞数
在Ⅱ组明显少，与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ组比较，有显著差异。见表2。
表2 各组骨髓有核细胞数、CD45+细胞
Tab 2 Changes of BMNC/ CD45+cells in rats(
±s) Group, http://www.100md.com
n
BMNC(10/thighbone)
CD+45 cells(%)
Ⅰ
10
11.56±0.89* *△
62.40±3.9*△#
Ⅱ
8
1.25±0.13
19.98±3.7
, 百拇医药
Ⅲ
10
9.27±0.56* *△
48.28±4.2*△
Ⅳ
10
8.67±0.51* *△
43.36±3.5*△
Ⅴ
9
6.67±0.68*
, 百拇医药
26.74±3.5
* P<0.05, * * P<0.01，vs group Ⅱ; △P<0.05， vs group V; # P<0.05， vs group Ⅲ,Ⅳ
I:normal+NS;Ⅱ:model+NS;Ⅲ:model+DIKABC(H);Ⅳ:model+DIKABC(L);Ⅴ:model+CsA
四、各组小鼠骨髓CD+45细胞的比较
Ⅱ组骨髓CD+45细胞与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组相比，差异显著(P<0.05)；Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ组骨髓CD+45细胞与Ⅴ组相比，差异亦显著(P<0.05)；Ⅲ、Ⅳ组与Ⅰ组之间亦有明显差异(P<0.05),见表2。
, 百拇医药
讨 论
参照姚军等[2]的方法复制了免疫介导的小鼠再障模型。本实验中再障小鼠的大体改变、外周血象变化及骨髓有核细胞变化特点与其报告相符，证明再障模型的建立是成功的。
小鼠经亚致死量γ射线照射后，输入H-2相同而mls抗原不同的小鼠胸腺、淋巴结混合细胞悬液后，可诱发小鼠再生障碍性贫血。该模型发生机制仍不明确，可能与再障小鼠体内出现造血抑制细胞和血浆粒单祖细胞抑制活性密切相关[3，4]。而这种针对宿主的从无到有，逐渐加强的造血抑制效应，最终导致了小鼠再障的发生[4]。
从外周血象的变化可见：补肾活血中药能够使免疫诱导的再障小鼠的周围血细胞增加，血细胞生成过程被认为是从造血细胞逐渐向单细胞分化成熟的过程。CD45抗原由一组分子量较大的跨膜糖蛋白组成[5]，存在于除成熟红细胞外所有造血细胞上[6，7]，属于蛋白酪氨酸磷酸酶(protein tyrodine phosphatase，PTH)[5，8]，由于编码基因三个外显子的不同剪接和糖基化程度不同而产生多种分子量各异的CD45，内显子包含二个PTH催化区，在其分子胞浆区域具有蛋白酪氨酸磷酸酯酶活性，可通过负反馈来调节蛋白酪氨酸激酶介导的磷酸化，在细胞的正常信号传递、调控细胞增殖、分化和激活中起重要作用。造模结果，免疫诱导再障小鼠骨髓CD+45细胞明显减少，表明造血细胞减少。本研究结果提示：补肾活血中药能使免疫诱导再障小鼠骨髓CD+45细胞明显增多，其作用机制是否与补肾活血中药促进了造血细胞增殖、分化有关，非常值得进一步探讨。此外，干细胞抑制因子(SCI)即巨噬细胞炎症蛋白(MIP-1α)可抑制造血祖细胞增殖，研究[8]发现AA患者骨髓有核细胞中SCI/hMIP-lαRNA转录水平显著高于正常人。从骨髓有核细胞数的变化可见：补肾活血中药对骨髓有核细胞有保护作用，该复方是否对SCI/hMIP-lαRNA转录水平产生抑制，亦值得进一步研究。
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补肾活血法治疗AA是随着对其发病机理认识的不断深入，在补肾和活血化瘀法治疗再障的基础上发展而来的。补肾活血中药对免疫诱导再障小鼠的周围血红细胞、白细胞、血小板及骨髓有核细胞等有提高作用，能防治免疫介导再障小鼠的贫血和骨髓衰竭，促进其骨髓造血功能的恢复，能够使免疫诱导再障小鼠骨髓CD+45细胞增多。我们认为：它具有补肾生血、去瘀生新、调节阴阳的作用，能够刺激造血细胞生长，这种作用可能是通过改善骨髓造血微环境和调节机体的免疫功能来实现的。
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[收稿日期] 2000-05-25
[修回日期] 2000-06-30, 百拇医药