尖锐湿疣患者血清白介素18与γ干扰素水平的检测及其相关研究
作者：钱起丰
单位：518020深圳市皮肤病防治研究所
关键词：尖锐湿疣；白细胞介素18；干扰素γ
中华皮肤科杂志000303
【摘要】目的研究白介素18(IL-18)，γ干扰素(IFN-γ)在尖锐湿疣(CA)发病机理中的作用及它们之间的关系。方法用双抗体夹心ELISA法检测了36例CA患者血清IL-18、IFN-γ水平。结果CA患者血清IL-18、IFN-γ水平均明显低于正常人对照组(分别为P<0.05及P<0.01)；IL-18与IFN-γ之间呈正相关(P<0.01)。结论CA患者血清IFN-γ水平低下与IL-18相关；IL-18水平低下所致的一系列细胞免疫反应抑制效应在CA发病机理中起着重要作用。
The Serum Level of Interleukin- 18 and Its Correlation with Interferon- gamma in Patients with Condyloma Acuminatum
, 百拇医药
QIAN Qifeng
(Shenzhen Institute of Dermatology, Center for STD Control and Research, Shenzhen 518020)
【 Abstract】 Objective To study the role of interleukin- 18(IL- 18) and interferon gamma(IFN- γ ) in the pathogenesis of condyloma acuminatum(CA), and the relationship between the two cytokines. Methods The serum levels of IL- 18 and IFN- γ were determined by double antibody sandwich enzyme linked immunosorbent assay in 36 patients with CA and in 30 normal controls.Results The serum levels of IL- 18 and IFN- γ were significantly lower in CA patients than those in normal controls(P<0.05 and P< 0.01, respectively). A significant correlation was found between the serum levels of IL-18 and IFN-γ (P< 0.001).Conclusion The results indicate that the lower level of IFN-γ is related to IL-18, which may result in inhibitory effects on a series of cell immune response and may play an important role in the pathogenesis of CA.
, 百拇医药
【 Key words】 Condyloma acuminata Interleukin 18 Interferon- gamma
白介素(IL)18最初命名为γ干扰素(IFN-γ)诱导因子(interferongammainducingfactor,IGIF)或IL-1γ，后来发现IL-18不仅能诱导Th1等细胞产生IFN-γ、还能增强NK细胞的活性，增强FasL介导的细胞毒效应，通过IFN-γ的产生调节免疫球蛋白产生，促进IL-2和GM-CSF的产生等功能，在抗病原微生物感染方面起着重要作用[1]。以往研究结果发现尖锐湿疣(CA)患者外周血单一核细胞产生IFN-γ能力及NK细胞活性降低是否亦与IL-18有关[2]。为此，我们检测了CA患者血清IL-18与IFN-γ水平，并探讨了它们之间的关系，现将结果报道如下。
资料与方法
一、临床资料
, 百拇医药
依据我国卫生部防疫司1991年制订的CA诊断标准确诊的36例患者。男28例，女8例；年龄20～58岁，平均30.3岁；病期7d至1.2年，平均6.8个月；初发者30例，复发者6例。绝大多数患者有非婚性接触史或配偶感染史。正常人对照30例，男19例，女11例；年龄17～42岁，平均28.0岁。
二、方法
1.血清IL-18检测：Quantikine人IL-18免疫检测试剂盒(R＆DSystemInc.Minneapolis,MN,USA)，批号为9934360，其最小检出剂量<15 pg/mL。 实验采 用双抗体夹心 ELISA 法。先用标定稀释液RD6P(动物血清)配制标准rIL-18浓度，分别为2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/mL。在已用抗IL-18单抗包被的微孔板内加RD1-8检测稀释液100μL，再分别加入标准rIL-18、待检血清样品各100μL，用塑料粘纸封住微孔板，室温孵育2h,洗涤4次，加辣根过氧化酶(HRP)标记的多克隆抗IL-18抗体200μL，再室温孵育2h，再洗涤，加H2O2-TMB底物溶液200μL，室温30min，最后加2NH2SO450μL终止反应，以波长450nm/630nm处测定A值，求出标准曲线，计算出样品含量。
, 百拇医药
2.血清IFN-γ检测：Quantikine人IFN-γ免疫检测试剂盒(R＆DSystemInc.)，批号为9930129，最小检出剂量法。用RD6R配制标准rIFN-γ浓度分别为1000、500、250、125、62.5、31.2、15.6、0pg/mL。在用抗IFN-γ单抗包被的微孔板内加RD1Z检测稀释液50μL，再分别加入标准rIFN-γ及血清样品各200μL，室温孵育2.5h，洗涤4次，加HRP-多克隆抗IFN-γ抗体结合物200μL，室温孵育2h，洗涤，加H2O2-TMB底物溶液200μL，室温30min，最后加2NH2SO450μL终止反应，测定A值并计算样品含量。
3.统计：采用两样本均数差别t检测。以直线相关法分析血清IL-18与IFN-γ间的关系，并作相关系数t检验。
结果
一、CA患者血清IL-18与IFN-γ水平
, 百拇医药
实验结果详见表1。CA患者血清IL-18及IFN-γ水平均明显降低。血清IL-18水平变化范围在CA患者中为0～707.4pg/mL，对照组为10.6～881.0pg/mL。IFN-γ变化范围患者为0～12.5pg/mL，对照组则为0～50.4pg/mL。
表1 CA患者血清IL-18与IFN-γ水平检测结果(
±
)
组 别 例数 IL-18(pg/mL) IFN-γ(pg/mL) 尖锐湿疣组 36 107.35±27.72 0.35±0.35 正常人对照组 30 213.90±45.19 6.84±2.40 t值 2.08 2.92 P值 <0.05 <0.01
二、CA患者IL-18与IFN-γ的关系
, 百拇医药
36例CA患者血清IL-18与IFN-γ之间呈正相关性，r=0.62(tr=4.59,P<0.01).
讨论
1995年Okamura等[1]从热灭活的丙酸杆菌致敏后再注射脂多糖的裸鼠肝细胞中分离并克隆出一种新的细胞因子，由于它能诱导产生IFN-γ，故命名为IGIF。Ushio等[3]1996年克隆了人类IGIF的cDNA并在E.coli中表达，鉴于IGIF的氨基酸序列与已知数据库中的任何蛋白质均不相同，并且它不仅能诱导IFN-γ产生，还有其他多种生物活性，因此重新命名为IL-18。IL-18主要由巨噬细胞样细胞产生。体外实验发现，用抗CD3单抗刺激T细胞后，单独加入IL-18或IL-12均可促进IFN-γ的产生，当IL-18与IL-12共同加入后，产生的IFN-γ可以达到非常高的水平，表明IL-18、IL-12在诱导IFN-γ产生上有协同效应。在二者的协同效应中，IL-12主要是诱导原始T细胞分化为Th1细胞，IL-18作为一种激活因子作用于Th1细胞，促进IFN-γ的产生。结合本次及以往研究结果所见，CA患者IL-18、IL-12p40水平均显著降低[4]，双重阻断了IFN-γ的产生途径，降低在抗病毒免疫中起主要作用的IFN-γ产量，明显地削弱了机体抗病毒能力。
, 百拇医药
IL-18可以与其结构上完全不同的IL-12(又称NK细胞刺激因子)一样，增强人NK细胞活性，增强Th1、NK细胞表面FasL的表达，增强FasL介导的细胞毒效应。Cauda等[2]研究发现CA患者外周血NK细胞(CD16+、CD57+)数目增多，而活化的NK细胞(CD16+、HLA-DR+)数与正常组相似，但其活性降低，IL-18、IL-12、IFN-γ、IL-2均是NK细胞激活因子，刺激NK细胞的杀伤功能，因此这些细胞因子水平下降都导致了NK细胞、CTL活性降低。以往研究结果证实IL-10(细胞因子合成抑制因子)抑制活化人PBMC体外产生Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ)[5]。CA患者血清IL-10水平比正常人显著增高[6]，抑制了IL-18mRNA在胞内的积聚，但其抑制强度不及对IL-12p40那样明显[7]，推测由于IL-10抑制IL-12、IL-18mRNA表达与分泌。阻碍了Th1型细胞的分化及其细胞因子表达。此外，血清中高水平的IL-10还抑制了抗原递呈细胞功能，使抗原特异性细胞增殖明显减少，从而更削弱了细胞介导的免疫反应。
, http://www.100md.com
上述研究证明，CA患者血清IFN-γ水平降低与IL-18相关。CA存在着因Th1与Th2细胞间的交互异常调节所致的有关细胞因子产生失衡，表现为Th2型细胞因子(IL-10)合成与分泌过多，Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ)合成过少，由此所引起一系列细胞免疫反应抑制效应在CA发病机理中起着重要作用。Th1/Th2细胞优势性相互转换，将对疾病的转归起着决定性的作用。
参 考 文 献
1，谢虹综述.IL-18的研究进展.上海免疫学杂志，1999,19:190-192.
2，Cauda R, Tyring SK, Grossi CE, et al. Patients with condyloma acuminatum exhibit decreased interleukin- 2 and interferon gamma production and depressed natural killer activity. J Clin Immunol, 1987,7:304- 311.
, 百拇医药
3，Ushio S, Namba M, Okura T, et al. Cloning of the cDNA for human IFN- γ - inducing factor, expression in E. coli. and studies on the biologic activities of the protein. J Immunol, 1996,156:4274- 4279.
4，钱起丰,莫衍石.尖锐湿疣患者白介素12、白介素15和肿瘤坏死因子α水平的研究.中华皮肤科杂志，1997,30:172-174.
5，钱起丰,赖志南.IL-10对外周血单个核细胞体外产生IL-2及IFN-γ的调节作用.中国免疫学杂志，1997,13:317-319.
6，钱起丰.尖锐湿疣患者血清白介素10水平及其与白介素2关系的研究.中华皮肤科杂志，1996,29:172-174.
7，Marshall JD, Aste AM, Chehimi SS, et al. Regulation of human IL- 18 mRNA expression.Clin Immunol, 1999,90:15- 21.
(收 稿 日 期 ： 1999- 10- 25), http://www.100md.com
单位：518020深圳市皮肤病防治研究所
关键词：尖锐湿疣；白细胞介素18；干扰素γ
中华皮肤科杂志000303
【摘要】目的研究白介素18(IL-18)，γ干扰素(IFN-γ)在尖锐湿疣(CA)发病机理中的作用及它们之间的关系。方法用双抗体夹心ELISA法检测了36例CA患者血清IL-18、IFN-γ水平。结果CA患者血清IL-18、IFN-γ水平均明显低于正常人对照组(分别为P<0.05及P<0.01)；IL-18与IFN-γ之间呈正相关(P<0.01)。结论CA患者血清IFN-γ水平低下与IL-18相关；IL-18水平低下所致的一系列细胞免疫反应抑制效应在CA发病机理中起着重要作用。
The Serum Level of Interleukin- 18 and Its Correlation with Interferon- gamma in Patients with Condyloma Acuminatum
, 百拇医药
QIAN Qifeng
(Shenzhen Institute of Dermatology, Center for STD Control and Research, Shenzhen 518020)
【 Abstract】 Objective To study the role of interleukin- 18(IL- 18) and interferon gamma(IFN- γ ) in the pathogenesis of condyloma acuminatum(CA), and the relationship between the two cytokines. Methods The serum levels of IL- 18 and IFN- γ were determined by double antibody sandwich enzyme linked immunosorbent assay in 36 patients with CA and in 30 normal controls.Results The serum levels of IL- 18 and IFN- γ were significantly lower in CA patients than those in normal controls(P<0.05 and P< 0.01, respectively). A significant correlation was found between the serum levels of IL-18 and IFN-γ (P< 0.001).Conclusion The results indicate that the lower level of IFN-γ is related to IL-18, which may result in inhibitory effects on a series of cell immune response and may play an important role in the pathogenesis of CA.
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【 Key words】 Condyloma acuminata Interleukin 18 Interferon- gamma
白介素(IL)18最初命名为γ干扰素(IFN-γ)诱导因子(interferongammainducingfactor,IGIF)或IL-1γ，后来发现IL-18不仅能诱导Th1等细胞产生IFN-γ、还能增强NK细胞的活性，增强FasL介导的细胞毒效应，通过IFN-γ的产生调节免疫球蛋白产生，促进IL-2和GM-CSF的产生等功能，在抗病原微生物感染方面起着重要作用[1]。以往研究结果发现尖锐湿疣(CA)患者外周血单一核细胞产生IFN-γ能力及NK细胞活性降低是否亦与IL-18有关[2]。为此，我们检测了CA患者血清IL-18与IFN-γ水平，并探讨了它们之间的关系，现将结果报道如下。
资料与方法
一、临床资料
, 百拇医药
依据我国卫生部防疫司1991年制订的CA诊断标准确诊的36例患者。男28例，女8例；年龄20～58岁，平均30.3岁；病期7d至1.2年，平均6.8个月；初发者30例，复发者6例。绝大多数患者有非婚性接触史或配偶感染史。正常人对照30例，男19例，女11例；年龄17～42岁，平均28.0岁。
二、方法
1.血清IL-18检测：Quantikine人IL-18免疫检测试剂盒(R＆DSystemInc.Minneapolis,MN,USA)，批号为9934360，其最小检出剂量<15 pg/mL。 实验采 用双抗体夹心 ELISA 法。先用标定稀释液RD6P(动物血清)配制标准rIL-18浓度，分别为2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/mL。在已用抗IL-18单抗包被的微孔板内加RD1-8检测稀释液100μL，再分别加入标准rIL-18、待检血清样品各100μL，用塑料粘纸封住微孔板，室温孵育2h,洗涤4次，加辣根过氧化酶(HRP)标记的多克隆抗IL-18抗体200μL，再室温孵育2h，再洗涤，加H2O2-TMB底物溶液200μL，室温30min，最后加2NH2SO450μL终止反应，以波长450nm/630nm处测定A值，求出标准曲线，计算出样品含量。
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2.血清IFN-γ检测：Quantikine人IFN-γ免疫检测试剂盒(R＆DSystemInc.)，批号为9930129，最小检出剂量法。用RD6R配制标准rIFN-γ浓度分别为1000、500、250、125、62.5、31.2、15.6、0pg/mL。在用抗IFN-γ单抗包被的微孔板内加RD1Z检测稀释液50μL，再分别加入标准rIFN-γ及血清样品各200μL，室温孵育2.5h，洗涤4次，加HRP-多克隆抗IFN-γ抗体结合物200μL，室温孵育2h，洗涤，加H2O2-TMB底物溶液200μL，室温30min，最后加2NH2SO450μL终止反应，测定A值并计算样品含量。
3.统计：采用两样本均数差别t检测。以直线相关法分析血清IL-18与IFN-γ间的关系，并作相关系数t检验。
结果
一、CA患者血清IL-18与IFN-γ水平
, 百拇医药
实验结果详见表1。CA患者血清IL-18及IFN-γ水平均明显降低。血清IL-18水平变化范围在CA患者中为0～707.4pg/mL，对照组为10.6～881.0pg/mL。IFN-γ变化范围患者为0～12.5pg/mL，对照组则为0～50.4pg/mL。
表1 CA患者血清IL-18与IFN-γ水平检测结果(
±)组 别 例数 IL-18(pg/mL) IFN-γ(pg/mL) 尖锐湿疣组 36 107.35±27.72 0.35±0.35 正常人对照组 30 213.90±45.19 6.84±2.40 t值 2.08 2.92 P值 <0.05 <0.01
二、CA患者IL-18与IFN-γ的关系
, 百拇医药
36例CA患者血清IL-18与IFN-γ之间呈正相关性，r=0.62(tr=4.59,P<0.01).
讨论
1995年Okamura等[1]从热灭活的丙酸杆菌致敏后再注射脂多糖的裸鼠肝细胞中分离并克隆出一种新的细胞因子，由于它能诱导产生IFN-γ，故命名为IGIF。Ushio等[3]1996年克隆了人类IGIF的cDNA并在E.coli中表达，鉴于IGIF的氨基酸序列与已知数据库中的任何蛋白质均不相同，并且它不仅能诱导IFN-γ产生，还有其他多种生物活性，因此重新命名为IL-18。IL-18主要由巨噬细胞样细胞产生。体外实验发现，用抗CD3单抗刺激T细胞后，单独加入IL-18或IL-12均可促进IFN-γ的产生，当IL-18与IL-12共同加入后，产生的IFN-γ可以达到非常高的水平，表明IL-18、IL-12在诱导IFN-γ产生上有协同效应。在二者的协同效应中，IL-12主要是诱导原始T细胞分化为Th1细胞，IL-18作为一种激活因子作用于Th1细胞，促进IFN-γ的产生。结合本次及以往研究结果所见，CA患者IL-18、IL-12p40水平均显著降低[4]，双重阻断了IFN-γ的产生途径，降低在抗病毒免疫中起主要作用的IFN-γ产量，明显地削弱了机体抗病毒能力。
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IL-18可以与其结构上完全不同的IL-12(又称NK细胞刺激因子)一样，增强人NK细胞活性，增强Th1、NK细胞表面FasL的表达，增强FasL介导的细胞毒效应。Cauda等[2]研究发现CA患者外周血NK细胞(CD16+、CD57+)数目增多，而活化的NK细胞(CD16+、HLA-DR+)数与正常组相似，但其活性降低，IL-18、IL-12、IFN-γ、IL-2均是NK细胞激活因子，刺激NK细胞的杀伤功能，因此这些细胞因子水平下降都导致了NK细胞、CTL活性降低。以往研究结果证实IL-10(细胞因子合成抑制因子)抑制活化人PBMC体外产生Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ)[5]。CA患者血清IL-10水平比正常人显著增高[6]，抑制了IL-18mRNA在胞内的积聚，但其抑制强度不及对IL-12p40那样明显[7]，推测由于IL-10抑制IL-12、IL-18mRNA表达与分泌。阻碍了Th1型细胞的分化及其细胞因子表达。此外，血清中高水平的IL-10还抑制了抗原递呈细胞功能，使抗原特异性细胞增殖明显减少，从而更削弱了细胞介导的免疫反应。
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上述研究证明，CA患者血清IFN-γ水平降低与IL-18相关。CA存在着因Th1与Th2细胞间的交互异常调节所致的有关细胞因子产生失衡，表现为Th2型细胞因子(IL-10)合成与分泌过多，Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ)合成过少，由此所引起一系列细胞免疫反应抑制效应在CA发病机理中起着重要作用。Th1/Th2细胞优势性相互转换，将对疾病的转归起着决定性的作用。
参 考 文 献
1，谢虹综述.IL-18的研究进展.上海免疫学杂志，1999,19:190-192.
2，Cauda R, Tyring SK, Grossi CE, et al. Patients with condyloma acuminatum exhibit decreased interleukin- 2 and interferon gamma production and depressed natural killer activity. J Clin Immunol, 1987,7:304- 311.
, 百拇医药
3，Ushio S, Namba M, Okura T, et al. Cloning of the cDNA for human IFN- γ - inducing factor, expression in E. coli. and studies on the biologic activities of the protein. J Immunol, 1996,156:4274- 4279.
4，钱起丰,莫衍石.尖锐湿疣患者白介素12、白介素15和肿瘤坏死因子α水平的研究.中华皮肤科杂志，1997,30:172-174.
5，钱起丰,赖志南.IL-10对外周血单个核细胞体外产生IL-2及IFN-γ的调节作用.中国免疫学杂志，1997,13:317-319.
6，钱起丰.尖锐湿疣患者血清白介素10水平及其与白介素2关系的研究.中华皮肤科杂志，1996,29:172-174.
7，Marshall JD, Aste AM, Chehimi SS, et al. Regulation of human IL- 18 mRNA expression.Clin Immunol, 1999,90:15- 21.
(收 稿 日 期 ： 1999- 10- 25), http://www.100md.com