C-myc癌基因在炎症、白斑及颊癌变中的表达分析
作者：梅陵宣 蒋 勇 金 岩
单位：梅陵宣 蒋 勇 安徽医科大学口腔医院，合肥 230032；金 岩 第四军医大学附属秦都口腔医学院病理科，西安 710032
关键词：癌基因；基因表达；癌；鳞状细胞；遗传
安徽医科大学学报990405 摘要：目的 用免疫组织化学定量方法观察在上皮癌变过程中C-myc的表达及意义。方法 标本取自病人颊粘膜，包括白斑(OLK)、慢性炎症(IF)、鳞状细胞癌(SCC)。采用免疫组化(ABC)法，一抗为C-myc单抗。用网格测试法对myc阳性反应细胞计数，可得出上皮myc的阳性指数。结果 显示myc在口腔上皮癌过程中有较高的表达，从IF、OLK到SCC组，有逐渐增大的趋势。结论 C-myc其表达程度主要与肿瘤细胞的分化关系密切，是判断细胞分化程度的一个参考指标。
中国图书资料分类法分类号：R394.2；R730.261
, 百拇医药
C-myc expression in IF、OLK and epithelial carcinoma
Mei Lingxuan, Jiang Yong, Jin Yan et al
(Faculty of Stamatology, Anhui Medical University, Hefei 230032)
Abstract Objective C-myc expression in epithelial carcinoma. Methods 50 cases of IF、OLK and SCC were detected by immunohistochemical method(ABC). The network test was used to count positive of epithelial myc. Results The positive rate of myc in SCC was higher than that of IF and OLK (P<0.05). Conclusion The relationship of expression of C-myc with pathological diagnosis and clinical prognosis should be studied further.
, 百拇医药
MeSH oncogenes; gene expression; carcinoma, squamous cell/genetics
癌基因与肿瘤有关，可以在肿瘤的起始和发展过程中出现；有证据显示在细胞无节制的增生中，癌基因都有量或质的变化〔1～3〕。C-myc癌基因编码核调节蛋白，C-myc表达的失调是各种细胞凋亡的主要原因，与多种肿瘤的发生有关。但是，C-myc调节细胞周期及凋亡受到bcl-2、p53及生长因子等多种因素的影响〔4，5〕。为此，着重观察和探讨了在上皮癌变前及癌变过程中C-myc癌基因的表达情况及意义。
1 材料和方法
1.1 标本来源 选用临床收集的病人的颊粘膜标本，包括慢性非特异性类症(IF，15例，男5例，女10例，年龄28～58岁)、鳞状细胞癌(SCC，25例，男17例，女8例，年龄44～73岁)、白斑(OLK，10例，男8例，女2例)。所有上述标本均由福尔马林液固定、石蜡包埋、切片厚4 μm。
, http://www.100md.com
1.2 免疫组织化学染色 采用标准化的ABC染色方法，切片经脱蜡入水并经3%双氧水及正常血清处理后，将切片置于6 mol.L-1尿素中放入微波炉中煮沸10 min。分别滴加抗C-myc单抗(qE10美国Oncogene science产品)，于4℃过夜，此后分别加生物素化二抗及ABC复合物(美国Vector公司，Elite ABC试剂盒)，于37℃下各孵育30 min。显色液用Tris HCl缓冲液(pH7.6、DAB试剂片Sigma)和新鲜的双氧水配制(终浓度为0.05%DAB，0.03%双氧水)。显色后滴加C-myc抗体的切片用苏木精轻微复染以利于观察阳性及阴性反应的细胞及组织结构。阴性对照以PBS代替一抗，结果为阴性。
1.3 组织定量方法 采用测试网格(10×10)，在高倍(×40)视野下对C-myc免疫组化结果进行计数测量。每个标本切片随机选取10个以上不重复无重叠的视野，测定基底层及棘层细胞核总数及C-myc阳性反应细胞核数。每张切片计数的细胞数应大于800个。由此可获得C-myc在上皮的阳性细胞百分比，表示为MPI。
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2 结果
C-myc的阳性反应判断标准以胞核阳性着色为准。观察结果显示，IF组上皮基底层及棘层细胞可见阳性；OLK及SCC组比IF组细胞阳性率提高，尤其是棘层(见图1～3)。对C-myc阳性反应测量结果显示(表1)，IF组的值为最低，与其它各病变组比较差异有显著性(P<0.05)；此外，SCC组的值最大。
表1 C-myc的免疫组化定量结果(
±s)
n
MPI(%)
IF
15
, 百拇医药 0.505±0.023
OLK
10
0.512±0.032*
SCC
25
0.561±0.022*
与IF比较，*P<0.05
图1 炎症
C-myc阳性着色主要集中于基底层及棘层深层细胞×40
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图2 不典型增生
C-myc阳性着色呈不规则分布×40
图3 鳞癌
C-myc阳性细胞增多×40
3 讨论
C-myc具有潜在的细胞周期调节作用，在各种肿瘤中发现C-myc基因表达的失调。Porter〔6〕在观察头颈部鳞癌时发现，C-myc癌蛋白的过表达与预后有关，在恶性病变的晚期发挥作用。Gapany等〔7〕在对头颈部鳞癌、结肠癌的观察结果显示，C-myc基因的表达与肿瘤细胞生长特性更为相关，C-myc参与细胞的增生和分化的调节。本研究显示，在炎症状态的上皮中，C-myc主要表达在基底层，而在癌前病变(白斑)上皮组及鳞癌组中，棘层细胞出现明显的C-myc表达增加。可见C-myc癌基因的表达与细胞的生长调节和分化紧密联系在一起。
, http://www.100md.com
C-myc在肿瘤发生中是一个重要基因，但是C-myc被认为是具有诱导细胞增殖和凋亡的双重作用的基因〔5〕。其作用的选择是由生长因子等因素的存在或其他刺激所决定的。Saranath〔3，4〕发现，在细胞转化过程中C-myc常与Ras癌基因协同作用，认为这种协同作用可能是通过myc对蛋白激酶C类物质的调节作用实现的，而蛋白激酶C是几个生长信号途径的交叉点。在本研究结果中，还显示了白斑C-myc表达最接近于SCC组，这正说明了癌前病变上皮高度恶变的可能，也说明了在上皮癌变发生的早期，一些癌基因的表达已出现异常，这对于早期诊断和认识一些具有高度恶度可能的癌前病变具有重要意义。
作者简介：梅陵宣，男，36岁，讲师
参考文献
1 Yamaoto T, Ikawa S, Akiyama T et al. Similarity of protein encoded by the human-erbB-2 gene to epidermal growth factor receptor. Nature,1986;319(6 050)：4～230
, http://www.100md.com
2 Horiguchi J, Iino Y, Takai H et al. Immunohistochemical study on the expression of c-erbB-2 oncoprotein in breast cancer. Oncology,1994;51(1):47～51
3 Scully C. Oncogenes, tumour suppressors and viruses in oral sguamous carcinoma. J Oral Pathol Med,1993;22(8):47～337
4 Saranath D, Pachal RG, Nair R et al. Oncogene amplification squamous cell carcinoma of the oral cavity. Jpn J Cancer Res,1989;80(5):7～430
, 百拇医药
5 Kert JFR, Winterford CM and Harmon BV. Apoptosis, Its significance in cancer and cancer therapy. Cancer,1994；73(8):26～2013
6 Porter MJ, Filed JK, Leung SH et al. The detection of the C-myc and ras oncogenes in nasopharyngeal carcinoma by immunohistochemistry. Acta Otolaryngol,1994;114(1):9 105
7 Gapany M, Pavelic ZP, Kelley DJ et al. Immunohistochemical detection of C-myc protein in head and neck tumors. Arch Otolaryngol Head Neck Surg,1994;120(3):9 255
1999-03-25收稿
1999-05-21修回, http://www.100md.com
单位：梅陵宣 蒋 勇 安徽医科大学口腔医院，合肥 230032；金 岩 第四军医大学附属秦都口腔医学院病理科，西安 710032
关键词：癌基因；基因表达；癌；鳞状细胞；遗传
安徽医科大学学报990405 摘要：目的 用免疫组织化学定量方法观察在上皮癌变过程中C-myc的表达及意义。方法 标本取自病人颊粘膜，包括白斑(OLK)、慢性炎症(IF)、鳞状细胞癌(SCC)。采用免疫组化(ABC)法，一抗为C-myc单抗。用网格测试法对myc阳性反应细胞计数，可得出上皮myc的阳性指数。结果 显示myc在口腔上皮癌过程中有较高的表达，从IF、OLK到SCC组，有逐渐增大的趋势。结论 C-myc其表达程度主要与肿瘤细胞的分化关系密切，是判断细胞分化程度的一个参考指标。
中国图书资料分类法分类号：R394.2；R730.261
, 百拇医药
C-myc expression in IF、OLK and epithelial carcinoma
Mei Lingxuan, Jiang Yong, Jin Yan et al
(Faculty of Stamatology, Anhui Medical University, Hefei 230032)
Abstract Objective C-myc expression in epithelial carcinoma. Methods 50 cases of IF、OLK and SCC were detected by immunohistochemical method(ABC). The network test was used to count positive of epithelial myc. Results The positive rate of myc in SCC was higher than that of IF and OLK (P<0.05). Conclusion The relationship of expression of C-myc with pathological diagnosis and clinical prognosis should be studied further.
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MeSH oncogenes; gene expression; carcinoma, squamous cell/genetics
癌基因与肿瘤有关，可以在肿瘤的起始和发展过程中出现；有证据显示在细胞无节制的增生中，癌基因都有量或质的变化〔1～3〕。C-myc癌基因编码核调节蛋白，C-myc表达的失调是各种细胞凋亡的主要原因，与多种肿瘤的发生有关。但是，C-myc调节细胞周期及凋亡受到bcl-2、p53及生长因子等多种因素的影响〔4，5〕。为此，着重观察和探讨了在上皮癌变前及癌变过程中C-myc癌基因的表达情况及意义。
1 材料和方法
1.1 标本来源 选用临床收集的病人的颊粘膜标本，包括慢性非特异性类症(IF，15例，男5例，女10例，年龄28～58岁)、鳞状细胞癌(SCC，25例，男17例，女8例，年龄44～73岁)、白斑(OLK，10例，男8例，女2例)。所有上述标本均由福尔马林液固定、石蜡包埋、切片厚4 μm。
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1.2 免疫组织化学染色 采用标准化的ABC染色方法，切片经脱蜡入水并经3%双氧水及正常血清处理后，将切片置于6 mol.L-1尿素中放入微波炉中煮沸10 min。分别滴加抗C-myc单抗(qE10美国Oncogene science产品)，于4℃过夜，此后分别加生物素化二抗及ABC复合物(美国Vector公司，Elite ABC试剂盒)，于37℃下各孵育30 min。显色液用Tris HCl缓冲液(pH7.6、DAB试剂片Sigma)和新鲜的双氧水配制(终浓度为0.05%DAB，0.03%双氧水)。显色后滴加C-myc抗体的切片用苏木精轻微复染以利于观察阳性及阴性反应的细胞及组织结构。阴性对照以PBS代替一抗，结果为阴性。
1.3 组织定量方法 采用测试网格(10×10)，在高倍(×40)视野下对C-myc免疫组化结果进行计数测量。每个标本切片随机选取10个以上不重复无重叠的视野，测定基底层及棘层细胞核总数及C-myc阳性反应细胞核数。每张切片计数的细胞数应大于800个。由此可获得C-myc在上皮的阳性细胞百分比，表示为MPI。
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2 结果
C-myc的阳性反应判断标准以胞核阳性着色为准。观察结果显示，IF组上皮基底层及棘层细胞可见阳性；OLK及SCC组比IF组细胞阳性率提高，尤其是棘层(见图1～3)。对C-myc阳性反应测量结果显示(表1)，IF组的值为最低，与其它各病变组比较差异有显著性(P<0.05)；此外，SCC组的值最大。
表1 C-myc的免疫组化定量结果(
±s)n
MPI(%)
IF
15
, 百拇医药 0.505±0.023
OLK
10
0.512±0.032*
SCC
25
0.561±0.022*
与IF比较，*P<0.05
图1 炎症
C-myc阳性着色主要集中于基底层及棘层深层细胞×40
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图2 不典型增生
C-myc阳性着色呈不规则分布×40
图3 鳞癌
C-myc阳性细胞增多×40
3 讨论
C-myc具有潜在的细胞周期调节作用，在各种肿瘤中发现C-myc基因表达的失调。Porter〔6〕在观察头颈部鳞癌时发现，C-myc癌蛋白的过表达与预后有关，在恶性病变的晚期发挥作用。Gapany等〔7〕在对头颈部鳞癌、结肠癌的观察结果显示，C-myc基因的表达与肿瘤细胞生长特性更为相关，C-myc参与细胞的增生和分化的调节。本研究显示，在炎症状态的上皮中，C-myc主要表达在基底层，而在癌前病变(白斑)上皮组及鳞癌组中，棘层细胞出现明显的C-myc表达增加。可见C-myc癌基因的表达与细胞的生长调节和分化紧密联系在一起。
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C-myc在肿瘤发生中是一个重要基因，但是C-myc被认为是具有诱导细胞增殖和凋亡的双重作用的基因〔5〕。其作用的选择是由生长因子等因素的存在或其他刺激所决定的。Saranath〔3，4〕发现，在细胞转化过程中C-myc常与Ras癌基因协同作用，认为这种协同作用可能是通过myc对蛋白激酶C类物质的调节作用实现的，而蛋白激酶C是几个生长信号途径的交叉点。在本研究结果中，还显示了白斑C-myc表达最接近于SCC组，这正说明了癌前病变上皮高度恶变的可能，也说明了在上皮癌变发生的早期，一些癌基因的表达已出现异常，这对于早期诊断和认识一些具有高度恶度可能的癌前病变具有重要意义。
作者简介：梅陵宣，男，36岁，讲师
参考文献
1 Yamaoto T, Ikawa S, Akiyama T et al. Similarity of protein encoded by the human-erbB-2 gene to epidermal growth factor receptor. Nature,1986;319(6 050)：4～230
, http://www.100md.com
2 Horiguchi J, Iino Y, Takai H et al. Immunohistochemical study on the expression of c-erbB-2 oncoprotein in breast cancer. Oncology,1994;51(1):47～51
3 Scully C. Oncogenes, tumour suppressors and viruses in oral sguamous carcinoma. J Oral Pathol Med,1993;22(8):47～337
4 Saranath D, Pachal RG, Nair R et al. Oncogene amplification squamous cell carcinoma of the oral cavity. Jpn J Cancer Res,1989;80(5):7～430
, 百拇医药
5 Kert JFR, Winterford CM and Harmon BV. Apoptosis, Its significance in cancer and cancer therapy. Cancer,1994；73(8):26～2013
6 Porter MJ, Filed JK, Leung SH et al. The detection of the C-myc and ras oncogenes in nasopharyngeal carcinoma by immunohistochemistry. Acta Otolaryngol,1994;114(1):9 105
7 Gapany M, Pavelic ZP, Kelley DJ et al. Immunohistochemical detection of C-myc protein in head and neck tumors. Arch Otolaryngol Head Neck Surg,1994;120(3):9 255
1999-03-25收稿
1999-05-21修回, http://www.100md.com