喹诺酮类药物对泌尿生殖道支原体的抗菌作用研究
作者：向斌 吴移谋 尹卫国 余敏君 武济民
单位：向斌 吴移谋 尹卫国 余敏君(421001湖南衡阳医学院微生物学教研室)；武济民(中国科学院上海药物研究所)
关键词：
中华皮肤科杂志000320
喹诺酮类药物在临床上用于抗支原体之初效果较为满意，但由于抗生素的滥用及治疗不当，支原体对喹诺酮类药物的耐药性也日益突出，同时新的喹诺酮类药物不断出现。我们采用直接肉汤稀释法，体外测定了9种喹诺酮类药物对100株解脲支原体(Uu)、100株人型支原体(Mh)的抗菌活性，以期正确评价新老喹诺酮类药物的抗泌尿生殖道支原体作用，给临床用药提供实验依据。
一、材料与方法
(一)材料：
, 百拇医药
1.标本来源及收集：按文献[1]报道方法。
2.培养基：双相液体培养基，Uu、Mh液体与固体培养基按文献[1,2]报道方法配制。用于鉴定的Uu、Mh固体培养基分别加入林可霉素(200mg/L)与红霉素(200mg/L)。
3.Uu与Mh的分离和鉴定：取标本0.1mL接种于1.5mL双相液体培养基内，37℃培养16～48h，阳性者再分别取0.1mL接种于1.5mL的Uu和Mh液体培养基中，37℃培养16～48h，按1∶10稀释后，取0.1mL接种于相应的用于鉴定的Uu、Mh固体培养基中培养，挑取含有单个菌落的琼脂再转种于1.5mL的相应Uu、Mh液体培养基中增菌，培养物置-70℃储存备用。
4.抗菌药物：9种喹诺酮类药物均为中国科学院上海药物研究所提供的粉剂，均用二甲基甲酰胺与乙醇溶解，再用灭菌蒸馏水配成1600～3200μg/mL的母液作为贮存液，-70℃保存备用，使用时再用相应液体培养基稀释成所需浓度。
, 百拇医药
(二)方法：
1.肉汤稀释法：按文献[3]报道方法。
2.判定方法：加药组以48h不出现颜色变化(由淡黄变红)的最小药物浓度为最小有效抑制支原体的药物浓度(MIC)，并计算MIC范围及MIC50和MIC90。
二、结果
(一)Mh与Uu对喹诺酮类药物敏感性：由表1可见，对于Mh:Y98-37、Y98-23、Y98-31、Y98-32显示出强大作用，其MIC50均为0.0625μg/mL，其次为左旋氧氟沙星、司帕沙星，氧氟沙星、盐酸环丙沙星表现出轻度耐药；对于Uu，Y98-37、Y98-23、Y98-31、Y98-32的MIC50为0.25～0.5μg/mL，呈良好作用，司帕沙星、氧氟沙星、盐酸环丙沙星为不同程度的耐药。Mh、Uu对萘啶酸均呈高度耐药，MIC50≥128μg/mL。
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表1 100株人型支原体与100株解脲支原体对9种喹诺酮类药物的体外敏感试验
抗菌药物 人型支原体株MIC(μg/mL) 解脲支原体株MIC(μg/mL) 范围 50% 90% 范围 50% 90% 氧氟沙星 0.26～64 4 8 0.5～128 8 16 萘啶酸 64～128 ≥128 ≥128 16～128 ≥128 ≥128 盐酸环丙沙星 0.5～128 4 8 2～128 16 32 左旋氧氟沙星 0.125～64 1 2 0.5～64 4 8 司帕沙星 0.125～32 0.25 0.5 0.25～64 4 8 Y98-37 0.125～32 0.0625 0.25 0.125～64 0.5 2 Y98-23 0.0625～32 0.0625 0.25 0.25～8 0.5 1 Y98-31 0.0625～16 0.0625 0.125 0.0625～8 0.25 0.5 Y98-32 0.0625～32 0.0625 0.5 0.125～8 0.25 1
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(二)Mh与Uu对喹诺酮类药物敏感性比较：除萘啶酸外，喹诺酮类药物对Mh的抗菌作用强于Uu，对Uu的MIC50是其相应Mh的MIC50的2～8倍，Y98-37、Y98-23、Y98-31、Y98-32对Mh、Uu均有较强的作用，其MIC90为0.25～1μg/mL。司帕沙星、左旋氧氟沙星对Mh的抗菌活性较好，对Uu则较差。
(三)Mh与Uu对喹诺酮类药物的交叉耐药性比较：100株Mh、100株Uu在环丙沙星8μg/mL浓度下，除均高度抵抗萘啶酸外，对其它药物交叉耐药情况见表2。对于Mh，同时对氧氟沙星有显著性交叉耐药(χ2=7.87,P<0.05)，对其它药物无显著性交叉耐药。对于Uu，同时对氧氟沙星、左旋氧氟沙星、司帕沙星有显著性交叉耐药(χ2分别为15.13、8.91、6.46,P<0.05),对其它药物无显著性交叉耐药
表2耐环丙沙星的解脲支原体与人型支原体株对其他喹诺酮类药物交叉耐药率
, 百拇医药
耐环丙沙星支原体 株数 氧氟沙星 左旋氧氟沙星 司帕沙星 耐药株数 交叉率* 耐药株数 交叉率 耐药株数 交叉率 人型支原体 53 10 18.87% 4 7.55% 3 5.66% 解脲支原体 94 75 79.79% 63 67.02% 58 61.70% *交叉耐药率
三、讨论
本研究结果显示老一代喹诺酮类药物如氧氟沙星、盐酸环丙沙星、左旋氧氟沙星等存在不同程度的耐药现象，而通过化学结构改造新合成的药物如Y98-37、Y98-23、Y98-31、Y98-32则显示出良好的抗Mh、Uu作用，表明对于Mh、Uu所致的泌尿生殖道感染喹诺酮类药物仍不失为一类有效药物。此外，本研究结果也显示喹诺酮类的抗Mh作用强于抗Uu作用，此特点与大环内酯类的作用特点具有互补性，因此研究喹诺酮类药物对泌尿生殖道支原体抗菌作用，对于指导临床用药，寻找新一代喹诺酮类药物具有重要意义。
, http://www.100md.com 湖南省教委资助课题
参 考 文 献
1，吴移谋，余敏君，尹卫国，等.从临床标本中定量检测泌尿生殖道支原体耐药性的研究.中华医学检验杂志，1998，21：335-337.
2，吴移谋，余敏君，刘腾飞，等.六种抗菌药物体外抗解脲支原体与人型支原体的抗菌作用.中华皮肤科杂志，1994，27：134-135.
3，吴移谋，尹卫国，余敏君，等.3种抗菌药物体外抗五种支原体的活性研究.中国现代医学杂志，1996，12：9-10.
(收 稿 日 期 ： 1999- 07- 11), http://www.100md.com
单位：向斌 吴移谋 尹卫国 余敏君(421001湖南衡阳医学院微生物学教研室)；武济民(中国科学院上海药物研究所)
关键词：
中华皮肤科杂志000320
喹诺酮类药物在临床上用于抗支原体之初效果较为满意，但由于抗生素的滥用及治疗不当，支原体对喹诺酮类药物的耐药性也日益突出，同时新的喹诺酮类药物不断出现。我们采用直接肉汤稀释法，体外测定了9种喹诺酮类药物对100株解脲支原体(Uu)、100株人型支原体(Mh)的抗菌活性，以期正确评价新老喹诺酮类药物的抗泌尿生殖道支原体作用，给临床用药提供实验依据。
一、材料与方法
(一)材料：
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1.标本来源及收集：按文献[1]报道方法。
2.培养基：双相液体培养基，Uu、Mh液体与固体培养基按文献[1,2]报道方法配制。用于鉴定的Uu、Mh固体培养基分别加入林可霉素(200mg/L)与红霉素(200mg/L)。
3.Uu与Mh的分离和鉴定：取标本0.1mL接种于1.5mL双相液体培养基内，37℃培养16～48h，阳性者再分别取0.1mL接种于1.5mL的Uu和Mh液体培养基中，37℃培养16～48h，按1∶10稀释后，取0.1mL接种于相应的用于鉴定的Uu、Mh固体培养基中培养，挑取含有单个菌落的琼脂再转种于1.5mL的相应Uu、Mh液体培养基中增菌，培养物置-70℃储存备用。
4.抗菌药物：9种喹诺酮类药物均为中国科学院上海药物研究所提供的粉剂，均用二甲基甲酰胺与乙醇溶解，再用灭菌蒸馏水配成1600～3200μg/mL的母液作为贮存液，-70℃保存备用，使用时再用相应液体培养基稀释成所需浓度。
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(二)方法：
1.肉汤稀释法：按文献[3]报道方法。
2.判定方法：加药组以48h不出现颜色变化(由淡黄变红)的最小药物浓度为最小有效抑制支原体的药物浓度(MIC)，并计算MIC范围及MIC50和MIC90。
二、结果
(一)Mh与Uu对喹诺酮类药物敏感性：由表1可见，对于Mh:Y98-37、Y98-23、Y98-31、Y98-32显示出强大作用，其MIC50均为0.0625μg/mL，其次为左旋氧氟沙星、司帕沙星，氧氟沙星、盐酸环丙沙星表现出轻度耐药；对于Uu，Y98-37、Y98-23、Y98-31、Y98-32的MIC50为0.25～0.5μg/mL，呈良好作用，司帕沙星、氧氟沙星、盐酸环丙沙星为不同程度的耐药。Mh、Uu对萘啶酸均呈高度耐药，MIC50≥128μg/mL。
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表1 100株人型支原体与100株解脲支原体对9种喹诺酮类药物的体外敏感试验
抗菌药物 人型支原体株MIC(μg/mL) 解脲支原体株MIC(μg/mL) 范围 50% 90% 范围 50% 90% 氧氟沙星 0.26～64 4 8 0.5～128 8 16 萘啶酸 64～128 ≥128 ≥128 16～128 ≥128 ≥128 盐酸环丙沙星 0.5～128 4 8 2～128 16 32 左旋氧氟沙星 0.125～64 1 2 0.5～64 4 8 司帕沙星 0.125～32 0.25 0.5 0.25～64 4 8 Y98-37 0.125～32 0.0625 0.25 0.125～64 0.5 2 Y98-23 0.0625～32 0.0625 0.25 0.25～8 0.5 1 Y98-31 0.0625～16 0.0625 0.125 0.0625～8 0.25 0.5 Y98-32 0.0625～32 0.0625 0.5 0.125～8 0.25 1
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(二)Mh与Uu对喹诺酮类药物敏感性比较：除萘啶酸外，喹诺酮类药物对Mh的抗菌作用强于Uu，对Uu的MIC50是其相应Mh的MIC50的2～8倍，Y98-37、Y98-23、Y98-31、Y98-32对Mh、Uu均有较强的作用，其MIC90为0.25～1μg/mL。司帕沙星、左旋氧氟沙星对Mh的抗菌活性较好，对Uu则较差。
(三)Mh与Uu对喹诺酮类药物的交叉耐药性比较：100株Mh、100株Uu在环丙沙星8μg/mL浓度下，除均高度抵抗萘啶酸外，对其它药物交叉耐药情况见表2。对于Mh，同时对氧氟沙星有显著性交叉耐药(χ2=7.87,P<0.05)，对其它药物无显著性交叉耐药。对于Uu，同时对氧氟沙星、左旋氧氟沙星、司帕沙星有显著性交叉耐药(χ2分别为15.13、8.91、6.46,P<0.05),对其它药物无显著性交叉耐药
表2耐环丙沙星的解脲支原体与人型支原体株对其他喹诺酮类药物交叉耐药率
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耐环丙沙星支原体 株数 氧氟沙星 左旋氧氟沙星 司帕沙星 耐药株数 交叉率* 耐药株数 交叉率 耐药株数 交叉率 人型支原体 53 10 18.87% 4 7.55% 3 5.66% 解脲支原体 94 75 79.79% 63 67.02% 58 61.70% *交叉耐药率
三、讨论
本研究结果显示老一代喹诺酮类药物如氧氟沙星、盐酸环丙沙星、左旋氧氟沙星等存在不同程度的耐药现象，而通过化学结构改造新合成的药物如Y98-37、Y98-23、Y98-31、Y98-32则显示出良好的抗Mh、Uu作用，表明对于Mh、Uu所致的泌尿生殖道感染喹诺酮类药物仍不失为一类有效药物。此外，本研究结果也显示喹诺酮类的抗Mh作用强于抗Uu作用，此特点与大环内酯类的作用特点具有互补性，因此研究喹诺酮类药物对泌尿生殖道支原体抗菌作用，对于指导临床用药，寻找新一代喹诺酮类药物具有重要意义。
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参 考 文 献
1，吴移谋，余敏君，尹卫国，等.从临床标本中定量检测泌尿生殖道支原体耐药性的研究.中华医学检验杂志，1998，21：335-337.
2，吴移谋，余敏君，刘腾飞，等.六种抗菌药物体外抗解脲支原体与人型支原体的抗菌作用.中华皮肤科杂志，1994，27：134-135.
3，吴移谋，尹卫国，余敏君，等.3种抗菌药物体外抗五种支原体的活性研究.中国现代医学杂志，1996，12：9-10.
(收 稿 日 期 ： 1999- 07- 11), http://www.100md.com