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编号:10276611
电针对大鼠红细胞免疫和T细胞亚群的影响
http://www.100md.com 《第四军医大学学报》 2000年第4期
     作者:高巍 黄裕新 赵宁侠 王庆莉 张洪新

    单位:高巍(第四军医大学唐都医院:消化内科,陕西 西安 710038 );黄裕新(第四军医大学唐都医院:消化内科,陕西 西安 710038 );王庆莉(第四军医大学唐都医院:消化内科,陕西 西安 710038 );赵宁侠(第四军医大学唐都医院中医科,陕西 西安 710038 );张洪新(第四军医大学唐都医院:介入放射科,陕西 西安

    关键词:电针;足三里;红细胞免疫;T细胞亚群;流式细胞仪

    第四军医大学学报000408 摘 要:目的 探讨电针(EA)对免疫系统的影响. 方法 应用流式细 胞 仪技术,通过微量全血直接免疫荧光染色法测定外周血T细胞亚群以反映细胞免疫功能;应 用红细胞C3b受体-酵母菌花环试验和红细胞-IC花环试验检测红细胞免疫功能. 结果 电针刺激足三里穴后正 常大鼠外周血的CD4+,RBC-C3bRR,RBC-ICR明显升高(P<0.01),CD8+无显著变化 (P> 0.05),且CD4+和RBC-C3bRR呈显著正相关(r=0.719,P<0.05). 免疫抑制模 型大鼠 外周血的CD4+,RBC-C3bRR明显低于正常对照组(P<0.01,P<0.05),CD8+无 显著变化(P>0.05), 电 针治疗后各项指标与正常对照组相比无显著差异(P>0.05). 非经非穴组的各项指标与 正常 对照组相比无显著差异(P>0.05). 结论 :电针刺激足三里穴能提高正 常大鼠及免疫抑制模 型大鼠的细胞免疫功能和红细胞免疫粘附功能. 这对揭示针刺治疗多种疾病的机制具有重要 意义.
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    中图号:R229 文献标识码:A

    文章编号:1000-2790(2000)04-0414-03

    Influences of electroacupuncture (EA) on T lymphocyte subgroups of peripheral blood and erythrocyte immune function in rats

    GAO Wei, HUANG Yu-XinWANG Qin-Li

    (Department of Gastroenterology,, Fourth Milit ary Medical University, Xi'an 710038,China)

    ZHAO Ning-Xia
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    (Department of Traditional Chinese Medicine,Fourth Milit ary Medical University, Xi'an 710038,China)

    ZHANG Hong-Xin

    (Department of Interventional Radiology,Tangdu Hospital, Fourth Milit ary Medical University, Xi'an 710038,China)

    Abstract: AIM To reveal the influences of electroacupunc ture (EA) on the immune system in rats. METHODS T lymphocyte subg roups of peripheral blood (includ ing CD4+ and CD8+) were measured by direct microvolume whole blood immunoflu rescent staining technique with flow cytometer (FCM) and erythrocyte immune func tions (including RBC-C3bRR and RBC-ICR) were observed to evaluate the immune f unctions of rats from different aspects. RESULTS ①The value of CD4+, RBC-C3bRR and RBC-ICR in EA group was significantly higher than th at of control group(P<0.01),and the value of CD8+ was not statisticall y different between the two gro ups, indicating that EA had a considerable regulative effect on the immune funct ion. ②The variation of CD4+ was significantly relative with RBC-C3bRR(r =0 .719,P<0.05). ③The value of CD4+ and RBC-C3bRR in immunosuppressive mo del group was observably lower than that of control group (P<0.01,P<0.05, P<0.01) ,and the value of CD8+ was not statistically different between the two groups ( P>0.05),indicating that CY restrained the T lymphocyte subgroups of periph eral blood and the erythrocyte immune function. ④In the immunosuppressive model +EA gro up, no marked difference was found as compared with the control group (P>0. 05), while some significant difference was observed as compared with the immunosuppre ssive model group (P<0.01). ⑤The date of the non point group were not diffe re nt from those of control group (P>0.05). CONCLUSION EA can i mpro ve cellular immune induced by T lymphocyte and red blood cell immune adherence f unction, which is of some significance in revealing the clinical potential of ac upuncture.
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    Keywords:electroacupuncture; Zusanli; erythrocyte immune function;T-lymphocyte subgroups; flow cytometer

    0 引言

    已有研究表明,针刺对红细胞免疫和T细胞亚群均有正向调节作用[1-5] ,但同步、多指 标观察针刺对红细胞免疫和T细胞亚群的影响以及对这两项指标的相关性研究报道,国内外 比较少见. 我们分设多组同步观察了针刺对大鼠的这两类免疫指标的影响,并进行了相关性 分析研究,旨在探讨免疫系统在针刺治疗相关疾病中的调控作用及可能的机制.

    1 材料和方法

    1.1 动物与分组 SD健康大白鼠(本校实验动物中心提供 ) ,体质量150~180 g. 应用分段随机分组法(blocked randomization)将大鼠分为5组(每 组8只):正常 对照组、非经非穴组、免疫抑制组、足三里组、免疫抑制+足三里组.
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    1.2 方法

    1.2.1 免疫抑制模型的制作 于第1日大鼠腹腔注射新鲜配制的环磷酰胺(CY)溶 液,剂 量为100 mg.kg-1体质量,第4日加强注射1次,制成免疫抑制模型. 其余各组大鼠 腹腔注射同剂量的生理盐水.

    1.2.2 针刺方法 所有实验大鼠均在安静环境下统一喂养,穴位选双侧足阳 明胃经上的足 三里穴[6],非经非穴点选足三里穴旁0.5 cm处. G6805-A型电针治疗仪(由上海 医疗仪器厂生产)参数选为断续波,频率2 Hz,强度3 V,时间30 min,以大鼠后肢轻微抖 动为宜. 足 三里 组大鼠固定后每日同一时辰于双侧“足三里”连续刺激30 min,持续7 d;免疫抑制组与免 疫 抑制+足三里组按上述方法制成免疫抑制模型,免疫抑制+足三里组电针治疗同足三里组,正 常对照组与免疫抑制组大鼠每日同一时辰同样方法固定30 min,但不行电针刺激.
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    1.2.3 标本采集及测定 所有大鼠于电针第7日腹腔注射1 g.L-1戊巴 比妥钠, 30 mg.kg-1体质量,麻醉后断头采血,125 U.mL-1肝素抗凝. 应用微量全血 直接免疫荧光染色法通过Epics-prof ileⅡ型流式细胞仪(美国Coulter公司产)检测T淋巴细胞亚群,抗大鼠CD4FITC/CD8PE单克 隆抗体由英国SEROTEC公司提供. 应用郭峰等法[2]测定大鼠的C3b受体花环率(RBC -C3bRR)、红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR).

    统计学处理:采用SPSS8.0软件进行数据分析,所用统计学方法为方 差分析、直线相关.

    2 结果

    各组实验结果见Tab 1. 足三里组大鼠T4(CD4+)细胞百分率、C3b受体花环率(RBC-C3b RR)、红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR)明显高于正常对照组(P<0.01);T8(CD8 +)细胞 百 分比无明显变化(P>0.05). 说明针刺足三里穴可以提高大鼠的T细胞和红细胞免疫功 能, 且CD4+与C3b受体花环率(RBC-C3bRR)呈显著正相关(r=0.719,P<0.05). 免 疫抑制组T4 (CD4+)细胞百分率、C3b受体花环率(RBC-C3bRR)明显低于正常对照组(P<0.01 ,P<0.0 5);T8(CD8+)细胞百分比无明显变化(P>0.05). 说明环磷酰胺(CY)抑制了大 鼠的T细 胞免疫功能和红细胞的免疫粘附功能,而经过针刺足三里后免疫抑制模型的大鼠各项指标显 示均有显著改善(P<0.01). 非经非穴组的各项指标与正常对照组相比无统计学的差异 (P>0.05).
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    表 1 大鼠T细胞亚群和红细胞免疫功能的变化

    Tab 1 The value of T lymphocyte subgroups of peripheral blood (including CD4 + and CD8+) and RBC-C3bRR and RBC-ICR in rats (n=8,±s) Group

    CD4+

    CD8+

    RBC-C3bR R

    RBC-ICR

    Control group
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    43.06±3.14

    23.61±2.62

    8. 63±2.13

    6.75±2.32

    None point group

    44.74±4.65

    20.98±4.27

    11.13±1.17

    8.88±2.80

    Immunosuppressive group

    34.50±2.52a
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    26.19±8.39

    5.25±1.1 7b

    9.75±4.43

    Zusanli group

    65.55±8.42a

    29.46±8.21

    15.88±2.99 a

    12.14±1.22a

    Immunosuppressive+EA group

    48.79±5.96c
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    22.65±7.01

    16.38±4.14 c

    15.00±5.18c

    aP<0.01,bP<0.05 vs control group,cP<0.01 vs immu nosuppressive group. EA:electroacupuncture.3 讨论

    已有研究表明,针刺对T淋巴细胞亚群和红细胞免疫功能均有正向调节作用[1 -5]. 但未 见电针刺激足三里穴时同步观察外周血T细胞亚群及红细胞免疫粘附功能的报道. 祖国医学 将机体能活动及抗御消除各种有害因素归之为“正气”,即正气具有维持机体正常机能和抗 御病邪的能力,这种能力包括现代医学的免疫功能在内[7]. 足三里穴是足阳明胃 经的重要 穴位,是临床治疗和研究中应用最广泛的穴位之一,也是目前研究针刺调节免疫系统的常用 穴位之一. 阳明经脉多气多血,主润宗筋;阳明经气通畅,则正气旺盛,血脉充盈,使机体 外周血中的免疫细胞的量和质都得到改善;同时,针刺足三里可以调和气血、平衡阴阳、通 达营卫、梳利经络以扶助正气、培元固本,从而提高和保护免疫功能. 本实验研究为进一步 阐明针刺对免疫系统的影响提供了重要的理论依据.
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    本实验观察到电针刺激足三里穴对正常大鼠外周血T淋巴细胞免疫功能和红细胞免疫 粘附能 力均有正向调节作用,且两者呈正相关. 免疫学研究证实,红细胞具有抗原提呈细胞作用, 能促进T细胞的免疫功能、扩大细胞免疫效应,参与细胞免疫调控[8],此与本研究 结果一致 ,也是针刺调节免疫系统的一个重要补充. 但针刺究竟是通过各自不同的途径调节 T淋巴细 胞免疫功能和红细胞免疫粘附能力,还是通过同一种介质(如某些胃肠激素、细胞因子等) 同时影响T淋巴细胞免疫功能和红细胞免疫粘附能力,抑或是通过增强红细胞免疫粘附功能 的同时间接增强T细胞免疫功能,其机制还有待进一步阐明.

    足三里是足阳明胃经的重要穴位,而足阳明胃经的分支主要分布于胃肠. 针刺足三里 穴可以 对多种胃肠功能(包括运动、分泌、粘膜保护等)具有良好的调整作用,但它对胃肠道粘膜 免疫的影响尚未见报道. 肠道相关淋巴组织GALT(gut associated lymphoid tissue)是人 体免疫系统中的一个重要免疫器官,与局部免疫应答有关,GALT内的T、B淋巴细胞通过一定 途径进行全身循环,与周围淋巴结、全身各系统的淋巴组织的淋巴细胞得到交流,即与范围 更广的、周身分布的粘膜相关淋巴组织联系(MALT,mucosa-associated lymphoid tissue ),实际上也是与整个免疫系统相联系. 针刺足三里穴可能通过神经、体液途径刺激肠道淋 巴组织而达到对胃肠道免疫的调节,从而实现对胃肠道疾病及功能的调整作用,并通过GALT 与全身淋巴组织的交流达到对全身免疫系统的正向调节作用.
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    目前研究针刺对免疫功能的调节作用时,多以荧光显微镜、普通光学显微镜为检测手 段,采 用酶免染色法、补体杀伤试验及花环形成试验等检测方法. 本研究首次将流式细胞仪技术, 通过微量全血直接免疫荧光染色法测定外周血T细胞亚群应用在针刺对免疫系统的研究中. 该方法具有快速简便,重复性好,指标客观等优点,且对大鼠机体的生理功能影响较少,结 果准确可靠[9],为针刺调节免疫系统的研究提供了一个良好的途径.

    基金项目:国家自然科学基金资助项目(39970888)

    作者简介:高巍(1971-),女(汉族),江苏省镇江人. 住院医师,硕 士(导师黄裕新). 发表论文3篇.Tel.(029)3577721

    710038 )

    参考文献:

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    [2] Guo C, Zhang W, Zheng S et al. Clinical observation on efficac y of electro-acu puncture therapy in hyperplasia of mammary glands and its effect on immunolog ical function[J]. J Tradit Chin Med, 1996;16(4):281-287.

    [3] Wu B. Effect of acupuncture on the regulation of cell-mediated im munity in the patients with malignant tumors[J]. Chen Tzu Yen Chiu, 1995;20(3):67 -71.

    [4] 钱伟华. 针刺五脏夹脊穴对红细胞免疫功能影响的实验研究[J]. 针灸临 床杂志,1995;11(5): 30-33.
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    [6] Yu C. Traditional Chinese veterinary acupuncture and moxibustion[ M]. Beijing: China Agricalture Press, 1989:147-163.

    [7] 刘宏伟,冯晓东,庞 波 et al. 针灸对小白鼠移植瘤活血化瘀作用实 验研究[J]. 中国针灸,1997;17(11):659-662.

    [8] 郭 峰. 红细胞调控细胞免疫的事实与意义[J]. 上海免疫学杂志,1991 ;11(1):63-64.

    [9] 葛依工,高 瀚,孔宪涛 et al. 流式细胞仪检测大鼠外周血T细胞亚 群(微量全血法)[J]. 上海免疫学杂志,1988;8(2):81-84.

    收稿日期:1999-10-08; 修回日期:1999-11-16, 百拇医药