系统性红斑狼疮患者自身抗体与HLA-DR、DQ基因的相关性研究
作者：彭学标 徐文严 费虹明 岳晓玉 陈仁彪
单位：210042 南京，中国医学科学院 中国协和医科大学皮肤病研究所[彭学标(现在广州第一军医大学南方医院皮肤科) 徐文严 岳晓玉]；上海第二医科大学生物学教研室(费虹明 陈仁彪)
关键词：红斑狼疮；系统性；自身抗体
中华皮肤科杂志980105
【摘要】 目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)的发病机理和遗传基础。方法 分析了SLE患者中各种自身抗体与HLA-DR、DQ基因的关联。结果 发现抗Ro抗体与DR2、DQ6及DQ2/DQ6杂合子相关，抗RNP抗体与DQA1*0102、DQB1*0602相关。抗Sm和抗dsDNA抗体均与DRB1*1501、DQA1*0102、DQB1*0602相关，这与汉族SLE与HLA的关联完全一致，表明抗Sm和抗dsDNA抗体对SLE有极高的诊断价值。结论自身抗体与HLA的关联跨越了种族界限，不同种族的SLE患者中同种自身抗体与HLA抗原的关联基本相同，提示HLA对SLE的遗传易感作用主要发生在自身抗体水平。
, http://www.100md.com
Study on the Association Between HLA-DR,DQ Genes and Autoantibodies in Pateints withSystemic Lupus Erythematosus Peng Xuebiao,Xu Wenyan,Fei Hongming,et al.Institute ofDermatology,Chinese Academy of Medical Sciences,Peking Union Medical College,Nanjing 210042
【Abstract】 Objective To study the pathogenesis and genetic basis of systemic lupuserythematosus(SLE). Methods The association between HLA-DR,DQ genes and variousautoantibodies in patients with SLE was analysed. Results The results indicated that DR2,DQ6 and the heterozygous combination DQ2/DQ6 were closely correlated with theproduction of autoantibodies to Ro antigen,and DQA1*0102,DQB1*0602 with antibodyto RNP. As shown in the lupus population study in Han nationality,patients with anti-Sm andanti-dsDNA antibodies were associated with DRB1*1501,DQA1*0102,and DQB1*0602which suggests that anti-Sm and anti-dsDNA antibodies have a very important diagnosticvalue in SLE. Conclusion The association between autoantibodies and HLA has gone beyondethnic boundary. In various ethnic patients with SLE, the associaton between HLA antigenand specific autoantibody is similar. The above data suggest that contribution of class Ⅱ MHCmolecules in SLE is predominantly at the level of specific autoantibodies production.
, 百拇医药
【Key words】 Lupus erythematosus,systemic Autoantibodies
系统性红斑狼疮(SLE)是一种典型的全身性自身免疫性疾病，其血清学异常包括对Ro、La、Sm和RNP抗原产生特异的自身抗体。一个或多个这些自身抗体的存在似乎与SLE的某些临床特征有关，表明这些自身抗体在SLE的发病中可能起了一定的作用[1]。国外研究表明SLE与HLAⅡ类多态性基因有关，然而SLE
与HLA的相关性仅在同一种族内才基本相似，所以目前还很难建立HLA与不同种族的SLE间的明确关联。但是，如果根据所产生的特异的自身抗体将SLE分组分析时，则发现特定的自身抗体与HLA呈强相关。如DR2/DQ6、DR3/DQ2单倍型与抗Ro和抗La抗体关联，而DR4与抗U1RNP抗体相关[1，2]。国内这方面的研究
尚属空白，我们从分子遗传学角度分析了我国江苏籍汉族SLE患者中自身抗体与HLA-DR、DQ基因的关联，旨在从亚临床水平探讨SLE的发病机理。
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材料和方法
1.研究对象：江苏籍汉族SLE患者67例，均符合1982年美国风湿病协会修订的诊断标准，正常对照组为与患者同一地区的健康随机人群，共69例，与患者无血缘关系。
2.DNA的制备：用去除淋巴细胞后剩余的静脉血白细胞，用改良的盐析法[3]提取基因组DNA。
3.HLA-DR、DQ基因的DNA分型：根据第11届国际组织相容性抗原会议(IHWC)资料[4]和文献[9]，用聚合酶链反应结合顺序特异的寡核苷酸(PCR/SSO)杂交方法对患者组和正常对照组HLA-DR、DQ亚区作DNA分型。
4.自身抗体的检测：用间接免疫荧光法检测抗dsDNA抗体，以短膜虫为底物，滴度>1∶16为阳性，采用单向免疫扩散法或ENA多肽抗体谱试剂盒(免疫印迹技术)检测抗RNP、Sm、Ro、La自身抗体。
, 百拇医药
5.统计学分析：用χ2检验或确切概率法统计，显著性检验水平为0.05。
结 果
1.与正常对照组相比，SLE患者中抗Ro抗体阳性者DR2、DQ6的基因频率及DQ2/DQ6杂合子频率均显著升高(P=0.0104，P=0.003和P=0.0056)。相关的DR2等位基因为DRB1*1501(P=0.015)，DR3及其所有的等位基因频率与正常对照组相比无明显差异。组成DQ6的所有等位基因中，仅DQA1*0102频率显著升高(P=0.0003)，而所有DQB1等位基因频率与对照组相比无显著性差异，见附表。
2.SLE患者抗Sm抗体阳性者DRB1*1501(P=0.0098)、DQA1*0102(P=0.0026)、DQB1*0602(P=0.0095)频率与正常人对照组比较显著升高；抗dsDNA抗体也与
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DRB1*1501(P=0.018)、DQA1*0102(P=0.000014)及DQB1*0602(P=0.0054)相关，但与DQA1*0601呈负相关(P=0.0098)。抗RNP抗体阳性与DR位点及其所有的等
位基因无关，而与DQA1*0102(P=0.0018)和DQB1*0602(P=0.0192)相关，见附表。
讨 论
现在多数学者认为，HLA的某些等位基因并不决定疾病的易感性，而是通过影响患者自身抗体的产生在疾病的分型及预后中起重要作用。20多年来的研究发现一系列的自身抗体与临床亚型相关，HLA的等位基因是通过与特定的自身抗体有密切关系从而与疾病相关，这些自身抗体的存在决定疾病的亚型[5]。
Stephens等[2]研究发现白种人SLE中抗Ro抗体与杂合子DR2/DR3，抗Ro+La抗体与DR3紧密相关。Reveille等[6]发现抗Ro和抗La抗体与杂合子DQ2/DQ6相关，且这种相关性在黑人及白种人SLE中均存在。我们发现江苏籍汉族SLE中抗Ro抗体与DR2、DQ6呈高度相关，但未发现与DR3有关，这可能是HLA抗原分布的种族差异所致，因在汉族人群中DR3抗原频率很低。有证据表明具有DQ2/DQ6杂合子的患者趋于产生更高滴度的抗Ro抗体[7]，因未能检测抗体的滴度，我们虽然发现了抗Ro抗体与杂合子DQ2/DQ6相关，却无法预见这部分患者是否产生高滴度的抗Ro抗体。抗La抗体通常与抗Ro抗体同时出现，遗憾的是，我们的研究中抗La抗体的阳性率很低，无法探讨其与HLA间的关联，还有待扩大样本量进
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一步研究。
抗Sm抗体是SLE的标志抗体，抗dsDNA抗体
附表 SLE患者与自身抗体关联的HLA-DR、DQ基因和等位基因
组 别
例数
阳 性 例 数
DR2
DR3
DQ2
DQ6
DRB1*1501
DQA1*0102
, 百拇医药
DQA1*0601
DQB1*0602
DQ2/DQ6
SLE患者
抗Ro(+)
15
9
6
6
11
7
11
3
, 百拇医药
4
5
抗Sm(+)
16
11
8
7
12
8
10
3
7
4
抗RNP(+)
, 百拇医药
22
11
10
9
17
8
13
5
8
6
抗dsDNA(+)
21
14
9
, 百拇医药
7
18
9
16
2
9
5
正常人对照
69
17
17
16
15
11
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6
12
6
4
是SLE病情活动的指标。我们发现汉族SLE中抗RNP抗体与HLA-DQA1*0102、DQB1*0602相关，而抗Sm和抗dsDNA抗体均与HLA-DRB1*1501，DQA1*0102，DQB1*0602相关，这与汉族SLE与HLA的关联完全相同，表明抗Sm和抗dsDNA抗体对SLE有极高的诊断价值。Olsen等[8]研究报道白种人SLE中抗dsDNA抗体与HLA-DR3、DR2、DQ2、DQ6相关，黑人患者抗Sm抗体主要与HLA-DRB1*1503、DQA1*0102、DQB1*0602相关，抗RNP抗体与HLA-DQA1*0101、DQB1*0501相关，而白种人SLE中抗RNP抗体与HLA-DQA1*0101、DQB1*0302、DQB1*0501相关。可见不同种族的SLE患者中同种自身抗体与HLA抗原的关联基本相同，但存在少数等位基因的差异，这反映了不同种族SLE患者中自身抗体与HLA相关的共性和特殊性。
, 百拇医药
参 考 文 献
1 Black CM, Maddison PJ, Welsh KI, et al. HLA and immunoglobulin allotypes in mixedconnective tissue disease. Arthitis Rheum, 1988,31∶131-138.
2 Stephens HAF, Mchugh NJ, Maddison PJ, et al. HLA class Ⅱ restriction ofautoantibody production in patients with systemic lupus erythematosus. Immunogenetics,1991,33∶276-280.
3 Miller SA, Dykes DD, Polesky HF, et al. A simple salting out procedure for extractingDNA from human nucleated cells. Nucleic Acid Res, 1988,16∶1215.
, 百拇医药
4 The 11th International HLA Workshop and Conference DNA Component. Japan:Yokohama, 1991.
5 章星琪综述. 系统性红斑狼疮的遗传因素-HLA相关性研究. 国外医学皮肤性病学分册, 1995,21∶257-260.
6 Reveille JD, MacLeod MJ, Whitington K, et al. Special amino acid residues in the secondhypervariable region of HLA-DQA1 and DQB1 chain genes promote the Ro/La autoantibodyresponse. J Immunol, 1991,146∶3871-3876.
7 Hamilton RG, Garleg JB, Bias WB, et al. Two Ro(SS-A) antibody response in systemiclupus erythematosus. Arthritis Rheum, 1988,31∶496-503.
, 百拇医药
8 Olsen ML, Arnett FC, Reveille JD. Contrasting molecular pattern of MHC class Ⅱ allelesassociatied with the anti-Sm and anti-RNP precipitin autoantibodies in systemic lupuscrythematosus. Arthritis Rheum, 1993,36∶94-104.
9 彭学标, 徐文严, 岳晓玉, 等. 江苏籍汉族系统性红斑狼疮与HLA-DR基因相关性研究. 中华皮肤科杂志, 1997,30∶7-9.
(收稿：1997-01-16 修回：1997-05-24), 百拇医药
单位：210042 南京，中国医学科学院 中国协和医科大学皮肤病研究所[彭学标(现在广州第一军医大学南方医院皮肤科) 徐文严 岳晓玉]；上海第二医科大学生物学教研室(费虹明 陈仁彪)
关键词：红斑狼疮；系统性；自身抗体
中华皮肤科杂志980105
【摘要】 目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)的发病机理和遗传基础。方法 分析了SLE患者中各种自身抗体与HLA-DR、DQ基因的关联。结果 发现抗Ro抗体与DR2、DQ6及DQ2/DQ6杂合子相关，抗RNP抗体与DQA1*0102、DQB1*0602相关。抗Sm和抗dsDNA抗体均与DRB1*1501、DQA1*0102、DQB1*0602相关，这与汉族SLE与HLA的关联完全一致，表明抗Sm和抗dsDNA抗体对SLE有极高的诊断价值。结论自身抗体与HLA的关联跨越了种族界限，不同种族的SLE患者中同种自身抗体与HLA抗原的关联基本相同，提示HLA对SLE的遗传易感作用主要发生在自身抗体水平。
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Study on the Association Between HLA-DR,DQ Genes and Autoantibodies in Pateints withSystemic Lupus Erythematosus Peng Xuebiao,Xu Wenyan,Fei Hongming,et al.Institute ofDermatology,Chinese Academy of Medical Sciences,Peking Union Medical College,Nanjing 210042
【Abstract】 Objective To study the pathogenesis and genetic basis of systemic lupuserythematosus(SLE). Methods The association between HLA-DR,DQ genes and variousautoantibodies in patients with SLE was analysed. Results The results indicated that DR2,DQ6 and the heterozygous combination DQ2/DQ6 were closely correlated with theproduction of autoantibodies to Ro antigen,and DQA1*0102,DQB1*0602 with antibodyto RNP. As shown in the lupus population study in Han nationality,patients with anti-Sm andanti-dsDNA antibodies were associated with DRB1*1501,DQA1*0102,and DQB1*0602which suggests that anti-Sm and anti-dsDNA antibodies have a very important diagnosticvalue in SLE. Conclusion The association between autoantibodies and HLA has gone beyondethnic boundary. In various ethnic patients with SLE, the associaton between HLA antigenand specific autoantibody is similar. The above data suggest that contribution of class Ⅱ MHCmolecules in SLE is predominantly at the level of specific autoantibodies production.
, 百拇医药
【Key words】 Lupus erythematosus,systemic Autoantibodies
系统性红斑狼疮(SLE)是一种典型的全身性自身免疫性疾病，其血清学异常包括对Ro、La、Sm和RNP抗原产生特异的自身抗体。一个或多个这些自身抗体的存在似乎与SLE的某些临床特征有关，表明这些自身抗体在SLE的发病中可能起了一定的作用[1]。国外研究表明SLE与HLAⅡ类多态性基因有关，然而SLE
与HLA的相关性仅在同一种族内才基本相似，所以目前还很难建立HLA与不同种族的SLE间的明确关联。但是，如果根据所产生的特异的自身抗体将SLE分组分析时，则发现特定的自身抗体与HLA呈强相关。如DR2/DQ6、DR3/DQ2单倍型与抗Ro和抗La抗体关联，而DR4与抗U1RNP抗体相关[1，2]。国内这方面的研究
尚属空白，我们从分子遗传学角度分析了我国江苏籍汉族SLE患者中自身抗体与HLA-DR、DQ基因的关联，旨在从亚临床水平探讨SLE的发病机理。
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材料和方法
1.研究对象：江苏籍汉族SLE患者67例，均符合1982年美国风湿病协会修订的诊断标准，正常对照组为与患者同一地区的健康随机人群，共69例，与患者无血缘关系。
2.DNA的制备：用去除淋巴细胞后剩余的静脉血白细胞，用改良的盐析法[3]提取基因组DNA。
3.HLA-DR、DQ基因的DNA分型：根据第11届国际组织相容性抗原会议(IHWC)资料[4]和文献[9]，用聚合酶链反应结合顺序特异的寡核苷酸(PCR/SSO)杂交方法对患者组和正常对照组HLA-DR、DQ亚区作DNA分型。
4.自身抗体的检测：用间接免疫荧光法检测抗dsDNA抗体，以短膜虫为底物，滴度>1∶16为阳性，采用单向免疫扩散法或ENA多肽抗体谱试剂盒(免疫印迹技术)检测抗RNP、Sm、Ro、La自身抗体。
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5.统计学分析：用χ2检验或确切概率法统计，显著性检验水平为0.05。
结 果
1.与正常对照组相比，SLE患者中抗Ro抗体阳性者DR2、DQ6的基因频率及DQ2/DQ6杂合子频率均显著升高(P=0.0104，P=0.003和P=0.0056)。相关的DR2等位基因为DRB1*1501(P=0.015)，DR3及其所有的等位基因频率与正常对照组相比无明显差异。组成DQ6的所有等位基因中，仅DQA1*0102频率显著升高(P=0.0003)，而所有DQB1等位基因频率与对照组相比无显著性差异，见附表。
2.SLE患者抗Sm抗体阳性者DRB1*1501(P=0.0098)、DQA1*0102(P=0.0026)、DQB1*0602(P=0.0095)频率与正常人对照组比较显著升高；抗dsDNA抗体也与
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DRB1*1501(P=0.018)、DQA1*0102(P=0.000014)及DQB1*0602(P=0.0054)相关，但与DQA1*0601呈负相关(P=0.0098)。抗RNP抗体阳性与DR位点及其所有的等
位基因无关，而与DQA1*0102(P=0.0018)和DQB1*0602(P=0.0192)相关，见附表。
讨 论
现在多数学者认为，HLA的某些等位基因并不决定疾病的易感性，而是通过影响患者自身抗体的产生在疾病的分型及预后中起重要作用。20多年来的研究发现一系列的自身抗体与临床亚型相关，HLA的等位基因是通过与特定的自身抗体有密切关系从而与疾病相关，这些自身抗体的存在决定疾病的亚型[5]。
Stephens等[2]研究发现白种人SLE中抗Ro抗体与杂合子DR2/DR3，抗Ro+La抗体与DR3紧密相关。Reveille等[6]发现抗Ro和抗La抗体与杂合子DQ2/DQ6相关，且这种相关性在黑人及白种人SLE中均存在。我们发现江苏籍汉族SLE中抗Ro抗体与DR2、DQ6呈高度相关，但未发现与DR3有关，这可能是HLA抗原分布的种族差异所致，因在汉族人群中DR3抗原频率很低。有证据表明具有DQ2/DQ6杂合子的患者趋于产生更高滴度的抗Ro抗体[7]，因未能检测抗体的滴度，我们虽然发现了抗Ro抗体与杂合子DQ2/DQ6相关，却无法预见这部分患者是否产生高滴度的抗Ro抗体。抗La抗体通常与抗Ro抗体同时出现，遗憾的是，我们的研究中抗La抗体的阳性率很低，无法探讨其与HLA间的关联，还有待扩大样本量进
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一步研究。
抗Sm抗体是SLE的标志抗体，抗dsDNA抗体
附表 SLE患者与自身抗体关联的HLA-DR、DQ基因和等位基因
组 别
例数
阳 性 例 数
DR2
DR3
DQ2
DQ6
DRB1*1501
DQA1*0102
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DQA1*0601
DQB1*0602
DQ2/DQ6
SLE患者
抗Ro(+)
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抗Sm(+)
16
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抗RNP(+)
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22
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抗dsDNA(+)
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正常人对照
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4
是SLE病情活动的指标。我们发现汉族SLE中抗RNP抗体与HLA-DQA1*0102、DQB1*0602相关，而抗Sm和抗dsDNA抗体均与HLA-DRB1*1501，DQA1*0102，DQB1*0602相关，这与汉族SLE与HLA的关联完全相同，表明抗Sm和抗dsDNA抗体对SLE有极高的诊断价值。Olsen等[8]研究报道白种人SLE中抗dsDNA抗体与HLA-DR3、DR2、DQ2、DQ6相关，黑人患者抗Sm抗体主要与HLA-DRB1*1503、DQA1*0102、DQB1*0602相关，抗RNP抗体与HLA-DQA1*0101、DQB1*0501相关，而白种人SLE中抗RNP抗体与HLA-DQA1*0101、DQB1*0302、DQB1*0501相关。可见不同种族的SLE患者中同种自身抗体与HLA抗原的关联基本相同，但存在少数等位基因的差异，这反映了不同种族SLE患者中自身抗体与HLA相关的共性和特殊性。
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参 考 文 献
1 Black CM, Maddison PJ, Welsh KI, et al. HLA and immunoglobulin allotypes in mixedconnective tissue disease. Arthitis Rheum, 1988,31∶131-138.
2 Stephens HAF, Mchugh NJ, Maddison PJ, et al. HLA class Ⅱ restriction ofautoantibody production in patients with systemic lupus erythematosus. Immunogenetics,1991,33∶276-280.
3 Miller SA, Dykes DD, Polesky HF, et al. A simple salting out procedure for extractingDNA from human nucleated cells. Nucleic Acid Res, 1988,16∶1215.
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4 The 11th International HLA Workshop and Conference DNA Component. Japan:Yokohama, 1991.
5 章星琪综述. 系统性红斑狼疮的遗传因素-HLA相关性研究. 国外医学皮肤性病学分册, 1995,21∶257-260.
6 Reveille JD, MacLeod MJ, Whitington K, et al. Special amino acid residues in the secondhypervariable region of HLA-DQA1 and DQB1 chain genes promote the Ro/La autoantibodyresponse. J Immunol, 1991,146∶3871-3876.
7 Hamilton RG, Garleg JB, Bias WB, et al. Two Ro(SS-A) antibody response in systemiclupus erythematosus. Arthritis Rheum, 1988,31∶496-503.
, 百拇医药
8 Olsen ML, Arnett FC, Reveille JD. Contrasting molecular pattern of MHC class Ⅱ allelesassociatied with the anti-Sm and anti-RNP precipitin autoantibodies in systemic lupuscrythematosus. Arthritis Rheum, 1993,36∶94-104.
9 彭学标, 徐文严, 岳晓玉, 等. 江苏籍汉族系统性红斑狼疮与HLA-DR基因相关性研究. 中华皮肤科杂志, 1997,30∶7-9.
(收稿：1997-01-16 修回：1997-05-24), 百拇医药