银屑病角朊细胞Fas、Ice、Bax及bcl-2基因的表达
作者：刘元林 王发友 张晓东 徐文 王刚
单位：100037 北京，海军总医院皮肤科
关键词：
中华皮肤科杂志980215.htm 凋亡(apoptosis)或程序化细胞死亡(programmed cell death)是一种不同于坏死且受基因控制的主动性自我消亡过程。迄今，细胞凋亡系统在银屑病发病机理中的作用国内外尚无定论。我们采用免疫组化及图像分析技术研究促凋亡基因(Fas、Ice、Bax)及抗凋亡基因(bcl-2)在银屑病角朊细胞中的表达，以进一步探讨银屑病的发病机理。
一、资料和方法
病例：15例银屑病及5例正常成人皮肤取自本科及美容科。组织块均常规石蜡包埋、切片，HE染色并经病理证实。
, http://www.100md.com
试剂及染色方法：促凋亡基因Fas、Ice、Bax及抗凋亡基因bcl-2之多克隆或单克隆抗体均购自Santa Cruz公司。ABC染色参照Vector Lab说明并稍加改进进行，一抗1∶100稀释，ABC显色，设正常人皮肤及PBS替代一抗对照染色。抗体标记率以每份切片5个高倍视野下同类细胞中阳性细胞的百分率计算。
定量图像分析：采用德国SIS图像分析系统，选择免疫组化染色切片，在100倍显微视野下尽可能选择具有代表性的完整表皮全层照象。然后在一定的阈值下分割抗体阳性细胞，进行如下测量：①阳性细胞数密度(个/μm2)，②面积密度(μm2/μm2)(阳性细胞面积之和/被观测之总面积)。
统计学处理：计量资料以
±s表示，并进行t检验。
, 百拇医药 三、结果
凋亡基因抗体染色阳性细胞的染色及分布特征：正常表皮角朊细胞：Fas、Ice基本上不着色，Bax轻度着色，bcl-2也呈轻度着色；阳性细胞散在于基底细胞或棘细胞层。银屑病角朊细胞：Fas、Ice除在少数病例(3/15)轻度着色外，其余病例基本不表达；Bax呈中度着色，bcl-2重度着色；阳性物质分布于核膜、胞浆或细胞膜，阳性细胞分布于表皮全层，以棘细胞层为著。
2.Bax及bcl-2阳性细胞的标记率：由表1可见银屑病组Bax、bcl-2阳性表达均显著高于正常人对照组(P<0.01)。
3.Bax及bcl-2标记的定量图像分析：表2中各项测量均值显示银屑病组较正常人对照组显著增高(P均<0.01)。
四、讨论
本研究发现正常人角朊细胞Fas、Ice不表达，Bax及bcl-2轻度表达；银屑病角
, http://www.100md.com
表1 银屑病患者皮损Bax及bcl-2抗体平均阳性标记率(±s，%) 组织类型
例数
Bax
bcl-2
银 屑 病
15
38.42±6.18
86.40±4.2
正常人对照
5
10.61±4.32
, 百拇医药
28.12±6.20
t值
-
9.26
23.91
P值
-
<0.01
<0.01
表2 银屑病患者皮损Bax及bcl-2标记定量图像分析结果(±s)
组别类型
, http://www.100md.com
例数
Bax
bcl-2
数密度(×10-2/μm2)
面积密度(×10-2μm2/μm2)
数密度(×10-2/μm2)
面积密度(×10-2μm2/μm2)
银 屑 病
15
, http://www.100md.com
0.18±0.06
5.42±1.24
0.41±0.02
9.16±0.78
正常人对照
5
0.05±0.01
0.92±0.12
0.06±0.02
3.36±0.32
t值
-
, http://www.100md.com
4.74
7.96
10.73
16.11
P值
-
<0.01
<0.01
<0.01
<0.01
海军重点课题基金资助(海军后勤部司令部953316)朊细胞Fas、Ice除在少数病例(3/15)表达外，其余病例基本上无表达；Bax呈中度表达，bcl-2重度表达。定量分析表明银屑病角朊细胞Bax及bcl-2表达较正常对照组显著增高。Korsmeyer[1，2]假定“bcl-2—Bax对”构成了细胞内的微调变阻器(preset rheostat within cells)，bcl-2/Bax比率决定细胞是接受或拒绝其接到的死亡命令。若一个细胞内bcl-2蛋白占优势，它结合掉所有的Bax，余下的bcl-2相互结成“bcl-2—bcl-2对”，由此细胞就得以生存，反之，细胞则死亡。在发育过程中，当细胞需要通过凋亡予以清除时，bcl-2/Bax比率应降低[2，3]。在本研究中，银屑病角朊细胞过度表达bcl-2蛋白，由于bcl-2蛋白的生物学功能为拮抗细胞凋亡，延长细胞寿命，进而影响其某些功能活动。故bcl-2这种过度表达可能提示通过抑制涉及表皮角朊细胞最终分化程序的正常凋亡，以致延长银屑病表皮角朊细胞的寿命。有关银屑病先前的研究主要集中在角朊细胞各种有丝分裂原如α-转化生长因子与表皮生长因子受体等，以解释银屑病表皮增厚[4，5]。而从本文结果可产生另一个推论：bcl-2过度表达潜在性地促进了另一种细胞分化途径，导致表皮增厚。
, 百拇医药
参 考 文 献
1 Hockenbery, Zaztter M, Hickey W, et al. Bcl-2 protein is topographically restricted in tissue characterized by apoptotic cell death. Proc Natl Acad Sci USA, 1991,88∶6961-6965.
2 Barinage M. Cell suicide: by ice, not fire. Science, 1994,263∶754-756.
3 Wrone-Smith T, Johnson T, Nelson B, et al. Discordant expression of bcl-x and bcl-2 by keratinocytes in vitro and psoriasic keratinocytes in vivo. Am J Pathol, 1995,146∶1079-1088.
4 Nagata S, Golstein P. The Fas death factor. Science, 1995,267∶1449.
5 Nickoloff BJ. The cytokine network in psoriasis. Arch Dermatol, 1991,127∶871-884.
(收稿：1997-06-16 修回：1997-09-30), http://www.100md.com
单位：100037 北京，海军总医院皮肤科
关键词：
中华皮肤科杂志980215.htm 凋亡(apoptosis)或程序化细胞死亡(programmed cell death)是一种不同于坏死且受基因控制的主动性自我消亡过程。迄今，细胞凋亡系统在银屑病发病机理中的作用国内外尚无定论。我们采用免疫组化及图像分析技术研究促凋亡基因(Fas、Ice、Bax)及抗凋亡基因(bcl-2)在银屑病角朊细胞中的表达，以进一步探讨银屑病的发病机理。
一、资料和方法
病例：15例银屑病及5例正常成人皮肤取自本科及美容科。组织块均常规石蜡包埋、切片，HE染色并经病理证实。
, http://www.100md.com
试剂及染色方法：促凋亡基因Fas、Ice、Bax及抗凋亡基因bcl-2之多克隆或单克隆抗体均购自Santa Cruz公司。ABC染色参照Vector Lab说明并稍加改进进行，一抗1∶100稀释，ABC显色，设正常人皮肤及PBS替代一抗对照染色。抗体标记率以每份切片5个高倍视野下同类细胞中阳性细胞的百分率计算。
定量图像分析：采用德国SIS图像分析系统，选择免疫组化染色切片，在100倍显微视野下尽可能选择具有代表性的完整表皮全层照象。然后在一定的阈值下分割抗体阳性细胞，进行如下测量：①阳性细胞数密度(个/μm2)，②面积密度(μm2/μm2)(阳性细胞面积之和/被观测之总面积)。
统计学处理：计量资料以
±s表示，并进行t检验。, 百拇医药 三、结果
凋亡基因抗体染色阳性细胞的染色及分布特征：正常表皮角朊细胞：Fas、Ice基本上不着色，Bax轻度着色，bcl-2也呈轻度着色；阳性细胞散在于基底细胞或棘细胞层。银屑病角朊细胞：Fas、Ice除在少数病例(3/15)轻度着色外，其余病例基本不表达；Bax呈中度着色，bcl-2重度着色；阳性物质分布于核膜、胞浆或细胞膜，阳性细胞分布于表皮全层，以棘细胞层为著。
2.Bax及bcl-2阳性细胞的标记率：由表1可见银屑病组Bax、bcl-2阳性表达均显著高于正常人对照组(P<0.01)。
3.Bax及bcl-2标记的定量图像分析：表2中各项测量均值显示银屑病组较正常人对照组显著增高(P均<0.01)。
四、讨论
本研究发现正常人角朊细胞Fas、Ice不表达，Bax及bcl-2轻度表达；银屑病角
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表1 银屑病患者皮损Bax及bcl-2抗体平均阳性标记率(
±s，%) 组织类型例数
Bax
bcl-2
银 屑 病
15
38.42±6.18
86.40±4.2
正常人对照
5
10.61±4.32
, 百拇医药
28.12±6.20
t值
-
9.26
23.91
P值
-
<0.01
<0.01
表2 银屑病患者皮损Bax及bcl-2标记定量图像分析结果(
±s)组别类型
, http://www.100md.com
例数
Bax
bcl-2
数密度(×10-2/μm2)
面积密度(×10-2μm2/μm2)
数密度(×10-2/μm2)
面积密度(×10-2μm2/μm2)
银 屑 病
15
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0.18±0.06
5.42±1.24
0.41±0.02
9.16±0.78
正常人对照
5
0.05±0.01
0.92±0.12
0.06±0.02
3.36±0.32
t值
-
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4.74
7.96
10.73
16.11
P值
-
<0.01
<0.01
<0.01
<0.01
海军重点课题基金资助(海军后勤部司令部953316)朊细胞Fas、Ice除在少数病例(3/15)表达外，其余病例基本上无表达；Bax呈中度表达，bcl-2重度表达。定量分析表明银屑病角朊细胞Bax及bcl-2表达较正常对照组显著增高。Korsmeyer[1，2]假定“bcl-2—Bax对”构成了细胞内的微调变阻器(preset rheostat within cells)，bcl-2/Bax比率决定细胞是接受或拒绝其接到的死亡命令。若一个细胞内bcl-2蛋白占优势，它结合掉所有的Bax，余下的bcl-2相互结成“bcl-2—bcl-2对”，由此细胞就得以生存，反之，细胞则死亡。在发育过程中，当细胞需要通过凋亡予以清除时，bcl-2/Bax比率应降低[2，3]。在本研究中，银屑病角朊细胞过度表达bcl-2蛋白，由于bcl-2蛋白的生物学功能为拮抗细胞凋亡，延长细胞寿命，进而影响其某些功能活动。故bcl-2这种过度表达可能提示通过抑制涉及表皮角朊细胞最终分化程序的正常凋亡，以致延长银屑病表皮角朊细胞的寿命。有关银屑病先前的研究主要集中在角朊细胞各种有丝分裂原如α-转化生长因子与表皮生长因子受体等，以解释银屑病表皮增厚[4，5]。而从本文结果可产生另一个推论：bcl-2过度表达潜在性地促进了另一种细胞分化途径，导致表皮增厚。
, 百拇医药
参 考 文 献
1 Hockenbery, Zaztter M, Hickey W, et al. Bcl-2 protein is topographically restricted in tissue characterized by apoptotic cell death. Proc Natl Acad Sci USA, 1991,88∶6961-6965.
2 Barinage M. Cell suicide: by ice, not fire. Science, 1994,263∶754-756.
3 Wrone-Smith T, Johnson T, Nelson B, et al. Discordant expression of bcl-x and bcl-2 by keratinocytes in vitro and psoriasic keratinocytes in vivo. Am J Pathol, 1995,146∶1079-1088.
4 Nagata S, Golstein P. The Fas death factor. Science, 1995,267∶1449.
5 Nickoloff BJ. The cytokine network in psoriasis. Arch Dermatol, 1991,127∶871-884.
(收稿：1997-06-16 修回：1997-09-30), http://www.100md.com