CDKN2基因在大肠癌组织表达中的临床意义
作者：薛佩莲 胡家露 王剑波
单位：266071 青岛，海军第401医院(薛佩莲)；第四军医大学西京医院(胡家露、王剑波)
关键词：
中华内科杂志/980225
CDKN2(MTS1)是新近发现的多种肿瘤抑制基因，编码分子量16 000的蛋白，简称p16。CDKN2(p16)与人多种肿瘤细胞系缺失、突变与肿瘤发生和发展相关。目前未见p16在原发大肠肿瘤组织表达的研究报道。作者采用S-P免疫组化法和图象分析技术检测大肠癌、大肠腺瘤及正常大肠组织p16表达，以探讨p16在大肠癌发病中的作用及其临床意义。
一、材料与方法
, http://www.100md.com 1.研究对象：大肠癌手术切除标本25例，随访5年以上，未接受化疗、放疗。大肠腺瘤内镜活检标本10例，正常大肠黏膜活检标本8例。系西京医院和海军第401医院病理科福尔马林固定、石蜡包埋组织。
2.试剂与方法：兔抗人p16多克隆抗体(Santa Cruz，美国)、S-P试剂盒(Zymed，美国)购自北京中山生物技术公司，工作浓度1∶100。免疫组化方法参照S-P试剂盒说明书常规进行。每批设已知p16阳性染色的食管癌组织为阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。
3.结果判定：胞浆或核膜着棕黄色斑点为阳性，无染色为阴性。用MIAM-300图像分析仪检测胞浆p16染色灰度，计算均值及标准差。分析临床病理参数及5年生存率与p16表达的关系。
4.统计学处理：采用卡方检验和F检验。
二、结果
, 百拇医药
1.正常大肠、大肠腺瘤、大肠癌组织p16表达阳性率分别为2/8、6/10及16/25(卡方检验，P>0.05)。p16染色灰度分别为151.910±2.863，147.415±1.548，132.161±1.542(F检验，P<0.001)。
2.大肠癌直径<3 cm和>3 cm者p16表达阳性率分别为0(0/1)和66.67%(16/24)。高、中、低分化腺癌和粘液腺癌p16表达阳性率分别为8/10、3/6、2/2及3/7(P>0.05)。
3.p16表达阳性和阴性的大肠癌患者5年生存率分别为81.25%(13/16)和6/9(P>0.05)。
讨论 细胞周期失控是细胞增殖过度及癌变的重要原因。Kamb等[1]认为真核细胞分裂须经两个关键点：G1期-S期转换，DNA合成的开始。G2期-M期转换，有丝分裂的启动。细胞周期素依赖激酶(CDKs)是细胞周期调控的核心装置，调节多种关键底物磷酸化，激发G1期-S期、G2期-M期转换。CDKN2/p16通过与Cyclin D竞争结合CDK4，抑制CDK4的活性，使细胞停滞于G1期，负性调节细胞周期[1]。Serrano等[2]称p16为细胞周期的“闸门”。Kamb等[1]报道50%黑色素瘤细胞系p16缺失。Naumann等[3]发现多株胰腺癌细胞系p16纯合子丢失率为55%，突变率为56%。但原发肿瘤组织与体外培养肿瘤细胞系p16突变和缺失率有明显差异。
, http://www.100md.com
本组研究资料表明大肠癌组织p16表达阳性率较大肠腺瘤和正常大肠黏膜高，与陈谦明等[4]报道p16在口腔鳞癌较正常口腔和异型增生的口腔黏膜表达增高的结果相一致。可能由于大肠癌细胞分裂活跃，反馈性p16高表达，与Cyclin D竞争结合CDK4而阻止细胞由G1期进入S期，以维持细胞周期平衡，为机体保护性代偿反应。图象分析表明大肠癌p16染色灰度明显低于正常大肠和大肠腺瘤，与国外报道p16在恶性肿瘤细胞系缺失的结论相同。p16表达阳性率与染色灰度间不一致性是否与肿瘤组织中存有正常细胞干扰还有待于进一步研究阐明。我们发现Duck Ⅰ、Ⅱ期大肠癌p16阳性率(75.0%)高于Ⅲ、Ⅳ期(53.8%)，与Reed等[5]观察示原发性黑色素瘤p16阳性表达率低，转移性黑色素瘤p16表达阳性率高的结论相反。与陈谦明等[4]观察到浸润性口腔鳞癌较转移性鳞癌p16表达阳性率高的结论相一致。可能由于强致癌因子干扰p16蛋白合成，p16突变蛋白成分增多，丧失抑制细胞增殖的作用，导致转移。我们发现，p16阳性表达者较阴性表达者的5年生存率明显增高。这一结果表明p16有可能成为判断大肠癌患者预后的指标之一。
, 百拇医药
参考文献
1 Kamb A, Gruis NA, Weaver-Feldhaus J, et al. A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types. Science, 1994,264：436-444.
2 Serrano M, Gomez-Lahoz E, DePinho RA, et al. Inhibition of ras-induced proliferation and cellular transformation by p16 INK4. Science, 1995,267：249-252.
3 Naumann M, Savitskaia N, Eilert C, et al. Frequent codeletion of p16/MTS1 and p15/MTS2 and genetic alteration in p16/MTS1 in pancreatic tumors. Gastroenterology, 1996,110：1215-1221.
, 百拇医药
4 陈谦明，李秉琪，罗刚，等.人类口腔粘膜癌前损害发生发展过程中CDKN2基因作用的研究.华西口腔医学杂志，1996，14：53-55.
5 Reed JA, Loganzo F Jr, Shea CR, et al. Loss of expression of the p16/cyclindependent kinase inhibitor 2 tumor suppressor gene in melanocytic lesions correlates with invasive stage of tumor progression. Cancer Res, 1995,55：2713-2718.
(收稿：1997-02-03 修回：1997-08-25), 百拇医药
单位：266071 青岛，海军第401医院(薛佩莲)；第四军医大学西京医院(胡家露、王剑波)
关键词：
中华内科杂志/980225
CDKN2(MTS1)是新近发现的多种肿瘤抑制基因，编码分子量16 000的蛋白，简称p16。CDKN2(p16)与人多种肿瘤细胞系缺失、突变与肿瘤发生和发展相关。目前未见p16在原发大肠肿瘤组织表达的研究报道。作者采用S-P免疫组化法和图象分析技术检测大肠癌、大肠腺瘤及正常大肠组织p16表达，以探讨p16在大肠癌发病中的作用及其临床意义。
一、材料与方法
, http://www.100md.com 1.研究对象：大肠癌手术切除标本25例，随访5年以上，未接受化疗、放疗。大肠腺瘤内镜活检标本10例，正常大肠黏膜活检标本8例。系西京医院和海军第401医院病理科福尔马林固定、石蜡包埋组织。
2.试剂与方法：兔抗人p16多克隆抗体(Santa Cruz，美国)、S-P试剂盒(Zymed，美国)购自北京中山生物技术公司，工作浓度1∶100。免疫组化方法参照S-P试剂盒说明书常规进行。每批设已知p16阳性染色的食管癌组织为阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。
3.结果判定：胞浆或核膜着棕黄色斑点为阳性，无染色为阴性。用MIAM-300图像分析仪检测胞浆p16染色灰度，计算均值及标准差。分析临床病理参数及5年生存率与p16表达的关系。
4.统计学处理：采用卡方检验和F检验。
二、结果
, 百拇医药
1.正常大肠、大肠腺瘤、大肠癌组织p16表达阳性率分别为2/8、6/10及16/25(卡方检验，P>0.05)。p16染色灰度分别为151.910±2.863，147.415±1.548，132.161±1.542(F检验，P<0.001)。
2.大肠癌直径<3 cm和>3 cm者p16表达阳性率分别为0(0/1)和66.67%(16/24)。高、中、低分化腺癌和粘液腺癌p16表达阳性率分别为8/10、3/6、2/2及3/7(P>0.05)。
3.p16表达阳性和阴性的大肠癌患者5年生存率分别为81.25%(13/16)和6/9(P>0.05)。
讨论 细胞周期失控是细胞增殖过度及癌变的重要原因。Kamb等[1]认为真核细胞分裂须经两个关键点：G1期-S期转换，DNA合成的开始。G2期-M期转换，有丝分裂的启动。细胞周期素依赖激酶(CDKs)是细胞周期调控的核心装置，调节多种关键底物磷酸化，激发G1期-S期、G2期-M期转换。CDKN2/p16通过与Cyclin D竞争结合CDK4，抑制CDK4的活性，使细胞停滞于G1期，负性调节细胞周期[1]。Serrano等[2]称p16为细胞周期的“闸门”。Kamb等[1]报道50%黑色素瘤细胞系p16缺失。Naumann等[3]发现多株胰腺癌细胞系p16纯合子丢失率为55%，突变率为56%。但原发肿瘤组织与体外培养肿瘤细胞系p16突变和缺失率有明显差异。
, http://www.100md.com
本组研究资料表明大肠癌组织p16表达阳性率较大肠腺瘤和正常大肠黏膜高，与陈谦明等[4]报道p16在口腔鳞癌较正常口腔和异型增生的口腔黏膜表达增高的结果相一致。可能由于大肠癌细胞分裂活跃，反馈性p16高表达，与Cyclin D竞争结合CDK4而阻止细胞由G1期进入S期，以维持细胞周期平衡，为机体保护性代偿反应。图象分析表明大肠癌p16染色灰度明显低于正常大肠和大肠腺瘤，与国外报道p16在恶性肿瘤细胞系缺失的结论相同。p16表达阳性率与染色灰度间不一致性是否与肿瘤组织中存有正常细胞干扰还有待于进一步研究阐明。我们发现Duck Ⅰ、Ⅱ期大肠癌p16阳性率(75.0%)高于Ⅲ、Ⅳ期(53.8%)，与Reed等[5]观察示原发性黑色素瘤p16阳性表达率低，转移性黑色素瘤p16表达阳性率高的结论相反。与陈谦明等[4]观察到浸润性口腔鳞癌较转移性鳞癌p16表达阳性率高的结论相一致。可能由于强致癌因子干扰p16蛋白合成，p16突变蛋白成分增多，丧失抑制细胞增殖的作用，导致转移。我们发现，p16阳性表达者较阴性表达者的5年生存率明显增高。这一结果表明p16有可能成为判断大肠癌患者预后的指标之一。
, 百拇医药
参考文献
1 Kamb A, Gruis NA, Weaver-Feldhaus J, et al. A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types. Science, 1994,264：436-444.
2 Serrano M, Gomez-Lahoz E, DePinho RA, et al. Inhibition of ras-induced proliferation and cellular transformation by p16 INK4. Science, 1995,267：249-252.
3 Naumann M, Savitskaia N, Eilert C, et al. Frequent codeletion of p16/MTS1 and p15/MTS2 and genetic alteration in p16/MTS1 in pancreatic tumors. Gastroenterology, 1996,110：1215-1221.
, 百拇医药
4 陈谦明，李秉琪，罗刚，等.人类口腔粘膜癌前损害发生发展过程中CDKN2基因作用的研究.华西口腔医学杂志，1996，14：53-55.
5 Reed JA, Loganzo F Jr, Shea CR, et al. Loss of expression of the p16/cyclindependent kinase inhibitor 2 tumor suppressor gene in melanocytic lesions correlates with invasive stage of tumor progression. Cancer Res, 1995,55：2713-2718.
(收稿：1997-02-03 修回：1997-08-25), 百拇医药