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编号:10273117
小青龙汤对哮喘大鼠肺组织糖皮质激素受体和β-受体等水平的影响*
http://www.100md.com 《中国中医基础医学杂志》 1999年第3期
     作者:童舜华 吴敦序 包照日格图 陈淑俊 奚蓓莉

    单位:童舜华 吴敦序 包照日格图 陈淑俊 奚蓓莉(上海中医药大学 上海 200032)

    关键词:小青龙汤;大鼠哮喘模型;糖皮质激素受体;β-肾上腺素能受体;环磷酸腺苷;皮质酮

    摘 要 目的 观察哮喘大鼠肺组织肾上腺糖皮质激素受体 摘 要 目的 观察哮喘大鼠肺组织肾上腺糖皮质激素受体(GCR)和β-肾上腺素能受体(β-AR)的最大结合位点(Bmax)、环磷酸腺苷(cAMP)和血浆皮质酮(B)的含量在哮喘发病过程中的变化规律和中药小青龙汤对其影响。方法 用放射配基竞争结合法、放射免疫法和血浆B竞争性蛋白结合分析法测定连续激发哮喘的大鼠第1、3、7d肺组织GCR、β-AR、cAMP和血浆B水平。结果 激发哮喘后第1d,哮喘大鼠GCR水平显著升高(P<0.01),第3d开始下降、第7d降至最低点,小青龙汤治疗7d后,GCR含量显著升高,并高于正常对照组(P<0.01),激发第1、3d,哮喘大鼠血浆B 明显低于正常对照组(P<0.01),第3d开始上升,升至第7d仍低于正常对照组,差异显著(P<0.01),小青龙汤治疗后,血浆B含量显著升高(P<0.01),β-AR和cAMP含量于激发后逐日下降,激发第3d,β-AR含量已明显低于正常对照组(P<0.01),第7d时,β-AR和cAMP均降至最低点,与正常对照组相比,差异极显著(P<0.01),小青龙汤治疗后,β-AR、cAMP含量显著上升(P<0.01),其中β-AR含量仍低于正常对照组(P<0.01),cAMP含量已达到并高于正常水平。结果提示:小青龙汤有上调哮喘大鼠肺组织GCR、β-AR、cAMP和血浆B水平的作用。
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    目前认为哮喘的本质是气道慢性非特异性炎症,哮喘的防治主要以消除或抑制气道炎症为重点,一般认为合理的治疗方案应当包括适当的抗炎药物和支气管舒张剂。糖皮质激素(GC)和β-受体激动剂(β-A)被视为首选的抗炎和支气管舒张剂。GC、β-A分别通过与GCR、β-AR结合而发挥生物效应,GCR和β-AR的数量和功能状态直接影响GC和β-A的效用,研究肺组织GCR、β-AR以及环磷酸腺苷(cAMP)和血浆皮质酮(B)在哮喘发病过程中的变化,有助于判断病情,有助于指导GC、β-A对哮喘的治疗。中药小青龙汤对哮喘治疗有良好的效果,研究小青龙汤对哮喘大鼠肺组织GCR、cAMP、β-AR和血浆B的影响,有助于认识小青龙汤的作用机理,有可能从调节GCR、β-AR和血浆B等水平入手来寻找一条治疗哮喘的有效途径。

    材料与方法

    1 材料

    1.1 动物:雄性SD大鼠,体重180g±30g,由上海计划生育研究所提供。
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    1.2 中药:小青龙汤由炙麻黄6g、桂枝6g、炒白芍10g、炙甘草6g、细辛3g、干姜6g、姜半夏10g、五味子6g组成,饮片由上海药材公司提供,制成浓度为1.6g生药/ml的水煎液。

    1.3 西药:必可酮气雾剂(Becotide),每揿含丙酸倍氯米松50μg,重庆葛兰素制药有限公司产品,批号:CO07043。

    1.4 试剂:(1、2、4、6、7)3H-地塞米松(Dexamethasone,3H-Dex):英国Amersham公司产品,放射比度82.0Ci/mmol,放化纯度98%,浓度1mci/ml;非标记Dex:Sigma公司产品,无水乙醇配成1nmol/μl;(1、2、6、7)3H-皮质酮:Amersham公司产品,浓度250μCi/250μl,放化纯度97%,放射比度81.0Ci/mmol;125I-心得静:本校同位素室标记,比活度2175Ci/mmol;非标记心得安:北京制药厂产品,双蒸水配成1mg/ml,4℃冰箱保存;闪烁液:TP10g、POPOP0.5g、乙酸乙酯1000ml、二甲苯4000ml;cAMP试剂药盒,本校同位素室提供。
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    2 方法

    2.1 哮喘模型的制造[1,2]:将动物随机分为正常对照组、哮喘模型组第1d、第3d和第7d组,必可酮治疗组和小青龙汤治疗组,每组9只。模型组与治疗组每鼠腹腔注入卵蛋白(OA)100mg,灭活百日咳杆菌疫苗5×109个和氢氧化铝干粉100mg致敏,2周后每天上午8—9时予超声雾化吸入2%OA20min激发哮喘,激发后模型组灌胃3ml自来水,必可酮治疗组每鼠雾吸必可酮一掀,小青龙汤治疗组灌胃小青龙汤煎剂3ml,正常对照组以生理盐水代替抗原液腹腔注射和雾化吸入,以自来水3ml灌胃。哮喘模型第1d、第3d组分别在激发第1、3d处死,其他各组均连续激发7d,各治疗组以相应药物连续治疗7d,第7d处死。

    2.2 肺组织细胞浆GCR的测定参照吕国平和徐仁宝的方法[3,4]。用lowry法测胞浆蛋白含量[5]
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    2.3 血浆皮质酮(B)的测定参照缪明等方法[6]

    2.4 肺组织胞膜液β-受体的测定参照夏宗勤的方法[7]。以Lowry法测定胞膜液蛋白含量[5]

    2.5 肺组织环磷酸腺苷(cAMP)的测定按药盒说明的步骤进行。

    结果

    1 肺组织GCR的变化及小青龙汤对其影响

    激发哮喘第1d,哮喘大鼠GCR水平显著升高(P<0.01),第3d开始下降、第7d降至最低点,小青龙汤治疗7d后,GCR含量显著升高并高于正常对照组(P<0.01)(见表1)。

    2 血浆B的变化及小青龙汤对其影响
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    激发哮喘第1、3d,哮喘大鼠血浆B明显低于正常对照组(P<0.01),第3d开始上升,升至第7d仍显著低于正常对照组(P<0.01),小青龙汤治疗后,血浆B含量显著升高(P<0.01)(见表1)。

    表1 肺组织GCR和血浆B的变化及小青龙汤对其影响(xx1.gif (881 bytes)±s)

    组别

    n

    GCR结合位点数

    (pmol/g)

    B含量

    (μg/100ml)
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    正常对照组

    9

    65.2±9.1

    146.6±9.2

    哮喘第1天组

    9

    123.7±13.2*

    55.8±12.1*

    哮喘第3天组

    9

    71.8±9.2Δ

    75.9±12.3*
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    哮喘第7天组

    9

    61.2±5.3Δ

    103.8±24.1*

    必可酮组

    9

    70.8±5

    119.7±24.2

    小青龙汤组

    9

    118±13*▲

    154.5±9.3
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    *与正常对照组相比:P<0.01;Δ与哮喘第1天组相比:P<0.01;▲与哮喘第7天组相比:P<0.01

    3 肺组织β-AR的变化及小青龙汤对其影响

    激发哮喘第3d,β-AR的含量已明显低于正常对照组(P<0.01),第7d时,降至最低点,与正常对照组相比,差异极显著(P<0.01),小青龙汤治疗后,β-AR含量显著上升(P<0.01),但仍低于正常对照组(P<0.01)(见表2)。

    4 肺组织cAMP的变化及小青龙汤对其影响

    cAMP含量于激发后逐日下降,激发第7d时,cAMP降至最低点,与正常对照组相比,差异极显著(P<0.01),小青龙汤治疗后,cAMP含量显著上升(P<0.01),已达到正常水平(见表2)。

    表2 肺组织β-AR和cAMP的变化及小青龙汤对其影响(xx1.gif (881 bytes)±s)
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    组别

    n

    β-AR结合位点数

    (pmol/g)

    cAMP含量

    (μg/100ml)

    正常对照组

    9

    144.2±15

    213±9

    哮喘第1天组

    9

    131.3±14
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    158±13

    哮喘第3天组

    9

    91.2±16*▲

    151±15

    哮喘第7天组

    9

    41.3±8*

    135±1*

    必可酮组

    9

    69.2±5*▲
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    201±31

    小青龙汤组

    9

    60.3±6*▲

    252±12

    *与正常对照组相比:P<0.01;Δ与哮喘第1天组相比:P<0.01;▲与哮喘第7天组相比:P<0.01讨论

    β-AR兴奋后,主要通过激活平滑肌细胞膜上腺苷酸环化酶(AC),增加平滑肌细胞内cAMP含量,使cAMP/cGMP比值升高,支气管平滑肌舒张,从而使肺泡通气功能改善,产生相应的平喘效应。我们研究发现,哮喘发病过程中,β-AR和cAMP水平随着激发的连续进行逐日下降,说明哮喘发病时,β-AR呈低反应性,且随着哮喘的持续而加剧。小青龙汤治疗后β-AR和cAMP水平显著升高,提示小青龙汤具有上调β-AR和cAMP水平的作用。
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    GC被认为是最有效的消除气道炎症药物,GC必须与GCR结合才能发挥生物效应,GCR是决定CG效用的关键因素。GC对哮喘的疗效是肯定的,但全身副作用较大。不管在体外培养细胞还是完整动物,GC对GCR均有下调作用[8]。必可酮气雾剂吸入后易在气道形成有效浓度,直接作用于气道,到肺泡后很快被酶破坏,进入血液又被肝灭活,因此副作用较小。我们的研究显示,激发第1d肺GCR显著升高,第3d起回落,至第7d已低于正常水平,与吕国平报道的结果[3]颇为接近。

    皮质酮为大鼠主要糖皮质激素,哮喘发作48h后进入迟发阶段,始有典型的气道炎症特征,同时发生应激反应[9],因此第3d起,血浆B开始升高。应激状态下机体对GC需要量增加,但我们测得第3、7d血浆B仍然显著低于正常水平。这一结果与Henry M等报道[10]及沈自尹报道[11]基本相似:认为哮喘患者伴有肾上腺皮质功能减退,主要表现为肾上腺皮质的代谢或分泌受到潜在影响,进一步研究表明下丘脑一垂体一肾上腺皮质功能已有不同程度、不同环节的改变。小青龙汤治疗后血浆B水平显著升高,说明该方具有改善哮喘大鼠的肾上腺皮质功能的作用。
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    中医认为哮喘发生的病理因素关键在于痰饮,因此治疗哮喘,就要重在治疗痰饮。温肺化痰饮的小青龙汤是治疗寒哮证的良方。近代药理研究表明小青龙汤在针对哮喘发病的各个不同环节上发挥着不同的作用。我们发现小青龙汤治疗后肺组织GCR、β-AR、cAMP和血浆B水平显著升高,特别是对GCR的上调作用非常显著。因此,我们推测小青龙汤诸多治疗哮喘的药效中,一个很重要的机理,可能是该方既显著上调GCR,又促进肾上腺皮质功能,产生足够的GC-GCR复合物,以满足应激反应的需要,从而起到强力的抑制EC等致敏细胞,促进β-AR功能重建,上调β-AR,使cAMP的合成增加,破坏减少,起到抗炎平喘的作用。至于小青龙汤是直接上调cAMP,还是通过上调β-AR以提高cAMP,还是二者兼而有之;是直接上调β-AR;还是通过上调GCR而上调β-AR;是通过促进GCR合成,还是抑制GCR降解来上调GCR等机理,尚有待于进一步研究。

    *本文为国家中医药管理局资助课题。

    作者简介:童舜华,男,29岁,医学硕士。1998年毕业于上海中医药大学中医基础理论专业,现工作于本校中医基础理论教研室。研究方向:扶正与化痰中药治疗支气管哮喘的实验研究。
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    参考文献

    [1] Dahlback M.Antigen-induced bronchial amaphylaxis inactivity sensitized sprague danley rats. 1 ed. Sweden Lund University, 1986,1-72

    [2] 吕国平,等.介绍一种建立大鼠哮喘模型的实验方法.中华结核和呼吸杂志,1995,(6):317

    [3] 吕国平,等.大鼠哮喘模型肺组织糖皮质激素受体和β受体水平及平喘药物的影响。中华结核和呼吸杂志,1996,(2):94

    [4] 徐仁宝 病理性应激时大鼠肝泡液糖皮质激素受体的变化.生理学报,1982,34:450

    [5] Dowell RT, Akins FL and Love sandra. β-Adrenergic receptors, adenylate cyclase activation, and my of ibril enzyme activity in hypothyroid rats. Am J physiol 1994, 266(35):H2 527-H2 532
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    [6] 缪明,等.大白鼠血浆皮质酮的竞争性蛋白结合分析法.动物学杂志,1980,2:41

    [7] 夏宗勤.实验核医学与核药学.上海:上海同济大学出版社,1989:232

    [8] Munck A, Mendel DB, Smith Li et al. Am Rev Respir Dis, 1990,141(2,pt 2):S2-S10

    [9] 林耀广.支气管哮喘的治疗学进展.中华结核和呼吸杂志,1995,(4):202

    [10] Henry M. et al. Endocrine function in bronchial as thma and hayfever. J. Allergy, 1958,29:384

    [11] 沈自尹,等.支气管哮喘采用补肾法防治及其内分泌和免疫方面的观察.中医杂志,1981,(5):21

    (收稿日期 1998—06—28 修回日期 1998—11—30), 百拇医药