硫酸庆大霉素注射液细菌内毒素检查方法探讨
作者：王海生
单位：山东医科大学第二附属医院 山东济南250033
关键词：
山东医药001721 细菌内毒素检查法以其灵敏、准确、重现性好而用于控制药品致热物质。中国药典1995年版收载了细菌内毒素检查法，但仅限于少数品种。硫酸庆大霉素生产量大，临床应用广泛，以往用热原法费时长，工作量大。我们用细菌内毒素检测方法对硫酸庆大霉素注射液进行检查，并与家兔热原法进行比较，结果表明，所测品种可用细菌内毒素检查法代替热原检查法。
材料：细菌内毒素工作标准品：中国药品生物制品检定所，规格60EU/支，批号9801；鲎试剂：中国湛江海洋制品厂，灵敏度0.5EU/ml，批号990130。鲎试剂在使用前的灵敏度为2～0.5λ。硫酸庆大霉素注射液(简称G)为山东省医学科学院试验药厂生产，规格8万U/ml/支。
, 百拇医药
方法与结果：①最大有效稀释倍数的计算(参照中国药典，1995年版，二部)：G的热原实验家兔注射剂量(CG＝10000U/(ml*kg))及其细菌内毒素限值(LG＝1.7EU/1mg或约1EU/600μ)，根据MVD＝CL/λ(鲎试剂λ＝0.5EU/ml)计算最大有效稀释倍数，MVD＝33。②鲎试验：将样品稀释成10000U/ml的溶液为原液，再按1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32的梯度稀释成系列浓度。取每一浓度样品0.1ml，加入鲎试剂0.1ml进行凝胶法鲎试验，平行4管。将细菌内毒素工作标准品稀释成0.5EU/ml，用作阳性对照，平行2管。再用细菌内毒素检查用水作阴性对照。结果见表1。③干扰试验：根据鲎试验结果，按照有效浓度范围将样品梯度稀释进行干扰试验，同时用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素工作标准品稀释成2EU/ml、1EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml作对照试验，结果见表2。④供试品的细菌内毒素检查法与家兔法比较：将25批G分别用细菌内毒素检查用水稀释至有效浓度，用灵敏度0.5EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查，结果均为阴性，与同批家兔热原法相比较，结果一致。
, 百拇医药
表1 鲎试验结果 品名
批号
1∶2
1∶4
1∶8
1∶16
1∶32
阴性对照
阳性对照
G
9809031
9809061
9811191
, http://www.100md.com
9811201
9812281
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, http://www.100md.com
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表2 干扰试验结果 稀释溶剂
内毒素浓度(EU/ml)
阴性对照
2
, http://www.100md.com
1
0.5
0.25
0.125
BET水
+
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G
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1∶4
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1∶16
1∶32
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讨论：本文干扰试验结果说明，G对细菌内毒素检查法有一定的抑制作用，但在有效稀释倍数范围内，将样品浓度稀释至1∶16、1∶32可排除干扰，适用于细菌内毒素检查。根据干扰试验结果，在有效稀释倍数范围内，G细菌内毒素检查法结果与家兔法一致。表明G可采用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法。 (2000-07-28收稿), 百拇医药
单位：山东医科大学第二附属医院 山东济南250033
关键词：
山东医药001721 细菌内毒素检查法以其灵敏、准确、重现性好而用于控制药品致热物质。中国药典1995年版收载了细菌内毒素检查法，但仅限于少数品种。硫酸庆大霉素生产量大，临床应用广泛，以往用热原法费时长，工作量大。我们用细菌内毒素检测方法对硫酸庆大霉素注射液进行检查，并与家兔热原法进行比较，结果表明，所测品种可用细菌内毒素检查法代替热原检查法。
材料：细菌内毒素工作标准品：中国药品生物制品检定所，规格60EU/支，批号9801；鲎试剂：中国湛江海洋制品厂，灵敏度0.5EU/ml，批号990130。鲎试剂在使用前的灵敏度为2～0.5λ。硫酸庆大霉素注射液(简称G)为山东省医学科学院试验药厂生产，规格8万U/ml/支。
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方法与结果：①最大有效稀释倍数的计算(参照中国药典，1995年版，二部)：G的热原实验家兔注射剂量(CG＝10000U/(ml*kg))及其细菌内毒素限值(LG＝1.7EU/1mg或约1EU/600μ)，根据MVD＝CL/λ(鲎试剂λ＝0.5EU/ml)计算最大有效稀释倍数，MVD＝33。②鲎试验：将样品稀释成10000U/ml的溶液为原液，再按1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32的梯度稀释成系列浓度。取每一浓度样品0.1ml，加入鲎试剂0.1ml进行凝胶法鲎试验，平行4管。将细菌内毒素工作标准品稀释成0.5EU/ml，用作阳性对照，平行2管。再用细菌内毒素检查用水作阴性对照。结果见表1。③干扰试验：根据鲎试验结果，按照有效浓度范围将样品梯度稀释进行干扰试验，同时用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素工作标准品稀释成2EU/ml、1EU/ml、0.5EU/ml、0.25EU/ml、0.125EU/ml作对照试验，结果见表2。④供试品的细菌内毒素检查法与家兔法比较：将25批G分别用细菌内毒素检查用水稀释至有效浓度，用灵敏度0.5EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查，结果均为阴性，与同批家兔热原法相比较，结果一致。
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表1 鲎试验结果 品名
批号
1∶2
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阴性对照
阳性对照
G
9809031
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表2 干扰试验结果 稀释溶剂
内毒素浓度(EU/ml)
阴性对照
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0.5
0.25
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讨论：本文干扰试验结果说明，G对细菌内毒素检查法有一定的抑制作用，但在有效稀释倍数范围内，将样品浓度稀释至1∶16、1∶32可排除干扰，适用于细菌内毒素检查。根据干扰试验结果，在有效稀释倍数范围内，G细菌内毒素检查法结果与家兔法一致。表明G可采用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法。 (2000-07-28收稿), 百拇医药