当前位置: 首页 > 期刊 > 《中华皮肤科杂志》 > 2000年第3期
编号:10276075
生殖道沙眼衣原体细胞培养和血清学研究
http://www.100md.com 《中华皮肤科杂志》 2000年第3期
     作者:倪安平 沈浣 何海英 胡美兰 郭建坤 廖绍荣 盖明英 郑和义 王家璧

    单位:倪安平 何海英 盖明英 郑和义 王家璧(100730北京,中国医学科学院,中国协和医科大学北京协和医院);沈浣(北京医科大学人民医院);胡美兰(北京医科大学人民医院);廖绍荣(北京市朝阳区小庄医院);郭建坤(黑龙江省第三建筑公司中心医院)

    关键词:衣原体;沙眼培养的;细胞血清学

    中华皮肤科杂志000306

    【摘要】目的研究孕妇、盆腔炎患者和STD门诊男女就诊者生殖道沙眼衣原体病原学、血清学及两者之间的关系,并与对照人群进行比较。方法细胞培养检测生殖道沙眼衣原体;酶免疫和微量免疫荧光试验方法检测血清沙眼衣原体抗体。结果孕妇、盆腔炎患者和STD男女就诊者生殖道沙眼衣原体阳性率分别为3.3%,6.7%,20.4%和15.6%;血清沙眼衣原体酶免疫法检测IgG/微量免疫荧光试验方法IgG抗体阳性率分别46.7%/11.9%,70.2%/39.9%,73.5%/52.4%和75.4%/63.1%,统计学上均极为显著高于对照人群(孕妇组除外)。女性生殖道沙眼衣原体阳性者比阴性者统计学上具有更高的血清沙眼衣原体抗体,男性则无这种差异。8例存在沙眼衣原体急性抗体。结论应常规筛查PID患者沙眼衣原体,但尚无需筛选孕妇;女性宫颈沙眼衣原体感染与血清学具有重要的关联;血清学无助于生殖道沙眼衣原体感染的诊断。
, 百拇医药
    Detection of Genital C. trachomatis Infection by Cell Culture and Serology

    NI Anping

    (Peking Union Medical College Hospital, CAMS and PUMC, Beijing 100730)

    SHEN Huan

    (Peking Union Medical College Hospital, CAMS and PUMC, Beijing 100730)

    HE Haiying

    (Peking Union Medical College Hospital, CAMS and PUMC, Beijing 100730)
, 百拇医药
    【 Abstract】 Objectives To determine the prevalences of genital C. trachomatis and serum chlamydial antibodies in pregnant women, PID patients and the patients attending STD clinic, and to compare the chlamydial serology with control subjects. Methods Genital C. trachomatis was detected by cell culture, and serum chlamydial antibodies were measured by EIA and MIF. Results Genital C. trachomatis was found in 3.3% of pregnant women, 6.7% of PID patients, 20.4% or 15.6% of male or female patients attending STD clinic, respectively. Prevalence of chlamydial EIA- IgG/MIF- IgG antibodies was 46.7% / 11.9% in pregnant women, 70.2% /39.9% in PID patients, 73.5% /52.4% and 75.4% /63.1% in male and female STD patients, which were statistically higher than those of controls (except pregnant women). Women, rather than men, with genital C. trachomatis were more likely to have serum chlamydial antibodies than those without infection. Eight subjects were measured with acute antibodies to C. trachomatis. Conclusions There is strong relation between cervical C. trachomatis and serum chlamydial antibodies. Serum antibodies to C. trachomatis are of no help for the diagnosis of genital C. trachoamtis infections. Routine screening of C. trachomatis is needed for patients with PID but not for pregnant women.
, 百拇医药
    【 Key words】 Chlamydia trachomatis Cells, cultured Serology

    沙眼衣原体生殖道感染是最常见性传播性疾病(STD)之一[1]。沙眼衣原体还被认为是盆腔炎(PID)及其后遗症——输卵管不孕和异位妊娠的重要病因[2]。孕妇患沙眼衣原体宫颈炎,胎儿经产道分娩时可感染沙眼衣原体结膜炎和肺炎。我们对正常孕妇、PID患者和STD门诊男女就诊者者生殖道沙眼衣原体病原学、血清学及两者之间的关系进行研究,现报告如下。

    材料与方法

    一、研究人群孕妇组:1995年5~7月北京协和医院妇产科初诊孕妇210例,年龄(28.6±3.4)岁;PID组:1995年7月至1996年4月北京医科大学人民医院妇产科临床诊断的急性和亚急性盆腔炎女性患者104例,年龄(34.1±8.3)岁;STD组:1995年8月至1997年5月北京协和医院和北京市朝阳区小庄医院STD门诊就诊者(未统计其病种),男147例,年龄(31.5±6.7)岁;女122例,年龄(28.8±5.9)岁。孕妇均为已婚。9.6%PID患者未婚。STD门诊中,33.3%男性未婚,16.4%女性未婚,男性平均性伴2.3人,女性1.5人。5.4%STD门诊男性使用男性避孕套。3组研究人群入选标准均是在过去2周内未系统使用过抗生素,且是连续性来源。女性研究人群采集宫颈拭子标本;STD男性采集尿道拭子标本;男女均同时采集静脉血清标本。
, 百拇医药
    血清学对照人群:北京市社区体检人群血清标本(均未采集生殖道标本),与上述三组研究人群按性别和年龄逐一配对。

    二、标本收集

    男性尿道标本和女性宫颈标本采集使用Dacron拭子(芬兰OrionDiagnostica公司),取材后的拭子剪断后置于含衣原体保护液的eppendorf管内,-80℃冻存待培养[3]。静脉血清标本采集后分离,-80℃冻存待检测。

    三、沙眼衣原体细胞培养及鉴定

    绿猴肾细胞(BGMK)用于沙眼衣原体培养,芬兰产OrionChlamyset荧光单抗染色鉴定[3]。

    四、沙眼衣原体血清学

    1.酶免疫法(EIA):沙眼衣原体L2/434/Bu株接种BGMK细胞,阶层梯度离心纯化原体,Lowry法测定纯化后的原体蛋白浓度。NUNC微量反应板包被纯化的L2原体(1.0μg/孔)。待检血清1∶100稀释。结合物是兔抗人IgG酶标抗体(丹麦Dako公司)。双波长测定(450nm~620nm)结果。临界值确定是30份阴性血清平均A值(曾称OD值)加3s。为了消除误差,每次试验将研究人群与配对人群血清标本平行置于同一块96孔酶标板(或同一块28孔微量免疫荧光抗原片)检测。
, 百拇医药
    2.沙眼衣原体微量免疫荧光试验(MIF)用于沙眼衣原体IgG和IgM抗体的检测[4]。沙眼衣原体IgM阳性血清使用类风湿因子吸附剂(Abbott公司)吸附后再次检测,并以吸附后的检测结果为准。IgG滴度≥1∶512和(或)IgM滴度≥1∶32是沙眼衣原体近期感染的标准(急性抗体);IgG≥1∶16但<1:512认为系既往感染[4]

    五、统计学分析

    EpiInfo软件(CDC,5.0版本)用于χ2检验,微软excel(7.0版本)用于t检验。

    结果

    一、生殖道沙眼衣原体培养

    210例孕妇生殖道沙眼衣原体培养阳性率3.3%,104例PID患者为6.7%,147例STD门诊男性为20.4%及122例女性就诊者为15.6%。沙眼衣原体培养阳性者的平均年龄均略低于所在组的平均年龄,但无统计学差异。30例尿道沙眼衣原体培养阳性男性中仅1例(3.3%)使用男性避孕套。
, 百拇医药
    二、沙眼衣原体血清学结果

    表1显示EIA法检测3组研究人群与对照人群血清沙眼衣原体IgG抗体结果。孕妇、PID患者、STD门诊男女就诊者抗体的阳性率分别为46.7%,70.2%,73.5%和75.4%。STD门诊男女就诊者抗体阳性率非常显著高于相应的对照人群。

    表1 酶免疫法检测研究人群血清沙眼衣原体IgG抗体 组 别 总例数 阳性数 阳性率 χ2值* P值 平均A值** P值 孕妇

    对照 210

    210 98

    109 46.7%

    51.9% 0.95 >0.05 0.581
, 百拇医药
    0.620 >0.05 盆腔炎

    对照 104

    104 73

    67 70.2%

    64.4% 0.55 >0.05 0.814

    0.579 <0.01 性病门诊就诊者 男性

    对照 147

    147 108

    66 73.5%

    44.9% 23.7 <0.01 0.773

    0.532 <0.01 女性
, 百拇医药
    对照 122

    122 9247 75.4%

    38.5% 32.4 <0.01 0.815

    0.624 <0.05 *Yates校正的χ2检验,**沙眼衣原体EIA-IgG抗体阳性平均A值,△t检验

    表2 微量免疫荧光试验检测研究人群血清沙眼衣原体IgG抗体 组 别 总例数 阳性数 阳性率 χ2值* P值 GMT** P值 孕妇

    对照 210

    210 25

    31 11.9%

, 百拇医药     14.8% 0.52 >0.05 31.2±2.1

    26.8±1.9 >0.05 盆腔炎

    对照 104

    104 41

    18 39.4%

    17.3% 11.45 <0.01

    24.5±2.3

    21.8±2.1 >0.05 性病门诊就诊者 男性

    对照 147

    147 77

    19 52.4%
, http://www.100md.com
    12.9% 50.30 <0.01

    27.7±2.1

    20.7±1.8 >0.05 女性

    对照 122

    122 77

    26 63.1%

    21.3% 42.00 <0.01

    43.5±2.7

    28.8±2.5 >0.05 *Yates校正的χ2检验,**沙眼衣原体MIF-IgG抗体阳性几何均度(GMT),△t检验表3 生殖道沙眼衣原体培养与血清沙眼衣原体IgG抗体关联(EIA法) EIA-IgG 生殖道沙眼衣原体 χ2* P值 阳性(%) 阴性(%) 男性 阳性
, 百拇医药
    阴性 25(83.3)

    5(16.7) 83(70.9)

    34(29.1) 1.30 >0.05 女性 阳性

    阴性 32(97.0)

    1(3.0) 231(57.3)

    172(42.7) 18.4 <0.01 *Yates校正的χ2检验表4 生殖道沙眼衣原体与血清沙眼衣原体IgG抗体关联(MIF法) MIF-IgG 生殖道沙眼衣原体 χ2* P值 阳性(%) 阴性(%) 男性 阳性

    阴性 18(60.0)

    12(40.0) 59(50.4)
, http://www.100md.com
    58(49.6) 0.54 >0.05 女性 阳性

    阴性 30(90.9)

    3(9.1) 113(28.0)

    290(72.0) 51.88 <0.01 *Yates校正的χ2检验

    表2显示的MIF法检测沙眼衣原体IgG抗体分别为11.9%,39.4%,52.4%和63.1%。PID患者、STD门诊男女就诊者抗体阳性率非常显著高于相应的对照人群。

    三、生殖道沙眼衣原体与血清沙眼衣原体IgG抗体的关联

    STD门诊男性就诊者尿道沙眼衣原体培养阳性30例,阴性117例;孕妇、PID患者以及STD门诊女性就诊者宫颈沙眼衣原体培养阳性者共计33例,阴性共计403例。将30例男性尿道和33例女性宫颈沙眼衣原体培养阳性者的血清学与生殖道沙眼衣原体培养阴性的117例男性及403例女性血清学进行比较,结果见表3和表4,女性生殖道沙眼衣原体培养阳性者其血清沙眼衣原体阳性率极其显著高于培养阴性者,且前者阳性平均A值也极其显著高于后者。但男性均无这种差异。
, 百拇医药
    四、血清沙眼衣原体急性抗体与生殖道沙眼衣原体关联

    3组研究人群和对照人群共发现8例(PID患者2例,STD就诊者4例,对照人群2例)血清存在沙眼衣原体急性抗体者,但生殖道沙眼衣原体培养阳性者仅1例。

    讨论

    瑞典和挪威报道产前门诊正常孕妇宫颈沙眼衣原体培养的阳性率为2.9%和5.4%。王千秋等[5]报道南京孕妇宫颈沙眼衣原体阳性率是3.0%。本文的阳性率是3.3%,与上述报道接近。1988~1989年我们曾调查北京协和医院产前门诊正常孕妇宫颈沙眼衣原体阳性率是2.9%[6],时隔8年,同一产前门诊的同样孕妇,且来源均是连续顺序的机率,做为重要性病之一的沙眼衣原体感染率在正常孕妇中未发现明显升高。Schachter等报道分娩时胎儿通过沙眼衣原体感染的宫颈受染的机率是23%~70%,主要表现为结膜炎和肺炎。美国的一项费用-效益研究分析显示,如果孕妇宫颈沙眼衣原体阳性率超过6%,治疗新生儿沙眼衣原体感染的费用才超过筛选和治疗沙眼衣原体感染孕妇的费用,如果我们参照这一数字(尽管美国的医疗费用明显高于我国,但其治疗新生儿沙眼衣原体感染的费用和筛选和治疗沙眼衣原体感染孕妇的费用是同等的高,故仍然可以参考),目前可能尚无必要对正常孕妇进行沙眼衣原体常规筛选。
, 百拇医药
    本文盆腔炎患者宫颈沙眼衣原体的阳性率为6.7%,无论从费用-效益还是PID后遗症考虑,应对盆腔炎患者进行生殖道沙眼衣原体常规筛查,并治疗阳性者[7]。本文以填表询问的方式统计STD门诊男女就诊者平均性伴人数估计比较保守。STD门诊男女就诊者中未婚者占有相当比例,由于这部分人群性伴更换频率更高,因此是沙眼衣原体及其它STD受染及传播的重要人群。本文男性避孕套使用率很低,这对沙眼衣原体以及HIV/AIDS在异性间传播的控制极为不利。

    我们采用病例对照方式研究沙眼衣原体血清学。方法是EIA和MIF,前者涉及衣原体属特异性脂多糖(LPS)抗原,后者与衣原体主要外膜蛋白(MOMP)种特异性抗原有关,特异性较强。做为主要性传播疾病,没有疑问STD门诊患者血清沙眼衣原体IgG抗体阳性率和浓度(平均A值)极为显著高于对照人群。孕妇组沙眼衣原体抗体与配对人群无差别,提示妊娠期妇女沙眼衣原体感染的危险因素不高于社区育龄妇女。国外报道PID病原学很大程度仍然是需氧菌和厌氧菌所致[8],从而解释本文STD就诊者中沙眼衣原体IgG抗体阳性率高于PID患者。
, 百拇医药
    表3和表4显示生殖道沙眼衣原体与血清学关联在男女性表现迥然不同的结果。STD男性生殖道沙眼衣原体与血清IgG抗体无关联,提示男性1次的沙眼衣原体尿道炎不一定刺激机体免疫应答反应(如血循环IgG抗体的产生),但反复感染可最终刺激机体产生抗体,因为STD门诊男性血清沙眼衣原体IgG抗体大大高于男性对照人群。女性宫颈沙眼衣原体与血清学具有极为显著的关联,可能是由于女性生殖系统解剖学上特点所致。

    世界卫生组织人类生殖医学研究发展和研究培训特殊项目资助

    参 考 文 献

    1,Centers for Disease Control and Prevention. Recommendations for the prevention and management of Chlamydia trachomatis infections, 1993. MMWR, 1993, 42(No. RR- 12): 1- 9.
, 百拇医药
    2,Westr m L, W lner Hanssen P. Pathogenesis of pelvic inflammatory disease. Genitourin Med, 1993, 69:9- 17.

    3,倪安平,何海英,沈浣,等.微量沙眼衣原体组织培养法的建立及临床应用.生殖医学杂志,1998,7:10-13.

    4,Ni AP, Ling GY, Yang L, et al. A seroepidemiologic study of C. pneumoniae, C. trachomatis and C. psittaci in different populations in the mainland of China. Scand J Infect Dis, 1996, 28:553- 557.

    5,Wang QQ, Liang GJ, Ye SZ, et al. Prevalence and epidemiologic correlates of sexually transmitted Chlamydia trachomatis infection in a selected population. Chin Med Sci J, 1993,8:107- 110.
, 百拇医药
    6,Ni AP, Gu CX, Li ST, et al. The prevalence chlamydial infection in outpatient clinics in Beijing. Genitourin Med, 1990, 66:125.

    7,Marrazzo JM, Celum CL, Hillis SD, et al. Performance and cost effectiveness of selective screening criteria for Chlamydia trachomatis infection in women: implications for a national chlamydia control strategy. Sex Transm Dis, 1997, 24:131- 140.

    8,Arredondo JL,Diaz V,Giatan H,et al.Oral clindamycin and ciprofloxacin versus intramuscular ceftriaxone and oral doxycycline in the treatment of mild to moderate pelvic inflammatory disease in outpatients. Clin Infect Dis, 1997, 24:170- 178.

    (收 稿 日 期 : 1999- 10- 18), http://www.100md.com