银杏叶提取物及银杏总内酯对帕金森病大鼠模型的作用
作者：郜文 王丽娟 景朋 姚娴 金有豫 鲁厚桢
单位：首都医科大学药物研究所，北京 100054
关键词：银杏叶提取物；银杏总内酯；帕金森症；模型；多巴胺
中国新药杂志000708 【摘要】 目的：研究银杏叶提取物、银杏总内酯对帕金森病(PD)大鼠模型的作用。方法：采用腹腔注射毒扁豆碱引起的急性震颤模型A以及单侧黑质注射微量6-羟多巴胺造成的慢性旋转模型B，观察银杏叶提取物、银杏总内酯的预防和治疗作用。结果：银杏叶提取物(100mg/kg)、银杏总内酯(12mg/kg)在预防给药14d后能够明显缩短模型A的震颤时间；在给药治疗14d后能减轻模型B的旋转行为，而且银杏总内酯(12mg/kg)还能使模型B受损侧纹状体的多巴胺含量升高。结论：银杏叶提取物、银杏总内酯可能具有防治PD的作用。
【中图分类号】R282.71 【文献标识码】A 【文章编号】1003-3734(2000)07-0458-04
, http://www.100md.com
The effects Ginkgo biloba extract and bilobalide on models
of rat with Parkinson's disease
GAO Wen WANG Li-juan YAO Xian JIN You-yu
(Medicine Research Institute,Capital University of Medical Sciences;Beijing 100054)
JING Peng LU Hou-zhen
(Department of Anatomy,Capital University of Medical Sciences,Beijing 100054)
, 百拇医药
【Abstract】 Objective:To study the effects of Ginkgo biloba extract(GBE)and bilobalide on models of rat with Parkinson's disease.Methods:Models A and B were created respectively by ip injection of physostigmine and by injecting subtle 6-hydroxy-dopamine into unilateral substantial nigra and observe the preservative and therapeutic effects of GBE and bilobalide.Results:After pre-administration of GBE(100mg/kg)and bilobalide(12mg/kg)for 14d,the trembling time in model A was obviously shortened and after treatment for 14d,the rotational behavior in model B was decreased.The dopamine content in the damaged lateral striatum can be enhanced by bilobalide.Conclusion:GBE and bilobalide may be effective in prevention and treatment of Parkinson's disease.
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【Key words】 Ginkgo biloba extract;Ginkgo biloba terpene lactones；Parkinson's disease；models；dopamine
帕金森病(PD)是一种慢性进行性疾病，主要表现为震颤、肌肉僵直及运动障碍。其发病机制目前认为主要与黑质-纹状体系统多巴胺(DA)功能和乙酰胆碱(Ach)功能间平衡失调有关[1]。凡引起前者功能下降或后者功能亢进的原因均可导致震颤。最常见系由于大脑黑质中DA神经元变性或减少，甚至完全消失导致纹状体DA含量下降而引起。目前临床上常以左旋多巴替代疗法为主，虽有疗效，但不良反应较大，容易产生并发症。现在手术治疗取得了一定的进展，但涉及到手术难度、条件、费用等诸多因素，尚难推广实施。因此，寻找疗效确切而无不良反应的药物仍然是PD研究的重要任务。据临床研究和实验室研究，银杏叶提取物(GBE)、银杏总内酯对中枢神经系统有保护作用，可用于大脑血流障碍和脑功能障碍[2,3]。吴春福等[4]用银杏内酯灌胃给药(10mg/kg,6d)，能升高正常大鼠纹状体DA含量。因此，我们以毒扁豆碱腹腔注射造成的大鼠震颤模型及6-羟基多巴胺单侧损毁的PD大鼠模型研究GBE、银杏总内酯的作用并分析其作用机制。
, 百拇医药
材料与方法
1 材料
1.1 动物 Wistar大鼠，雄性，体重200～300g，由中国科学院遗传研究所实验动物中心提供。
1.2 药品 GBE(含黄酮24%，银杏内酯6%，由北京第四制药厂提供)，银杏总内酯(首都医科大学药物研究所提供)。
1.3 仪器 大鼠立体定位仪(N.TAKAHASHI COMPANY，JAPAN)，HPLC-EC(BAS公司，USA)。
1.4 试剂 6-羟基多巴胺盐酸盐(6-OH-DA，Sigma)；盐酸去水吗啡(沈阳第一制药厂生产，批号：770501)，多巴胺盐酸盐(DA，Sigma)；3，4-二羟基苯乙酸(DOPAC，Sigma)；高香草酸(HVA，Sigma)；辛烷基磺酸钠(SOS，Sigma)；高氯酸(AR)；半胱氨酸(AR)；EDTA二钠盐(AR)；柠檬酸(AR)；无水乙酸钠(AR)；磷酸氢二钠(AR)；柠檬酸钾(AR)、三乙胺(AR)；甲醇(AR)；羟甲基纤维素钠(实验试剂)；硫酸毒扁豆碱(上海市化学试剂公司，英国分装)。
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2 方法
2.1 对大鼠震颤模型的预防作用 Wistar大鼠，雄性，体重200～300g，随机分4组：空白对照组(A组，生理盐水)；GBE组(B组，100mg/kg)；银杏总内酯大剂量组(C组，12mg/kg)；银杏总内酯小剂量组(D组，6mg/kg)。每组8只，各组动物均灌胃给药，qd，连续给药14d，最末一次给药1h后，ip毒扁豆碱(0.5 mg/kg)，记录给药后到开始震颤的时间(潜伏期)以及震颤开始到震颤结束的时间(震颤时间)。
2.2 对PD大鼠旋转模型的治疗作用 Wistar大鼠，雄性，体重200～300g，经反复测试确认无旋转行为后，用6%的水合氯醛腹腔注射(300 mg/kg)麻醉，参照文献[5]及图谱定位，选右侧黑质定位：前囟后4.4～5.0mm，矢状缝右侧1.1～1.8mm，颅骨下8.0～8.5mm。定位完毕，用微量注射器，进针注射6-羟基多巴胺4μl(12μg)，注射速度为1μl/min，注毕留针15 min。手术后，缝针，碘酊消毒，放回笼中饲养。10～14d后，进行行为检测，实验动物腹腔注射盐酸去水吗啡(0.25mg/kg)，观察其行为变化，5min后，开始记录大鼠旋转次数，大鼠恒定左旋，并且旋转次数平均大于7r/min，视为合格模型。
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将合格的PD模型大鼠随机分4组：空白对照组(A组，生理盐水)；GBE组(B组，100mg/kg)；银杏总内酯大剂量组(C组，12mg/kg)；银杏总内酯小剂量组(D组，6mg/kg)；每组7只；各组动物均灌胃给药，qd，连续给药14d，实验大鼠在给药前、给药后7，14d用盐酸去水吗啡腹腔注射(0.25 mg/kg)诱发，观察实验大鼠并记录大鼠10min内旋转次数。
2.3 对PD大鼠旋转模型组织形态学的影响 最末一次给药1h后，从上述各组随机取2只大鼠，以6%的水合氯醛(300 mg/kg)麻醉，ip,用4%的多聚甲醛灌注固定。取脑放30%蔗糖溶液中过夜，然后作冰冻连续横切片，片厚40μm，每间隔5片取1片，作为一组切片，免疫细胞化学法(TH)染色。光镜下观察实验大鼠纹状体及黑质的神经元损伤情况。
2.4 对PD大鼠旋转模型纹状体DA及其代谢产物含量的影响 将上述实验组大鼠，断头，迅速取出大脑，在冰台上分离出纹状体，称重后立即放入400μl冰冷的0.4mol/L高氯酸中(含0.5mmol/L EDTA和0.01%半胱氨酸)，玻璃匀浆器中匀浆，匀浆液高速离心(12 000×g，10min，4℃)。取上清液200μl，加300μl的钾盐溶液(含枸橼酸钾20mmol/L，磷酸氢二钾300 mmol/L，EDTA-二钠2 mmol/L)混合，过0.22μm膜，滤液20μl注入高效液相色谱电化学检测系统，测定条件参照文献[6]。
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3 统计学方法
本实验数据均用Origin软件进行统计处理，结果用均数±标准差表示，前后差值行配对t检验，组间比较采用成组t检验。
结 果
1 对大鼠震颤模型的预防作用
GBE(100mg/kg)、银杏总内酯(12mg/kg)在预防给药14d后能够明显缩短大鼠因腹腔注射毒扁豆碱引起的震颤时间(P<0.01)，结果见表1。
表1 银杏叶提取物及银杏总内酯对大鼠震颤
模型的影响 (
±s，n=8) 组别
剂量(mg/kg)
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潜伏期(min)
震颤时间(min)
A
—
5.5±1.7
30±2
B
100
6.6±1.1
22±5a
C
6
6.9±0.9
, 百拇医药
28±8
D
12
6.8±1.7
19±5a
与空白对照组比a:P<0.01
2 GBE及银杏总内酯对PD大鼠旋转模型的治疗作用
银杏叶提取物(100mg/kg)给药治疗7，14d后PD大鼠的旋转圈数显著下降(分别为P<0.05及P<0.01)；银杏总内酯大剂量(12mg/kg)给药治疗14d后PD大鼠的旋转圈数显著下降(P<0.01)，结果见表2。
表2 GBE及银杏总内酯对PD大鼠模型旋转
, 百拇医药
行为的影响 (±s，n=7) 组别
剂 量
(mg/kg)
平均转速(r/min)
给药前
给药7d
给药14d
A
—
15.5±7.4
16.8±8.7
, 百拇医药
18.0±10.6
B
100
11.1±4.6
9.0±4.3a
6.9±4.5b
C
6
10.2±1.3
11.3±2.6
11.4±3.5
D
, 百拇医药
12
14.4±4.0
10.9±4.5
8.4±4.8b
每组动物给药前与给药后比较 a:P<0.05；b:P<0.01
3 GBE及银杏总内酯对PD大鼠旋转模型组织形态学的影响
在TH切片上，观察到各组大鼠右侧(损伤侧)黑质区TH样免疫反应神经元明显少于左侧(正常侧)黑质区。右侧(损伤侧)纹状体TH样免疫反应纤维末梢明显少于左侧纹状体(正常侧)，给药组与空白组切片之间未见有明显差异。
4 GBE及银杏总内酯对PD大鼠旋转模型纹状体DA及其代谢产物含量的影响
, 百拇医药
银杏总内酯(12mg/kg)可使模型动物损伤侧纹状体的DA含量升高(P<0.05)，DA/HVA升高(P<0.05)，DA/DOPAC有升高趋势但统计无显著意义，结果见表3。
表3 GBE及银杏总内酯对PD大鼠旋转模型纹状体DA及其代谢产物含量的影响 (±s，n=5) 组别
剂 量
(mg/kg)
DA(nmol/g湿组织)
DOPAC(nmol/g湿组织)
HVA(nmol/g湿组织)
DA/DOPAC
, 百拇医药
DA/HVA
左
右
左
右
左
右
左
右
左
右
A
—
4.10±0.95
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0.64±0.44
2.18±0.32
0.13±0.08
1.34±0.18
0.11±0.04
1.87±0.29
4.64±1.18
3.04±0.54
4.59±1.20
B
100
4.44±0.66
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0.68±0.25
2.54±0.44
0.17±0.06
1.44±0.45
0.13±0.03
1.76±0.32
4.16±0.83
3.27±1.11
5.04±1.19
C
6
4.31±0.77
, 百拇医药
0.76±0.26
2.14±0.16
0.16±0.05
1.28±0.23
0.13±0.03
2.04±0.48
4.36±1.28
3.47±0.86
5.86±0.88
D
12
4.21±0.84
, 百拇医药
1.68±0.84a
2.29±0.38
0.31±0.15a
1.32±0.27
0.20±0.08a
1.85±0.32
5.44±0.60
3.25±0.76
8.23±1.60a
与空白对照组比a：P<0.05；左侧为正常侧，右侧为损伤侧讨 论
, 百拇医药
我们采用毒扁豆碱腹腔注射引起大鼠震颤，初步研究GBE及银杏总内酯对PD的作用。该方法模型形成快，持续时间短，可反复使用，但模型震颤属高频震颤，与PD震颤有明显区别。因而我们又采用了以6-羟多巴胺单侧损毁黑质DA能神经元的PD模型进行深入研究。该模型有3个优点：①该模型大鼠纹状体的DA含量明显下降与目前认为的黑质-纹状体DA含量减少是PD发病的主要原因一致，且DA含量可用HPLC-EC准确测定。②通过TH染色能明确反映出大鼠多巴胺能神经元和神经末梢的病理变化情况。③该模型经盐酸去水吗啡诱发后具有特殊的旋转行为并且结果稳定，便于长期研究观察。
实验结果表明GBE(100mg/kg)及银杏总内酯(12mg/kg)，每日灌胃给药1次，连续给药14d后能明显缩短大鼠由于腹腔注射毒扁豆碱所引起的震颤持续时间。同样地，可明显减轻由6-羟多巴胺微量单侧黑质注射而造成的PD大鼠模型的旋转，提示两者可能具有防治PD的作用。
另实验结果显示银杏总内酯可使模型动物损伤侧纹状体的DA含量升高，DA/HVA升高，DA/DOPAC有升高趋势，其原因可能是：①银杏总内酯通过保护残存的损伤侧黑质神经元，使得纹状体的DA的减少得以控制，并停留在某一水平。②银杏总内酯抑制纹状体DA的代谢，而银杏叶提取物组动物(100 mg/kg，含银杏总内酯6%)损伤侧纹状体的DA不升高，与银杏总内酯(6 mg/kg)组动物结果一致，表明银杏总内酯可能是这一作用的主要成分，而且与剂量有关。
, 百拇医药
存在的问题：银杏总内酯(12 mg/kg )既能升高PD大鼠损伤侧的DA含量，又能改善PD大鼠旋转行为，GBE(100mg/kg)能改善PD大鼠旋转行为但不升高损伤侧的DA含量。那么PD 大鼠的旋转行为是否完全与大鼠纹状体DA 含量呈正相关，其原因待进一步研究。从PD大鼠纹状体、黑质免疫组化切片未见给药组与对照组之间的差异，可能与给药时间和给药剂量有关。
【作者简介】 郜文(1966-)，男，讲师，药理学硕士。主要研究方向：植物药的提取分离及进一步应用。联系电话：(010)63051452，E-mail:jinyouyu@cpums.edu.cn。
【参考文献】
[1] 傅文玉，黄岩.黑质、纹状体与帕金森氏病[J].解剖科学进展，1997，3(1)∶51
[2] 孙久荣，刘文胜.银杏提取物对中枢神经系统的作用[J].中国药理学通报，1998，14(4)∶300
, 百拇医药
[3] Krieglstein J.Neuroprotective effective of Ginkgo biloba consitituents[J].Eur J Pharmacol Sci,1995,3(1)∶39
[4] 吴春福，游松，刘雯，等.银杏内酯和银杏叶提取物对纹状体和边缘系统多巴胺及其代谢产物含量的影响[J].中草药， 1995，26(5)∶253
[5] 周明付，张华，吴金良，等.大鼠帕金森氏病模型的建立[J].河南医科大学学报，1994，29(4)∶289
[6] 张林魁，钮心懿，徐瑞明，等.用高效液相-电化学检测法同时测定大鼠脑内单胺递质及其主要代谢产物[J].药学学报，1987，22(8)∶591
收稿：2000-04-14
修回：2000-04-18, 百拇医药
单位：首都医科大学药物研究所，北京 100054
关键词：银杏叶提取物；银杏总内酯；帕金森症；模型；多巴胺
中国新药杂志000708 【摘要】 目的：研究银杏叶提取物、银杏总内酯对帕金森病(PD)大鼠模型的作用。方法：采用腹腔注射毒扁豆碱引起的急性震颤模型A以及单侧黑质注射微量6-羟多巴胺造成的慢性旋转模型B，观察银杏叶提取物、银杏总内酯的预防和治疗作用。结果：银杏叶提取物(100mg/kg)、银杏总内酯(12mg/kg)在预防给药14d后能够明显缩短模型A的震颤时间；在给药治疗14d后能减轻模型B的旋转行为，而且银杏总内酯(12mg/kg)还能使模型B受损侧纹状体的多巴胺含量升高。结论：银杏叶提取物、银杏总内酯可能具有防治PD的作用。
【中图分类号】R282.71 【文献标识码】A 【文章编号】1003-3734(2000)07-0458-04
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The effects Ginkgo biloba extract and bilobalide on models
of rat with Parkinson's disease
GAO Wen WANG Li-juan YAO Xian JIN You-yu
(Medicine Research Institute,Capital University of Medical Sciences;Beijing 100054)
JING Peng LU Hou-zhen
(Department of Anatomy,Capital University of Medical Sciences,Beijing 100054)
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【Abstract】 Objective:To study the effects of Ginkgo biloba extract(GBE)and bilobalide on models of rat with Parkinson's disease.Methods:Models A and B were created respectively by ip injection of physostigmine and by injecting subtle 6-hydroxy-dopamine into unilateral substantial nigra and observe the preservative and therapeutic effects of GBE and bilobalide.Results:After pre-administration of GBE(100mg/kg)and bilobalide(12mg/kg)for 14d,the trembling time in model A was obviously shortened and after treatment for 14d,the rotational behavior in model B was decreased.The dopamine content in the damaged lateral striatum can be enhanced by bilobalide.Conclusion:GBE and bilobalide may be effective in prevention and treatment of Parkinson's disease.
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【Key words】 Ginkgo biloba extract;Ginkgo biloba terpene lactones；Parkinson's disease；models；dopamine
帕金森病(PD)是一种慢性进行性疾病，主要表现为震颤、肌肉僵直及运动障碍。其发病机制目前认为主要与黑质-纹状体系统多巴胺(DA)功能和乙酰胆碱(Ach)功能间平衡失调有关[1]。凡引起前者功能下降或后者功能亢进的原因均可导致震颤。最常见系由于大脑黑质中DA神经元变性或减少，甚至完全消失导致纹状体DA含量下降而引起。目前临床上常以左旋多巴替代疗法为主，虽有疗效，但不良反应较大，容易产生并发症。现在手术治疗取得了一定的进展，但涉及到手术难度、条件、费用等诸多因素，尚难推广实施。因此，寻找疗效确切而无不良反应的药物仍然是PD研究的重要任务。据临床研究和实验室研究，银杏叶提取物(GBE)、银杏总内酯对中枢神经系统有保护作用，可用于大脑血流障碍和脑功能障碍[2,3]。吴春福等[4]用银杏内酯灌胃给药(10mg/kg,6d)，能升高正常大鼠纹状体DA含量。因此，我们以毒扁豆碱腹腔注射造成的大鼠震颤模型及6-羟基多巴胺单侧损毁的PD大鼠模型研究GBE、银杏总内酯的作用并分析其作用机制。
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材料与方法
1 材料
1.1 动物 Wistar大鼠，雄性，体重200～300g，由中国科学院遗传研究所实验动物中心提供。
1.2 药品 GBE(含黄酮24%，银杏内酯6%，由北京第四制药厂提供)，银杏总内酯(首都医科大学药物研究所提供)。
1.3 仪器 大鼠立体定位仪(N.TAKAHASHI COMPANY，JAPAN)，HPLC-EC(BAS公司，USA)。
1.4 试剂 6-羟基多巴胺盐酸盐(6-OH-DA，Sigma)；盐酸去水吗啡(沈阳第一制药厂生产，批号：770501)，多巴胺盐酸盐(DA，Sigma)；3，4-二羟基苯乙酸(DOPAC，Sigma)；高香草酸(HVA，Sigma)；辛烷基磺酸钠(SOS，Sigma)；高氯酸(AR)；半胱氨酸(AR)；EDTA二钠盐(AR)；柠檬酸(AR)；无水乙酸钠(AR)；磷酸氢二钠(AR)；柠檬酸钾(AR)、三乙胺(AR)；甲醇(AR)；羟甲基纤维素钠(实验试剂)；硫酸毒扁豆碱(上海市化学试剂公司，英国分装)。
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2 方法
2.1 对大鼠震颤模型的预防作用 Wistar大鼠，雄性，体重200～300g，随机分4组：空白对照组(A组，生理盐水)；GBE组(B组，100mg/kg)；银杏总内酯大剂量组(C组，12mg/kg)；银杏总内酯小剂量组(D组，6mg/kg)。每组8只，各组动物均灌胃给药，qd，连续给药14d，最末一次给药1h后，ip毒扁豆碱(0.5 mg/kg)，记录给药后到开始震颤的时间(潜伏期)以及震颤开始到震颤结束的时间(震颤时间)。
2.2 对PD大鼠旋转模型的治疗作用 Wistar大鼠，雄性，体重200～300g，经反复测试确认无旋转行为后，用6%的水合氯醛腹腔注射(300 mg/kg)麻醉，参照文献[5]及图谱定位，选右侧黑质定位：前囟后4.4～5.0mm，矢状缝右侧1.1～1.8mm，颅骨下8.0～8.5mm。定位完毕，用微量注射器，进针注射6-羟基多巴胺4μl(12μg)，注射速度为1μl/min，注毕留针15 min。手术后，缝针，碘酊消毒，放回笼中饲养。10～14d后，进行行为检测，实验动物腹腔注射盐酸去水吗啡(0.25mg/kg)，观察其行为变化，5min后，开始记录大鼠旋转次数，大鼠恒定左旋，并且旋转次数平均大于7r/min，视为合格模型。
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将合格的PD模型大鼠随机分4组：空白对照组(A组，生理盐水)；GBE组(B组，100mg/kg)；银杏总内酯大剂量组(C组，12mg/kg)；银杏总内酯小剂量组(D组，6mg/kg)；每组7只；各组动物均灌胃给药，qd，连续给药14d，实验大鼠在给药前、给药后7，14d用盐酸去水吗啡腹腔注射(0.25 mg/kg)诱发，观察实验大鼠并记录大鼠10min内旋转次数。
2.3 对PD大鼠旋转模型组织形态学的影响 最末一次给药1h后，从上述各组随机取2只大鼠，以6%的水合氯醛(300 mg/kg)麻醉，ip,用4%的多聚甲醛灌注固定。取脑放30%蔗糖溶液中过夜，然后作冰冻连续横切片，片厚40μm，每间隔5片取1片，作为一组切片，免疫细胞化学法(TH)染色。光镜下观察实验大鼠纹状体及黑质的神经元损伤情况。
2.4 对PD大鼠旋转模型纹状体DA及其代谢产物含量的影响 将上述实验组大鼠，断头，迅速取出大脑，在冰台上分离出纹状体，称重后立即放入400μl冰冷的0.4mol/L高氯酸中(含0.5mmol/L EDTA和0.01%半胱氨酸)，玻璃匀浆器中匀浆，匀浆液高速离心(12 000×g，10min，4℃)。取上清液200μl，加300μl的钾盐溶液(含枸橼酸钾20mmol/L，磷酸氢二钾300 mmol/L，EDTA-二钠2 mmol/L)混合，过0.22μm膜，滤液20μl注入高效液相色谱电化学检测系统，测定条件参照文献[6]。
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3 统计学方法
本实验数据均用Origin软件进行统计处理，结果用均数±标准差表示，前后差值行配对t检验，组间比较采用成组t检验。
结 果
1 对大鼠震颤模型的预防作用
GBE(100mg/kg)、银杏总内酯(12mg/kg)在预防给药14d后能够明显缩短大鼠因腹腔注射毒扁豆碱引起的震颤时间(P<0.01)，结果见表1。
表1 银杏叶提取物及银杏总内酯对大鼠震颤
模型的影响 (
±s，n=8) 组别剂量(mg/kg)
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潜伏期(min)
震颤时间(min)
A
—
5.5±1.7
30±2
B
100
6.6±1.1
22±5a
C
6
6.9±0.9
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28±8
D
12
6.8±1.7
19±5a
与空白对照组比a:P<0.01
2 GBE及银杏总内酯对PD大鼠旋转模型的治疗作用
银杏叶提取物(100mg/kg)给药治疗7，14d后PD大鼠的旋转圈数显著下降(分别为P<0.05及P<0.01)；银杏总内酯大剂量(12mg/kg)给药治疗14d后PD大鼠的旋转圈数显著下降(P<0.01)，结果见表2。
表2 GBE及银杏总内酯对PD大鼠模型旋转
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行为的影响 (
±s，n=7) 组别剂 量
(mg/kg)
平均转速(r/min)
给药前
给药7d
给药14d
A
—
15.5±7.4
16.8±8.7
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18.0±10.6
B
100
11.1±4.6
9.0±4.3a
6.9±4.5b
C
6
10.2±1.3
11.3±2.6
11.4±3.5
D
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14.4±4.0
10.9±4.5
8.4±4.8b
每组动物给药前与给药后比较 a:P<0.05；b:P<0.01
3 GBE及银杏总内酯对PD大鼠旋转模型组织形态学的影响
在TH切片上，观察到各组大鼠右侧(损伤侧)黑质区TH样免疫反应神经元明显少于左侧(正常侧)黑质区。右侧(损伤侧)纹状体TH样免疫反应纤维末梢明显少于左侧纹状体(正常侧)，给药组与空白组切片之间未见有明显差异。
4 GBE及银杏总内酯对PD大鼠旋转模型纹状体DA及其代谢产物含量的影响
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银杏总内酯(12mg/kg)可使模型动物损伤侧纹状体的DA含量升高(P<0.05)，DA/HVA升高(P<0.05)，DA/DOPAC有升高趋势但统计无显著意义，结果见表3。
表3 GBE及银杏总内酯对PD大鼠旋转模型纹状体DA及其代谢产物含量的影响 (
±s，n=5) 组别剂 量
(mg/kg)
DA(nmol/g湿组织)
DOPAC(nmol/g湿组织)
HVA(nmol/g湿组织)
DA/DOPAC
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DA/HVA
左
右
左
右
左
右
左
右
左
右
A
—
4.10±0.95
, http://www.100md.com
0.64±0.44
2.18±0.32
0.13±0.08
1.34±0.18
0.11±0.04
1.87±0.29
4.64±1.18
3.04±0.54
4.59±1.20
B
100
4.44±0.66
, http://www.100md.com
0.68±0.25
2.54±0.44
0.17±0.06
1.44±0.45
0.13±0.03
1.76±0.32
4.16±0.83
3.27±1.11
5.04±1.19
C
6
4.31±0.77
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0.76±0.26
2.14±0.16
0.16±0.05
1.28±0.23
0.13±0.03
2.04±0.48
4.36±1.28
3.47±0.86
5.86±0.88
D
12
4.21±0.84
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1.68±0.84a
2.29±0.38
0.31±0.15a
1.32±0.27
0.20±0.08a
1.85±0.32
5.44±0.60
3.25±0.76
8.23±1.60a
与空白对照组比a：P<0.05；左侧为正常侧，右侧为损伤侧讨 论
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我们采用毒扁豆碱腹腔注射引起大鼠震颤，初步研究GBE及银杏总内酯对PD的作用。该方法模型形成快，持续时间短，可反复使用，但模型震颤属高频震颤，与PD震颤有明显区别。因而我们又采用了以6-羟多巴胺单侧损毁黑质DA能神经元的PD模型进行深入研究。该模型有3个优点：①该模型大鼠纹状体的DA含量明显下降与目前认为的黑质-纹状体DA含量减少是PD发病的主要原因一致，且DA含量可用HPLC-EC准确测定。②通过TH染色能明确反映出大鼠多巴胺能神经元和神经末梢的病理变化情况。③该模型经盐酸去水吗啡诱发后具有特殊的旋转行为并且结果稳定，便于长期研究观察。
实验结果表明GBE(100mg/kg)及银杏总内酯(12mg/kg)，每日灌胃给药1次，连续给药14d后能明显缩短大鼠由于腹腔注射毒扁豆碱所引起的震颤持续时间。同样地，可明显减轻由6-羟多巴胺微量单侧黑质注射而造成的PD大鼠模型的旋转，提示两者可能具有防治PD的作用。
另实验结果显示银杏总内酯可使模型动物损伤侧纹状体的DA含量升高，DA/HVA升高，DA/DOPAC有升高趋势，其原因可能是：①银杏总内酯通过保护残存的损伤侧黑质神经元，使得纹状体的DA的减少得以控制，并停留在某一水平。②银杏总内酯抑制纹状体DA的代谢，而银杏叶提取物组动物(100 mg/kg，含银杏总内酯6%)损伤侧纹状体的DA不升高，与银杏总内酯(6 mg/kg)组动物结果一致，表明银杏总内酯可能是这一作用的主要成分，而且与剂量有关。
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存在的问题：银杏总内酯(12 mg/kg )既能升高PD大鼠损伤侧的DA含量，又能改善PD大鼠旋转行为，GBE(100mg/kg)能改善PD大鼠旋转行为但不升高损伤侧的DA含量。那么PD 大鼠的旋转行为是否完全与大鼠纹状体DA 含量呈正相关，其原因待进一步研究。从PD大鼠纹状体、黑质免疫组化切片未见给药组与对照组之间的差异，可能与给药时间和给药剂量有关。
【作者简介】 郜文(1966-)，男，讲师，药理学硕士。主要研究方向：植物药的提取分离及进一步应用。联系电话：(010)63051452，E-mail:jinyouyu@cpums.edu.cn。
【参考文献】
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收稿：2000-04-14
修回：2000-04-18, 百拇医药