系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞CD43抗原的研究
作者：梁再赋 张士发 许静 冯永山 王壮志 顾绍裘
单位：110001 沈阳，中国医科大学第一临床学院皮肤科(梁再赋 许静 冯永山 王壮志 顾绍裘)；沈阳军区总医院皮肤科(张士发)
关键词：红斑狼疮；系统性；流式细胞计数
中华皮肤科杂志980107
【摘要】 目的 探讨SLE免疫功能异常的原因。方法 采用免疫荧光双标记-流式细胞仪检测了16例活动期SLE患者外周血淋巴细胞的CD43抗原。结果 ①活动期SLE患者外周血CD43抗原阳性淋巴细胞为63.14±16.47，低于正常人对照组86.62±12.86，有非常显著性差异(P<0.01)；②CD43抗原阳性淋巴细胞数与SLE疾病活动度呈显著负相关，r=-0.702，P<0.01；③活动期SLE患者外周血CD19+-CD43+淋巴细胞为2.55±1.38，高于对照组1.32±0.92，有非常显著性差异(P<0.01)。结论CD19+-CD43+淋巴细胞的增多可能与SLE大量产生抗DNA自身抗体有关。
CD43Preliminary Study of Expression of CD43 Antigen on Lymphocytes of Peripheral Bloodin Patients with SLE Liang Zaifu, Zang Shifa, Xu Jing, et al. Department of Dermatology,No.1 Hospital of China Medical University,Shenyang 110001
【Abstract】 Objective To investigate the causes of immunological disorders in SLE.Methods CD43 antigen on lymphocytes of peripheral blood in 16 cases of active SLE was detected by immunoflourescent double marker-flowcytometry.Results The results showed that, (1)the number of CD43 antigen positive lymphocytes in peripheral blood of active SLE patients was 63.14 ± 16.47, which was significantly lower than that of the control group
(86.62 ± 12.86, P< 0.01). (2) The number of CD43 antigen positive cells was negatively correlated to the disease activity of SLE (r=-0.702,P<0.01). (3) The number of CD19+-CD43+ lymphocytes in peripheral blood in active SLE was 2.55±1.38 which was significantly higher than that of the control group (1.32±0.92, P<0.01). Conclusion The increase of CD19+- CD43+ lymphocytes may be correlated with the production of anti-DNA autoantibody in SLE.
【Key words】 Lupus erythematosus,systemic Flowcytometry CD43 SLE发病机理尚未完全阐明，一般认为SLE患者存在免疫功能紊乱而表现出调节性T细胞功能异常及B细胞多克隆活化。CD43抗原是与淋巴细胞活化相关的大分子糖蛋白，我们拟通过观察CD43分子在SLE患者中的变化来探讨SLE免疫学发生机理。
材料和方法
(一)研究对象：SLE患者16例为本院住院患者，按美国风湿病协会1982年标准确诊，平均年龄29.88岁(15～46岁)；平均病程28个月；均为活动期患者，其疾病活动度判定标准依据Valentijn法[1]；根据临床症状评分，<5分者为非活动性，6～10分者为低度活动性，11～15分者为中度活动性，>15分者为高度活动性。检测前均未大量规律性使用过皮质类固醇激素类药物。正常人对照组16例，平均年龄26.13岁(19～39岁)，男女比例均为1∶3。
(二)试剂与仪器：荧光标记单克隆抗体：鼠抗人CD43-PE，鼠抗人CD19-FITC均为美国Zymed公司产品。05PR-22型低温离心机，CF-15D型微量高速离心机，日本Hitachi公司产品。FACS-Can流式细胞仪，美国Becton Dickson公司产品。
(三)研究方法：
1.外周血单一核细胞的分离：按常规方法进行。
2.直接免疫荧光染色：用5% FCS 0.01mol/L PBS(pH7.2)调整细胞浓度为2×106/ml，加入Eppendoffer管中，每管1ml，1200r/min离心10分钟，弃上清，悬起细胞，从左右两侧沿管壁加入荧光标记单克隆抗体，混匀，1200r/min离心1分钟，放4℃避光反应30分钟。
3.检测及统计学处理：反应结束后，用PBS洗涤细胞3次，沉淀中加入1ml 1%多聚甲醛固定细胞，混匀，上流式细胞仪检测，每个样品收集分析5000个细胞，采用t检验处理分析结果。
结 果
(一)活动期SLE患者外周血CD43阳性淋巴细胞的变化：活动期SLE患者外周血CD43阳性淋巴细胞(63.14±16.47)低于正常人对照组(86.62±12.86)，两组比较有显著性差异(t=4.68，P<0.01)。对CD43阳性淋巴细胞与SLE患者疾病活动性相关性分析的结果显示：两者呈负相关，随着疾病病情的加重，CD43阳性淋巴细胞减少，Y=96.96-3.48x，r=-0.702，有非常显著性差异(P<0.01)。
(二)活动期SLE患者外周血CD19+-CD43+淋巴细胞的变化：如附表所示，活动期SLE患者外周血CD19+-CD43+淋巴细胞高于正常人对照组，有非常显著性差异(P<0.01)；CD19+-CD43+淋巴细胞与CD19+细胞的比值无显著性差异；CD19+-CD43+淋巴细胞与CD43+细胞的比值低于正常对照，有非常显著性差异(P<0.01)。
附表 活动期SLE患者CD19+-CD43+淋巴细胞
的变化(
±s，%)组别
例数
CD19+-CD43+
CD19+-CD43+/CD19+
CD19+-CD43+/CD43+
正常人组
16
1.32±0.92
17.56±12.52
1.37±0.85
SLE组
16
2.55±1.38
18.97±8.26
3.74±2.58
t值
3.01
1.82
3.49
P值
<0.01
>0.05
<0.01
讨 论
CD43分子存在于人、大鼠、小鼠中，在体内主要分布于胸腺细胞、末梢T细胞、一部分B细胞、单核细胞、中性粒细胞、血小板、红细胞前驱细胞。可分为细胞内、膜贯通、细胞外三部分，人CD43分子细胞外部分由234个氨基酸组成，其上有70～80个O型糖链结合部位和少量的N型糖链结合部分，因此，CD43分子是上述细胞表面主要的唾液酸化糖蛋白，约占胸腺细胞表面积的20%[2]。我们对CD43分子在SLE患者外周血淋巴细胞的表达进行了研究，结果发现活动期SLE患者外周血CD43阳性淋巴细胞下降，且与疾病活动度呈负相关，这可能导致SLE的单核、巨噬细胞功能低下和T细胞功能障碍。与SLE外周血CD43阳性淋巴细胞下降相反，我们还发现SLE患者的CD19+-CD43+细胞高于正常人对照组，已知静止期B细胞不表达CD43，只有活化的B细胞表达[3]，上述结果支持SLE患者体内的B细胞多处于活化状态。
在SLE动物模型NZB/NZWF1小鼠，产生IgG型抗DNA抗体的B细胞表达Lp-3(鼠的CD43分子)，而产生IgM型抗DNA抗体的B细胞不表达Lp-3[4，5]，推测CD19+-CD43+细胞可能与SLE抗DNA自身抗体产生有关。产生多种自身抗体是SLE发病机理关键的环节之一，CD43分子功能的研究将有助于SLE自身抗体产生机制的阐明，CD43是个多糖链的大分子，糖的多少可能表达不同的功能，因此，有关参与糖链合成酶类的研究也是CD43分子研究中今后需重视的课题。
参 考 文 献
1 Valentijn RM, van Overhagen H, Hazevoet HM, et al. The value of complement and immunecomplex determinations in monitoring disease activity in patients with systemic lupuserythematosus. Arthritis Rheum, 1985,28∶904-913.
2 Cyster JG, Shotton DM, William AF, et al. The dimensions of the T lymphocyte glycoproteinleukosialin and identification of linear protein epitopes that can be modified by glycosylation.EMBO J, 1991,10∶893-902.
3 Wiken M, Bjorck MP, Axelsson B, et al. Induction of CD43 expression during activation andterminal differentiation of human B cells. Scand J Immunol, 1988,28∶457-464.
4 盐田 润, 西村裕之, 冈本 完, 他. 抗DNA抗体产生前驱B细胞上のュニクな分化抗原Lp-3は,leukosialin(CD43)であった. 第21回日本免疫学会总会学术集会记录, 1991,21∶508.
5 Okada T, Abe M, Takimura F, et al. Distinct surface phenotypes of B cells responsible for spontaneous production of IgM and IgG anti-DNA antibodies in autoimmune-prone NZB/NZWF1 mice. Autoimmunity, 1990,7∶109-120.
(收稿：1997-07-15 修回：1997-10-05)