低温保存对人体皮肤表皮LC游走功能的影响
作者：王锡华 吴军 谷才之 张宁 肖光夏
单位：王锡华(兰州军区乌鲁木齐总医院烧伤整形科，新疆 乌鲁木齐 830000)；吴军(兰州军区乌鲁木齐总医院烧伤整形科，新疆 乌鲁木齐 830000)；谷才之(兰州军区乌鲁木齐总医院烧伤整形科，新疆 乌鲁木齐 830000)；张宁(第三军医大学西南医院烧伤研究所，重庆 400038)；肖光夏(第三军医大学西南医院烧伤研究所，重庆 400038)
关键词：整形外科学；皮肤；组织保存；朗罕氏细胞；免疫；三磷酸腺苷酶染色
西北国防医学杂志000420摘要：目的：探讨低温保存皮肤抗原性下降的原因。方法 ：冻存皮肤经体外培养和在体异种移植实验后，用ATP酶染色方法测定皮 肤表皮LC密度，以 新鲜皮肤为对照。结果：经体外培养和在体移植实验后冻 存皮肤表皮LC密度均高于正常对照 组。结论：冻存皮肤表皮LC游走功能减弱是低温保存皮肤 抗原性下降的原因之一。
, 百拇医药
中图分类号：R 62 文献标识码 ：A 文章编号：1007-8622(2000)04-0294-03
Effect of cryopreservation on migration of Langerhans cell in huma n split-thickness skin
WANG Xi-hua,WU Jun,GU Cai-zhi,et al.
(Department of Burn and Plastic Surgery,General Hospital of Urumqi,Lanzhou Command,PLA,830000,China)
Abstract:Objective:To explore the reason for antigen icity decrease of cryopreserved human split-thickness skin.Method s:Epidermal LC density of cryopreserved hu man split-thickness skin sample had been examined by ATPase dye method after in vitro skin organ culture and in vivo skin xenograft.Fresh skin was as c ontrol.Results:Epidermal LC density of cryopreserved skin in vitro culture or in vivo skin graft was much higher than that of control group.Conclusion:It is suggested that th e LC migration decreased play an important role in antigenicity decrease of cryo preserved skin.
, http://www.100md.com
Key words:Plastic surgery; Skin; Cryopreservation; Langerhans cell; Immunity; ATPase dye
低温保存人体皮肤的抗原性明显减弱，冻存人体皮异体移植的成活期明显较新鲜皮延长 ，其具体机理尚未完全明确。表皮中的朗罕氏细胞(Langerhans cell LC)是皮肤的抗原递呈 细胞(APC)，皮肤移植时表皮内的LC可以游走，穿越基底膜进入真皮，最后离开真皮到达局 部引流的淋巴结内，刺激并激活T-细胞而引起异体移植排斥反应，LC被认为是皮肤免疫系 统中外周输入途径[1]。为探讨低温保存皮肤抗原性减弱的原因，我们检测了冻存 皮肤表皮LC的游走功能。
1 材料与方法
1.1 标本来源：死后6～8 h健 康青年人尸体胸腹部皮肤，经消毒制成厚0.3～0.4 mm的 断层皮肤，经抗冻液(10%二甲基亚石 风、10%多聚乙二醇、10%1-2-丙二醇)处理后投入液 氮中保存48 h以上。使用时取出人体皮，立即浸入40℃的0.01 mol*L-1PBS(pH7.2 )中复温。以未经抗冻液处理和冻存的断层人体皮肤为新鲜皮。
, http://www.100md.com
1.2 体外皮肤组织培养试验： 冻存皮肤和新鲜皮，分别用含抗生素的生理盐水冲洗5次 ，在无菌条件下，剪成0.5 cm×0.5 cm左右的皮块，真皮面贴于培养平皿上，加DMEM/F 12表皮细胞完全培养液(内含15%FCS)使皮块悬浮。置37℃、5%CO2(V/V)恒温细胞培 养箱(1815-TC，Shel-lab,USA)内培养。于培养0、12、24、48和72 h分别取出8个皮片 进行表皮LC密度测定。
1.3 在体皮肤异种移植试验： 取250～300 g Wistar大鼠，每组16只，麻醉后背部剪毛 、消毒，于脊柱两侧制造2 cm×2 cm创面各一个，将冻存皮或新鲜皮移植于创面，皮缘间断 缝合固定，单笼饲养。于移植后1、3、5 d和7 d分别取4只鼠8个皮片进行表皮LC密度测定。
1.4 皮片ATPase染色及表皮LC密度测定：采用三磷酸腺苷酶(ATPase)染色显示表皮LC。 将皮片放入0.76%EDTA溶液内37℃孵化2 h，分离表皮层与真皮层，表皮再经二甲砷酸-甲 醛液(32%二甲砷酸40 ml、40%甲醛10 ml、蔗糖6.85 g、双蒸水50 ml)固定20 min后用双 蒸水冲洗3遍，再放入ATP-硝酸铅液内(0.05%ATP二钠2.7 ml，2%硝酸铅0.3 ml，ATP二钠为 Sigma公司产品)37℃孵化1 h，经2%硫化胺染色10 min后，将染色后的表皮片皮面向上平铺 于载玻片上，甘油明胶封片。LC密度采用光学显微镜(Opton，德国)进行观测，计算每平方 毫米面积内LC数量。每份标本均随机观测5个视野的LC数量，计算LC数均值/mm2。
, 百拇医药
表1 冻存皮肤和新鲜皮体外培养后表皮LC密度变化 组别
n
培养不同时间后表皮LC密 度(个/mm2)
0 h
12 h
24 h
48 h
72 h
冻存皮组
8
647±122
5 62±101＃
, http://www.100md.com
543±110＃
421±89+△
407±92+△
新鲜皮组
8
663±107
576±96＃
477±85△
2 32±59△
119±27△
, 百拇医药 注：组间比较P<0.05，+P<0.01 ；组内与0 h比较＃P<0.05；△P<0.01表2 冻存皮肤和新鲜皮异种移植后表皮LC密度变化 组别
n
培养不同时间后表皮LC密度(个/mm2)
0d
1 d
3 d
5 d
7 d
冻存皮组
8
647±122
, 百拇医药
5 06±104＃
413±94+△
388±81+△
404±78+△
新鲜皮组
8
663±107
374±77△
298±65△
2 01±58△
, 百拇医药
132±39△
注：组间比较P<0.05，+P<0.01 ；组内与0 h比较＃P<0.05，△P<0.01
1.5 统计学处理： 结果以均数±标准差(
± s)表示。采用华西医科大学医用统计程序包进行多样本均数差异显著性分析。
2 结果
2.1 冻存皮肤和新鲜皮体外培养后表皮LC密度 变化(表1)：培养前冻存皮组表皮LC密度 和新鲜皮组没有显著差异，经体外培养后两组表皮LC密度均逐渐下降，新鲜皮组各时相点之 间均有显著性差异；而冻存皮组培养12 h与24 h时相点之间、48 h与72 h时相点之间无显著 差异，培养后各时相点均较培养前显著下降。而两组间除培养12 h时相点没有显著差异外， 培养后的其余各时相点冻存皮组均显著高于相应时相点的新鲜皮组。
, http://www.100md.com
2.2 冻存皮肤和新鲜皮异种移植后表皮LC密度 变化(表2)：经在体异种移植后两组表皮L C密度均较移植前显著下降，新鲜皮组各时相点之间均有显著性差异，且随移植时间延长LC 密度逐渐下降；而冻存皮组移植3、5、7 d时相点之间无显著差异，但均较移植1 d时相点显 著下降。而移植后各时相点冻存皮组均显著高于相应时相点的新鲜皮组。
3 讨论
人们早已发现经低温保存的皮肤异体移植成活期明显较新鲜皮延长，抗原性明显减弱，但具 体机理尚不清。皮肤免疫学研究已证实，异体皮肤移植的排斥反应是典型的细胞免疫，HLA -DR在皮肤中主要分布于LC，皮肤中刺激T-细胞引起异体皮移植排斥反应的主要是LC [1，2]。人皮肤LC位于表皮基底层，是起源于骨髓的一种树突状细胞，也是表皮细 胞内唯一具有IgG-Fc受体、C3受体及HLA-DR抗原的细胞亚群，是皮肤的抗原递呈细胞(APC )[3]。能消除移植物内的LC，可延长异体皮肤的存活期[4，5]。我们既往 的研究表明[6]，冻存皮肤LC数目变化不明显，但LC膜表面与免疫有关的共刺激分 子(如CD86)明显丢失。Ingham等[7]研究也发现经冻存后皮肤的LC数目并没 有改变，然而刺激异体淋巴细胞反应的能力却显著下降。Abe[8]用免疫组化方法 证明冻存后的皮肤OKT6、S-100、2B7表面抗原显著减少。因此，冷冻后LC的损伤可能 是功能性的。
, http://www.100md.com
皮肤移植时表皮内的LC可以游走、穿越基底膜进入真皮，最后离开真皮到达局部引流的淋巴 结内，刺激并激活T-细胞而引起异体移植排斥反应，LC被认为是皮肤免疫系统中外周输入 途径[1～3]。本实验体外培养模拟了皮片移植初期，皮片未与创基建立血运， 靠 血浆营养皮片的情况。结果表明，新鲜皮组随培养时间延长表皮LC密度显著性下降。而冻存 皮组培养后各时相点虽然均较培养前显著下降，但除培养12 h时相点外，其余各时相点冻存 皮 组表皮LC密度均显著高于相应时相点的新鲜皮组。异种移植实验结果与体外实验相似，异种 移植后两组表皮LC密度均较移植前显著下降，新鲜皮组各时相点之间均有显著性差异，且随 移植时间延长逐渐下降；而冻存皮组移植3、5、7 d时相点之间无显著差异，但均较移值1 d 时相点显著下降。而移植后各时相点冻存皮组均显著高于相应时相点的新鲜皮组。结果提示 ，冻存皮肤LC游走功能明显较新鲜皮组减弱。冻存皮肤中未损伤的LC先游走出表皮层，而功 能受损的LC则继续残留在表皮层，可能是造成移植后3、5、7 d无显著差异的原因。
, 百拇医药
Larsen等[2]用皮肤器官培养和皮肤移植试验证明自体移植与异体移植均发生LC的 游走，这个过程是LC自发的，但异体移植LC的游走明显较自体移植显著，异体移植LC游走同 时Ia抗原表达也增强，非特异性的炎症或创伤均可诱导皮片LC成熟和游离。新鲜异体皮移植 后48 h内即可在宿主淋巴结内检到异体LC，而冻存皮则没有测到[9]。因此可以推 测：LC在冻存中功能受损，LC游走减弱而致没有足够的LC达到淋巴结刺激T-细胞引起排斥 反应，而致冻存皮移植成活期延长。然而LC随着时间的延长可以自我修复而继续迁移，或宿 主抗原提呈细胞(如单核细胞)可进入移植物对异体抗原加工和处理后再迁移到引流的淋巴结 ，激活T细胞，最终排斥冻存皮肤。
作者简介：王锡华(1967-)，男，硕士，主治医师
参考文献：
[1]Rico MJ,Streilein JW.Comparison of alloimmunogenicity of Lang erhans cells and keratinocytes from mouse epidermis[J].J Invest Dermatol,1987 ,89(6):607-610.
, 百拇医药
[2]Larsen CP,Sternman RM,Wiener-pack M,et al.Migration and matu ration of Langerhans cells in skin transplants and explants[J].J Exp Med,1990; 172:1483-1493.
[3]丁铁钢、丘丙森.皮肤免疫功能的一些新概念[J].国外医学皮肤病学分 册，1990，3：131-133.
[4]Alsbjorn BF,Sorensen B.Grafting with epidermal Langerhans ce ll depressed cadaver split skin[J].Burns Incl Therm Inj,1985,11(4):259-263.
[5]Obochi MO,Ratkay LG,Levy JG.Prolonged skin allograft survival after photodynamic therapy associated with modification of donor skin antigenic ity[J].Transplantation,1997,63(6):810-817.
, 百拇医药
[6]王锡华，吴 军，谷才之，等.冻存人体皮肤抗原性的实验研究[J].中 国现代医学杂志，1999，9(11)：26-29.
[7]Ingham E,Matthews JB,kearmey JN,et al.The effects of variatio n of cryopreservation protocols on the immunogenicity of allogeneic skin grafts [J].Cryobiology,1993,30(5):443-458.
[8]Abe S,Fujita T,Takami Y.Disappearance of Langerhans cell and melanocytes after cryopreservation[J].Br J Plast Surg,1995,48:405-409.
[9]Richters CD,van Pelt AM,van Geldrop E,et al.Migration of rat skin dendritic cells[J].J Leukoc Biol,1996,60(3):317-322.
收稿日期：2000-04-13, 百拇医药
单位：王锡华(兰州军区乌鲁木齐总医院烧伤整形科，新疆 乌鲁木齐 830000)；吴军(兰州军区乌鲁木齐总医院烧伤整形科，新疆 乌鲁木齐 830000)；谷才之(兰州军区乌鲁木齐总医院烧伤整形科，新疆 乌鲁木齐 830000)；张宁(第三军医大学西南医院烧伤研究所，重庆 400038)；肖光夏(第三军医大学西南医院烧伤研究所，重庆 400038)
关键词：整形外科学；皮肤；组织保存；朗罕氏细胞；免疫；三磷酸腺苷酶染色
西北国防医学杂志000420摘要：目的：探讨低温保存皮肤抗原性下降的原因。方法 ：冻存皮肤经体外培养和在体异种移植实验后，用ATP酶染色方法测定皮 肤表皮LC密度，以 新鲜皮肤为对照。结果：经体外培养和在体移植实验后冻 存皮肤表皮LC密度均高于正常对照 组。结论：冻存皮肤表皮LC游走功能减弱是低温保存皮肤 抗原性下降的原因之一。
, 百拇医药
中图分类号：R 62 文献标识码 ：A 文章编号：1007-8622(2000)04-0294-03
Effect of cryopreservation on migration of Langerhans cell in huma n split-thickness skin
WANG Xi-hua,WU Jun,GU Cai-zhi,et al.
(Department of Burn and Plastic Surgery,General Hospital of Urumqi,Lanzhou Command,PLA,830000,China)
Abstract:Objective:To explore the reason for antigen icity decrease of cryopreserved human split-thickness skin.Method s:Epidermal LC density of cryopreserved hu man split-thickness skin sample had been examined by ATPase dye method after in vitro skin organ culture and in vivo skin xenograft.Fresh skin was as c ontrol.Results:Epidermal LC density of cryopreserved skin in vitro culture or in vivo skin graft was much higher than that of control group.Conclusion:It is suggested that th e LC migration decreased play an important role in antigenicity decrease of cryo preserved skin.
, http://www.100md.com
Key words:Plastic surgery; Skin; Cryopreservation; Langerhans cell; Immunity; ATPase dye
低温保存人体皮肤的抗原性明显减弱，冻存人体皮异体移植的成活期明显较新鲜皮延长 ，其具体机理尚未完全明确。表皮中的朗罕氏细胞(Langerhans cell LC)是皮肤的抗原递呈 细胞(APC)，皮肤移植时表皮内的LC可以游走，穿越基底膜进入真皮，最后离开真皮到达局 部引流的淋巴结内，刺激并激活T-细胞而引起异体移植排斥反应，LC被认为是皮肤免疫系 统中外周输入途径[1]。为探讨低温保存皮肤抗原性减弱的原因，我们检测了冻存 皮肤表皮LC的游走功能。
1 材料与方法
1.1 标本来源：死后6～8 h健 康青年人尸体胸腹部皮肤，经消毒制成厚0.3～0.4 mm的 断层皮肤，经抗冻液(10%二甲基亚石 风、10%多聚乙二醇、10%1-2-丙二醇)处理后投入液 氮中保存48 h以上。使用时取出人体皮，立即浸入40℃的0.01 mol*L-1PBS(pH7.2 )中复温。以未经抗冻液处理和冻存的断层人体皮肤为新鲜皮。
, http://www.100md.com
1.2 体外皮肤组织培养试验： 冻存皮肤和新鲜皮，分别用含抗生素的生理盐水冲洗5次 ，在无菌条件下，剪成0.5 cm×0.5 cm左右的皮块，真皮面贴于培养平皿上，加DMEM/F 12表皮细胞完全培养液(内含15%FCS)使皮块悬浮。置37℃、5%CO2(V/V)恒温细胞培 养箱(1815-TC，Shel-lab,USA)内培养。于培养0、12、24、48和72 h分别取出8个皮片 进行表皮LC密度测定。
1.3 在体皮肤异种移植试验： 取250～300 g Wistar大鼠，每组16只，麻醉后背部剪毛 、消毒，于脊柱两侧制造2 cm×2 cm创面各一个，将冻存皮或新鲜皮移植于创面，皮缘间断 缝合固定，单笼饲养。于移植后1、3、5 d和7 d分别取4只鼠8个皮片进行表皮LC密度测定。
1.4 皮片ATPase染色及表皮LC密度测定：采用三磷酸腺苷酶(ATPase)染色显示表皮LC。 将皮片放入0.76%EDTA溶液内37℃孵化2 h，分离表皮层与真皮层，表皮再经二甲砷酸-甲 醛液(32%二甲砷酸40 ml、40%甲醛10 ml、蔗糖6.85 g、双蒸水50 ml)固定20 min后用双 蒸水冲洗3遍，再放入ATP-硝酸铅液内(0.05%ATP二钠2.7 ml，2%硝酸铅0.3 ml，ATP二钠为 Sigma公司产品)37℃孵化1 h，经2%硫化胺染色10 min后，将染色后的表皮片皮面向上平铺 于载玻片上，甘油明胶封片。LC密度采用光学显微镜(Opton，德国)进行观测，计算每平方 毫米面积内LC数量。每份标本均随机观测5个视野的LC数量，计算LC数均值/mm2。
, 百拇医药
表1 冻存皮肤和新鲜皮体外培养后表皮LC密度变化 组别
n
培养不同时间后表皮LC密 度(个/mm2)
0 h
12 h
24 h
48 h
72 h
冻存皮组
8
647±122
5 62±101＃
, http://www.100md.com
543±110＃
421±89+△
407±92+△
新鲜皮组
8
663±107
576±96＃
477±85△
2 32±59△
119±27△
, 百拇医药 注：组间比较P<0.05，+P<0.01 ；组内与0 h比较＃P<0.05；△P<0.01表2 冻存皮肤和新鲜皮异种移植后表皮LC密度变化 组别
n
培养不同时间后表皮LC密度(个/mm2)
0d
1 d
3 d
5 d
7 d
冻存皮组
8
647±122
, 百拇医药
5 06±104＃
413±94+△
388±81+△
404±78+△
新鲜皮组
8
663±107
374±77△
298±65△
2 01±58△
, 百拇医药
132±39△
注：组间比较P<0.05，+P<0.01 ；组内与0 h比较＃P<0.05，△P<0.01
1.5 统计学处理： 结果以均数±标准差(
± s)表示。采用华西医科大学医用统计程序包进行多样本均数差异显著性分析。2 结果
2.1 冻存皮肤和新鲜皮体外培养后表皮LC密度 变化(表1)：培养前冻存皮组表皮LC密度 和新鲜皮组没有显著差异，经体外培养后两组表皮LC密度均逐渐下降，新鲜皮组各时相点之 间均有显著性差异；而冻存皮组培养12 h与24 h时相点之间、48 h与72 h时相点之间无显著 差异，培养后各时相点均较培养前显著下降。而两组间除培养12 h时相点没有显著差异外， 培养后的其余各时相点冻存皮组均显著高于相应时相点的新鲜皮组。
, http://www.100md.com
2.2 冻存皮肤和新鲜皮异种移植后表皮LC密度 变化(表2)：经在体异种移植后两组表皮L C密度均较移植前显著下降，新鲜皮组各时相点之间均有显著性差异，且随移植时间延长LC 密度逐渐下降；而冻存皮组移植3、5、7 d时相点之间无显著差异，但均较移植1 d时相点显 著下降。而移植后各时相点冻存皮组均显著高于相应时相点的新鲜皮组。
3 讨论
人们早已发现经低温保存的皮肤异体移植成活期明显较新鲜皮延长，抗原性明显减弱，但具 体机理尚不清。皮肤免疫学研究已证实，异体皮肤移植的排斥反应是典型的细胞免疫，HLA -DR在皮肤中主要分布于LC，皮肤中刺激T-细胞引起异体皮移植排斥反应的主要是LC [1，2]。人皮肤LC位于表皮基底层，是起源于骨髓的一种树突状细胞，也是表皮细 胞内唯一具有IgG-Fc受体、C3受体及HLA-DR抗原的细胞亚群，是皮肤的抗原递呈细胞(APC )[3]。能消除移植物内的LC，可延长异体皮肤的存活期[4，5]。我们既往 的研究表明[6]，冻存皮肤LC数目变化不明显，但LC膜表面与免疫有关的共刺激分 子(如CD86)明显丢失。Ingham等[7]研究也发现经冻存后皮肤的LC数目并没 有改变，然而刺激异体淋巴细胞反应的能力却显著下降。Abe[8]用免疫组化方法 证明冻存后的皮肤OKT6、S-100、2B7表面抗原显著减少。因此，冷冻后LC的损伤可能 是功能性的。
, http://www.100md.com
皮肤移植时表皮内的LC可以游走、穿越基底膜进入真皮，最后离开真皮到达局部引流的淋巴 结内，刺激并激活T-细胞而引起异体移植排斥反应，LC被认为是皮肤免疫系统中外周输入 途径[1～3]。本实验体外培养模拟了皮片移植初期，皮片未与创基建立血运， 靠 血浆营养皮片的情况。结果表明，新鲜皮组随培养时间延长表皮LC密度显著性下降。而冻存 皮组培养后各时相点虽然均较培养前显著下降，但除培养12 h时相点外，其余各时相点冻存 皮 组表皮LC密度均显著高于相应时相点的新鲜皮组。异种移植实验结果与体外实验相似，异种 移植后两组表皮LC密度均较移植前显著下降，新鲜皮组各时相点之间均有显著性差异，且随 移植时间延长逐渐下降；而冻存皮组移植3、5、7 d时相点之间无显著差异，但均较移值1 d 时相点显著下降。而移植后各时相点冻存皮组均显著高于相应时相点的新鲜皮组。结果提示 ，冻存皮肤LC游走功能明显较新鲜皮组减弱。冻存皮肤中未损伤的LC先游走出表皮层，而功 能受损的LC则继续残留在表皮层，可能是造成移植后3、5、7 d无显著差异的原因。
, 百拇医药
Larsen等[2]用皮肤器官培养和皮肤移植试验证明自体移植与异体移植均发生LC的 游走，这个过程是LC自发的，但异体移植LC的游走明显较自体移植显著，异体移植LC游走同 时Ia抗原表达也增强，非特异性的炎症或创伤均可诱导皮片LC成熟和游离。新鲜异体皮移植 后48 h内即可在宿主淋巴结内检到异体LC，而冻存皮则没有测到[9]。因此可以推 测：LC在冻存中功能受损，LC游走减弱而致没有足够的LC达到淋巴结刺激T-细胞引起排斥 反应，而致冻存皮移植成活期延长。然而LC随着时间的延长可以自我修复而继续迁移，或宿 主抗原提呈细胞(如单核细胞)可进入移植物对异体抗原加工和处理后再迁移到引流的淋巴结 ，激活T细胞，最终排斥冻存皮肤。
作者简介：王锡华(1967-)，男，硕士，主治医师
参考文献：
[1]Rico MJ,Streilein JW.Comparison of alloimmunogenicity of Lang erhans cells and keratinocytes from mouse epidermis[J].J Invest Dermatol,1987 ,89(6):607-610.
, 百拇医药
[2]Larsen CP,Sternman RM,Wiener-pack M,et al.Migration and matu ration of Langerhans cells in skin transplants and explants[J].J Exp Med,1990; 172:1483-1493.
[3]丁铁钢、丘丙森.皮肤免疫功能的一些新概念[J].国外医学皮肤病学分 册，1990，3：131-133.
[4]Alsbjorn BF,Sorensen B.Grafting with epidermal Langerhans ce ll depressed cadaver split skin[J].Burns Incl Therm Inj,1985,11(4):259-263.
[5]Obochi MO,Ratkay LG,Levy JG.Prolonged skin allograft survival after photodynamic therapy associated with modification of donor skin antigenic ity[J].Transplantation,1997,63(6):810-817.
, 百拇医药
[6]王锡华，吴 军，谷才之，等.冻存人体皮肤抗原性的实验研究[J].中 国现代医学杂志，1999，9(11)：26-29.
[7]Ingham E,Matthews JB,kearmey JN,et al.The effects of variatio n of cryopreservation protocols on the immunogenicity of allogeneic skin grafts [J].Cryobiology,1993,30(5):443-458.
[8]Abe S,Fujita T,Takami Y.Disappearance of Langerhans cell and melanocytes after cryopreservation[J].Br J Plast Surg,1995,48:405-409.
[9]Richters CD,van Pelt AM,van Geldrop E,et al.Migration of rat skin dendritic cells[J].J Leukoc Biol,1996,60(3):317-322.
收稿日期：2000-04-13, 百拇医药