不同人群输血后肝炎相关病毒检测及临床意义探讨
作者：鲁文清 张联庆 黄绍标 王金科 阎惠平
单位：鲁文清 张联庆 黄绍标 王金科 南宁市第四人民医院； 阎惠平 北京市肝炎研究所
关键词：输血后肝炎相关病毒；斑点杂交；肝炎
广西医学990522
摘要 目的：对不同人群进行TTVDNA检测并初步探讨TTV的感染状况及临床意义。方法：采用斑点杂交方法检测几组不同人群共92例血清TTVDNA。结果：在非甲～戊型肝炎患者组18例中检出7例TTVDNA阳性(38.9%)，7例其中2例为亚重型肝炎，非甲非乙型肝炎患者组12例中检出TTVDNA阳性3例(25.0%)。乙肝患者组40例中检出TTVDNA阳性9例(22.5%)，正常献血员组17例中检出TTVDNA阳性3例(17.7%)，非甲～戊型肝炎组中检出的7例TTVDNA阳性病人的临床分型都是急肝及亚重肝。结论：TTVDNA在不同人群中均能检出，而非甲～戊型肝炎患者中检出率最高，提示TTV可能是一种损肝病毒，而且可致重度肝损害，临床以急性发病为主，另外，TTV可能呈一种“健康携带状态”。
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目前已得到一致公认的嗜肝病毒有甲、乙、丙、丁、戊型5种，但仍有3%～20%的肝炎病人病因不明(1)，1995年发现了庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)，但其致病性未得到证实(1)。1997年日本学者Nishizawa T首先报道了一种新的与输血后肝炎相关的病毒，命名为TTV(Transfusion-transmitted Virus)(2)。本文用斑点杂交方法检测广西南宁及北京地区共75例肝炎患者及17例正常献血员的血清TTV感染情况，进行初步探讨。
1 材料与方法
1.1 病例来源：75例肝炎患者均为北京市佑安医院及广西南宁市第四医院住院病人，诊断均符合1995年第5次全国传染病寄生虫病学术会议(北京)制订的诊断标准。其中男性45例，年龄最小15岁，最大78岁，平均年龄42.3岁；女性30例，年龄最小18岁，最大66岁，平均年龄40.1岁；17例正常献血员血清由北京市肝炎研究所提供，均来自北京佑安医院血库，均进行了严格的检测筛选。
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1.2 材料：TTVDNA探针由北京市肝炎研究所提供，系采用德国宝灵曼公司(Boehringer Mannheim)试剂盒，以地高辛(Digoxigenin-11-dUTP)为标记物，PCR法进行标记；预杂交液及显色液均为德国宝灵曼公司产品；阳性对照采用TTV阳性血清及PCR扩增阳性产物，阴性对照采用非特异性的鱼精DNA及PCR扩增阴性产物。阳性及阴性对照物由北京市肝炎研究所提供。
1.3 实验方法：每份血清取100μl，用含蛋白酶k的裂解液消化，然后用酚、氯仿抽提，用冷无水乙醇沉淀核酸，经离心、干燥后每份再用20μlTE溶解核酸，然后在蜡酸纤维膜上点膜，此后的杂交前后步骤均严格按德国宝灵曼公司的试剂盒的方法操作。
2 结果
在检测的92例血清中，TTVDNA阳性共22例(23.9%)。其中肝病患者75例检出TTVDNA阳性19例(25.3%)。，乙肝组(包括乙肝后肝硬化)40例检出TTVDNA阳性9例(22.5%)，非甲～戊型肝炎18例检出TTVDNA阳性7例(38.9%)，非甲非乙肝组(丙或戊型病毒指标不全者，但不包括非甲～戊肝组)12例检出TTVDNA阳性3例(25.0%)，甲肝组3例及酒精肝组2例均未检出TTVDNA；正常献血员17例检出TTVDNA阳性3例(17.7%)。75例肝病患者在临床分型中慢性肝炎32例检出TTVDNA阳性7例(21.9%)，急性肝炎19例检出7例(36.8%)，重型肝炎5例检出2例(40.0%)，肝硬化19例检出3例(15.8%)；在慢肝组的7例TTV阳性中，6例原明确诊断为慢性乙肝，1例原明确诊断为慢性自身免疫性肝病，急肝组的7例TTV阳性中，5例为非甲～戊型肝炎，1例为非甲非乙非丙型肝炎(戊型指标缺)，1例为非甲非乙非戊型肝炎(丙型指标缺)；重肝组的2例TTV阳性患者均为非甲～戊型、HGV阴性，均为亚重肝；肝硬化组的3例TTV阳性患者原诊断均明确为乙肝后肝硬化。
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3 讨论
近年来，由于临床上发现仍有一些肝炎病人无法用已知的病因解释，所以国内外学者纷纷致力于这一领域的研究，特别是致肝损害病毒的研究。1997年日本学者发现了一种新病毒，研究表明该病毒与输血后肝炎有密切相关性，并称之为TTV。目前我国许多作者也从各个角度对这一病毒进行了研究报道，也认为TTV可能是输血后肝炎的病因之一(3)，部分非甲～庚型肝炎可能与TTV相关(4)。但因研究手段较少，也未能大范围进行，故TTV的确切致病性仍需进一步深入研究。
本文报道用斑点杂交方法共检测92例标本，其中肝炎患者75例，正常献血员17例，从检测结果分析，TTV在各类人群中均能检出，说明各类人群均存在TTV感染，而在非甲～戊型肝炎患者检出率最高(38.9%)，提示TTV极可能是一种致肝损害病毒，是一部分非甲～戊型肝炎的病原，但另一方面，本文所报道的非甲～戊型肝炎中仍有约60%TTV阴性，提示仍存在其他病因。在5例重肝患者中检出2例TTV阳性(40.0%)，此2例的已知病毒指标检测结果均为非甲～庚型。据此推断，TTV不仅可致肝损害，并能引起重度肝损害。孟庆华等(5)报道也认为，TTV是部分非甲～戊和庚型肝炎病人的致病因子，而且在暴发型肝炎中检出率极高(66.7%)，提示TTV也可能是促进肝衰竭的重要因素之一。
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本文报道的TTV阳性的非甲～戊型肝炎共7例，均表现为急性肝炎，在慢性肝炎及肝硬化组中的TTV阳性患者均有明确的原病因，基本上是慢性乙肝及乙肝后肝硬化，未发现不明原因(即已知肝炎病毒、酒精、寄生虫、自身免疫损伤等以外)的单一TTV阳性的慢性肝炎患者，据以上两点认为TTV损肝多引起急性肝炎，单纯TTV引起慢性肝炎可能较少。但有作者认为TTV可能是导致肝炎慢性化的病原之一(5)。这方面有待进一步研究及探讨。
本文所检测的结果显示慢性乙肝可以重叠感染TTV，但慢性乙肝重叠感染TTV后是否引起病情加重、加快肝纤维化进程以及与肝癌的关系的研究本文未涉及，有待进一步做大量的研究工作。
有作者报道，TTV存在“健康携带状态”(3)，本文报道的17例正常献血员中有3例检出TTV，这也说明TTV可能在正常人群中存在一种携带状态。本文报道的正常人群的TTV阳性率较其他作者报道稍高，可能与本文所检验的正常人群的样本量较小有一定关系。
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参考文献
1 凌斌华.输血传播病毒(TTV)研究近况.国外医学流行病学传染病学分册 1998；25(3)：97
2 Nishizawa T,Okamoto H,Konishi K,et al.A novel DNA virus(TTV) associated with elevated transaminase levels in post transfusion hepatitis of unknown etiology.Biochem Biophys Res Commun 1997；24(1)：92
3 黄呈辉，周育森，陈汝光，等.献血员中TT病毒DNA检测及部分基因序列分析.中华实验和临床病毒学杂志 1998；12(3)：237
4 周伯平，马为民，五火生，等.深圳地区不同人群TTV感染情况的调查.中华实验和临床病毒学杂志 1998；12(3)：241
5 孟庆华，周育森，刘德恭，等.TTV在肝炎患者中的检测及临床意义探讨.中华实验和临床病毒学杂志 1998；12(2)：111, http://www.100md.com
单位：鲁文清 张联庆 黄绍标 王金科 南宁市第四人民医院； 阎惠平 北京市肝炎研究所
关键词：输血后肝炎相关病毒；斑点杂交；肝炎
广西医学990522
摘要 目的：对不同人群进行TTVDNA检测并初步探讨TTV的感染状况及临床意义。方法：采用斑点杂交方法检测几组不同人群共92例血清TTVDNA。结果：在非甲～戊型肝炎患者组18例中检出7例TTVDNA阳性(38.9%)，7例其中2例为亚重型肝炎，非甲非乙型肝炎患者组12例中检出TTVDNA阳性3例(25.0%)。乙肝患者组40例中检出TTVDNA阳性9例(22.5%)，正常献血员组17例中检出TTVDNA阳性3例(17.7%)，非甲～戊型肝炎组中检出的7例TTVDNA阳性病人的临床分型都是急肝及亚重肝。结论：TTVDNA在不同人群中均能检出，而非甲～戊型肝炎患者中检出率最高，提示TTV可能是一种损肝病毒，而且可致重度肝损害，临床以急性发病为主，另外，TTV可能呈一种“健康携带状态”。
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目前已得到一致公认的嗜肝病毒有甲、乙、丙、丁、戊型5种，但仍有3%～20%的肝炎病人病因不明(1)，1995年发现了庚型肝炎病毒(HGV/GBV-C)，但其致病性未得到证实(1)。1997年日本学者Nishizawa T首先报道了一种新的与输血后肝炎相关的病毒，命名为TTV(Transfusion-transmitted Virus)(2)。本文用斑点杂交方法检测广西南宁及北京地区共75例肝炎患者及17例正常献血员的血清TTV感染情况，进行初步探讨。
1 材料与方法
1.1 病例来源：75例肝炎患者均为北京市佑安医院及广西南宁市第四医院住院病人，诊断均符合1995年第5次全国传染病寄生虫病学术会议(北京)制订的诊断标准。其中男性45例，年龄最小15岁，最大78岁，平均年龄42.3岁；女性30例，年龄最小18岁，最大66岁，平均年龄40.1岁；17例正常献血员血清由北京市肝炎研究所提供，均来自北京佑安医院血库，均进行了严格的检测筛选。
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1.2 材料：TTVDNA探针由北京市肝炎研究所提供，系采用德国宝灵曼公司(Boehringer Mannheim)试剂盒，以地高辛(Digoxigenin-11-dUTP)为标记物，PCR法进行标记；预杂交液及显色液均为德国宝灵曼公司产品；阳性对照采用TTV阳性血清及PCR扩增阳性产物，阴性对照采用非特异性的鱼精DNA及PCR扩增阴性产物。阳性及阴性对照物由北京市肝炎研究所提供。
1.3 实验方法：每份血清取100μl，用含蛋白酶k的裂解液消化，然后用酚、氯仿抽提，用冷无水乙醇沉淀核酸，经离心、干燥后每份再用20μlTE溶解核酸，然后在蜡酸纤维膜上点膜，此后的杂交前后步骤均严格按德国宝灵曼公司的试剂盒的方法操作。
2 结果
在检测的92例血清中，TTVDNA阳性共22例(23.9%)。其中肝病患者75例检出TTVDNA阳性19例(25.3%)。，乙肝组(包括乙肝后肝硬化)40例检出TTVDNA阳性9例(22.5%)，非甲～戊型肝炎18例检出TTVDNA阳性7例(38.9%)，非甲非乙肝组(丙或戊型病毒指标不全者，但不包括非甲～戊肝组)12例检出TTVDNA阳性3例(25.0%)，甲肝组3例及酒精肝组2例均未检出TTVDNA；正常献血员17例检出TTVDNA阳性3例(17.7%)。75例肝病患者在临床分型中慢性肝炎32例检出TTVDNA阳性7例(21.9%)，急性肝炎19例检出7例(36.8%)，重型肝炎5例检出2例(40.0%)，肝硬化19例检出3例(15.8%)；在慢肝组的7例TTV阳性中，6例原明确诊断为慢性乙肝，1例原明确诊断为慢性自身免疫性肝病，急肝组的7例TTV阳性中，5例为非甲～戊型肝炎，1例为非甲非乙非丙型肝炎(戊型指标缺)，1例为非甲非乙非戊型肝炎(丙型指标缺)；重肝组的2例TTV阳性患者均为非甲～戊型、HGV阴性，均为亚重肝；肝硬化组的3例TTV阳性患者原诊断均明确为乙肝后肝硬化。
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3 讨论
近年来，由于临床上发现仍有一些肝炎病人无法用已知的病因解释，所以国内外学者纷纷致力于这一领域的研究，特别是致肝损害病毒的研究。1997年日本学者发现了一种新病毒，研究表明该病毒与输血后肝炎有密切相关性，并称之为TTV。目前我国许多作者也从各个角度对这一病毒进行了研究报道，也认为TTV可能是输血后肝炎的病因之一(3)，部分非甲～庚型肝炎可能与TTV相关(4)。但因研究手段较少，也未能大范围进行，故TTV的确切致病性仍需进一步深入研究。
本文报道用斑点杂交方法共检测92例标本，其中肝炎患者75例，正常献血员17例，从检测结果分析，TTV在各类人群中均能检出，说明各类人群均存在TTV感染，而在非甲～戊型肝炎患者检出率最高(38.9%)，提示TTV极可能是一种致肝损害病毒，是一部分非甲～戊型肝炎的病原，但另一方面，本文所报道的非甲～戊型肝炎中仍有约60%TTV阴性，提示仍存在其他病因。在5例重肝患者中检出2例TTV阳性(40.0%)，此2例的已知病毒指标检测结果均为非甲～庚型。据此推断，TTV不仅可致肝损害，并能引起重度肝损害。孟庆华等(5)报道也认为，TTV是部分非甲～戊和庚型肝炎病人的致病因子，而且在暴发型肝炎中检出率极高(66.7%)，提示TTV也可能是促进肝衰竭的重要因素之一。
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本文报道的TTV阳性的非甲～戊型肝炎共7例，均表现为急性肝炎，在慢性肝炎及肝硬化组中的TTV阳性患者均有明确的原病因，基本上是慢性乙肝及乙肝后肝硬化，未发现不明原因(即已知肝炎病毒、酒精、寄生虫、自身免疫损伤等以外)的单一TTV阳性的慢性肝炎患者，据以上两点认为TTV损肝多引起急性肝炎，单纯TTV引起慢性肝炎可能较少。但有作者认为TTV可能是导致肝炎慢性化的病原之一(5)。这方面有待进一步研究及探讨。
本文所检测的结果显示慢性乙肝可以重叠感染TTV，但慢性乙肝重叠感染TTV后是否引起病情加重、加快肝纤维化进程以及与肝癌的关系的研究本文未涉及，有待进一步做大量的研究工作。
有作者报道，TTV存在“健康携带状态”(3)，本文报道的17例正常献血员中有3例检出TTV，这也说明TTV可能在正常人群中存在一种携带状态。本文报道的正常人群的TTV阳性率较其他作者报道稍高，可能与本文所检验的正常人群的样本量较小有一定关系。
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参考文献
1 凌斌华.输血传播病毒(TTV)研究近况.国外医学流行病学传染病学分册 1998；25(3)：97
2 Nishizawa T,Okamoto H,Konishi K,et al.A novel DNA virus(TTV) associated with elevated transaminase levels in post transfusion hepatitis of unknown etiology.Biochem Biophys Res Commun 1997；24(1)：92
3 黄呈辉，周育森，陈汝光，等.献血员中TT病毒DNA检测及部分基因序列分析.中华实验和临床病毒学杂志 1998；12(3)：237
4 周伯平，马为民，五火生，等.深圳地区不同人群TTV感染情况的调查.中华实验和临床病毒学杂志 1998；12(3)：241
5 孟庆华，周育森，刘德恭，等.TTV在肝炎患者中的检测及临床意义探讨.中华实验和临床病毒学杂志 1998；12(2)：111, http://www.100md.com