介绍一种提高免疫组化反应的方法
作者：杨喜民 李栓德 张宏宾
单位：解放军第三医院
关键词：免疫组化技术；染色；方法
西北国防医学杂志MEDICAL JOURANL OF NATIONAL DEFENDING FORCES IN NORTHWEST CHINA1999年 第20卷 第1期 Vol 分类号：R 446.6
文献标识码：A
文章编号：1007-8622(1999)01-0055-55
免疫组织化学技术已广泛用于临床诊断，影响免疫组化染色效果因素较多，必须每个环节都注意到才能获得较佳染色结果。现就我们通过抗体反复加入法促进免疫组织化学反应获得良好结果的体会报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料：收集本院外科手术切除的新鲜标本，经福尔马林固定、石蜡包埋，4 μm连续切片。第1抗体Rabbit Anti-P16购自美国Maxim Biotech Inc，免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。
1.2 操作方法：改进后的方法为：①石蜡切片脱蜡水化后用PBS冲洗3次；②加入50 μl过氧化酶阻断溶液；③PBS冲洗；④加入50 μl非免疫性动物血清，室温下孵育10 min后吸去多余液体；⑤加入50 μl第1抗体，4℃过夜，取出置室温60 min；⑥滤纸吸取液体，再加入第1抗体置室温45 min；⑦PBS冲洗；⑧加入50 μl生物素标记的第2抗体置室温60 min；⑨加入50 μl链亲和素-过氧化物酶溶液；B10PBS冲洗，加入50 μl新鲜配制的DAB溶液，观察结果。以细胞核呈界限清晰的棕褐色为阳性，每张切片中选择观察有代表性的高倍视野(×400)，每个视野计数100个肿瘤细胞中的阳性细胞数，然后计算其阳性平均数的染色强度，依着色深浅分为三级：弱阳性(+)、中等阳性(
)、强阳性(
)。
2 结果和讨论
经反复加入抗体以及对原法的改进，染色强度均有不同程度的增强，特别是对免疫组化阳性较低的组织获得了较为满意的阳性染色结果。通过对42例组织标本进行原法与改进后的免疫组化染色方法的对比，结果强阳性率原法为28.3%，而改进后的方法为38.5%，两者有显著性差异(P<0.05)。
免疫组织化学染色的成功与否，在一定程度上取决于组织内抗原的保存与暴露。抗原反复加入法促使抗原抗体进一步反应，从而增强了免疫组化的染色强度，并提高了抗原的检出率，而且使组织相应的特异性抗原得到了清晰的定位显示，为免疫病理诊断提供了既方便又准确的技术手段。
作者简介：杨喜民，男，37岁，主治医师，解放军第三医院，陕西宝鸡，721004
收稿日期：1998-03-23, http://www.100md.com
单位：解放军第三医院
关键词：免疫组化技术；染色；方法
西北国防医学杂志MEDICAL JOURANL OF NATIONAL DEFENDING FORCES IN NORTHWEST CHINA1999年 第20卷 第1期 Vol 分类号：R 446.6
文献标识码：A
文章编号：1007-8622(1999)01-0055-55
免疫组织化学技术已广泛用于临床诊断，影响免疫组化染色效果因素较多，必须每个环节都注意到才能获得较佳染色结果。现就我们通过抗体反复加入法促进免疫组织化学反应获得良好结果的体会报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料：收集本院外科手术切除的新鲜标本，经福尔马林固定、石蜡包埋，4 μm连续切片。第1抗体Rabbit Anti-P16购自美国Maxim Biotech Inc，免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。
1.2 操作方法：改进后的方法为：①石蜡切片脱蜡水化后用PBS冲洗3次；②加入50 μl过氧化酶阻断溶液；③PBS冲洗；④加入50 μl非免疫性动物血清，室温下孵育10 min后吸去多余液体；⑤加入50 μl第1抗体，4℃过夜，取出置室温60 min；⑥滤纸吸取液体，再加入第1抗体置室温45 min；⑦PBS冲洗；⑧加入50 μl生物素标记的第2抗体置室温60 min；⑨加入50 μl链亲和素-过氧化物酶溶液；B10PBS冲洗，加入50 μl新鲜配制的DAB溶液，观察结果。以细胞核呈界限清晰的棕褐色为阳性，每张切片中选择观察有代表性的高倍视野(×400)，每个视野计数100个肿瘤细胞中的阳性细胞数，然后计算其阳性平均数的染色强度，依着色深浅分为三级：弱阳性(+)、中等阳性(
)、强阳性()。2 结果和讨论
经反复加入抗体以及对原法的改进，染色强度均有不同程度的增强，特别是对免疫组化阳性较低的组织获得了较为满意的阳性染色结果。通过对42例组织标本进行原法与改进后的免疫组化染色方法的对比，结果强阳性率原法为28.3%，而改进后的方法为38.5%，两者有显著性差异(P<0.05)。
免疫组织化学染色的成功与否，在一定程度上取决于组织内抗原的保存与暴露。抗原反复加入法促使抗原抗体进一步反应，从而增强了免疫组化的染色强度，并提高了抗原的检出率，而且使组织相应的特异性抗原得到了清晰的定位显示，为免疫病理诊断提供了既方便又准确的技术手段。
作者简介：杨喜民，男，37岁，主治医师，解放军第三医院，陕西宝鸡，721004
收稿日期：1998-03-23, http://www.100md.com