支气管哮喘患者肺泡巨噬细胞分泌白细胞介素-10的研究
作者：康文娟 张永兴 宋满景 刘卓拉 李建强 闫晓梅
单位：030010 太原，山西医科大学第二临床学院呼吸科(第一作者现在山西省人民医院，太原， 030012)
关键词：
中华内科杂志990915 本研究采用支气管肺泡灌洗及细胞培养技术，观察哮喘患者支气管肺泡灌洗液和肺泡巨噬细胞培养上清液中白细胞介素(IL)-10水平的变化以及糖皮质激素对其的影响，旨在探讨肺泡巨噬细胞分泌的细胞因子在支气管哮喘发病机制中的作用及糖皮质激素治疗的可能机制。
一、对象与方法
1.对象：哮喘组：男10例，女5例，年龄24～64岁，平均(37.7±12.2)岁。均符合1993年中华医学会哮喘组制订的支气管哮喘的诊断标准及分级标准。受试者做支气管镜前48小时未用肾上腺皮质激素、β2受体激动剂和支气管扩张剂。对照组：15例，男11例，女4例，年龄26～63岁，平均(42.4±10.1)岁。既往无肺部疾患，非过敏体质者。
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2.方法：常规于右肺中叶或左肺舌叶进行支气管肺泡灌洗[1]，将上清液浓缩后备用。离心沉淀的细胞成分用D-hank液漂洗，并用含20%小牛血清的RPMI 1640培养基悬浮细胞，纯化并培养肺泡巨噬细胞。调整细胞浓度为1×109/L，加青霉素100 U/ml，链霉素100 mg/ L。分成3份，A份为空白对照，B份加10 mg/L脂多糖(LPS)，C份加10 mg/L LPS和4 mg/L氟美松。用 ELISA法测定细胞因子含量。
3.统计学方法：数值以
±s表示，各组间比较采用t检验。
二、结果
1.哮喘组支气管肺泡灌洗液中 IL-10为(23.84±1.28) ng/L，对照组为(31.86±4.38) ng/L，两组比较，P<0.05。
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2.肺泡巨噬细胞培养上清液中IL-10水平：见表1。
表1 肺泡巨噬细胞培养上清液中白细胞介素-10水平(ng/L，±s) 组别
例数
A份
B份
C份
哮喘组
15
42.49±0.89
43.90±1.27*
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45.72±1.85**
对照组
15
43.53±1.20
44.58±1.23*
44.09±1.89△
注：与同组A份比较，*P<0.05；与同组B份比较，**P<0.05，△P>0.05 讨论 IL-10主要由单核和(或)巨噬细胞、T淋巴细胞等产生。通过原位杂交和免疫细胞化学的方法检测过敏性哮喘患者支气管肺泡灌洗液细胞，结果显示IL-10 mRNA表达局限于CD+3T淋巴细胞和CD+68肺泡巨噬细胞[2]。本组资料显示，哮喘组支气管肺泡灌洗液及肺泡巨噬细胞培养上清液中IL-10水平较对照组明显减低。Borish等[3]应用RNA PCR技术研究表明，哮喘患者肺泡灌洗液中IL-10浓度明显低于正常人，迟发相哮喘反应中IL-10减少是由于IL-10 mRNA的转录受到抑制所致，同时又发现哮喘患者外周血单个核细胞无论刺激与否其合成及释放IL-10的量均低于正常人。Th1细胞分泌IL-2和γ干扰素(IFN-γ)，激发和调节高反应性迟发相；Th2细胞能分泌IL-4、IL-5和IL-10，辅助B淋巴细胞生成抗体。Th1由于分泌INF-γ而有抑制产生IgE的作用，Th1实际是迟发相变态反应的主导者，它产生的INF-γ又是活化巨噬细胞的细胞因子。因此哮喘患者气道局部被活化的巨噬细胞数量增加。
, 百拇医药
在本组试验中，LPS做为一种体外刺激剂，使肺泡巨噬细胞进一步活化，哮喘组与对照组IL-10分泌均增加。未加刺激剂之前，IL-10水平与活化巨噬细胞数量呈正比，而加刺激剂之后，IL-10水平与活化巨噬细胞数量呈反比，可能因为两次活化的刺激剂不同，前者由于体内抗原刺激，后者是在体外进行的，更深入的原因有待进一步探讨。
本组结果显示，加入氟美松后，哮喘组IL-10水平反而较对照组升高。糖皮质激素用于哮喘的治疗已有数十年的历史，但对其作用机制并未完全明了。细胞免疫起始于抗原和巨噬细胞相互作用，糖皮质激素可干扰巨噬细胞的功能，如抑制巨噬细胞移行抑制因子的功能，抑制INF-γ的作用，阻止巨噬细胞的活化，从而诱导IL-10的分泌，而IL-10又可抑制IFN-γ的产生，发挥强有力的抗炎作用[4]，可能是其抗炎机制之一，即其抗炎作用有细胞因子参与调节,而调节细胞因子含量又可控制哮喘的转归[5]。因此，IL-10作为一种免疫抑制因子可抑制多种细胞合成其他细胞因子，具有抗炎作用，它的预防和治疗作用运用于临床将会有良好的前景。
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参考文献
[1] 支气管肺泡灌洗及灌洗液的细胞计数分类技术规范.中华结核和呼吸杂志，1994，17：10.
[2] Robinson DS, Tsicopoulos A, Meng Q, et al. Increased interleukin-10 messenger RNA expression in atopic allergy and asthma. Am J Respir Cell Mol Biol, 1996,14: 113-117.
[3] Borish L, Aarons A, Rumbyrt J, et al. Interleukin-10 regulation in normal subjects and patients with asthma. J Allergy Clin Immunol,1996,97:1288-1296.
, 百拇医药
[4] Koning H, Neijens HJ, Baert MR, et al. T cells subsets and cytokines in allergic and non-allergic children. II. Analysis and IL-5 and IL-10 mRNA expression and protein production. Cytokine,1997,9:427-436.
[5] Ippoliti F, Ragno V, Del Nero A, et al. Effect of preseasonal enzyme potentiated desensitisation (EPD) on plasma-IL-6 and IL-10 of grass pollen-sensitive asthmatic children. Allerg Immunol, 1997,29:120,123-125.
(收稿：1998-11-04 修回：1999-06-18), 百拇医药
单位：030010 太原，山西医科大学第二临床学院呼吸科(第一作者现在山西省人民医院，太原， 030012)
关键词：
中华内科杂志990915 本研究采用支气管肺泡灌洗及细胞培养技术，观察哮喘患者支气管肺泡灌洗液和肺泡巨噬细胞培养上清液中白细胞介素(IL)-10水平的变化以及糖皮质激素对其的影响，旨在探讨肺泡巨噬细胞分泌的细胞因子在支气管哮喘发病机制中的作用及糖皮质激素治疗的可能机制。
一、对象与方法
1.对象：哮喘组：男10例，女5例，年龄24～64岁，平均(37.7±12.2)岁。均符合1993年中华医学会哮喘组制订的支气管哮喘的诊断标准及分级标准。受试者做支气管镜前48小时未用肾上腺皮质激素、β2受体激动剂和支气管扩张剂。对照组：15例，男11例，女4例，年龄26～63岁，平均(42.4±10.1)岁。既往无肺部疾患，非过敏体质者。
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2.方法：常规于右肺中叶或左肺舌叶进行支气管肺泡灌洗[1]，将上清液浓缩后备用。离心沉淀的细胞成分用D-hank液漂洗，并用含20%小牛血清的RPMI 1640培养基悬浮细胞，纯化并培养肺泡巨噬细胞。调整细胞浓度为1×109/L，加青霉素100 U/ml，链霉素100 mg/ L。分成3份，A份为空白对照，B份加10 mg/L脂多糖(LPS)，C份加10 mg/L LPS和4 mg/L氟美松。用 ELISA法测定细胞因子含量。
3.统计学方法：数值以
±s表示，各组间比较采用t检验。二、结果
1.哮喘组支气管肺泡灌洗液中 IL-10为(23.84±1.28) ng/L，对照组为(31.86±4.38) ng/L，两组比较，P<0.05。
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2.肺泡巨噬细胞培养上清液中IL-10水平：见表1。
表1 肺泡巨噬细胞培养上清液中白细胞介素-10水平(ng/L，
±s) 组别例数
A份
B份
C份
哮喘组
15
42.49±0.89
43.90±1.27*
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45.72±1.85**
对照组
15
43.53±1.20
44.58±1.23*
44.09±1.89△
注：与同组A份比较，*P<0.05；与同组B份比较，**P<0.05，△P>0.05 讨论 IL-10主要由单核和(或)巨噬细胞、T淋巴细胞等产生。通过原位杂交和免疫细胞化学的方法检测过敏性哮喘患者支气管肺泡灌洗液细胞，结果显示IL-10 mRNA表达局限于CD+3T淋巴细胞和CD+68肺泡巨噬细胞[2]。本组资料显示，哮喘组支气管肺泡灌洗液及肺泡巨噬细胞培养上清液中IL-10水平较对照组明显减低。Borish等[3]应用RNA PCR技术研究表明，哮喘患者肺泡灌洗液中IL-10浓度明显低于正常人，迟发相哮喘反应中IL-10减少是由于IL-10 mRNA的转录受到抑制所致，同时又发现哮喘患者外周血单个核细胞无论刺激与否其合成及释放IL-10的量均低于正常人。Th1细胞分泌IL-2和γ干扰素(IFN-γ)，激发和调节高反应性迟发相；Th2细胞能分泌IL-4、IL-5和IL-10，辅助B淋巴细胞生成抗体。Th1由于分泌INF-γ而有抑制产生IgE的作用，Th1实际是迟发相变态反应的主导者，它产生的INF-γ又是活化巨噬细胞的细胞因子。因此哮喘患者气道局部被活化的巨噬细胞数量增加。
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在本组试验中，LPS做为一种体外刺激剂，使肺泡巨噬细胞进一步活化，哮喘组与对照组IL-10分泌均增加。未加刺激剂之前，IL-10水平与活化巨噬细胞数量呈正比，而加刺激剂之后，IL-10水平与活化巨噬细胞数量呈反比，可能因为两次活化的刺激剂不同，前者由于体内抗原刺激，后者是在体外进行的，更深入的原因有待进一步探讨。
本组结果显示，加入氟美松后，哮喘组IL-10水平反而较对照组升高。糖皮质激素用于哮喘的治疗已有数十年的历史，但对其作用机制并未完全明了。细胞免疫起始于抗原和巨噬细胞相互作用，糖皮质激素可干扰巨噬细胞的功能，如抑制巨噬细胞移行抑制因子的功能，抑制INF-γ的作用，阻止巨噬细胞的活化，从而诱导IL-10的分泌，而IL-10又可抑制IFN-γ的产生，发挥强有力的抗炎作用[4]，可能是其抗炎机制之一，即其抗炎作用有细胞因子参与调节,而调节细胞因子含量又可控制哮喘的转归[5]。因此，IL-10作为一种免疫抑制因子可抑制多种细胞合成其他细胞因子，具有抗炎作用，它的预防和治疗作用运用于临床将会有良好的前景。
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参考文献
[1] 支气管肺泡灌洗及灌洗液的细胞计数分类技术规范.中华结核和呼吸杂志，1994，17：10.
[2] Robinson DS, Tsicopoulos A, Meng Q, et al. Increased interleukin-10 messenger RNA expression in atopic allergy and asthma. Am J Respir Cell Mol Biol, 1996,14: 113-117.
[3] Borish L, Aarons A, Rumbyrt J, et al. Interleukin-10 regulation in normal subjects and patients with asthma. J Allergy Clin Immunol,1996,97:1288-1296.
, 百拇医药
[4] Koning H, Neijens HJ, Baert MR, et al. T cells subsets and cytokines in allergic and non-allergic children. II. Analysis and IL-5 and IL-10 mRNA expression and protein production. Cytokine,1997,9:427-436.
[5] Ippoliti F, Ragno V, Del Nero A, et al. Effect of preseasonal enzyme potentiated desensitisation (EPD) on plasma-IL-6 and IL-10 of grass pollen-sensitive asthmatic children. Allerg Immunol, 1997,29:120,123-125.
(收稿：1998-11-04 修回：1999-06-18), 百拇医药