利复星抗结核作用的药效学研究
作者：段连山 梁桂芳 李惠文 赵伟杰 张彤群 陆 宇
单位：北京结核病胸部肿瘤研究所,北京 101149
关键词：左氟沙星；抗结核药；分支杆菌；结核
中国新药杂志990121 摘要 目的： 观察利复星(甲磺酸左氟沙星)在体内体外的抗结核活性。方法：采用试管2倍稀释法测定试验药的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度，以半数动物存活时间为指标，与国外同类产品(可乐必妥)及其消旋体氧氟沙星比较其药物的疗效。结果：① 利复星在所试3种培养基中对人型结核菌、牛型结核菌和草分支杆菌的MIC与可乐必妥相同，抑菌活性强于氧氟沙星。② 利复星在半流体培养基中对人型结核菌和牛型结核菌的MBC与可乐必妥相同，杀菌活性强于氧氟沙星。③ 利复星对小白鼠实验性结核病呈显著性或非常显著性疗效，与可乐必妥比较，其疗效未见显著性差别，显著优于同剂量氧氟沙星的疗效。左氟沙星1mg/只的疗效近于氧氟沙星2mg/只的疗效。结论：利复星和可乐必妥在体内体外均呈显著性抗结核活性，二者作用相同，其体内外抗结核活性约为氧氟沙星的2倍。
, 百拇医药
本实验观察了利复星(甲磺酸左氟沙星)在体内体外的抗结核活性，并与可乐必妥和氧氟沙星进行了比较。现将结果报告如下。
材料和方法
1 药物
利复星、氧氟沙星均为北京双鹤药业股份有限公司产品，可乐必妥为日本第一制药株式会社产品，乙胺丁醇(EMB)为印度Lupin公司产品。
2 试管内抑菌实验
2.1 培养基 改良苏通半流体培养基、含5%血清改良苏通半流体培养基和改良罗氏鸡卵固体培养基。
2.2 药物溶解与稀释 先将左氟沙星和氧氟沙星定量溶解于二甲基亚砜中作为初溶液，再进行稀释(EMB用灭菌蒸馏水溶解)，使药物在培养基中为所设计的各种浓度(试管2倍稀释法)。
, 百拇医药
2.3 实验菌及其在培养基中浓度 将在改良罗氏培养基上生长良好的人型结核分支杆菌(H37Rv)、牛型结核分支杆菌(Ravenel)和草分支杆菌(M.phlei)的培养物，用玛瑙乳钵磨成菌悬液，使其在培养基中成以下浓度：在改良苏通半流体培养基中为10-2 mg/ml和10-3 mg/ml；在含血清培养基中为10-3 mg/ml和10-4 mg/ml；在改良罗氏培养基斜面上接种10-3mg/ml的菌悬液0.1 ml(10-4 mg/ml)。
2.4 培养与观察 于37℃培养箱中，H37Rv和Ravenel以培养4周的结果为准，M.phlei以培养1周的结果为准。
3 试管内杀菌实验
试管内抑菌实验结束时，测得MIC，将半流体培养基中未见细菌生长的各管培养物分别吸取0.1 ml接种于2支改良罗氏培养基斜面上，于37℃培养箱中再培养，2支改良罗氏培养基斜面上的菌落之和少于5的最小稀释度的药物浓度即为最低杀菌浓度(MBC)。
, http://www.100md.com
4 对小鼠实验性结核的治疗实验
4.1 动物及分组 用昆明种小鼠，体重17～19 g，雌雄各半，随机分组，每组20只。
4.2 感染 取在改良罗氏培养基上生长2周的H37Rv的培养物, 用玛瑙乳钵磨成5 mg/ml的均匀菌悬液(含0.05%土温80的灭菌生理盐水溶液)，于小鼠尾iv 0.2 ml/只。
4.3 给药 左氟沙星和氧氟沙星用0.5%CMC制成混悬液，乙胺丁醇用蒸馏水溶解，均采用灌胃给药。各给药组(空白对照组给水)于感染的d 2开始，qd 灌胃，给药至空白对照组死亡半数为止。
4.4 观察指标 及时记录各组动物死亡数，求得各组半数动物存活时间(ST 50)和8周的存活率，用新药数据处理软件NDST程序进行统计学处理。
结果
, http://www.100md.com
1 试管内抑菌实验
在3种培养基中对H37Rv、Ravenel和M.phlei的抑菌实验结果表明：利复星与可乐必妥的MIC相同，强于氧氟沙星(其MIC数值为氧氟沙星的1/2)，而氧氟沙星在试管内抗结核菌活性强于EMB。见表1、2和3。
表1 利复星对H37Rv的MIC(μg/ml) 药 物
苏通半流体
5%血清苏通半流体
罗氏鸡卵固体
菌量
MIC
菌量
MIC
, http://www.100md.com
菌量
MIC
利复星
-2
0.5
-3
0.5
-4
0.5
利复星
-3
0.5
-4
, 百拇医药 0.5
可乐必妥
-2
0.5
-3
0.5
-4
0.5
可乐必妥
-3
0.5
-4
0.5
氧氟沙星
, 百拇医药
-2
1.0
-3
1.0
-4
1.0
氧氟沙星
-3
1.0
-4
1.0
EMB
-2
, http://www.100md.com 4.0
-3
2.0
-4
2.0
EMB
-3
2.0
-4
2.0
-2代表10-2, -3代表10-3, -4代表10-4， 菌量单位为mg/ml，(下同)表2 利复星对Ravenel的MIC(μg/ml) 药 物
, http://www.100md.com
苏通半流体
5%血清苏通半流体
罗氏鸡卵固体
菌量
MIC
菌量
MIC
菌量
MIC
利复星
-2
0.5
-3
, 百拇医药
0.25
-4
0.5
利复星
-3
0.25
-4
0.25
可乐必妥
-2
0.5
-3
0.25
, http://www.100md.com
-4
0.5
可乐必妥
-3
0.25
-4
0.25
氧氟沙星
-2
1.0
-3
0.5
-4
, 百拇医药
1.0
氧氟沙星
-3
0.5
-4
0.5
EMB
-2
>8.0
-3
4.0
-4
2.0
, 百拇医药 EMB
-3
8.0
-4
4.0
表3 利复星对M.phlei的MIC(μg/ml) 药 物
苏通半流体
5%血清苏通半流体
罗氏鸡卵固体
菌量
MIC
菌量
MIC
, 百拇医药
菌量
MIC
利复星
-2
1.0
-3
0.5
-4
0.25
利复星
-3
0.5
-4
, 百拇医药 0.5
可乐必妥
-2
1.0
-3
0.5
-4
0.25
可乐必妥
-3
0.5
-4
0.5
, http://www.100md.com 氧氟沙星
-2
2.0
-3
1.0
-4
0.5
氧氟沙星
-3
1.0
-4
1.0
EMB
-2
, 百拇医药
>8.0
-3
>8.0
-4
>64.0
EMB
-3
>8.0
-4
>8.0
2 试管内杀菌实验
在半流体培养基中对H37Rv和Ravenel的最小杀菌实验结果表明：利复星与可乐必妥的MBC相同，强于氧氟沙星(其MBC数值为氧氟沙星的1/2)，而氧氟沙星在试管内杀菌作用强于EMB见表4，5。表4 利复星对H37Rv的MBC(μg/ml) 药 物
, 百拇医药
苏通半流体
5%血清苏通半流体
菌量
MBC
菌量
MBC
利复星
-2
1.0
-3
1.0
利复星
-3
, 百拇医药
1.0
-4
0.5
可乐必妥
-2
1.0
-3
1.0
可乐必妥
-3
1.0
-4
0.5
, http://www.100md.com 氧氟沙星
-2
2.0
-3
2.0
氧氟沙星
-3
2.0
-4
1.0
EMB
-2
>8.0
, http://www.100md.com -3
>8.0
EMB
-3
8.0
-4
>8.0
表5 利复星对Ravenel的MBC(μg/ml) 药 物
苏通半流体
5%血清苏通半流体
菌量
MBC
菌量
, 百拇医药
MBC
利复星
-2
1.0
-3
0.5
利复星
-3
0.5
-4
0.25
可乐必妥
-2
, 百拇医药 1.0
-3
0.5
可乐必妥
-3
0.5
-4
0.25
氧氟沙星
-2
2.0
-3
1.0
, 百拇医药 氧氟沙星
-3
1.0
-4
0.5
EMB
-2
>8.0
-3
>8.0
EMB
-3
>8.0
, 百拇医药 -4
4.0
3 对小鼠实验性结核的治疗实验
半数动物存活时间及实验结束时d 56的存活率表明：① 在各给药组中，利复星0.5 mg/只与感染对照组比较，疗效未见显著性差异(P>0.05)，利复星(1.0mg/只)剂量组呈显著性差异(P<0.05)，其他给药组均呈非常显著性差异(P<0.01)。② 利复星大小各剂量组之间呈显著性差异(P<0.05)或非常显著性(P<0.01)量效关系。③ 利复星1 mg/只剂量与OFLX的2 mg/只剂量比较，其疗效未见显著性差异(P>0.05)。④ 利复星的2 mg/只与同剂量的可乐必妥比较，其疗效无显著差异(P>0.05)，均显著优于同剂量氧氟沙星(P<0.05)。⑤ EMB 2 mg/只的疗效非常显著地强于同剂量氧氟沙星的疗效(P<0.01)。见表6。表6 各组的半数动物存活时间及56 d的存活率 组 别
, http://www.100md.com
药 物
剂量(mg/只)
ST50(d)
存活率(%)
1
利复星
0.5
17
10
2
利复星
1
40
, http://www.100md.com
30
3
利复星
2
>56
85
4
利复星
4
>56
100
5
可乐必妥
2
, 百拇医药
>56
80
6
氧氟沙星
2
47
35
7
EMB
2
>56
100
8
对照
, 百拇医药
16
0
讨论
药效学实验结果表明，左氟沙星(利复星和可乐必妥)的体内外抗结核活性约为氧氟沙星的2倍，结核病的治疗需较长时间用药，综合其疗效和不良反应，左氟沙星可望优于氧氟沙星。
参考文献
[1] Mor N,Vandervolk J Heifets.Inhibitory and bacticidal activity of levofloxacin against mycobacterium tuberculosis in vitro and in human macrophages.Antimicrob Agents Chemother,1994,38(5)∶1161
, 百拇医药 [2] Klemens SP,Sharpe CA,Rogge MC,et al. Activity of levofloxacin in murine model of tubercuiosis.Antimicrob Agents Chemother, 1994,38(7)∶1476
[3] Saito H,Sato K,Tomioka H,et al.In vitro antimycobaterial activity of a new quinolone levofloxacin(DR-3355).Tuber Lung Dis,1995,76(5)∶377
[4] Ji B,Lounis N,Truffot Pernot C,et al. In vitro and in vivo activities against mycobacterium tuberculosis.Antimicrob Agents Chemother,1995,39(6)∶1341
(收稿：1998-11-23), http://www.100md.com
单位：北京结核病胸部肿瘤研究所,北京 101149
关键词：左氟沙星；抗结核药；分支杆菌；结核
中国新药杂志990121 摘要 目的： 观察利复星(甲磺酸左氟沙星)在体内体外的抗结核活性。方法：采用试管2倍稀释法测定试验药的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度，以半数动物存活时间为指标，与国外同类产品(可乐必妥)及其消旋体氧氟沙星比较其药物的疗效。结果：① 利复星在所试3种培养基中对人型结核菌、牛型结核菌和草分支杆菌的MIC与可乐必妥相同，抑菌活性强于氧氟沙星。② 利复星在半流体培养基中对人型结核菌和牛型结核菌的MBC与可乐必妥相同，杀菌活性强于氧氟沙星。③ 利复星对小白鼠实验性结核病呈显著性或非常显著性疗效，与可乐必妥比较，其疗效未见显著性差别，显著优于同剂量氧氟沙星的疗效。左氟沙星1mg/只的疗效近于氧氟沙星2mg/只的疗效。结论：利复星和可乐必妥在体内体外均呈显著性抗结核活性，二者作用相同，其体内外抗结核活性约为氧氟沙星的2倍。
, 百拇医药
本实验观察了利复星(甲磺酸左氟沙星)在体内体外的抗结核活性，并与可乐必妥和氧氟沙星进行了比较。现将结果报告如下。
材料和方法
1 药物
利复星、氧氟沙星均为北京双鹤药业股份有限公司产品，可乐必妥为日本第一制药株式会社产品，乙胺丁醇(EMB)为印度Lupin公司产品。
2 试管内抑菌实验
2.1 培养基 改良苏通半流体培养基、含5%血清改良苏通半流体培养基和改良罗氏鸡卵固体培养基。
2.2 药物溶解与稀释 先将左氟沙星和氧氟沙星定量溶解于二甲基亚砜中作为初溶液，再进行稀释(EMB用灭菌蒸馏水溶解)，使药物在培养基中为所设计的各种浓度(试管2倍稀释法)。
, 百拇医药
2.3 实验菌及其在培养基中浓度 将在改良罗氏培养基上生长良好的人型结核分支杆菌(H37Rv)、牛型结核分支杆菌(Ravenel)和草分支杆菌(M.phlei)的培养物，用玛瑙乳钵磨成菌悬液，使其在培养基中成以下浓度：在改良苏通半流体培养基中为10-2 mg/ml和10-3 mg/ml；在含血清培养基中为10-3 mg/ml和10-4 mg/ml；在改良罗氏培养基斜面上接种10-3mg/ml的菌悬液0.1 ml(10-4 mg/ml)。
2.4 培养与观察 于37℃培养箱中，H37Rv和Ravenel以培养4周的结果为准，M.phlei以培养1周的结果为准。
3 试管内杀菌实验
试管内抑菌实验结束时，测得MIC，将半流体培养基中未见细菌生长的各管培养物分别吸取0.1 ml接种于2支改良罗氏培养基斜面上，于37℃培养箱中再培养，2支改良罗氏培养基斜面上的菌落之和少于5的最小稀释度的药物浓度即为最低杀菌浓度(MBC)。
, http://www.100md.com
4 对小鼠实验性结核的治疗实验
4.1 动物及分组 用昆明种小鼠，体重17～19 g，雌雄各半，随机分组，每组20只。
4.2 感染 取在改良罗氏培养基上生长2周的H37Rv的培养物, 用玛瑙乳钵磨成5 mg/ml的均匀菌悬液(含0.05%土温80的灭菌生理盐水溶液)，于小鼠尾iv 0.2 ml/只。
4.3 给药 左氟沙星和氧氟沙星用0.5%CMC制成混悬液，乙胺丁醇用蒸馏水溶解，均采用灌胃给药。各给药组(空白对照组给水)于感染的d 2开始，qd 灌胃，给药至空白对照组死亡半数为止。
4.4 观察指标 及时记录各组动物死亡数，求得各组半数动物存活时间(ST 50)和8周的存活率，用新药数据处理软件NDST程序进行统计学处理。
结果
, http://www.100md.com
1 试管内抑菌实验
在3种培养基中对H37Rv、Ravenel和M.phlei的抑菌实验结果表明：利复星与可乐必妥的MIC相同，强于氧氟沙星(其MIC数值为氧氟沙星的1/2)，而氧氟沙星在试管内抗结核菌活性强于EMB。见表1、2和3。
表1 利复星对H37Rv的MIC(μg/ml) 药 物
苏通半流体
5%血清苏通半流体
罗氏鸡卵固体
菌量
MIC
菌量
MIC
, http://www.100md.com
菌量
MIC
利复星
-2
0.5
-3
0.5
-4
0.5
利复星
-3
0.5
-4
, 百拇医药 0.5
可乐必妥
-2
0.5
-3
0.5
-4
0.5
可乐必妥
-3
0.5
-4
0.5
氧氟沙星
, 百拇医药
-2
1.0
-3
1.0
-4
1.0
氧氟沙星
-3
1.0
-4
1.0
EMB
-2
, http://www.100md.com 4.0
-3
2.0
-4
2.0
EMB
-3
2.0
-4
2.0
-2代表10-2, -3代表10-3, -4代表10-4， 菌量单位为mg/ml，(下同)表2 利复星对Ravenel的MIC(μg/ml) 药 物
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苏通半流体
5%血清苏通半流体
罗氏鸡卵固体
菌量
MIC
菌量
MIC
菌量
MIC
利复星
-2
0.5
-3
, 百拇医药
0.25
-4
0.5
利复星
-3
0.25
-4
0.25
可乐必妥
-2
0.5
-3
0.25
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-4
0.5
可乐必妥
-3
0.25
-4
0.25
氧氟沙星
-2
1.0
-3
0.5
-4
, 百拇医药
1.0
氧氟沙星
-3
0.5
-4
0.5
EMB
-2
>8.0
-3
4.0
-4
2.0
, 百拇医药 EMB
-3
8.0
-4
4.0
表3 利复星对M.phlei的MIC(μg/ml) 药 物
苏通半流体
5%血清苏通半流体
罗氏鸡卵固体
菌量
MIC
菌量
MIC
, 百拇医药
菌量
MIC
利复星
-2
1.0
-3
0.5
-4
0.25
利复星
-3
0.5
-4
, 百拇医药 0.5
可乐必妥
-2
1.0
-3
0.5
-4
0.25
可乐必妥
-3
0.5
-4
0.5
, http://www.100md.com 氧氟沙星
-2
2.0
-3
1.0
-4
0.5
氧氟沙星
-3
1.0
-4
1.0
EMB
-2
, 百拇医药
>8.0
-3
>8.0
-4
>64.0
EMB
-3
>8.0
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>8.0
2 试管内杀菌实验
在半流体培养基中对H37Rv和Ravenel的最小杀菌实验结果表明：利复星与可乐必妥的MBC相同，强于氧氟沙星(其MBC数值为氧氟沙星的1/2)，而氧氟沙星在试管内杀菌作用强于EMB见表4，5。表4 利复星对H37Rv的MBC(μg/ml) 药 物
, 百拇医药
苏通半流体
5%血清苏通半流体
菌量
MBC
菌量
MBC
利复星
-2
1.0
-3
1.0
利复星
-3
, 百拇医药
1.0
-4
0.5
可乐必妥
-2
1.0
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可乐必妥
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1.0
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, http://www.100md.com 氧氟沙星
-2
2.0
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氧氟沙星
-3
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EMB
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, http://www.100md.com -3
>8.0
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>8.0
表5 利复星对Ravenel的MBC(μg/ml) 药 物
苏通半流体
5%血清苏通半流体
菌量
MBC
菌量
, 百拇医药
MBC
利复星
-2
1.0
-3
0.5
利复星
-3
0.5
-4
0.25
可乐必妥
-2
, 百拇医药 1.0
-3
0.5
可乐必妥
-3
0.5
-4
0.25
氧氟沙星
-2
2.0
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, 百拇医药 氧氟沙星
-3
1.0
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0.5
EMB
-2
>8.0
-3
>8.0
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4.0
3 对小鼠实验性结核的治疗实验
半数动物存活时间及实验结束时d 56的存活率表明：① 在各给药组中，利复星0.5 mg/只与感染对照组比较，疗效未见显著性差异(P>0.05)，利复星(1.0mg/只)剂量组呈显著性差异(P<0.05)，其他给药组均呈非常显著性差异(P<0.01)。② 利复星大小各剂量组之间呈显著性差异(P<0.05)或非常显著性(P<0.01)量效关系。③ 利复星1 mg/只剂量与OFLX的2 mg/只剂量比较，其疗效未见显著性差异(P>0.05)。④ 利复星的2 mg/只与同剂量的可乐必妥比较，其疗效无显著差异(P>0.05)，均显著优于同剂量氧氟沙星(P<0.05)。⑤ EMB 2 mg/只的疗效非常显著地强于同剂量氧氟沙星的疗效(P<0.01)。见表6。表6 各组的半数动物存活时间及56 d的存活率 组 别
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药 物
剂量(mg/只)
ST50(d)
存活率(%)
1
利复星
0.5
17
10
2
利复星
1
40
, http://www.100md.com
30
3
利复星
2
>56
85
4
利复星
4
>56
100
5
可乐必妥
2
, 百拇医药
>56
80
6
氧氟沙星
2
47
35
7
EMB
2
>56
100
8
对照
, 百拇医药
16
0
讨论
药效学实验结果表明，左氟沙星(利复星和可乐必妥)的体内外抗结核活性约为氧氟沙星的2倍，结核病的治疗需较长时间用药，综合其疗效和不良反应，左氟沙星可望优于氧氟沙星。
参考文献
[1] Mor N,Vandervolk J Heifets.Inhibitory and bacticidal activity of levofloxacin against mycobacterium tuberculosis in vitro and in human macrophages.Antimicrob Agents Chemother,1994,38(5)∶1161
, 百拇医药 [2] Klemens SP,Sharpe CA,Rogge MC,et al. Activity of levofloxacin in murine model of tubercuiosis.Antimicrob Agents Chemother, 1994,38(7)∶1476
[3] Saito H,Sato K,Tomioka H,et al.In vitro antimycobaterial activity of a new quinolone levofloxacin(DR-3355).Tuber Lung Dis,1995,76(5)∶377
[4] Ji B,Lounis N,Truffot Pernot C,et al. In vitro and in vivo activities against mycobacterium tuberculosis.Antimicrob Agents Chemother,1995,39(6)∶1341
(收稿：1998-11-23), http://www.100md.com