用转换曲线分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊含量
作者：丁 力 连传宝
单位：(淄博市药品检验所，淄博 255040)
关键词：转换曲线分光光度法；提取分光光度法；复方头孢氨苄；头孢氨苄；甲氧苄啶
用转换曲线分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊含量 摘要 目的：介绍转换曲线分光光度法同时测定复方头孢氨苄胶囊中头孢氨苄和甲氧苄啶含量的方法。方法：按配对t实验设计，考察了转换曲线分光光度法和提取分光光度法对测定复方头孢氨苄胶囊含量的影响。结果：头孢氨苄与甲氧苄啶的配对t值分别为0.548和0.1241，说明两种分析方法的测定结果无统计学差异(P>0.5)，但转换曲线分光光度法可显著提高分析速度。结论：转换曲线分光光度法可代替提取分光光度法用于复方头孢氨苄胶囊的含量测定。
SIMULTANEOUS DETERMINATION OF CEFALEXIN AND TRIMETHOPRIM BY
, http://www.100md.com
CONVERSION CURVE SPECTROPHOTOMETRY
Ding Li，Lian Chuanbao
(Zibo Institute for Drug Control,Zibo 255040)
ABSTRACT OBJECTIVE:To develop a rapid,sensitive,and specific method for simultaneous determination of cefalexin and trimethoprim in compound cefalexin capsules.METHODS:The effect of conversion curve spectrophotometry and extraction sepectrophotometry on simultaneous determination of cefalexin and trimethoprim was evaluated by paried design.RESULTS:The paired t-value for cefalexin and trimethoprim were 0.548 and 0.1241 respectively indicated that there is no significant difference between the two methods but the conversion spectrophotometric method was much rapid.CONCLUSION:Cefalexin and trimethoprim in compound cefalexin capsule can be determined simultaneously by conversion curve spectrophotometry instead of extraction spectrophotometry.；Cefalein；Trimethoprim
, 百拇医药
复方头孢氨苄胶囊中头孢氨苄和甲氧苄啶的含量系采用提取分光光度法分别测定，操作繁琐，误差大。同时测定二者含量的方法作者未见报道。本文采用转换曲线分光光度法[1]可使头孢氨苄和甲氧苄啶不经分离，直接测定二者含量，其结果与提取分光光度法相比，无统计学差异(P>0.5)，但却显著地提高了分析速度。
材料与方法
1 基本原理
对于吸收互有干扰的二元复合制剂，在其吸收光谱重叠的波长范围内，测定任意波长下的吸收度应为该波长下两种组分各自的吸收度之和。设头孢氨苄对照品溶液浓度为Cts，甲氧苄啶对照品溶液浓度为Cgs，在任意波长λi处它们的吸收度分别为Ai和ai，若待测样品溶液中含头孢氨苄的浓度为Ct，含甲氧苄啶的浓度为Cg，则该样品在λi处的吸收度Ai(M)应为Ai(M)=Ct/Cts×Ai+Cg/Cgs×ai，等式两边同除以ai，得Ai(M)/ai=Ct/Cts×Ai/ai+Cg/Cgs， 将Ai/ai 称为对照品溶液的转换值，Ai(M)/ai称为样品溶液的转换值，不同波长下转换值构成的曲线称为转换曲线。因此在不同波长下测定头孢氨苄对照品溶液、甲氧苄啶对照品溶液及待测样品溶液的吸收度后，分别求出相应波长下的转换值，以对照品溶液的转换值为自变量(X) ，以样品溶液转换值为应变量(Y)进行直线回归，斜率为Ct/Cts，截距为Cg/Cgs，因Cts和Cgs已知，即可求出Ct和Cg。
, 百拇医药
2 仪器及试药
岛津UV-260紫外分光光度计;复方头孢氨苄胶囊(批号:980302,980403,980404)，山东新达制药股份有限公司提供；头孢氨苄对照品(含量:91.7%)及甲氧苄啶对照品，中国药品生物制品检定所提供；头孢氨苄原料、甲氧苄啶原料及硬脂酸镁，山东新华制药厂提供，所用试剂均为国产分析纯。
3 回收率实验
3.1 对照品溶液及模拟样品液的配制 精密称取头孢氨苄对照品及甲氧苄啶对照品适量，分别用80% 乙醇稀释成含头孢氨苄29.62 μg/ml，甲氧苄啶31.25 μg/ml的溶液，分别作为头孢氨苄对照品溶液和甲氧苄啶对照品溶液。另按复方头孢氨苄胶囊的处方比例，用80% 乙醇配成含头孢氨苄308.5 μg/ml、甲氧苄啶64.5 μg/ml、硬脂酸镁2.9 μg/ml的溶液，摇匀，过滤，分别精密吸取续滤液3，4，5 ml，置50 ml量瓶中，加80%乙醇稀释至刻度，混匀，分别作为模拟样品液M1，M2，M3。
, 百拇医药
3.2 测定波长的选择及吸收度的测定 取硬脂酸镁适量，用80%乙醇稀释成含20 μg/ml的溶液，在200～300 nm 波长范围内扫描，其吸收光谱几乎呈一直线，说明在这一波长范围内不干扰测定。通过改变数据标尺对甲氧苄啶对照品溶液进行搜索性扫描，使其吸收曲线与头孢氨苄对照品溶液的吸收曲线相切，切点为257 nm，故以253，255，257，259，261 nm为测定波长。选择仪器多波长测定功能，分别测定上述波长下头孢氨苄对照品溶液吸收度(Ai)、甲氧苄啶对照品溶液吸收度(ai)及模拟样品溶液的吸收度(Ai(M))。
4 样品测定
取三批复方头孢氨苄胶囊各20粒，同批号每10粒为一组，精密称定，求出平均装量，将内容物分置6个研钵中研细，得6份供试品细粉。每份供试品细粉分别用转换值分光光度法与提取分光光度法进行含量测定。
, 百拇医药 5 统计学处理
按配对t检验。
结 果
1 模拟样品的回收率
各溶液在测定波长下的转换值见表1。
表1 对照品溶液及模拟样品液在测定波长处的转换值
波长
(nm)
对照品
模拟样品M1
模拟样品M2
模拟样品M3
, 百拇医药
Ai
Ai/ai
Ai(M1)/ai
Ai(M2)/ai
Ai(M3)/ai
253
0.5699
1.4711
1.0555
1.4156
, 百拇医药
1.7651
255
0.5870
1.9521
1.3598
1.8257
2.2777
257
0.6048
2.3333
1.6053
2.1559
2.6871
, 百拇医药
259
0.6197
2.5008
1.7098
2.2914
2.8584
261
0.6298
2.4468
1.6713
2.2374
2.7894
对表1中数据进行直线回归得三份模拟样品的回归方程：M1为Y=0.1219+0.6345X,r=1.000，M2 为 Y= 0.1681+0.8488X,r=0.999，M3为Y=0.2102+1.0582X,r=0.999。将头孢氨苄对照品浓度及甲氧苄啶对照品浓度分别与斜率和截距相乘，即得模拟样品液中所含头孢氨苄和甲氧苄啶的浓度，并计算出模拟样品中头孢氨苄的回收率分别为101.51%，101.86%，101.59%，甲氧苄啶的回收率分别为98.45%，101.74%，101.86%。 2 样品测定结果
, 百拇医药
本法测定的6份供试品细粉含量见表2，同时与提取分光光度法的测定结果进行了比较。以两种分析方法的测定值之差计算统计量配对t值，结果头孢氨苄与甲氧苄啶的配对t值分为0.548和0.1241，以自由度为5查t界值表得P均>0.5。
表2 转换值分光光度法与提取分光光度法
测定复方头孢氨苄胶囊含量 (标示量%)
转换值分光光度法
提取分光光度法
差 值
头孢氨苄
甲氧苄啶
头孢氨苄
, 百拇医药 甲氧苄啶
头孢氨苄
甲氧苄啶
99.93
103.12
100.18
96.01
-0.25
7.11
98.07
100.66
99.25
96.08
, 百拇医药
-1.18
4.58
99.82
96.90
98.69
95.80
1.13
1.10
98.45
96.99
93.36
97.06
5.09
, 百拇医药
-0.07
100.73
90.40
100.78
97.73
-0.05
-7.33
98.12
94.98
99.62
98.76
-1.50
-3.78
, 百拇医药
讨 论
1 头孢氨苄微溶于水，不溶于乙醇，甲氧苄啶在水中极微溶解，但溶于乙醇，所以采用80%乙醇为溶剂，使用前应用超声波进行脱气处理。
2 本实验以257 nm为中点， 上下各选择两个波长作为测定波长，目的是采用仪器的多波长测定功能，该功能通过合理的参数设置[2]，一次可同时测定6个不同波长下的吸收度值，在设定多波长测定参数时，将波长间隔定为2 nm，并且采用最低的扫描速度，以期获得较高的准确度，这样仪器的噪声也能较好的得到平均分布[3]。
3 本法原理是基于吸收度的加和性，只有单色光才能严格的符合比耳定律，谱带过宽将对灵敏度和线性产生不良影响。因此，本实验采用仪器狭缝为1 nm。
4 本实验采用配对t实验设计分别用转换值分光光度法和提取分光光度法测定了复方头孢氨苄胶囊中头孢氨苄和甲氧苄啶含量，结果无统计学差异(P>0.5)。因此，转换曲线分光光度法可替代提取分光光度法用于复方头孢氨苄胶囊的含量测定，并具有简便、快速，两组分不经分离直接测定的优点。
参考文献
1 韩柏青.转换曲线分光光度法的初探.药物分析杂志,1995,15(1)∶45
2 丁力,连传宝.UV260紫外分光光度计在测定复方新诺明片含量上的应用.中国药学杂志,1998,33(11)∶657
3 马剑文,韩永平,沈克温.现代药品检验学.北京:人民军医出版社,1994.546～547
(收稿：1998-09-14 修回：1999-06-07), 百拇医药
单位：(淄博市药品检验所，淄博 255040)
关键词：转换曲线分光光度法；提取分光光度法；复方头孢氨苄；头孢氨苄；甲氧苄啶
用转换曲线分光光度法测定复方头孢氨苄胶囊含量 摘要 目的：介绍转换曲线分光光度法同时测定复方头孢氨苄胶囊中头孢氨苄和甲氧苄啶含量的方法。方法：按配对t实验设计，考察了转换曲线分光光度法和提取分光光度法对测定复方头孢氨苄胶囊含量的影响。结果：头孢氨苄与甲氧苄啶的配对t值分别为0.548和0.1241，说明两种分析方法的测定结果无统计学差异(P>0.5)，但转换曲线分光光度法可显著提高分析速度。结论：转换曲线分光光度法可代替提取分光光度法用于复方头孢氨苄胶囊的含量测定。
SIMULTANEOUS DETERMINATION OF CEFALEXIN AND TRIMETHOPRIM BY
, http://www.100md.com
CONVERSION CURVE SPECTROPHOTOMETRY
Ding Li，Lian Chuanbao
(Zibo Institute for Drug Control,Zibo 255040)
ABSTRACT OBJECTIVE:To develop a rapid,sensitive,and specific method for simultaneous determination of cefalexin and trimethoprim in compound cefalexin capsules.METHODS:The effect of conversion curve spectrophotometry and extraction sepectrophotometry on simultaneous determination of cefalexin and trimethoprim was evaluated by paried design.RESULTS:The paired t-value for cefalexin and trimethoprim were 0.548 and 0.1241 respectively indicated that there is no significant difference between the two methods but the conversion spectrophotometric method was much rapid.CONCLUSION:Cefalexin and trimethoprim in compound cefalexin capsule can be determined simultaneously by conversion curve spectrophotometry instead of extraction spectrophotometry.；Cefalein；Trimethoprim
, 百拇医药
复方头孢氨苄胶囊中头孢氨苄和甲氧苄啶的含量系采用提取分光光度法分别测定，操作繁琐，误差大。同时测定二者含量的方法作者未见报道。本文采用转换曲线分光光度法[1]可使头孢氨苄和甲氧苄啶不经分离，直接测定二者含量，其结果与提取分光光度法相比，无统计学差异(P>0.5)，但却显著地提高了分析速度。
材料与方法
1 基本原理
对于吸收互有干扰的二元复合制剂，在其吸收光谱重叠的波长范围内，测定任意波长下的吸收度应为该波长下两种组分各自的吸收度之和。设头孢氨苄对照品溶液浓度为Cts，甲氧苄啶对照品溶液浓度为Cgs，在任意波长λi处它们的吸收度分别为Ai和ai，若待测样品溶液中含头孢氨苄的浓度为Ct，含甲氧苄啶的浓度为Cg，则该样品在λi处的吸收度Ai(M)应为Ai(M)=Ct/Cts×Ai+Cg/Cgs×ai，等式两边同除以ai，得Ai(M)/ai=Ct/Cts×Ai/ai+Cg/Cgs， 将Ai/ai 称为对照品溶液的转换值，Ai(M)/ai称为样品溶液的转换值，不同波长下转换值构成的曲线称为转换曲线。因此在不同波长下测定头孢氨苄对照品溶液、甲氧苄啶对照品溶液及待测样品溶液的吸收度后，分别求出相应波长下的转换值，以对照品溶液的转换值为自变量(X) ，以样品溶液转换值为应变量(Y)进行直线回归，斜率为Ct/Cts，截距为Cg/Cgs，因Cts和Cgs已知，即可求出Ct和Cg。
, 百拇医药
2 仪器及试药
岛津UV-260紫外分光光度计;复方头孢氨苄胶囊(批号:980302,980403,980404)，山东新达制药股份有限公司提供；头孢氨苄对照品(含量:91.7%)及甲氧苄啶对照品，中国药品生物制品检定所提供；头孢氨苄原料、甲氧苄啶原料及硬脂酸镁，山东新华制药厂提供，所用试剂均为国产分析纯。
3 回收率实验
3.1 对照品溶液及模拟样品液的配制 精密称取头孢氨苄对照品及甲氧苄啶对照品适量，分别用80% 乙醇稀释成含头孢氨苄29.62 μg/ml，甲氧苄啶31.25 μg/ml的溶液，分别作为头孢氨苄对照品溶液和甲氧苄啶对照品溶液。另按复方头孢氨苄胶囊的处方比例，用80% 乙醇配成含头孢氨苄308.5 μg/ml、甲氧苄啶64.5 μg/ml、硬脂酸镁2.9 μg/ml的溶液，摇匀，过滤，分别精密吸取续滤液3，4，5 ml，置50 ml量瓶中，加80%乙醇稀释至刻度，混匀，分别作为模拟样品液M1，M2，M3。
, 百拇医药
3.2 测定波长的选择及吸收度的测定 取硬脂酸镁适量，用80%乙醇稀释成含20 μg/ml的溶液，在200～300 nm 波长范围内扫描，其吸收光谱几乎呈一直线，说明在这一波长范围内不干扰测定。通过改变数据标尺对甲氧苄啶对照品溶液进行搜索性扫描，使其吸收曲线与头孢氨苄对照品溶液的吸收曲线相切，切点为257 nm，故以253，255，257，259，261 nm为测定波长。选择仪器多波长测定功能，分别测定上述波长下头孢氨苄对照品溶液吸收度(Ai)、甲氧苄啶对照品溶液吸收度(ai)及模拟样品溶液的吸收度(Ai(M))。
4 样品测定
取三批复方头孢氨苄胶囊各20粒，同批号每10粒为一组，精密称定，求出平均装量，将内容物分置6个研钵中研细，得6份供试品细粉。每份供试品细粉分别用转换值分光光度法与提取分光光度法进行含量测定。
, 百拇医药 5 统计学处理
按配对t检验。
结 果
1 模拟样品的回收率
各溶液在测定波长下的转换值见表1。
表1 对照品溶液及模拟样品液在测定波长处的转换值
波长
(nm)
对照品
模拟样品M1
模拟样品M2
模拟样品M3
, 百拇医药
Ai
Ai/ai
Ai(M1)/ai
Ai(M2)/ai
Ai(M3)/ai
253
0.5699
1.4711
1.0555
1.4156
, 百拇医药
1.7651
255
0.5870
1.9521
1.3598
1.8257
2.2777
257
0.6048
2.3333
1.6053
2.1559
2.6871
, 百拇医药
259
0.6197
2.5008
1.7098
2.2914
2.8584
261
0.6298
2.4468
1.6713
2.2374
2.7894
对表1中数据进行直线回归得三份模拟样品的回归方程：M1为Y=0.1219+0.6345X,r=1.000，M2 为 Y= 0.1681+0.8488X,r=0.999，M3为Y=0.2102+1.0582X,r=0.999。将头孢氨苄对照品浓度及甲氧苄啶对照品浓度分别与斜率和截距相乘，即得模拟样品液中所含头孢氨苄和甲氧苄啶的浓度，并计算出模拟样品中头孢氨苄的回收率分别为101.51%，101.86%，101.59%，甲氧苄啶的回收率分别为98.45%，101.74%，101.86%。 2 样品测定结果
, 百拇医药
本法测定的6份供试品细粉含量见表2，同时与提取分光光度法的测定结果进行了比较。以两种分析方法的测定值之差计算统计量配对t值，结果头孢氨苄与甲氧苄啶的配对t值分为0.548和0.1241，以自由度为5查t界值表得P均>0.5。
表2 转换值分光光度法与提取分光光度法
测定复方头孢氨苄胶囊含量 (标示量%)
转换值分光光度法
提取分光光度法
差 值
头孢氨苄
甲氧苄啶
头孢氨苄
, 百拇医药 甲氧苄啶
头孢氨苄
甲氧苄啶
99.93
103.12
100.18
96.01
-0.25
7.11
98.07
100.66
99.25
96.08
, 百拇医药
-1.18
4.58
99.82
96.90
98.69
95.80
1.13
1.10
98.45
96.99
93.36
97.06
5.09
, 百拇医药
-0.07
100.73
90.40
100.78
97.73
-0.05
-7.33
98.12
94.98
99.62
98.76
-1.50
-3.78
, 百拇医药
讨 论
1 头孢氨苄微溶于水，不溶于乙醇，甲氧苄啶在水中极微溶解，但溶于乙醇，所以采用80%乙醇为溶剂，使用前应用超声波进行脱气处理。
2 本实验以257 nm为中点， 上下各选择两个波长作为测定波长，目的是采用仪器的多波长测定功能，该功能通过合理的参数设置[2]，一次可同时测定6个不同波长下的吸收度值，在设定多波长测定参数时，将波长间隔定为2 nm，并且采用最低的扫描速度，以期获得较高的准确度，这样仪器的噪声也能较好的得到平均分布[3]。
3 本法原理是基于吸收度的加和性，只有单色光才能严格的符合比耳定律，谱带过宽将对灵敏度和线性产生不良影响。因此，本实验采用仪器狭缝为1 nm。
4 本实验采用配对t实验设计分别用转换值分光光度法和提取分光光度法测定了复方头孢氨苄胶囊中头孢氨苄和甲氧苄啶含量，结果无统计学差异(P>0.5)。因此，转换曲线分光光度法可替代提取分光光度法用于复方头孢氨苄胶囊的含量测定，并具有简便、快速，两组分不经分离直接测定的优点。
参考文献
1 韩柏青.转换曲线分光光度法的初探.药物分析杂志,1995,15(1)∶45
2 丁力,连传宝.UV260紫外分光光度计在测定复方新诺明片含量上的应用.中国药学杂志,1998,33(11)∶657
3 马剑文,韩永平,沈克温.现代药品检验学.北京:人民军医出版社,1994.546～547
(收稿：1998-09-14 修回：1999-06-07), 百拇医药