172株解脲支原体的血清学分型研究
作者：王荷英 施美琴 叶顺章 王红春 孙厚华 戴秀琴
单位：210042 南京，中国医学科学院 中国协和医科大学皮肤病研究所
关键词：尿素支原体；尿素分解；血清分型
中华皮肤科杂志/980406 【摘要】 目的 为了探讨解脲支原体(Uu)不同血清型与致病性关系。方法 对来自STD门诊的172株Uu作了1～14型血清学分型。Uu株经纯化后，应用代谢抑制试验判定。结果 可分型Uu株达到100%，属单一型有150株(87.2%)，混合型占22株(12.8%)。出现频率高的血清型依次为：4型31株(15.4%)，1型31株(15.4%)，3型24株(11.9%)，8型20株(10%)，14型18株(9%)，6型16株(8%)，其他血清型较少(占3%～6.5%)，未见7型Uu株。结果显示，血清型与性别无关(P>0.05)，但非淋菌性尿道炎患者3型Uu株女性多于男性(P<0.05)。172株中102株Uu系由非淋菌性尿道炎患者的标本中分离出，单一型占90株(88.2%)，混合型占12株(11.8%)。出现频率高的血清型为4、1和8型，各占10%以上。其中以4型为最高，占25株(21.6%)。结论 4型与非淋菌性尿道炎发生呈显著相关。作者认为，Uu株3型在宿主因素和一定的环境条件下，寄居和致病状态可相互转化。
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Study on Serotypes of 172 Strains of Ureaplasmaurealyticum Wang Heying, Shi Meiqin, Ye Shunzhang, et al. Institute of Dermatology,Chinese Academy of Medical Sciences, Peking Union Medical College, Nanjing 210042
【Abstract】 Objective To study the relationship between different serotypes of Ureaplasma urealyticum and their pathogenesis. Methods 172 strains of Ureaplasma urealyticum were isolated from specimens of STDclinic patients, and pure cultures were serotyped by metabolic inhibition test. Results The results showed that all of the strains could be typed, in which, 150 strains (87.2%) attributed to a single type and 22 strains (12.8%) mixed serotypes. Serotypes frequentlyfound were as follows: serotype 4 and 1 (both 31 strains,15.4%), serotype 3 (24 strains,11.9%), serotype 8 (20 strains,10%), serotype 14 (18 strains,9%), serotype 6 (16 strains,8%). Other serotypes were uncommen (3%～6.5%), serotype 7 was not found. No association was found between serotype and sex (P>0.05), except serotype 3 from NGU patients, which was more commonly found in women than in men (P<0.05). Of 172 strains, 102 were isolated from NGU patients. Ninety strains (88.2%) were attributed to a single serotype, and 12 strains (11.8%) mixed serotypes. Serotypes 4,1,and 8 were found frequently (>10%, respectively). Conclusion Serotype 4 was the one most frequently found and strongly related with NGU. It is suggestedthat the transformation from colonization to pathogenetic status be possible forserotype 3 under the influence of host and a certain environmental condition.
, 百拇医药
【Key words】 Ureaplasma urealyticum Serotyping
解脲支原体能引起人类泌尿生殖道的一系列疾病，尤其是与非淋菌性尿道炎(NGU)的发生有密切关系。但是，从部分正常人中也能培养分离出Uu，提示Uu的致病性与宿主因素以及Uu的不同血清型可能有关。因此，探讨Uu不同血清型与致病性关系对STD防治工作具有重要的理论和实践意义。172株Uu，经纯化后，应用代谢抑制试验(MIT)作了Uu 1～14血清型的分型研究，并对Uu血清型与致病性关系作了初步分析，现报道如下。
材料和方法
一、Uu标准株及抗血清来源
Uu国际标准株1～14血清型来自北京儿科研究所，经传代后置-70℃以下冰箱中冻存。1～14型相应抗血清由南京铁道医学院赵季文教授馈赠。
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二、Uu临床株来源及临床资料
172株Uu均来自我所STD门诊，由尿道(宫颈)分泌物培养分离出，经纯化置-70℃以下冰箱中冻存。172例患者中有102例NGU患者，其中男62例(60.8%)，女40例(39.2%)。年龄22～50岁，平均26.8岁。病期数天至3年不等。对NGU诊断系根据患者临床表现和实验室检查结果而定[1]。
三、Uu血清学分型试验
(一)抗血清滴度测定和待分型株处理：为了使制备的抗血清在MIT分型试验中达到最佳稀释浓度，首先测定了抗血清滴度，即用MIT法获取同相应的1～14血清型标准Uu株发生阳性反应的抗血清最适稀释度。分型试验前，取出待分型临床株，复苏后传代2～3次，再作CCU(颜色改变单位)测定。支原体数量需达到106，再用液体培养基稀释成103悬液后，用于MIT实验。
, 百拇医药
(二)分型试验：采用试管法。取103 Uu临床株悬液，分别加入等量1～14血清型抗血清稀释液，混匀后置37℃温箱中培养。设阳性及阴性对照。时常观察颜色改变情况。当阳性对照管出现了颜色改变(培养基颜色由黄变为红色)，即可判定分型结果。不发生颜色改变的试管(Uu生长被抑制)，应定为Uu的血清型。
结 果
(一)172株Uu血清型分布状况：结果表明，Uu株为单一型的有150株(占87.2%)，混合型为22株(占12.8%)。血清学分型结果为：1型31株(15.4%)，2型6株(3.0%)，3型24株(11.9%)，4型31株(15.4%)，5型8株(4.0%)，6型16株(8.0%)，8型20株(9.9%)，9型9株(4.5%)，10型13株(6.5%)，11型11株(5.5%)，12型8株(4.0%)，13型6株(3.0%)，14型18株(8.9%)。单一型出现频率高的型别为4、1、3、8、14型。Uu株属2个型19株(占混合型总数的86.4%)，属3个型2株(占9.1%)，4个型为1株(4.5%)。在混合型中，未见出现高频率型别。在172株Uu血清学分型中，未出现7型。
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(二)102例NGU患者，其Uu株分型结果如下(包括混合型数据)：单一型有90株(占88.2%)，2个以上混合型有12株(占11.8%)，血清型出现频率高的型别为4、1、8、3、14型5个血清型，按顺序如下：4型25株(21.6%)，1型17株(14.7%)，8型15株(12.9%)，3型11株(9.5%)，14型10株(8.6%)，2型3株(2.6%)，5型4株(3.4%)，6型9株(7.8%)，7型0株，9型6株(5.2%)，10型6株(5.2%)，11型4株(3.4%)，12型4株(3.4%)，13型2株(1.7%)。在混合型中，属2个型有11株Uu。属4个型为1株。未见混合型中出现高频率型别。分型结果表明，Uu血清型与性别无关(P>0.05)，但是在NGU患者中，3型Uu株女性高于男性(P<0.05)。
讨 论
在血清学分型试验中，认为用MIT作Uu株定型方法可靠，且特异性好、敏感性高。据报道，采用14个血清型抗血清分型，可鉴定95%Uu株型别。在本研究中，可分型Uu株已达到100%，其中单一型Uu株为87.2%(150/172)。实验稳定，重复性好。
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172株Uu，血清分布以4、1、3、8、14型频率较高。血清型占比例最高的是4型和1型，各占定型总数15.4%，这与国内外的报道基本一致。有些学者认为，3型主要以寄居状态存在，但是本研究表明，在STD人群中，172株Uu中3型所占比例较高，仅次于4型和1型，占第2位，提示Uu3型也可以成为致病原。或者3型是在宿主因素和一定的环境条件下，由寄居状态转化为具有致病特点的Uu株；也有可能在上述因素发生改变时，又由致病状态转化成寄居。据Naessens等[2]报道，在207例正常怀孕妇女和患有合并症怀孕妇女中分离出的240株Uu的研究结果表明，3型比例最高(52.2%)，但3型在各组中的分布相似。Cracea[3]在不孕症和尿道炎的分型研究中指出，不能认为3型无传染性。据报道[4]，在卖淫妇女和STD门诊患者中分离出Uu阳性率分别为40.9%(36/88)及22.3%(41/184)。用聚合酶链反应(PCR)按产生特异扩增条带作分群，第一群包括1、3、6和14血清型，第二群包括其余10个血清型。结果表明有96.0%属于第一群，属第二群仅占4%，这与本研究结果第二群占多数不一致。尤其是4型、8型明显高于其他型别。据报道，2型和5型有共同抗原成分，在本研究中未发现2型和5型同时出现情况。
, 百拇医药
在102例NGU病例中，单一型占90株(88.2%)，而以4型Uu株占首位(占21.6%)，其次是1型(14.7%)，8型(12.9%)，3型(9.5%)和14型(8.6%)。已有许多报道认为4型与人类疾病关系密切[3，5，6]，与NGU发生呈显著相关。在本研究中未见7型Uu株，这与Hewish等[7]对124例泌尿道患者分离出Uu株的分型结果一致。
Uu的致病可能与不同型别或宿主方面的因素等有关，因此对Uu进行分型研究，了解其型别与致病性关系很有必要。研究人类泌尿生殖道中最常见支原体的寄居和致病的关系，对进一步做好性病防治工作具有重要意义。
参 考 文 献
1 卫生部防疫司. 性病防治手册. 第2版. 南京: 江苏科学技术出版社, 1994.45-54.
2 Naessens A, Foulon W, Breynaert J, et al. Serotypes of Ureaplasma urealyticum isolated from normal pregnant women and patients with pregnancy complications. J Clin Microbiol, 1988,26∶319-322.
, 百拇医药
3 Cracea E. Serotypes of Ureaplasma urealyticum isolatedfrom patients with nongonococcal urethritis and gonorrhea and from asymptomatic urethral carriers. Sex Transm Dis, 1985,12∶219-223.
4 孔繁荣, 朱学骏, 张耕耘, 等. 解脲脲原体为一具有广泛异质性的群体. 中华流行病学杂志, 1995,16∶42-44.
5 闫国富综述. 解脲支原体感染的血清学研究现状. 国外医学皮肤病学分册, 1994,20∶199-202.
6 Naessens A, Lauwers S. Modified indirect immunofluore scence test for serotyping large numbers of Ureaplasma urealyticum clinical isolates. J Clin Microbiol, 1987,25∶191-192.
7 Hewish M J, Birch DF, Fairley KF. Ureaplasma urealyticum serotypes in urinary tract disease. J Clin Microbiol, 1986,23∶149-154.
中国医学科学院、中国协和医科大学科研基金资助课题
(收稿：1997-11-21 修回：1998-02-25), 百拇医药
单位：210042 南京，中国医学科学院 中国协和医科大学皮肤病研究所
关键词：尿素支原体；尿素分解；血清分型
中华皮肤科杂志/980406 【摘要】 目的 为了探讨解脲支原体(Uu)不同血清型与致病性关系。方法 对来自STD门诊的172株Uu作了1～14型血清学分型。Uu株经纯化后，应用代谢抑制试验判定。结果 可分型Uu株达到100%，属单一型有150株(87.2%)，混合型占22株(12.8%)。出现频率高的血清型依次为：4型31株(15.4%)，1型31株(15.4%)，3型24株(11.9%)，8型20株(10%)，14型18株(9%)，6型16株(8%)，其他血清型较少(占3%～6.5%)，未见7型Uu株。结果显示，血清型与性别无关(P>0.05)，但非淋菌性尿道炎患者3型Uu株女性多于男性(P<0.05)。172株中102株Uu系由非淋菌性尿道炎患者的标本中分离出，单一型占90株(88.2%)，混合型占12株(11.8%)。出现频率高的血清型为4、1和8型，各占10%以上。其中以4型为最高，占25株(21.6%)。结论 4型与非淋菌性尿道炎发生呈显著相关。作者认为，Uu株3型在宿主因素和一定的环境条件下，寄居和致病状态可相互转化。
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Study on Serotypes of 172 Strains of Ureaplasmaurealyticum Wang Heying, Shi Meiqin, Ye Shunzhang, et al. Institute of Dermatology,Chinese Academy of Medical Sciences, Peking Union Medical College, Nanjing 210042
【Abstract】 Objective To study the relationship between different serotypes of Ureaplasma urealyticum and their pathogenesis. Methods 172 strains of Ureaplasma urealyticum were isolated from specimens of STDclinic patients, and pure cultures were serotyped by metabolic inhibition test. Results The results showed that all of the strains could be typed, in which, 150 strains (87.2%) attributed to a single type and 22 strains (12.8%) mixed serotypes. Serotypes frequentlyfound were as follows: serotype 4 and 1 (both 31 strains,15.4%), serotype 3 (24 strains,11.9%), serotype 8 (20 strains,10%), serotype 14 (18 strains,9%), serotype 6 (16 strains,8%). Other serotypes were uncommen (3%～6.5%), serotype 7 was not found. No association was found between serotype and sex (P>0.05), except serotype 3 from NGU patients, which was more commonly found in women than in men (P<0.05). Of 172 strains, 102 were isolated from NGU patients. Ninety strains (88.2%) were attributed to a single serotype, and 12 strains (11.8%) mixed serotypes. Serotypes 4,1,and 8 were found frequently (>10%, respectively). Conclusion Serotype 4 was the one most frequently found and strongly related with NGU. It is suggestedthat the transformation from colonization to pathogenetic status be possible forserotype 3 under the influence of host and a certain environmental condition.
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【Key words】 Ureaplasma urealyticum Serotyping
解脲支原体能引起人类泌尿生殖道的一系列疾病，尤其是与非淋菌性尿道炎(NGU)的发生有密切关系。但是，从部分正常人中也能培养分离出Uu，提示Uu的致病性与宿主因素以及Uu的不同血清型可能有关。因此，探讨Uu不同血清型与致病性关系对STD防治工作具有重要的理论和实践意义。172株Uu，经纯化后，应用代谢抑制试验(MIT)作了Uu 1～14血清型的分型研究，并对Uu血清型与致病性关系作了初步分析，现报道如下。
材料和方法
一、Uu标准株及抗血清来源
Uu国际标准株1～14血清型来自北京儿科研究所，经传代后置-70℃以下冰箱中冻存。1～14型相应抗血清由南京铁道医学院赵季文教授馈赠。
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二、Uu临床株来源及临床资料
172株Uu均来自我所STD门诊，由尿道(宫颈)分泌物培养分离出，经纯化置-70℃以下冰箱中冻存。172例患者中有102例NGU患者，其中男62例(60.8%)，女40例(39.2%)。年龄22～50岁，平均26.8岁。病期数天至3年不等。对NGU诊断系根据患者临床表现和实验室检查结果而定[1]。
三、Uu血清学分型试验
(一)抗血清滴度测定和待分型株处理：为了使制备的抗血清在MIT分型试验中达到最佳稀释浓度，首先测定了抗血清滴度，即用MIT法获取同相应的1～14血清型标准Uu株发生阳性反应的抗血清最适稀释度。分型试验前，取出待分型临床株，复苏后传代2～3次，再作CCU(颜色改变单位)测定。支原体数量需达到106，再用液体培养基稀释成103悬液后，用于MIT实验。
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(二)分型试验：采用试管法。取103 Uu临床株悬液，分别加入等量1～14血清型抗血清稀释液，混匀后置37℃温箱中培养。设阳性及阴性对照。时常观察颜色改变情况。当阳性对照管出现了颜色改变(培养基颜色由黄变为红色)，即可判定分型结果。不发生颜色改变的试管(Uu生长被抑制)，应定为Uu的血清型。
结 果
(一)172株Uu血清型分布状况：结果表明，Uu株为单一型的有150株(占87.2%)，混合型为22株(占12.8%)。血清学分型结果为：1型31株(15.4%)，2型6株(3.0%)，3型24株(11.9%)，4型31株(15.4%)，5型8株(4.0%)，6型16株(8.0%)，8型20株(9.9%)，9型9株(4.5%)，10型13株(6.5%)，11型11株(5.5%)，12型8株(4.0%)，13型6株(3.0%)，14型18株(8.9%)。单一型出现频率高的型别为4、1、3、8、14型。Uu株属2个型19株(占混合型总数的86.4%)，属3个型2株(占9.1%)，4个型为1株(4.5%)。在混合型中，未见出现高频率型别。在172株Uu血清学分型中，未出现7型。
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(二)102例NGU患者，其Uu株分型结果如下(包括混合型数据)：单一型有90株(占88.2%)，2个以上混合型有12株(占11.8%)，血清型出现频率高的型别为4、1、8、3、14型5个血清型，按顺序如下：4型25株(21.6%)，1型17株(14.7%)，8型15株(12.9%)，3型11株(9.5%)，14型10株(8.6%)，2型3株(2.6%)，5型4株(3.4%)，6型9株(7.8%)，7型0株，9型6株(5.2%)，10型6株(5.2%)，11型4株(3.4%)，12型4株(3.4%)，13型2株(1.7%)。在混合型中，属2个型有11株Uu。属4个型为1株。未见混合型中出现高频率型别。分型结果表明，Uu血清型与性别无关(P>0.05)，但是在NGU患者中，3型Uu株女性高于男性(P<0.05)。
讨 论
在血清学分型试验中，认为用MIT作Uu株定型方法可靠，且特异性好、敏感性高。据报道，采用14个血清型抗血清分型，可鉴定95%Uu株型别。在本研究中，可分型Uu株已达到100%，其中单一型Uu株为87.2%(150/172)。实验稳定，重复性好。
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172株Uu，血清分布以4、1、3、8、14型频率较高。血清型占比例最高的是4型和1型，各占定型总数15.4%，这与国内外的报道基本一致。有些学者认为，3型主要以寄居状态存在，但是本研究表明，在STD人群中，172株Uu中3型所占比例较高，仅次于4型和1型，占第2位，提示Uu3型也可以成为致病原。或者3型是在宿主因素和一定的环境条件下，由寄居状态转化为具有致病特点的Uu株；也有可能在上述因素发生改变时，又由致病状态转化成寄居。据Naessens等[2]报道，在207例正常怀孕妇女和患有合并症怀孕妇女中分离出的240株Uu的研究结果表明，3型比例最高(52.2%)，但3型在各组中的分布相似。Cracea[3]在不孕症和尿道炎的分型研究中指出，不能认为3型无传染性。据报道[4]，在卖淫妇女和STD门诊患者中分离出Uu阳性率分别为40.9%(36/88)及22.3%(41/184)。用聚合酶链反应(PCR)按产生特异扩增条带作分群，第一群包括1、3、6和14血清型，第二群包括其余10个血清型。结果表明有96.0%属于第一群，属第二群仅占4%，这与本研究结果第二群占多数不一致。尤其是4型、8型明显高于其他型别。据报道，2型和5型有共同抗原成分，在本研究中未发现2型和5型同时出现情况。
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在102例NGU病例中，单一型占90株(88.2%)，而以4型Uu株占首位(占21.6%)，其次是1型(14.7%)，8型(12.9%)，3型(9.5%)和14型(8.6%)。已有许多报道认为4型与人类疾病关系密切[3，5，6]，与NGU发生呈显著相关。在本研究中未见7型Uu株，这与Hewish等[7]对124例泌尿道患者分离出Uu株的分型结果一致。
Uu的致病可能与不同型别或宿主方面的因素等有关，因此对Uu进行分型研究，了解其型别与致病性关系很有必要。研究人类泌尿生殖道中最常见支原体的寄居和致病的关系，对进一步做好性病防治工作具有重要意义。
参 考 文 献
1 卫生部防疫司. 性病防治手册. 第2版. 南京: 江苏科学技术出版社, 1994.45-54.
2 Naessens A, Foulon W, Breynaert J, et al. Serotypes of Ureaplasma urealyticum isolated from normal pregnant women and patients with pregnancy complications. J Clin Microbiol, 1988,26∶319-322.
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3 Cracea E. Serotypes of Ureaplasma urealyticum isolatedfrom patients with nongonococcal urethritis and gonorrhea and from asymptomatic urethral carriers. Sex Transm Dis, 1985,12∶219-223.
4 孔繁荣, 朱学骏, 张耕耘, 等. 解脲脲原体为一具有广泛异质性的群体. 中华流行病学杂志, 1995,16∶42-44.
5 闫国富综述. 解脲支原体感染的血清学研究现状. 国外医学皮肤病学分册, 1994,20∶199-202.
6 Naessens A, Lauwers S. Modified indirect immunofluore scence test for serotyping large numbers of Ureaplasma urealyticum clinical isolates. J Clin Microbiol, 1987,25∶191-192.
7 Hewish M J, Birch DF, Fairley KF. Ureaplasma urealyticum serotypes in urinary tract disease. J Clin Microbiol, 1986,23∶149-154.
中国医学科学院、中国协和医科大学科研基金资助课题
(收稿：1997-11-21 修回：1998-02-25), 百拇医药