用聚合酶链反应检测CO2激光治疗尖锐湿疣烟雾中的HPV DNA
作者：吴原 戴利成 宋颖沈翠芬
单位：313000 浙江省湖州市第二医院皮肤科(吴原 宋颖)，PCR室(戴利成 沈翠芬)
关键词：
中国皮肤科杂志980321 CO2激光作为治疗尖锐湿疣的有效手段被广泛应用，但我们在临床中发现少数患者治疗后出现尖锐湿疣复发。因此，我们自1997年1～4月收集了CO2激光治疗尖 锐湿疣的烟雾标本，用PCR方法进行HPV DNA的检测，现报道如下。
一、材料和方法
(一)标本来源：20例均为具有典型皮损，临床确诊为尖锐湿疣的门诊患者。其分布部位为冠 状沟、包皮、阴茎、大小阴唇。
(二)标本的收集和贮存：治疗前后用短波紫外线对操作周围进行照射消毒。将CO2激光调 至10W左右，激光枪与垂直线呈10°～20°角，使飞溅的烟雾能不受阻挡垂直上升。同时在疣体上方2cm处，用生理盐水浸润的消毒棉签熏蒸，时间尽可能长，使棉签呈焦黄色，不可碰触疣体及激光头，否则将其删除。之后将棉签放入消毒试管中，-4℃冷藏待测。
(三)PCR：采用军事医学科学院放射医学研究所生产的PCR诊断试验盒，内含HPV6、11DNA引物，具体步骤如下。将标本充分溶于0.5ml离心管中，加200μl生理盐水混匀，8 000r/min离心5分钟，弃上清液，加50μl裂解液，55℃ 1小时后，100℃煮沸10分钟，15000 r/min离心10分钟，取上清液5μl作为HPV DNA模板，加入PCR混合物15μl，裂解液0.2μl ，石蜡油20μl混合，按下列条件进行PCR扩增。变性94℃、60秒；退火50℃、60秒；延伸72 ℃、60秒；循环次数35次。取PCR扩增溶液10μl直接上样于1.5%琼脂糖凝胶进行电泳，在紫外灯光下观察有450bp的橙色荧光带者即为阳性。同时对试验盒内阴阳性对照标本进行同样处理。
二、结果
20份烟雾标本中有1份阳性。并将阳性标本送浙江医科大学重复检测，证实确为阳性。在PCR 检测中，试验盒中对照标本均相应显示。
三、讨论
Carden等[1]证实CO2激光烟雾中有存活的HPV。少量CO2 激光烟雾中存在HPV的原因主要有：①疣体突出部分较疏松，大功率CO2激光照射时，其 光压易使疣组织向四周飞溅。②由于CO2激光使组织气化时，形成微型爆炸，当其发生在突出的疣体侧缘时，易使上端较疏松的疣组织向四周播散。顾恒等[2]对21例尖锐湿疣CO2激光烟尘中的HPV进行PCR测定，均为阴性。而我们检测了20例，有1例HPV6、11型DNA阳性。产生两者差异的原因可能为观察例数较少，而出现概 率上的差异。
参考文献
1 Garden JM, O′Banion MK, Shelnitz LS, et al. Papillomavi rus in the vapor of carbon dioxide laser-treated verrucae. JAMA, 1988,259∶1199 -1202.
2 顾恒, 常宝珠, 陈, 等. CO2激光治疗尖锐湿疣烟尘中HPV DNA的检测. 中华 皮肤科杂志, 1997,30∶175-177., 百拇医药
单位：313000 浙江省湖州市第二医院皮肤科(吴原 宋颖)，PCR室(戴利成 沈翠芬)
关键词：
中国皮肤科杂志980321 CO2激光作为治疗尖锐湿疣的有效手段被广泛应用，但我们在临床中发现少数患者治疗后出现尖锐湿疣复发。因此，我们自1997年1～4月收集了CO2激光治疗尖 锐湿疣的烟雾标本，用PCR方法进行HPV DNA的检测，现报道如下。
一、材料和方法
(一)标本来源：20例均为具有典型皮损，临床确诊为尖锐湿疣的门诊患者。其分布部位为冠 状沟、包皮、阴茎、大小阴唇。
(二)标本的收集和贮存：治疗前后用短波紫外线对操作周围进行照射消毒。将CO2激光调 至10W左右，激光枪与垂直线呈10°～20°角，使飞溅的烟雾能不受阻挡垂直上升。同时在疣体上方2cm处，用生理盐水浸润的消毒棉签熏蒸，时间尽可能长，使棉签呈焦黄色，不可碰触疣体及激光头，否则将其删除。之后将棉签放入消毒试管中，-4℃冷藏待测。
(三)PCR：采用军事医学科学院放射医学研究所生产的PCR诊断试验盒，内含HPV6、11DNA引物，具体步骤如下。将标本充分溶于0.5ml离心管中，加200μl生理盐水混匀，8 000r/min离心5分钟，弃上清液，加50μl裂解液，55℃ 1小时后，100℃煮沸10分钟，15000 r/min离心10分钟，取上清液5μl作为HPV DNA模板，加入PCR混合物15μl，裂解液0.2μl ，石蜡油20μl混合，按下列条件进行PCR扩增。变性94℃、60秒；退火50℃、60秒；延伸72 ℃、60秒；循环次数35次。取PCR扩增溶液10μl直接上样于1.5%琼脂糖凝胶进行电泳，在紫外灯光下观察有450bp的橙色荧光带者即为阳性。同时对试验盒内阴阳性对照标本进行同样处理。
二、结果
20份烟雾标本中有1份阳性。并将阳性标本送浙江医科大学重复检测，证实确为阳性。在PCR 检测中，试验盒中对照标本均相应显示。
三、讨论
Carden等[1]证实CO2激光烟雾中有存活的HPV。少量CO2 激光烟雾中存在HPV的原因主要有：①疣体突出部分较疏松，大功率CO2激光照射时，其 光压易使疣组织向四周飞溅。②由于CO2激光使组织气化时，形成微型爆炸，当其发生在突出的疣体侧缘时，易使上端较疏松的疣组织向四周播散。顾恒等[2]对21例尖锐湿疣CO2激光烟尘中的HPV进行PCR测定，均为阴性。而我们检测了20例，有1例HPV6、11型DNA阳性。产生两者差异的原因可能为观察例数较少，而出现概 率上的差异。
参考文献
1 Garden JM, O′Banion MK, Shelnitz LS, et al. Papillomavi rus in the vapor of carbon dioxide laser-treated verrucae. JAMA, 1988,259∶1199 -1202.
2 顾恒, 常宝珠, 陈, 等. CO2激光治疗尖锐湿疣烟尘中HPV DNA的检测. 中华 皮肤科杂志, 1997,30∶175-177., 百拇医药