幽门螺杆菌对亚硝酸盐及亚硝胺合成的影响
作者：施有奎 劳征虹 许超 陈一平 林洁 钱可大
单位：施有奎(浙江省德清县人民医院 313200)；劳征虹(浙江省德清县人民医院 313200)；许超(浙江省德清县人民医院 313200)；陈一平(浙江省德清县人民医院 313200)；林洁(浙江大学医学院附属邵逸夫医院)；钱可大(浙江大学医学院附属邵逸夫医院)
关键词：
中华内科杂志001019 幽门螺杆菌(Hp)与胃癌的关系日益受到广泛关注。世界卫生组织已将Hp列为I类生物致癌物。然而其致癌机制迄今尚未阐明[1，2]。亚硝酸盐、N-亚硝胺(简称亚硝胺)均属强烈致癌物，特别是后者已广泛用于实验动物胃癌模型的建立。我们采用化学法分析了Hp培养上清液中的亚硝酸盐、亚硝胺含量，以探讨Hp亚硝酸盐还原酶、亚硝胺合成酶的活性。现报道如下。
1.方法：收集Hp菌株共59株。其中来自胃癌患者21株，来自非胃癌患者38株(慢性浅表性胃炎患者21例，慢性萎缩性胃炎10例，消化性溃疡7例)。菌株采用革兰染色、生化反应和抗血清玻片凝集法鉴定。挑选生长于Hp培养基的典型Hp菌落，37℃微需氧开放培养72 h(摇床振摇频率80次/min)，3 000 r/min,30 min离心，收集上清液供亚硝酸盐及亚硝胺测定用。阴性对照为含50 ml/L胎牛血清、10 mmol/L底物液的布氏肉汤37℃微需氧放置72 h后，3 000 r/min，30 min离心，收集上清液即可。亚硝酸盐测定采用N-(1-萘基)-乙二胺光度法[3]。亚硝胺测定采用薄层层析萘胺显色定量法[3]。
, 百拇医药
2. 结果：21例胃癌组Hp培养上清液中亚硝酸盐及亚硝胺含量分别为(0.061±0.056) mg/L和(0.011±0.009) mg/L；38例非癌组分别为(0.054±0.049) mg/L和(0.013±0.011) mg/L, 均显著高于18例阴性对照[分别为(0.018±0.008) mg/L和(0.006±0.003 ) mg/L]。提示Hp菌体有亚硝酸盐还原酶和亚硝胺合成酶系的存在。然胃癌组与非癌组Hp 培养上清液中的亚硝酸盐、亚硝胺含量差异无显著性(P>0.05)，提示Hp对亚硝酸盐、亚硝胺合成的影响与不同菌株有关。若以亚硝酸盐还原酶/亚硝胺合成酶均阴性的金黄色葡萄球菌标准株为标准，凡含量≥标准株
+1.96s者为阳性，则胃癌组亚硝酸盐还原酶阳性率为14%，与非癌组的16%相比较，P>0.05；胃癌组亚硝胺合成酶阳性率为10%，与非癌组的11%比较，P>0.05。提示Hp的亚硝酸盐还原酶、亚硝胺合成酶活性与菌株来源无关。
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讨论 多数学者认为Hp感染主要作用于癌变的起始阶段，但其机制未明。亚硝酸盐是氮循环的中间产物，不稳定，亚硝胺在体内经一系列代谢生成不稳定的α-羟化衍生物，并自发裂解成醛和相应亚硝基单烷基胺，后者具有亲核性，可与DNA、RNA的碱基发生结合而致碱基对突变，引起DNA、RNA链大面积损伤等而致癌[4]。目前的研究已表明多种细菌在体外实验中均表达有亚硝酸盐还原酶、亚硝胺合成酶的酶系活性，但尚不知Hp是否亦具有该酶系活性。
本结果表明，胃癌、非胃癌组Hp培养上清液中亚硝酸盐、亚硝胺浓度显著高于阴性对照，提示Hp亦具有亚硝酸盐还原酶、亚硝胺合成酶系。然胃癌与非胃癌组二者差异无显著性，提示Hp的酶活性与Hp菌株来源无关，进一步佐证了Hp致癌作用时间的长期性。若以亚硝酸盐还原酶和亚硝胺合成酶均阴性的金黄色葡萄球菌标准株为标准，胃癌组、非胃癌组Hp亚硝酸盐还原酶阳性率分别为14%、16%，亚硝胺合成酶分别为10%、11%，二组间P值均>0.05，亦提示Hp菌株来源与酶系活性影响无关。然而，需进一步探讨Hp亚硝酸盐还原酶、亚硝胺合成酶阳性菌株感染患者胃液中亚硝酸盐、亚硝胺含量和机体对其合成的影响因素等。
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基金项目：浙江省德清县科委基金资助项目(99-78)
参考文献
1，胡伏莲，周殿元，贾博琦.幽门螺杆菌感染的基础与临床.第1版.北京：中国科学技术出版社，1997.210-212.
2，Granter ME. Intestinal metaplasia and Helicobacter pylori: an endoscopic biotic study of the gastric anteroom. Gut, 1992，33:16.
3，国家环保局，主编.水和废水监测分析方法.北京：中国环境科学出版社，1989.260-263.
4，江希明，郑树，丁仁端.肿瘤生物学.杭州：浙江科学技术出版社，1990.105-106.
收稿日期：1999-10-29, 百拇医药
单位：施有奎(浙江省德清县人民医院 313200)；劳征虹(浙江省德清县人民医院 313200)；许超(浙江省德清县人民医院 313200)；陈一平(浙江省德清县人民医院 313200)；林洁(浙江大学医学院附属邵逸夫医院)；钱可大(浙江大学医学院附属邵逸夫医院)
关键词：
中华内科杂志001019 幽门螺杆菌(Hp)与胃癌的关系日益受到广泛关注。世界卫生组织已将Hp列为I类生物致癌物。然而其致癌机制迄今尚未阐明[1，2]。亚硝酸盐、N-亚硝胺(简称亚硝胺)均属强烈致癌物，特别是后者已广泛用于实验动物胃癌模型的建立。我们采用化学法分析了Hp培养上清液中的亚硝酸盐、亚硝胺含量，以探讨Hp亚硝酸盐还原酶、亚硝胺合成酶的活性。现报道如下。
1.方法：收集Hp菌株共59株。其中来自胃癌患者21株，来自非胃癌患者38株(慢性浅表性胃炎患者21例，慢性萎缩性胃炎10例，消化性溃疡7例)。菌株采用革兰染色、生化反应和抗血清玻片凝集法鉴定。挑选生长于Hp培养基的典型Hp菌落，37℃微需氧开放培养72 h(摇床振摇频率80次/min)，3 000 r/min,30 min离心，收集上清液供亚硝酸盐及亚硝胺测定用。阴性对照为含50 ml/L胎牛血清、10 mmol/L底物液的布氏肉汤37℃微需氧放置72 h后，3 000 r/min，30 min离心，收集上清液即可。亚硝酸盐测定采用N-(1-萘基)-乙二胺光度法[3]。亚硝胺测定采用薄层层析萘胺显色定量法[3]。
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2. 结果：21例胃癌组Hp培养上清液中亚硝酸盐及亚硝胺含量分别为(0.061±0.056) mg/L和(0.011±0.009) mg/L；38例非癌组分别为(0.054±0.049) mg/L和(0.013±0.011) mg/L, 均显著高于18例阴性对照[分别为(0.018±0.008) mg/L和(0.006±0.003 ) mg/L]。提示Hp菌体有亚硝酸盐还原酶和亚硝胺合成酶系的存在。然胃癌组与非癌组Hp 培养上清液中的亚硝酸盐、亚硝胺含量差异无显著性(P>0.05)，提示Hp对亚硝酸盐、亚硝胺合成的影响与不同菌株有关。若以亚硝酸盐还原酶/亚硝胺合成酶均阴性的金黄色葡萄球菌标准株为标准，凡含量≥标准株
+1.96s者为阳性，则胃癌组亚硝酸盐还原酶阳性率为14%，与非癌组的16%相比较，P>0.05；胃癌组亚硝胺合成酶阳性率为10%，与非癌组的11%比较，P>0.05。提示Hp的亚硝酸盐还原酶、亚硝胺合成酶活性与菌株来源无关。, 百拇医药
讨论 多数学者认为Hp感染主要作用于癌变的起始阶段，但其机制未明。亚硝酸盐是氮循环的中间产物，不稳定，亚硝胺在体内经一系列代谢生成不稳定的α-羟化衍生物，并自发裂解成醛和相应亚硝基单烷基胺，后者具有亲核性，可与DNA、RNA的碱基发生结合而致碱基对突变，引起DNA、RNA链大面积损伤等而致癌[4]。目前的研究已表明多种细菌在体外实验中均表达有亚硝酸盐还原酶、亚硝胺合成酶的酶系活性，但尚不知Hp是否亦具有该酶系活性。
本结果表明，胃癌、非胃癌组Hp培养上清液中亚硝酸盐、亚硝胺浓度显著高于阴性对照，提示Hp亦具有亚硝酸盐还原酶、亚硝胺合成酶系。然胃癌与非胃癌组二者差异无显著性，提示Hp的酶活性与Hp菌株来源无关，进一步佐证了Hp致癌作用时间的长期性。若以亚硝酸盐还原酶和亚硝胺合成酶均阴性的金黄色葡萄球菌标准株为标准，胃癌组、非胃癌组Hp亚硝酸盐还原酶阳性率分别为14%、16%，亚硝胺合成酶分别为10%、11%，二组间P值均>0.05，亦提示Hp菌株来源与酶系活性影响无关。然而，需进一步探讨Hp亚硝酸盐还原酶、亚硝胺合成酶阳性菌株感染患者胃液中亚硝酸盐、亚硝胺含量和机体对其合成的影响因素等。
, 百拇医药
基金项目：浙江省德清县科委基金资助项目(99-78)
参考文献
1，胡伏莲，周殿元，贾博琦.幽门螺杆菌感染的基础与临床.第1版.北京：中国科学技术出版社，1997.210-212.
2，Granter ME. Intestinal metaplasia and Helicobacter pylori: an endoscopic biotic study of the gastric anteroom. Gut, 1992，33:16.
3，国家环保局，主编.水和废水监测分析方法.北京：中国环境科学出版社，1989.260-263.
4，江希明，郑树，丁仁端.肿瘤生物学.杭州：浙江科学技术出版社，1990.105-106.
收稿日期：1999-10-29, 百拇医药