AngⅡ、mm-LDL和TNFα对ECV304细胞PDGF-B链基因转录调控的影响
作者：李健 王小明 斯勤 郭恒怡 吴其夏
单位：中国医学科学院基础医学研究所 中国协和医科大学基础医学院病理生理室，北京 100005
关键词：
中国病理生理杂志001055
目的：从基因转录水平探讨AngⅡ、mm-LDL及TNFα对ECV304细胞PDGF-B链基因表达的影响。方法：(1)以GAPDH为内参照，用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测10-6 mol/L AngⅡ、100 μg/mL mm-LDL及200 U/mL TNFα作用于ECV304细胞18 h后各实验组PDGF-B链基因mRNA水平，分别为对照组的1.5倍、2.0倍和1.3倍，提示AngⅡ、mm-LDL及TNFα在转录水平对ECV304细胞PDGF-B链基因的表达有促进作用。(2)构建一系列含人PDGF-B链基因不同上游序列的荧光素酶报告基因质粒，将报告基因质粒分别与内参照粒pSV-β-gal共转染培养的ECV304细胞，观察10-6 mol/L AngⅡ、100 μg/mL mm-LDL及200 U/mL TNFα作用一定时间后荧光素酶的表达活性。结果：(1)AngⅡ处理2 h后，转染pSIS-1352/+43Luc、pSIS-190/+43Luc和pSIS-82/+43Luc的细胞荧光素酶表达量较对照组都有一定程度增加，但与对照组无显著差异。AngⅡ处理18 h后，转染pSIS-1352/+43Luc和pSIS-190/+43Luc的细胞荧光素酶表达量较对照组明显增加，分别为对照组的1.31和1.62倍(P<0.01)；而转染pSIS-82/+43Luc的细胞荧光素酶表达量与对照组无明显差别。提示AngⅡ作用足够时间后可促进ECV304细胞PGDF-B链基因表达，对AngⅡ诱导起反应的顺式调控元件可能存在于-190/-83bp范围内。(2) mm-LDL处理转染内皮细胞2 h或18 h后，转染pSIS-1352/+43Luc质粒的细胞的荧光素酶表达量明显增加(P<0.01)；转染pSIS-190/+43Luc和pSIS-82/+43Luc质粒的细胞，荧光素酶表达量与对照组无明显差异。提示mm-LDL促进ECV304细胞PGDF-B链基因表达，对mm-LDL诱导起反应的顺式调控元件可能存在于-1352/190bp范围内。(3)TNFα处理18 h后，转染pSIS-1758/+43Luc和pSIS-189/+43Luc质粒的细胞荧光素酶表达量均比相应对照组增高；当转染质粒仅含上游序列-84/+43bp时，荧光素酶表达量显著降低。提示TNFα促进ECV304 PGDF-B链基因表达依赖上游-85 bp以远的序列。结论：人PGDF-B链基因上对AngⅡ、mm-LDL和TNFα的诱导起反应的顺式调控元件可能分别定位于该基因上游序列-190/-83bp、-1352/-190bp和-1758/-85bp区域内。, http://www.100md.com
单位：中国医学科学院基础医学研究所 中国协和医科大学基础医学院病理生理室，北京 100005
关键词：
中国病理生理杂志001055
目的：从基因转录水平探讨AngⅡ、mm-LDL及TNFα对ECV304细胞PDGF-B链基因表达的影响。方法：(1)以GAPDH为内参照，用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测10-6 mol/L AngⅡ、100 μg/mL mm-LDL及200 U/mL TNFα作用于ECV304细胞18 h后各实验组PDGF-B链基因mRNA水平，分别为对照组的1.5倍、2.0倍和1.3倍，提示AngⅡ、mm-LDL及TNFα在转录水平对ECV304细胞PDGF-B链基因的表达有促进作用。(2)构建一系列含人PDGF-B链基因不同上游序列的荧光素酶报告基因质粒，将报告基因质粒分别与内参照粒pSV-β-gal共转染培养的ECV304细胞，观察10-6 mol/L AngⅡ、100 μg/mL mm-LDL及200 U/mL TNFα作用一定时间后荧光素酶的表达活性。结果：(1)AngⅡ处理2 h后，转染pSIS-1352/+43Luc、pSIS-190/+43Luc和pSIS-82/+43Luc的细胞荧光素酶表达量较对照组都有一定程度增加，但与对照组无显著差异。AngⅡ处理18 h后，转染pSIS-1352/+43Luc和pSIS-190/+43Luc的细胞荧光素酶表达量较对照组明显增加，分别为对照组的1.31和1.62倍(P<0.01)；而转染pSIS-82/+43Luc的细胞荧光素酶表达量与对照组无明显差别。提示AngⅡ作用足够时间后可促进ECV304细胞PGDF-B链基因表达，对AngⅡ诱导起反应的顺式调控元件可能存在于-190/-83bp范围内。(2) mm-LDL处理转染内皮细胞2 h或18 h后，转染pSIS-1352/+43Luc质粒的细胞的荧光素酶表达量明显增加(P<0.01)；转染pSIS-190/+43Luc和pSIS-82/+43Luc质粒的细胞，荧光素酶表达量与对照组无明显差异。提示mm-LDL促进ECV304细胞PGDF-B链基因表达，对mm-LDL诱导起反应的顺式调控元件可能存在于-1352/190bp范围内。(3)TNFα处理18 h后，转染pSIS-1758/+43Luc和pSIS-189/+43Luc质粒的细胞荧光素酶表达量均比相应对照组增高；当转染质粒仅含上游序列-84/+43bp时，荧光素酶表达量显著降低。提示TNFα促进ECV304 PGDF-B链基因表达依赖上游-85 bp以远的序列。结论：人PGDF-B链基因上对AngⅡ、mm-LDL和TNFα的诱导起反应的顺式调控元件可能分别定位于该基因上游序列-190/-83bp、-1352/-190bp和-1758/-85bp区域内。, http://www.100md.com