银屑病患者外周血单一核细胞CD44及CD54分子的表达
作者：李冠勇 刘华昌 周春蕾 曹瑞华 尹格平
单位：250031 济南，济南军区总医院皮肤科(李冠勇 刘华昌 周春蕾 曹瑞华)；流式细胞研究室(尹格平)
关键词：
中华皮肤科杂志980216.htm 我们采用流式细胞仪对银屑病患者外周血单一核细胞(PBMC)CD44及CD54分子的表达进行了初步研究，旨在探讨PBMC CD44及CD54分子在银屑病发病中的作用。
一、资料和方法
1.观察对象：46例寻常型银屑病患者，男26例，女20例；年龄17～63岁，平均35岁；病程半个月至35年；其中进行期
附表 银屑病患者外周血单一核细胞CD44及CD54表达(
±s，%) 组 别
, http://www.100md.com
例数
CD44+
CD54+±s
t值*±s
t值*
正常人对照组银屑病组
40
46
13.42±3.41
, 百拇医药
30.61±5.35
17.99
4.75±1.02
6.27±1.74
5.017
进行期
静止期
25
21
35.16±4.13
26.06±4.72
6.973
, 百拇医药
7.16±1.21
5.38±1.17
4.684
治疗前
治疗后
25
25
33.24±4.83
20.05±5.04
9.448
6.98±1.54
4.96±1.72
, 百拇医药
4.375
*两者比较的t值，P均<0.0125例，静止期21例。健康对照者40例，男21例，女19例；年龄18～60岁，平均34岁。两组均排除系统性疾患。抽血前2个月内均无应用皮质类固醇、免疫抑制剂及细胞毒性药物史。
2.实验方法：
(1)单克隆抗体和对照：异硫氰酸荧光素(FITC)标记鼠抗人CD44及CD54单克隆抗体，阴性对照为FITC标记羊抗鼠IgG1多克隆抗体。由法国国际免疫公司生产。
(2)流式细胞仪：FACScan型，美国Becton-Dickinson公司产。
(3)PBMC悬液：取静脉血2ml，2% EDTA抗凝(EDTA∶血=1∶9)，叠加于2ml Ficoll-Hypaque分离液上，离心1500r/min，15分钟，提取单一核细胞层，再以PBS 2ml漂洗，同速离心(细胞浓度106/ml)，去上清后以70%乙醇固定，4℃保存备用。
, http://www.100md.com
(4)免疫荧光染色：反应前以PBS漂洗离心1次以除去固定剂，将PBMC悬液分为4管，每试管500μl，分别加入FITC标记鼠抗人CD44单克隆抗体、FITC标记羊抗鼠IgG1多克隆抗体、FITC标记鼠抗人CD54单克隆抗体及FITC标记羊抗鼠IgG1多克隆抗体20μl。室温下反应20分钟，以PBS漂洗离心2次，弃上清液。
(5)流式细胞计数：上机前以标准荧光微球调整仪器，使变异系数稳定在2%左右，上机后计数2×104个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试完后在Macintosh650计算机上用Cell Qutst Plot软件(美国Becton-Dickinson公司产)分析数据。
3.统计学处理：结果中所列数据以±s表示，对方差齐者采用t检验，不齐者采用t′检验。
二、结果
, http://www.100md.com
1.银屑病患者PBMC中CD44阳性率较对照组显著增高(P<0.01)；进行期患者PBMC中CD44阳性率明显高于静止期患者(P<0.01)。
2.银屑病患者PBMC中CD54阳性率较对照组显著增高(P<0.01)；进行期患者CD54阳性细胞百分率明显高于静止期患者(P<0.01)，详见附表。
3.经过皮质类固醇激素、活血化瘀中药、紫外线(UV-N)照射等治疗，25例患者皮疹消退，其CD44及CD54阳性细胞百分率较治疗前显著降低(P<0.01)。
4.将患者按病程分为3组(<5年、5～15年、>15年)，结果显示PBMC中CD44及CD54阳性率与病程长短无关(P均>0.05)。
三、讨论
CD44分子是细胞表面的整合膜蛋白，属粘附分子家族。CD44分子有几种类型，在原始的造血细胞上表达的CD44类型称CD44标准型(CD44std)[1]。已有研究表明淋巴细胞CD44std在淋巴细胞与内皮细胞(EC)粘附[2]、淋巴细胞移行、淋巴细胞生成、淋巴细胞归巢、T细胞活化[3]及释放细胞因子[1]方面具重要作用。CD44std还是透明质酸的受体[1]。业已证明透明质酸在炎性反应、血管生成等方面亦具重要作用[4]。我们的结果显示银屑病患者PBMC中CD44阳性率显著增高，且与病情有关，提示PBMC CD44分子异常可能与银屑病患者淋巴细胞浸润、细胞因子异常、血管发生(angiogenesis)等有关。
, 百拇医药
CD54由90 000～114 000单链糖蛋白组成，属免疫球蛋白基因超家族成员。CD54为淋巴细胞功能相关抗原-1(lymphocyte funtion-associated antigen-1, LFA-1)的配基[5]。CD54分子与白细胞通过EC到达炎性部位有关[5]。正常情况下，淋巴细胞不表达或少量表达CD54。炎性介质如白介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)可诱导CD54的表达[5]。Schopf[5]等的研究结果显示银屑病患者血浆可溶性CD54分子明显增高，且与病情有关。Cai等[6]认为银屑病的炎性反应与淋巴细胞和EC的功能失调密切相关。我们的结果显示银屑病患者PBMC中CD44及CD54阳性细胞明显增多，提示粘附分子的改变可能是银屑病患者淋巴细胞功能失调的一个重要方面。 参 考 文 献
1 Baum HP, Schmid T, Schock G, et al. Expression of CD44 isoforms in basal cell carcinomas. Br J Dermatol, 1996,134∶465-468.
, 百拇医药
2 Oppenheimer-Marks N, Davis LS, Lipsky PE. Human T lymphocyte adhesion to endothelial cell and transendothelial migration: alteration of receptor use relates to the activation status of both the T cell and the endothelial cell. J Immunol, 1990,145∶140-148.
3 Osada A, Nakashima H, Furue M, et al. Up-regulation of CD44 expression by tumor necrosis factor-α is neutralized by interleukin-10 in Langerhans cells. J Invest Dermatol, 1995,105∶124-127.
, 百拇医药
4 金顺钱, 张伟综述. 细胞表面糖蛋白CD44研究进展. 国外医学免疫学分册, 1994,17∶85-89.
5 Schopf RE, Neumann S, Rehder M, et al. Soluble intercellular adhesion molecule-1 levels in patients with psoriasis. Br J Dermatol, 1993,128∶34-37.
6 Cai JP, Harris K, Falanga V, et al. UVB therapy decrease the adhesive interaction between peripheral blood mononuclear cells and dermal microvascular endothelium, and regulates the differential expression of CD54, VCAM-1, and E-selectin in psoriatic plaques. Br J Dermatol, 1996,134∶7-16.
(收稿：1997-02-04 修回：1997-10-16), 百拇医药
单位：250031 济南，济南军区总医院皮肤科(李冠勇 刘华昌 周春蕾 曹瑞华)；流式细胞研究室(尹格平)
关键词：
中华皮肤科杂志980216.htm 我们采用流式细胞仪对银屑病患者外周血单一核细胞(PBMC)CD44及CD54分子的表达进行了初步研究，旨在探讨PBMC CD44及CD54分子在银屑病发病中的作用。
一、资料和方法
1.观察对象：46例寻常型银屑病患者，男26例，女20例；年龄17～63岁，平均35岁；病程半个月至35年；其中进行期
附表 银屑病患者外周血单一核细胞CD44及CD54表达(
±s，%) 组 别, http://www.100md.com
例数
CD44+
CD54+
±st值*
±st值*
正常人对照组银屑病组
40
46
13.42±3.41
, 百拇医药
30.61±5.35
17.99
4.75±1.02
6.27±1.74
5.017
进行期
静止期
25
21
35.16±4.13
26.06±4.72
6.973
, 百拇医药
7.16±1.21
5.38±1.17
4.684
治疗前
治疗后
25
25
33.24±4.83
20.05±5.04
9.448
6.98±1.54
4.96±1.72
, 百拇医药
4.375
*两者比较的t值，P均<0.0125例，静止期21例。健康对照者40例，男21例，女19例；年龄18～60岁，平均34岁。两组均排除系统性疾患。抽血前2个月内均无应用皮质类固醇、免疫抑制剂及细胞毒性药物史。
2.实验方法：
(1)单克隆抗体和对照：异硫氰酸荧光素(FITC)标记鼠抗人CD44及CD54单克隆抗体，阴性对照为FITC标记羊抗鼠IgG1多克隆抗体。由法国国际免疫公司生产。
(2)流式细胞仪：FACScan型，美国Becton-Dickinson公司产。
(3)PBMC悬液：取静脉血2ml，2% EDTA抗凝(EDTA∶血=1∶9)，叠加于2ml Ficoll-Hypaque分离液上，离心1500r/min，15分钟，提取单一核细胞层，再以PBS 2ml漂洗，同速离心(细胞浓度106/ml)，去上清后以70%乙醇固定，4℃保存备用。
, http://www.100md.com
(4)免疫荧光染色：反应前以PBS漂洗离心1次以除去固定剂，将PBMC悬液分为4管，每试管500μl，分别加入FITC标记鼠抗人CD44单克隆抗体、FITC标记羊抗鼠IgG1多克隆抗体、FITC标记鼠抗人CD54单克隆抗体及FITC标记羊抗鼠IgG1多克隆抗体20μl。室温下反应20分钟，以PBS漂洗离心2次，弃上清液。
(5)流式细胞计数：上机前以标准荧光微球调整仪器，使变异系数稳定在2%左右，上机后计数2×104个细胞，荧光强度以对数放大，光散射数据存软盘，测试完后在Macintosh650计算机上用Cell Qutst Plot软件(美国Becton-Dickinson公司产)分析数据。
3.统计学处理：结果中所列数据以±s表示，对方差齐者采用t检验，不齐者采用t′检验。
二、结果
, http://www.100md.com
1.银屑病患者PBMC中CD44阳性率较对照组显著增高(P<0.01)；进行期患者PBMC中CD44阳性率明显高于静止期患者(P<0.01)。
2.银屑病患者PBMC中CD54阳性率较对照组显著增高(P<0.01)；进行期患者CD54阳性细胞百分率明显高于静止期患者(P<0.01)，详见附表。
3.经过皮质类固醇激素、活血化瘀中药、紫外线(UV-N)照射等治疗，25例患者皮疹消退，其CD44及CD54阳性细胞百分率较治疗前显著降低(P<0.01)。
4.将患者按病程分为3组(<5年、5～15年、>15年)，结果显示PBMC中CD44及CD54阳性率与病程长短无关(P均>0.05)。
三、讨论
CD44分子是细胞表面的整合膜蛋白，属粘附分子家族。CD44分子有几种类型，在原始的造血细胞上表达的CD44类型称CD44标准型(CD44std)[1]。已有研究表明淋巴细胞CD44std在淋巴细胞与内皮细胞(EC)粘附[2]、淋巴细胞移行、淋巴细胞生成、淋巴细胞归巢、T细胞活化[3]及释放细胞因子[1]方面具重要作用。CD44std还是透明质酸的受体[1]。业已证明透明质酸在炎性反应、血管生成等方面亦具重要作用[4]。我们的结果显示银屑病患者PBMC中CD44阳性率显著增高，且与病情有关，提示PBMC CD44分子异常可能与银屑病患者淋巴细胞浸润、细胞因子异常、血管发生(angiogenesis)等有关。
, 百拇医药
CD54由90 000～114 000单链糖蛋白组成，属免疫球蛋白基因超家族成员。CD54为淋巴细胞功能相关抗原-1(lymphocyte funtion-associated antigen-1, LFA-1)的配基[5]。CD54分子与白细胞通过EC到达炎性部位有关[5]。正常情况下，淋巴细胞不表达或少量表达CD54。炎性介质如白介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)可诱导CD54的表达[5]。Schopf[5]等的研究结果显示银屑病患者血浆可溶性CD54分子明显增高，且与病情有关。Cai等[6]认为银屑病的炎性反应与淋巴细胞和EC的功能失调密切相关。我们的结果显示银屑病患者PBMC中CD44及CD54阳性细胞明显增多，提示粘附分子的改变可能是银屑病患者淋巴细胞功能失调的一个重要方面。 参 考 文 献
1 Baum HP, Schmid T, Schock G, et al. Expression of CD44 isoforms in basal cell carcinomas. Br J Dermatol, 1996,134∶465-468.
, 百拇医药
2 Oppenheimer-Marks N, Davis LS, Lipsky PE. Human T lymphocyte adhesion to endothelial cell and transendothelial migration: alteration of receptor use relates to the activation status of both the T cell and the endothelial cell. J Immunol, 1990,145∶140-148.
3 Osada A, Nakashima H, Furue M, et al. Up-regulation of CD44 expression by tumor necrosis factor-α is neutralized by interleukin-10 in Langerhans cells. J Invest Dermatol, 1995,105∶124-127.
, 百拇医药
4 金顺钱, 张伟综述. 细胞表面糖蛋白CD44研究进展. 国外医学免疫学分册, 1994,17∶85-89.
5 Schopf RE, Neumann S, Rehder M, et al. Soluble intercellular adhesion molecule-1 levels in patients with psoriasis. Br J Dermatol, 1993,128∶34-37.
6 Cai JP, Harris K, Falanga V, et al. UVB therapy decrease the adhesive interaction between peripheral blood mononuclear cells and dermal microvascular endothelium, and regulates the differential expression of CD54, VCAM-1, and E-selectin in psoriatic plaques. Br J Dermatol, 1996,134∶7-16.
(收稿：1997-02-04 修回：1997-10-16), 百拇医药