检测体外中性粒细胞自发性激活的方法学研究
作者：吴立志 陈槐卿
单位：华西医科大学 生物医学工程研究室，成都 610041
关键词：中性粒细胞；自发性激活；伪足；硝基蓝四唑
生物医学工程学杂志990226 摘要 从细胞形态学和细胞酶组织化学的角度出发，用伪足法和NBT法检测体外中性粒细胞的自发性激活，研究了正常人中性粒细胞体外自发性激活的时相特征，对这两种方法进行了对比分析。发现：(1)检测体外中性粒细胞自发性激活，伪足法较NBT法更灵敏、可靠、且可实时观察；(2)体外中性粒细胞自发性激活的百分率呈现由低升高、再逐渐降低的时相过程，最高激活百分率出现在采血后第3小时。研究结果为今后深入研究中性粒细胞激活与多种疾病的关系提供了方法学基础。
Study of Methods for Measuring Spontaneous
, 百拇医药
Activation of Neutrophils in Vitro
Wu Lizhi Chen Huaiqing
Research Unit of Biomedical Engineering, West China University of Medical Sciences, Chengdu 610041
Abstract From the viewpoints of cellular morphology and enzymic histochemistry, we adopted the pseudopod method and NBT test for the measurement of spontaneous activation of neutrophils in vitro The time course curves of spontaneous activation of neutrophils from healthy donor were drawn. After comparing the pseudopod method with NBT test, we conclude that pseudopod method is more sensitive and reliable than NBT test and it can be used for real time observation; and that the curves of time course ascend from lower level to the highest level within 3 hours after the samples are collected, and then they descend gradually. The methodology of this study is available for use in future studies on the relatioship between activation of neutrophils and many diseases.
, 百拇医药
Key words Neutrophil Spontaneuous activation Pseudopod NBT
1 前 言
心脑血管疾病是威胁人类生命的大敌。人们注意到心肌梗塞等疾病与血液中的白细胞数目存在相关性[1]。为证明在这些疾病中白细胞尤其是中性粒细胞所起的作用，学者们采用了各种手段来检测其激活程度。由于各方法的理论依据不同，手段各异而影响了实验结果之间的可比性。还缺少一种简便、准确、实用的检测方法。尚未见对人体中性粒细胞的激活特征系统全面的报道。因此，我们从细胞形态学和细胞酶组织化学的角度出发，用伪足法和硝基蓝四唑(NBT)法研究正常人中性粒细胞体外自发性激活的时相特征，对这两种方法进行对比分析，以期建立和完善客观、准确的检测方法，为深入研究中性粒细胞激活与多种疾病之间的关系提供方法学基础。
2 材料和方法
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2.1 标本的采集
上午10时采集健康男性青年志愿者肘前静脉血10 ml，共27例。肝素(200 IU)抗凝，分为二份，分别用两种方法检测激活的中性粒细胞的百分率。
各标本均常规作全血白细胞计数，分类计数，NBT试验，上清孵育液第1 h和第8 h白细胞计数，台盼蓝排除法计数活性白细胞的百分率。
2.2 检测方法
伪足法：抗凝血装入硅化试管中，以45°斜放于37 ℃恒温水浴中静置45 min，取上清液(此上清液中富含白细胞、血小板，还有少量散在的红细胞)与0.9%生理盐水1∶2混匀，装入另一试管中，加盖，于恒温水浴中孵育，轻微振荡，以防白细胞聚集和粘附。自采血时起每隔1 h用巴氏吸管吸取孵育液100 μl加至显微观察板的凹槽中，加盖玻片后在倒置相差显微镜×100油镜下观察100个中性粒细胞，计数伸出伪足的中性粒细胞的百分率。4 min内记数完毕。
, http://www.100md.com
在1000倍的放大倍数下可清楚地分辨出各种白细胞。中性粒细胞直径为7.4～8.5 μm，胞浆中含有大量强折光性的颗粒。淋巴细胞直径6.0～7.5 μm，它和单核细胞的胞浆中均不含颗粒。嗜酸性和嗜碱性粒细胞较中性粒细胞略大，胞浆内颗粒亦比中性粒细胞的大，折光性更强。死亡中性粒细胞内的颗粒作快速布朗运动。按Chang等的标准，无变形的球形细胞上伸出的突起，长度超过1 μm者确认为伪足[2]。
NBT法：抗凝血装入硅化试管中，于37 ℃恒温水浴中振荡孵育。采血后每隔1 h取100μl全血，与0.2%NBT生理盐水溶液和0.15M PBS各50 μl装入另一试管中，混匀后加盖，于37 ℃水浴中孵育20 min，再置20 ℃孵育10 min，取细胞层制成血片，Wright's染色后在×100油镜下观察100个中性粒细胞，计数NBT阳性细胞的百分率。标准为：胞浆中含有蓝黑色的细小颗粒(比细胞本身的大)或较粗大的凝块[3]。
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(a)伸出伪足的中性粒细胞 (b)NBT阳性中性粒细胞
(a)A neutrophil protruding pseudopod (b)A NBT positive neutorphil
图1 激活的中性粒细胞
Fig 1 Activated neutrophils (×100,oil objective)
图(a)中箭头所示为伪足 图(b)中箭头所示为甲月替沉淀
“→”：pseudopod “→”：formazan deposit
2.3 统计学处理
所得数据以均数±标准差(x±s)表示，并作配对t检验。
, 百拇医药
3 结 果
3.1 测得白细胞的有关数据
血标本白细胞总数：5208±820/μl；分类记数：中性粒细胞63.1%±4.62%，淋巴细胞31.5%±3.8%；采血时NBT阳性的中性粒细胞百分率2.67%±2.13%；活性白细胞百分率第1 h>97%，第8 h>95%。
3.2 两种方法检测结果的比较
伪足法和NBT法检测体外自发性激活的中性粒细胞的百分率见表1和图2。
表1 两种方法检测体外自发性激活的中性粒细胞的百分率(n=27)
Table 1 Percentage of spontaneously activated neutrophils in vitro measured by pseudopod method and NBT test(n=27) Time(hr)
, 百拇医药
1
2
3
4
5
6
7
8
NBT test
7.3
±4.7
13
±8.3
18.6
, http://www.100md.com
±9.6
12.9
±5.6
10.6
±4.8
12.3
±4.6
12.7
±7.5
8.2
±5.8
Pseudopod
method
, http://www.100md.com
21.8
±5.3*
53
±9.1*
62.3
±7.5*
55.2
±7.7*
48.6
±7.9*
42.8
±7.4*
, 百拇医药
37.3
±7.3*
21.3
±8.3*
* pseudopod method vs NBT test P<0.01
图2 两种方法检测体外自发性激活的中性粒细胞的时相变化
Fig 2 Time course of spontaneously activated neutrophils in vitro measured by pseudopod method and NBT test
, http://www.100md.com
*pseudopod method vs NBT test P<0.01
从表1中和图中可见：(1)各小时检测出的中性粒细胞的激活百分率，伪足法均明显高于NBT法(P<0.01)；(2)两种方法检测出的中性粒细胞的激活百分率均表现出由低升高再逐渐降低的时相过程，最大激活百分率出现在采血后第3 h；(3)NBT法的时相曲线呈双峰状，两峰分别出现在采血后第3 h和第7 h，第3 h的激活百分率明显高于第7 h(P<0.01)，第5、6、7 h之间两两比较，差异无显著性(P>0.20)。
4 讨 论
4.1 两种检测方法的理论依据
中性粒细胞被激活时，膜上的Ca2+泵被激活，Ca2+外流，细胞内部分区域Ca2+浓度发生变化，使肌动蛋白在球状单体和长链状双螺旋多聚体两种形态之间转变，加之肌球蛋白收缩，就形成了伪足，细胞因此得以进行趋化、吞噬、脱颗粒等活动[4]。同时NADPH氧化酶被激活，催化氧分子得电子被还原成超氧阴离子，超氧阴离子及其衍生物是中性粒细胞的主要杀菌物质，这时活跃的电子传递活动可将NBT还原成蓝黑色的甲月(无无)/(日)(formazan)而沉淀在细胞浆中[6]。因此可用伪足法和NBT法来检测激活的中性粒细胞，这两种方法简便、直观、实用。
, 百拇医药
4.2 中性粒细胞自发性激活的时相特点
采用伪足法和NBT法来检测中性粒细胞的激活，其时相具有以下二个特点：
(1)伪足法检测的结果显著高于NBT法。伪足法检测的是细胞形态的变化，这种变化与细胞内肌动蛋白的聚合化密切相关[7]，在1000倍的放大倍数下可清楚、生动地观察到这种变化。NBT法要出现阳性结果须具备二个条件：①NBT与血浆中的纤维蛋白原、肝素形成复合物后被吞噬入细胞浆内，这是NBT进入中性粒细胞的唯一方式[8]；②细胞浆中有活跃的电子传递活动，能够将NBT还原成甲月(无无)/(日)而沉淀下来。这就降低了NBT法的灵敏性。此外，中性粒细胞浆内还有许多其他酶催化的氧化还原反应，它们可还原NBT形成甲月(无无)/(日)[6]，影响NBT法的准确性。因此，与NBT法相比，伪足法更灵敏、可靠，且可实时观察。
(2)两种方法的检测结果都表明：体外中性粒细胞自发性激活的百分率表现为由低升高，再逐渐降低的时相过程，最高激活百分率出现在采血后第3 h。目前对中性粒细胞自发性激活的机制还不十分清楚。人们注意到在正常人血清中含有一些生物活性物质如白三烯B4(LTB4)和血小板激活因子等参与调节中性粒细胞的激活[9]。激活的中性粒细胞自身也可释放肿瘤坏死因子、LTB4[10]等物质，可能在它们的作用下中性粒细胞自发性激活的百分率逐渐升高。百分率下降则可能是由于下列原因：①与激活时的信号转导、丝状骨架蛋白的装配和拆装及呼吸爆发有关的酶和蛋白质的活性发生了改变。②激活的中性粒细胞内能量代谢活动十分旺盛[11]，能量物质被大量消耗。③有关的生物活性物质逐渐降解，中性粒细胞上相应受体的数目和活性下调使之对刺激物质脱敏[12]。④血清中还含有一些抑制中性粒细胞激活的物质，如血小板衍生出来的一些物质可抑制中性粒细胞释放氧自由基[13]。
, 百拇医药
5 结 论
本实验研究表明：(1)检测体外中性粒细胞自发性激活，伪足观察法较NBT酶组化法灵敏、可靠，且可实时观察。(2)体外中性粒细胞自发性激活的百分率呈现由低升高，再逐渐降低的时相特征，最大激活百分率出现在采血后第3 h。研究结果为以后进一步深入研究中性粒细胞激活与多种疾病的关系提供了方法学基础。
注释：国家自然科学基金资助项目(39670202)
参考文献
1 Phillips AN, Neaton JD, Cook DG et al. Leukocyte count and risk of major coronary disease events. Am J Epidem, 1992; 136(1)∶59
2 Chang RRK, Chien NTY, Chen CH et al. Spontaneous activation of circulating granulocytes in patients with actue myocardial and cerebral diseases. Biorheology, 1992; 29∶549
, 百拇医药
3 魏明竟等.临床检验学.第三版.北京：科学技术出版社，1996∶86
4 Hoffman R.Hematology, basic principles and practice (1st edition), New York:Churchill Livingston Inc., 1991∶529
5 Babior BM. The respiratory burst of phagocytes. J Clin lnvest, 1984; 73∶599
6 肖邦良.酶组织化学讲义.华西医科大学公共卫生学院毒理教研室，1988∶82
7 Killer HU, Fedier A, Roher R et al. Relationship between light scattering in flow cytometry and changes in shape volume, and actin poly-merization in human polymorphonuclear leukocytes. J Leukoc Biol, 1995; 58∶519
, 百拇医药
8 Hudson L. Practical immunology (3rd edition). Oxford London: Blackwell Scientific Publications, 1989∶187
9 Rossi AG, Maclntyre DE, Carolyn JP et al.Stimulation of human polymorphounclear leukocytes by Leukotriene B4 and platelet-activating factor and ultrastructural and pharmacological study. J Leukoc Biol, 1993; 53∶117
10 Wei S, Blanchard DK, Hong LJ et al. Activation of tumor necrosis factor-α production from human neutrophils by IL-2 via IL-2-Rb. J Immunol, 1993; 150∶1979
, http://www.100md.com
11 Williams WJ et al. Hematology (4th edition). USA:McGraw-Hill, Inc., 1990∶775
12 Haslett C. Resolution of acute inflammation and the role of apoptosis in the tissue fate of granulogcytes. Clin Scie, 1992; 83∶639
13 Principe DD, Menichelli A, Giulio SD et al. Stimulated platelets release factors affecting the in vitro response of human polymorphonuclear cells. J Leukoc Biol, 1990; 48∶7
收稿：1998-06-17, 百拇医药
单位：华西医科大学 生物医学工程研究室，成都 610041
关键词：中性粒细胞；自发性激活；伪足；硝基蓝四唑
生物医学工程学杂志990226 摘要 从细胞形态学和细胞酶组织化学的角度出发，用伪足法和NBT法检测体外中性粒细胞的自发性激活，研究了正常人中性粒细胞体外自发性激活的时相特征，对这两种方法进行了对比分析。发现：(1)检测体外中性粒细胞自发性激活，伪足法较NBT法更灵敏、可靠、且可实时观察；(2)体外中性粒细胞自发性激活的百分率呈现由低升高、再逐渐降低的时相过程，最高激活百分率出现在采血后第3小时。研究结果为今后深入研究中性粒细胞激活与多种疾病的关系提供了方法学基础。
Study of Methods for Measuring Spontaneous
, 百拇医药
Activation of Neutrophils in Vitro
Wu Lizhi Chen Huaiqing
Research Unit of Biomedical Engineering, West China University of Medical Sciences, Chengdu 610041
Abstract From the viewpoints of cellular morphology and enzymic histochemistry, we adopted the pseudopod method and NBT test for the measurement of spontaneous activation of neutrophils in vitro The time course curves of spontaneous activation of neutrophils from healthy donor were drawn. After comparing the pseudopod method with NBT test, we conclude that pseudopod method is more sensitive and reliable than NBT test and it can be used for real time observation; and that the curves of time course ascend from lower level to the highest level within 3 hours after the samples are collected, and then they descend gradually. The methodology of this study is available for use in future studies on the relatioship between activation of neutrophils and many diseases.
, 百拇医药
Key words Neutrophil Spontaneuous activation Pseudopod NBT
1 前 言
心脑血管疾病是威胁人类生命的大敌。人们注意到心肌梗塞等疾病与血液中的白细胞数目存在相关性[1]。为证明在这些疾病中白细胞尤其是中性粒细胞所起的作用，学者们采用了各种手段来检测其激活程度。由于各方法的理论依据不同，手段各异而影响了实验结果之间的可比性。还缺少一种简便、准确、实用的检测方法。尚未见对人体中性粒细胞的激活特征系统全面的报道。因此，我们从细胞形态学和细胞酶组织化学的角度出发，用伪足法和硝基蓝四唑(NBT)法研究正常人中性粒细胞体外自发性激活的时相特征，对这两种方法进行对比分析，以期建立和完善客观、准确的检测方法，为深入研究中性粒细胞激活与多种疾病之间的关系提供方法学基础。
2 材料和方法
, http://www.100md.com
2.1 标本的采集
上午10时采集健康男性青年志愿者肘前静脉血10 ml，共27例。肝素(200 IU)抗凝，分为二份，分别用两种方法检测激活的中性粒细胞的百分率。
各标本均常规作全血白细胞计数，分类计数，NBT试验，上清孵育液第1 h和第8 h白细胞计数，台盼蓝排除法计数活性白细胞的百分率。
2.2 检测方法
伪足法：抗凝血装入硅化试管中，以45°斜放于37 ℃恒温水浴中静置45 min，取上清液(此上清液中富含白细胞、血小板，还有少量散在的红细胞)与0.9%生理盐水1∶2混匀，装入另一试管中，加盖，于恒温水浴中孵育，轻微振荡，以防白细胞聚集和粘附。自采血时起每隔1 h用巴氏吸管吸取孵育液100 μl加至显微观察板的凹槽中，加盖玻片后在倒置相差显微镜×100油镜下观察100个中性粒细胞，计数伸出伪足的中性粒细胞的百分率。4 min内记数完毕。
, http://www.100md.com
在1000倍的放大倍数下可清楚地分辨出各种白细胞。中性粒细胞直径为7.4～8.5 μm，胞浆中含有大量强折光性的颗粒。淋巴细胞直径6.0～7.5 μm，它和单核细胞的胞浆中均不含颗粒。嗜酸性和嗜碱性粒细胞较中性粒细胞略大，胞浆内颗粒亦比中性粒细胞的大，折光性更强。死亡中性粒细胞内的颗粒作快速布朗运动。按Chang等的标准，无变形的球形细胞上伸出的突起，长度超过1 μm者确认为伪足[2]。
NBT法：抗凝血装入硅化试管中，于37 ℃恒温水浴中振荡孵育。采血后每隔1 h取100μl全血，与0.2%NBT生理盐水溶液和0.15M PBS各50 μl装入另一试管中，混匀后加盖，于37 ℃水浴中孵育20 min，再置20 ℃孵育10 min，取细胞层制成血片，Wright's染色后在×100油镜下观察100个中性粒细胞，计数NBT阳性细胞的百分率。标准为：胞浆中含有蓝黑色的细小颗粒(比细胞本身的大)或较粗大的凝块[3]。
, http://www.100md.com
(a)伸出伪足的中性粒细胞 (b)NBT阳性中性粒细胞
(a)A neutrophil protruding pseudopod (b)A NBT positive neutorphil
图1 激活的中性粒细胞
Fig 1 Activated neutrophils (×100,oil objective)
图(a)中箭头所示为伪足 图(b)中箭头所示为甲月替沉淀
“→”：pseudopod “→”：formazan deposit
2.3 统计学处理
所得数据以均数±标准差(x±s)表示，并作配对t检验。
, 百拇医药
3 结 果
3.1 测得白细胞的有关数据
血标本白细胞总数：5208±820/μl；分类记数：中性粒细胞63.1%±4.62%，淋巴细胞31.5%±3.8%；采血时NBT阳性的中性粒细胞百分率2.67%±2.13%；活性白细胞百分率第1 h>97%，第8 h>95%。
3.2 两种方法检测结果的比较
伪足法和NBT法检测体外自发性激活的中性粒细胞的百分率见表1和图2。
表1 两种方法检测体外自发性激活的中性粒细胞的百分率(n=27)
Table 1 Percentage of spontaneously activated neutrophils in vitro measured by pseudopod method and NBT test(n=27) Time(hr)
, 百拇医药
1
2
3
4
5
6
7
8
NBT test
7.3
±4.7
13
±8.3
18.6
, http://www.100md.com
±9.6
12.9
±5.6
10.6
±4.8
12.3
±4.6
12.7
±7.5
8.2
±5.8
Pseudopod
method
, http://www.100md.com
21.8
±5.3*
53
±9.1*
62.3
±7.5*
55.2
±7.7*
48.6
±7.9*
42.8
±7.4*
, 百拇医药
37.3
±7.3*
21.3
±8.3*
* pseudopod method vs NBT test P<0.01
图2 两种方法检测体外自发性激活的中性粒细胞的时相变化
Fig 2 Time course of spontaneously activated neutrophils in vitro measured by pseudopod method and NBT test
, http://www.100md.com
*pseudopod method vs NBT test P<0.01
从表1中和图中可见：(1)各小时检测出的中性粒细胞的激活百分率，伪足法均明显高于NBT法(P<0.01)；(2)两种方法检测出的中性粒细胞的激活百分率均表现出由低升高再逐渐降低的时相过程，最大激活百分率出现在采血后第3 h；(3)NBT法的时相曲线呈双峰状，两峰分别出现在采血后第3 h和第7 h，第3 h的激活百分率明显高于第7 h(P<0.01)，第5、6、7 h之间两两比较，差异无显著性(P>0.20)。
4 讨 论
4.1 两种检测方法的理论依据
中性粒细胞被激活时，膜上的Ca2+泵被激活，Ca2+外流，细胞内部分区域Ca2+浓度发生变化，使肌动蛋白在球状单体和长链状双螺旋多聚体两种形态之间转变，加之肌球蛋白收缩，就形成了伪足，细胞因此得以进行趋化、吞噬、脱颗粒等活动[4]。同时NADPH氧化酶被激活，催化氧分子得电子被还原成超氧阴离子，超氧阴离子及其衍生物是中性粒细胞的主要杀菌物质，这时活跃的电子传递活动可将NBT还原成蓝黑色的甲月(无无)/(日)(formazan)而沉淀在细胞浆中[6]。因此可用伪足法和NBT法来检测激活的中性粒细胞，这两种方法简便、直观、实用。
, 百拇医药
4.2 中性粒细胞自发性激活的时相特点
采用伪足法和NBT法来检测中性粒细胞的激活，其时相具有以下二个特点：
(1)伪足法检测的结果显著高于NBT法。伪足法检测的是细胞形态的变化，这种变化与细胞内肌动蛋白的聚合化密切相关[7]，在1000倍的放大倍数下可清楚、生动地观察到这种变化。NBT法要出现阳性结果须具备二个条件：①NBT与血浆中的纤维蛋白原、肝素形成复合物后被吞噬入细胞浆内，这是NBT进入中性粒细胞的唯一方式[8]；②细胞浆中有活跃的电子传递活动，能够将NBT还原成甲月(无无)/(日)而沉淀下来。这就降低了NBT法的灵敏性。此外，中性粒细胞浆内还有许多其他酶催化的氧化还原反应，它们可还原NBT形成甲月(无无)/(日)[6]，影响NBT法的准确性。因此，与NBT法相比，伪足法更灵敏、可靠，且可实时观察。
(2)两种方法的检测结果都表明：体外中性粒细胞自发性激活的百分率表现为由低升高，再逐渐降低的时相过程，最高激活百分率出现在采血后第3 h。目前对中性粒细胞自发性激活的机制还不十分清楚。人们注意到在正常人血清中含有一些生物活性物质如白三烯B4(LTB4)和血小板激活因子等参与调节中性粒细胞的激活[9]。激活的中性粒细胞自身也可释放肿瘤坏死因子、LTB4[10]等物质，可能在它们的作用下中性粒细胞自发性激活的百分率逐渐升高。百分率下降则可能是由于下列原因：①与激活时的信号转导、丝状骨架蛋白的装配和拆装及呼吸爆发有关的酶和蛋白质的活性发生了改变。②激活的中性粒细胞内能量代谢活动十分旺盛[11]，能量物质被大量消耗。③有关的生物活性物质逐渐降解，中性粒细胞上相应受体的数目和活性下调使之对刺激物质脱敏[12]。④血清中还含有一些抑制中性粒细胞激活的物质，如血小板衍生出来的一些物质可抑制中性粒细胞释放氧自由基[13]。
, 百拇医药
5 结 论
本实验研究表明：(1)检测体外中性粒细胞自发性激活，伪足观察法较NBT酶组化法灵敏、可靠，且可实时观察。(2)体外中性粒细胞自发性激活的百分率呈现由低升高，再逐渐降低的时相特征，最大激活百分率出现在采血后第3 h。研究结果为以后进一步深入研究中性粒细胞激活与多种疾病的关系提供了方法学基础。
注释：国家自然科学基金资助项目(39670202)
参考文献
1 Phillips AN, Neaton JD, Cook DG et al. Leukocyte count and risk of major coronary disease events. Am J Epidem, 1992; 136(1)∶59
2 Chang RRK, Chien NTY, Chen CH et al. Spontaneous activation of circulating granulocytes in patients with actue myocardial and cerebral diseases. Biorheology, 1992; 29∶549
, 百拇医药
3 魏明竟等.临床检验学.第三版.北京：科学技术出版社，1996∶86
4 Hoffman R.Hematology, basic principles and practice (1st edition), New York:Churchill Livingston Inc., 1991∶529
5 Babior BM. The respiratory burst of phagocytes. J Clin lnvest, 1984; 73∶599
6 肖邦良.酶组织化学讲义.华西医科大学公共卫生学院毒理教研室，1988∶82
7 Killer HU, Fedier A, Roher R et al. Relationship between light scattering in flow cytometry and changes in shape volume, and actin poly-merization in human polymorphonuclear leukocytes. J Leukoc Biol, 1995; 58∶519
, 百拇医药
8 Hudson L. Practical immunology (3rd edition). Oxford London: Blackwell Scientific Publications, 1989∶187
9 Rossi AG, Maclntyre DE, Carolyn JP et al.Stimulation of human polymorphounclear leukocytes by Leukotriene B4 and platelet-activating factor and ultrastructural and pharmacological study. J Leukoc Biol, 1993; 53∶117
10 Wei S, Blanchard DK, Hong LJ et al. Activation of tumor necrosis factor-α production from human neutrophils by IL-2 via IL-2-Rb. J Immunol, 1993; 150∶1979
, http://www.100md.com
11 Williams WJ et al. Hematology (4th edition). USA:McGraw-Hill, Inc., 1990∶775
12 Haslett C. Resolution of acute inflammation and the role of apoptosis in the tissue fate of granulogcytes. Clin Scie, 1992; 83∶639
13 Principe DD, Menichelli A, Giulio SD et al. Stimulated platelets release factors affecting the in vitro response of human polymorphonuclear cells. J Leukoc Biol, 1990; 48∶7
收稿：1998-06-17, 百拇医药