HPLC法测定延胡索中延胡索乙素的含量
作者：龚青 周蒂 王碧娟
单位：龚青(杭州 310004 浙江省药品检验所)；周蒂(海南养生堂药业公司)；王碧娟(浙江中医学院98毕业实习生)
关键词：延胡索；延胡索乙素；HPLC；含量测定
中国现代应用药学000426 摘要 目的： 对延胡索中的延胡索乙素进行含量测定。方法：采用HPLC法，以 C18-ODS为色谱柱，甲醇-0.1%磷酸(用三乙胺调pH至6.0)(60∶40)为流动相，检测 波长为280nm。结果：延胡索乙素的量在0.257～2.056μg范围内线性良 好，回收率为99.03%，RSD为0.51%。结论：该方法简 便、可靠，适合延胡索的质量控制。
Assay of tetrahydropalmatine in yanhusuo by HPLC
, 百拇医药
Gong Qing(Gong Q)，Zhou Di(Zhou D)，Wang Bijuan(Wang BJ)
(Zhejiang Institute for Drug Control，Hangzhou 310004)
ABSTRACT OBJECTIVE：To determine the content of tetrahyd ropalmatine in the yanhusuo.METHODS:HPLC method was selected to dete rmine the content.The separation was performed on an analytical C18-ODS c olumn.The mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid(adjusted to PH 6.0 wit h triethylamine)(60∶40).The UV detector was set at 280nm.RESULTS:Th e calibration curve of tetrahydropalmatine was linear between 0.257～2.056μg.Th e average recovery was 99.03% with RSD 0.51%.CONCLUSION: This method was proved to be simple and reliable，and can be used for the quality control of yanhusuo.
, 百拇医药
KEY WORDS terahydropalmatine，yanhusuo，HPLC，assay
延胡索为罂粟科紫堇属植物延胡索(Corydalis yanhusuo W.T. Wang)的 块茎。其主要成分为延胡索甲素、乙素、丙素、丁素、戊素、辛素、壬素、癸素、子素、丑 素、寅素、β-高白屈菜碱、黄连碱、延胡索胺碱等。其中以延胡索乙素(tetrahydropalma tione)的镇痛作用较强[1]。延胡索乙素测定方法有分光光度法[2]、薄层 扫描法[3，4]、旋光法[5]、荧光法[6]等。本文采用高效液相色 谱法测定了延胡索乙素的含量，方法简便、准确，重现性好。
1 仪器与试药
Shimadzu LC-10A型高效液相色谱仪，S himadzu SPD-10A紫外检测器，Shimadzu C-R7A色谱处理机。
, 百拇医药
延胡索乙素对照品(中国药 品生物制品检定所)，延胡索(浙江)，所用试剂均为分析纯。
2 色谱条件
流动相：甲醇-0.1%磷酸(用三乙胺调PH 至6.0)(60∶40)，色谱柱:Shim-pack CLC-ODS C18(0.15m×6.0∮)，流速:1.0ml/min ，波长:280nm，纸速:2mm/min，进样量:20μl。
3 线性关系的考察
精密称取五氧化二磷减压干燥过夜 的延胡索乙素对照品25.7mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品 溶液。分别吸取对照品溶液1，2，4，6和8μl进行分析，以峰面积为纵坐标，以对照品的量(μ g)为横坐标，绘制标准曲线(见图1)，其回归方程为:Y=704.7+808363.6X，r=0. 9999。表明延胡索乙素在0.257～2.056μg之间具有良好的线性关系。
, 百拇医药
图1 延胡索乙素标准曲线图
4 回收率实验
采用加样回收率法，精密称取已知含量 的延胡索样品1g，分别精密加入适量延胡索乙素对照品，按“样品测定”相下操作，结果见 表1。
表1 回收率试验结果 样品号
样品延胡索乙
素的量/mg
加入延胡 索乙
素的量/mg
测得延胡索乙
素的量/mg
回收率
, http://www.100md.com
/%
平均回
收率
1
0.4231
0.5045
0.9255
99.58
2
0.4223
0.5045
0.9241
99.46
, http://www.100md.com
3
0.4232
0.5045
0.9203
98.53
99.03%
4
0.4350
0.5045
0.9363
99.37
RSD＝0.51%
5
, http://www.100md.com
0.4298
0.5045
0.9286
98.87
6
0.4325
0.5045
0.9289
98.39
5 精密度试验
取延胡索乙素对照品，用甲醇制成每1m l中含40μg的溶液，精密吸取20μl重复进样6次，测峰面积，计算RSD为0.39% 。
, 百拇医药
6 重现性试验
精密称取样品2g，按“样品测定” 相下操作，在相同条件下测定同一批号样品6份，计算含量，其RSD为1.25%。
7 样品含量测定
精密称取样品2g，置锥形瓶中，精 密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理30min，冷却，称重，加甲醇补足重量，用微孔滤膜过 滤，精密吸取20μl注入色谱柱，按外标峰面积法计算延胡索乙素的含量，结果见表2。其HP LC图谱见图2，3。
表2 延胡索乙素含量测定结果 样品号
每g含延胡素
乙素/ mg
样品号
, http://www.100md.com
每g含延胡索
乙素/mg
1
0.387
6
0.594
2
0.517
7
0.402
3
0.614
8
, http://www.100md.com
0.621
4
0.659
9
0.626
5
0.425
10
0.485
图2 延胡索乙素对照品HPLC图
, 百拇医药
1-延胡索乙素
图3 延胡索样品HPLC图
8 结果与讨论
8.1 提取溶剂和时间的选择 以甲醇 、乙醇、乙醚为溶剂，分别超声处理20，30和40min，实验结果表明，用甲醇超声处理30min可 提取完全。
8.2 稳定性考察 取延胡索乙素对照品，在0，0.5，1，3，5，7 和24h分别测定，其RSD为1.2%，说明稳定性较好。
8.3 通过测定10批样品，结果延胡索乙素含量相差较大，故通过含 量测定可有效地控制质量。
, 百拇医药
参考文献
[1]沙世炎，徐礼燊，严敏如，等.中草药有效成分分析法.上册.北京：人民卫生出版社，1985∶53 .
[2]曾丽修.分光光度法测定颅痛定片剂的含量. 药物分析杂志，1984，4(1)∶39.
[3]朱敏.元胡类生物碱的高效薄层层析定量研究.药物分析 杂志，1985，5(3)∶139.
[4]傅小勇，梁文藻，涂国士.元胡生物碱的化学研究.药物 分析杂志，1985，5(4)∶194.
[5]杨晓平.旋光法测定罗痛定片剂的含量.药物分析杂志，1 986，6(3)∶176.
[6]庞志功，汪宝琪，黄泓.SLS-胶束荧光法测定元胡中延 胡索乙素的含量.中国药科大学学报，1993，24(6)∶345.
收稿日期：1998-09-07, 百拇医药
单位：龚青(杭州 310004 浙江省药品检验所)；周蒂(海南养生堂药业公司)；王碧娟(浙江中医学院98毕业实习生)
关键词：延胡索；延胡索乙素；HPLC；含量测定
中国现代应用药学000426 摘要 目的： 对延胡索中的延胡索乙素进行含量测定。方法：采用HPLC法，以 C18-ODS为色谱柱，甲醇-0.1%磷酸(用三乙胺调pH至6.0)(60∶40)为流动相，检测 波长为280nm。结果：延胡索乙素的量在0.257～2.056μg范围内线性良 好，回收率为99.03%，RSD为0.51%。结论：该方法简 便、可靠，适合延胡索的质量控制。
Assay of tetrahydropalmatine in yanhusuo by HPLC
, 百拇医药
Gong Qing(Gong Q)，Zhou Di(Zhou D)，Wang Bijuan(Wang BJ)
(Zhejiang Institute for Drug Control，Hangzhou 310004)
ABSTRACT OBJECTIVE：To determine the content of tetrahyd ropalmatine in the yanhusuo.METHODS:HPLC method was selected to dete rmine the content.The separation was performed on an analytical C18-ODS c olumn.The mobile phase was methanol-0.1% phosphoric acid(adjusted to PH 6.0 wit h triethylamine)(60∶40).The UV detector was set at 280nm.RESULTS:Th e calibration curve of tetrahydropalmatine was linear between 0.257～2.056μg.Th e average recovery was 99.03% with RSD 0.51%.CONCLUSION: This method was proved to be simple and reliable，and can be used for the quality control of yanhusuo.
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KEY WORDS terahydropalmatine，yanhusuo，HPLC，assay
延胡索为罂粟科紫堇属植物延胡索(Corydalis yanhusuo W.T. Wang)的 块茎。其主要成分为延胡索甲素、乙素、丙素、丁素、戊素、辛素、壬素、癸素、子素、丑 素、寅素、β-高白屈菜碱、黄连碱、延胡索胺碱等。其中以延胡索乙素(tetrahydropalma tione)的镇痛作用较强[1]。延胡索乙素测定方法有分光光度法[2]、薄层 扫描法[3，4]、旋光法[5]、荧光法[6]等。本文采用高效液相色 谱法测定了延胡索乙素的含量，方法简便、准确，重现性好。
1 仪器与试药
Shimadzu LC-10A型高效液相色谱仪，S himadzu SPD-10A紫外检测器，Shimadzu C-R7A色谱处理机。
, 百拇医药
延胡索乙素对照品(中国药 品生物制品检定所)，延胡索(浙江)，所用试剂均为分析纯。
2 色谱条件
流动相：甲醇-0.1%磷酸(用三乙胺调PH 至6.0)(60∶40)，色谱柱:Shim-pack CLC-ODS C18(0.15m×6.0∮)，流速:1.0ml/min ，波长:280nm，纸速:2mm/min，进样量:20μl。
3 线性关系的考察
精密称取五氧化二磷减压干燥过夜 的延胡索乙素对照品25.7mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品 溶液。分别吸取对照品溶液1，2，4，6和8μl进行分析，以峰面积为纵坐标，以对照品的量(μ g)为横坐标，绘制标准曲线(见图1)，其回归方程为:Y=704.7+808363.6X，r=0. 9999。表明延胡索乙素在0.257～2.056μg之间具有良好的线性关系。
, 百拇医药
图1 延胡索乙素标准曲线图
4 回收率实验
采用加样回收率法，精密称取已知含量 的延胡索样品1g，分别精密加入适量延胡索乙素对照品，按“样品测定”相下操作，结果见 表1。
表1 回收率试验结果 样品号
样品延胡索乙
素的量/mg
加入延胡 索乙
素的量/mg
测得延胡索乙
素的量/mg
回收率
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/%
平均回
收率
1
0.4231
0.5045
0.9255
99.58
2
0.4223
0.5045
0.9241
99.46
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3
0.4232
0.5045
0.9203
98.53
99.03%
4
0.4350
0.5045
0.9363
99.37
RSD＝0.51%
5
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0.4298
0.5045
0.9286
98.87
6
0.4325
0.5045
0.9289
98.39
5 精密度试验
取延胡索乙素对照品，用甲醇制成每1m l中含40μg的溶液，精密吸取20μl重复进样6次，测峰面积，计算RSD为0.39% 。
, 百拇医药
6 重现性试验
精密称取样品2g，按“样品测定” 相下操作，在相同条件下测定同一批号样品6份，计算含量，其RSD为1.25%。
7 样品含量测定
精密称取样品2g，置锥形瓶中，精 密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理30min，冷却，称重，加甲醇补足重量，用微孔滤膜过 滤，精密吸取20μl注入色谱柱，按外标峰面积法计算延胡索乙素的含量，结果见表2。其HP LC图谱见图2，3。
表2 延胡索乙素含量测定结果 样品号
每g含延胡素
乙素/ mg
样品号
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每g含延胡索
乙素/mg
1
0.387
6
0.594
2
0.517
7
0.402
3
0.614
8
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0.621
4
0.659
9
0.626
5
0.425
10
0.485
图2 延胡索乙素对照品HPLC图
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1-延胡索乙素
图3 延胡索样品HPLC图
8 结果与讨论
8.1 提取溶剂和时间的选择 以甲醇 、乙醇、乙醚为溶剂，分别超声处理20，30和40min，实验结果表明，用甲醇超声处理30min可 提取完全。
8.2 稳定性考察 取延胡索乙素对照品，在0，0.5，1，3，5，7 和24h分别测定，其RSD为1.2%，说明稳定性较好。
8.3 通过测定10批样品，结果延胡索乙素含量相差较大，故通过含 量测定可有效地控制质量。
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参考文献
[1]沙世炎，徐礼燊，严敏如，等.中草药有效成分分析法.上册.北京：人民卫生出版社，1985∶53 .
[2]曾丽修.分光光度法测定颅痛定片剂的含量. 药物分析杂志，1984，4(1)∶39.
[3]朱敏.元胡类生物碱的高效薄层层析定量研究.药物分析 杂志，1985，5(3)∶139.
[4]傅小勇，梁文藻，涂国士.元胡生物碱的化学研究.药物 分析杂志，1985，5(4)∶194.
[5]杨晓平.旋光法测定罗痛定片剂的含量.药物分析杂志，1 986，6(3)∶176.
[6]庞志功，汪宝琪，黄泓.SLS-胶束荧光法测定元胡中延 胡索乙素的含量.中国药科大学学报，1993，24(6)∶345.
收稿日期：1998-09-07, 百拇医药