慢性肾衰血透患者输血传播病毒感染分析
作者：孙脊峰 焦凯 傅恩清 李光荫 郑义 张桂林 白雪帆
单位：孙脊峰(第四军医大学唐都医院 肾脏内科 陕西 西安 710038)；焦凯(第四军医大学唐都医院 内分泌科 陕西 西安 710038)；傅恩清(第四军医大学唐都医院 感染病院 陕西 西安 710038)；李光荫(第四军医大学唐都医院 肾脏内科 陕西 西安 710038)；郑义(第四军医大学唐都医院 肾脏内科 陕西 西安 710038)；张桂林(第四军医大学唐都医院 肾脏内科 陕西 西安 710038)；白雪帆(第四军医大学唐都医院 感染病院陕西 西安 710038)
关键词：血液透析；肝炎病毒；输血传播病毒(TTV)；巢式-聚合酶链反应(Nest-PCR)
第四军医大学学报000639 摘要：目的 观察输血传播病毒(TTV)和肝炎病毒在慢性肾衰(CRF)血液透析(HD)患者中的流行情况和感染相关因素. 方法 应用巢式-聚合酶链反应(Nest-PCR)方法和双抗体夹心ELISA法，检测90例CRF 血透患者和208例西安地区职业献血员及128例对照组血清TTV-DNA,HBV五项 , 并分析TTV与输血次数、HD时间、肝功能损害及其与各型肝炎病毒感染的关系. 结果 ①90例CRF血透患者和208例职业献血员中TTV-DNA阳性率，分别是46.6%和16.8%，明显高于对照组(P<0.01)；②TTV-DNA阳性率与输血次数、HD时间呈显著的正相关(r＝0.586,P<0.01，r＝0.486，P<0.01)，而与年龄、性别、手术史均无显著相关；③90例HD患者中，检出肝炎病毒标志物阳性者66例(感染率73.3%)，明显高于对照组(P<0.01)，其中以HCV阳性(感染率68.1%)最突出，HBV阳性(感染率18.1%)次之，HBV,HCV双重阳性者亦较明显(感染率13.6%)；208例职业献血员中，检出肝炎病毒标志物阳性者14例(感染率6.7%)，与对照组(感染率5.4%)比较无明显差异(P>0.05)；④80例TTV阳性患者中5例合并HBV感染，与TTV阴性组相当，但合并HCV感染及HCV、HBV双重感染差别显著(P<0.05)(16.0% vs 11.0%及6.0% vs 2.0%). 结论 CRF血透患者及西安地区职业献血员中存在着严重的TTV感染；同时也是肝炎病毒感染的高危人群，尤其是HCV及HBV,HCV双重感染；其高发生率可能与血液紧密接触相关.
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中图号：R629.5 文献标识码：A
文章编号：1000-2790(2000)06-0767-03
Transfusion transmitted virus infection in hemodialysis patients with chronic renal failure
SUN Ji-Feng LI Guang-Yin ZHENG Yi ZHANG Gui-Lin
(Department of Nephrology Hospital, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi'an 710038, China)
JIAO Kai
, 百拇医药
(Department of Endocrinology Hospital, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi'an 710038, China)
FU En-Qing BAI Xue-Fan
(Department of Infection Hospital, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi'an 710038, China)
Abstract: AIM To observe the prevalence and clinical relevance of transfusion transmitted virus (TTV) infection in hemodialysis(HD) patients with chronic renal failure(CRF) and in professional blood donors. METHODS Nest-PCR and sandwich-ELISA were used to detect TTV-DNA, HBV, anti-HCVIgG, anti-HDV, anti-HEVIgG, anti-HGV and anti-HIV in 90 HD patients and 208 professional donors and 128 controls. The relationship between TTV and blood transfusion times, HD duration and liver function was analyzed. RESULTS ①The incidence of TTV infection in 90 HD patients and 208 professional donors were 46.6% and 16.8% respectively, which were significantly higher than that in control; ②The infectious rate of TTV was correlated with blood transfusion times and HD duration. But no significant relationship between TTV infection with their age, sex and operation; ③Hepatitis viruses were detected in 66 of 90 HD cases, particularly HCV, HBV and HBV overlappingly infected HCV, while only 14 cases were infected with hepatitis virus in 208 professional donors; ④HCV or HBV and HCV overlappingly infected patients in TTV positive group were much higher than that in negative group (P<0.05). While the patients with HBV was found no significant difference between TTV positive group and negative group. CONCLUSION There are severe TTV infection in HD patients with CRF and professional donors in Xi'an; and hepatitis virus was highly infected in these group, particularly HCV and HBV overlappingly infected HCV. The infectious rate may be correlated with the times of blood contacting.
, 百拇医药
Keywords:hemodialysis; hepatitis virus; transfusion transmitted virus(TTV); nest-PCR
0 引言
1997年Nishizawa等[1]首次报道发现一种以输血传播的人类肝炎相关的DNA病毒(transfusion transmitted virus, TTV)，Okamoto 等[2]进一步研究发现TTV为一单股DNA病毒，基因全序列长3739 bp，含ORF1和ORF2两个开放读码框，分别编码774个与172个氨基酸. TTV主要经输血传播. 我国已在各类病毒肝炎患者及健康人群中检测出TTV-DNA，并发现其可能经肠道传播[3]. CRF血透患者和职业献血员都是与血液有密切接触的血源性传播疾病的高危人群, 迄今未见报道TTV流行病学的研究，现就西安地区慢性肾衰血透患者和职业献血员感染TTV的状况及临床流行特点报告如下.
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 对象 ①HD组：均为我院住院的维持性HD患者90(男47，女43)例，平均年龄52.3(24～60)岁，平均存活时间45.6(3～108)mo，其原发病为慢性肾炎(54例)、急进性肾炎(3例)、原发性高血压(9例)、糖尿病(15例)及多囊肾(9例)，全部有输血史. ②职业献血员组：均为我院长期或临时的职业献血员208(男64，女144)例，平均年龄50.2(40～83)岁. ③对照组：我院住院的非肝炎患者128(男71，女57)例，平均的年龄51.2(1～78)岁.
1.2 标本的采集和处理 空腹抽血2 mL置于玻璃试管中，离心分离血清，取20 μL于高压灭菌的1.5 mL塑料管中，加等量裂解液煮沸10 min，再高速离心10 min，保存于-20℃备用.
1.3 引物设计和主要试剂及设备 Taq DNA聚合酶、dNTP、低熔点琼脂糖均购于华美公司，引物参照文献设计，序列为:
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P1为正链5′-GCAGCAGCATATGGATATGT-3′
P2为负链5′-TGACTGTGCTAAAGCCTCTA-3′
P3为正链5′-CATACACATGAATGCCAGGC-3′
P4为负链5′-GTACTTCTTGCTGGTGAAAT-3′
P1与P2为外引物，P3与P4为内引物，两对引物均位于ORF1保守区，内引物扩增片段长度为197 bp. PCR仪为美国PE公司2400型PCR仪.
1.4 TTV-DNA检测方法 用nest-PCR方法，第一次取标本离心上清2 μL做DNA模板，第二轮以第一轮产物2 μL做模板，两次PCR反应体积均为15 μL，含2.5 mmol.L-1 dNTP 1 μL,2.5 mmol.L-1引物各1 μL，Taq酶1.5 μL，10×Taq酶buffer 1.5 μL. 顶部以石腊油封闭，均按下列参数循环：94℃ 30 s，56℃ 30 s，72℃ 30 s，共35个循环. 开始循环前94℃预变性5 min，最后72℃延伸5 min. PCR终产物经1.5 g.L-1琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外线检测仪观察结果，出现197 bp DNA扩增带为阳性.
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1.5 病毒性肝炎标志物和肝功检测 HBV五项和抗-HDV及抗-HGV的检测试剂盒购自北京福瑞生物工程公司；抗-HCV IgG和抗-HEV IgG及抗-HIV的检测试剂盒购自北京高达生物技术研究所，以上操作均按产品说明书严格进行. 肝功的检测由我院检验科采用日立7170自动生化分析仪完成.
2 结果
2.1 TTV-DNA检测和血液接触次数的关系 TTV-DNA阳性血清均在197 bp处出现阳性条带，与预计片段大小一致. 所测3组中TTV-DNA阳性血清例数和比率及与血液接触次数的关系见Tab 1.
表 1 TTV-DNA与接触血液次数的关系
Tab 1 Analysis of the relationship between TTV and blood transfusion times Group
, 百拇医药
n
TTV positive(%)
Times of contact
with blood
HD
90
42(46.6)a
328b
PD-BP
208
35(16.8)a
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731c
Control
128
3(2.3)
5
aP<0.01 vs control;bP<0.01,cP<0.01,Analysis of the relationship between TTV and times of contact with blood. 从Tab 1可见，90例血透患者中TTV-DNA阳性42例，阳性率为46.6%，明显高于对照组(P<0.01)，且与血液接触次数呈正相关(r＝0.586,P<0.01)；208例职业献血员中TTV-DNA阳性者35例，阳性率为16.8%，明显高于对照组(P<0.01)，与血液接触次数亦呈正相关(r＝0.486，P<0.01).
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2.2 肝炎病毒标志物检测 90例HD患者中，检出肝炎病毒标志物阳性者66例(感染73%)，其中抗-HBs阳性9例，抗-Hbe阳性3例，抗-HCV阳性45例，抗-HEV IgG阳性3例，抗-HGV IgG阳性6例，其余乙肝五项、抗-HDV和抗-HIV均为阴性，HBV、抗-HCV双重阳性者9例，HBV、抗-HEV IgG双重阳性3例，HBV、抗-HCV、抗-HGV混合阳性者3例. 208例职业献血员中，检出肝炎病毒标志物阳性者14例(感染率6.7%)，其中抗-HBc阳性7例，抗-Hbe阳性1例，HBeAg阳性1例，抗-HCV阳性5例，其余乙肝五项、抗-HDV、抗-HEV IgG、抗-HGV IgG、抗-HIV均为阴性，HBV、抗-HCV双重阳性者4例. 128例住院的非肝炎患者中，检出肝炎病毒标志物阳性者7例(感染率5.4%)，其中乙肝五项、抗-HDV、抗-HEV IgG、抗-HGV IgG、抗-HIV均为阴性，HBV和抗-HCV双重阳性者1例.
2.3 TTV-DNA阳性患者的临床特点分析 TTV-DNA阳性和阴性患者与年龄、性别、手术史均无显著的差别和相关性，而与输血史、HD时间(HD组)关系密切，两组间差别均十分显著(P<0.01)，且TTV-DNA阳性与输血次数、HD时间均呈显著的正相关(r＝0.586,P<0.01,r=0.486,P<0.01). ALT正常者与异常者TTV感染阳性率无统计学差异(P<0.05，Tab 2).
, 百拇医药
表 2 TTV-DNA阳性者的与临床特点分析
Tab 2 Analysis of the relationship between TTV and clinical relevance Clinical relevance
total
TTV
TTV negative
n
426
80
346
Age(a)
, 百拇医药
57.8±13.3
52.8±10.7
62.8±17.5
Sex(m/f)
192/212
47/43
145/169
Blood contact times(%)
12.2± 4.7
(73.0%)
16.9± 9.5
(100.0%)
, 百拇医药
13.8± 5.2
(81.0%)
Operation times(%)
142(39.0%)
22(42.0%)
120(39.0%)
HD duration(mo)
55.6±19.8ac
35.2±15.4
History of ALT abnormal
44(12.0%)
, 百拇医药
12(15.0%)b
22( 7.0%)
HBV positive(%)
27( 5.0%)
5( 6.0%)
22( 6.0%)
HCV positive(%)
51( 6.0%)
13(16.0%)b
38(11.0%)
HCV overlap HBV(%)
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14( 3.0%)
6( 6.0%)b
8( 2.0%)
aP<0.01 vs negative;bP<0.05 vs negative;cP<0.01,Analysis of the relationship between TTV and blood transtusion times, hemodialysis duration.2.4 TTV-DNA与肝炎病毒 3组中TTV-DNA阳性者共计80例，其中重叠其它肝炎病毒标志物阳性的24例. 其中HD组42例TTV-DNA阳性者中合并HBV阳性者3例，合并HCV阳性者12例，合并HBV、抗-HCV双重阳性者5例. 职业献血员组35例TTV-DNA阳性者中合并HBV阳性者2例，合并HCV阳性者1例，合并HBV、抗-HCV双重阳性者1例. 对照组3例TTV-DNA阳性者中无合并HBV，HCV阳性者.
, 百拇医药
3 讨论
血液透析(HD)是治疗慢性肾衰(CRF)有效的替代方法之一，因肾性贫血需经常输血，而CRF血透患者又常常伴有明显的免疫功能低下，因此HD患者易感染输血传播性疾病，且随HD次数增多危险性明显增大，增加HD患者的并发症、病死率和移植肾失功能，同时也是医务人员易被传染的主要原因[4]. 我们检测HD组TTV-DNA阳性率为46.6%，较上海地区[5]32.5%明显高，这可能与HD组患者均有一次以上输血史有关. 本组西安地区有偿职业献血员TTV基因检测阳性率16.8%，比国内文献[6]报道的9.0%明显高，较上海地区[5]24.5%为低，但也明显高于Simmonds等[7]报道的义务献血员1.5%. 表明尽快实行义务献血及加强血源管理的重要性和必要性.
CRF血透患者和职业献血员是血源性传播疾病的高危人群，尤其是传染性病毒性肝炎. 我们检测的结果显示，在我们的血透中心HD患者中及西安地区职业献血员中感染的肝炎病毒主要是HCV，明显高于文献报道的HD患者3.3～80.0%[8]，提示近年来加强了献血员的HBV检测及乙肝疫苗的广泛应用，乙型肝炎已得到较好的控制，丙型肝炎正成为日益突出的问题. 目前对TTV与肝炎的相关性及其致病性尚不清楚. 本组ALT正常者与异常者TTV感染阳性率无统计学差异(P<0.05)，80例TTV-DNA阳性者中，目前无1例有明显的发病症状，也无1例血清转氨酶(ALT)升高，似乎不支持TTV的单独致病性.
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回顾HD组和职业献血员组近1 a的肝功能检查结果，合并肝炎病毒感染的24例TTV阳性患者中有6例ALT升高史，无合并肝炎病毒感染的53例TTV-DNA阳性者中只有4例ALT升高史(25.0% vs 7.0% P<0.05)，提示TTV与肝炎病毒关系密切. TTV与肝炎病毒的重叠感染可能使患者的肝功能异常进一步加重. 在80例TTV阳性患者中有5例(6.0%)合并HBV感染，与TTV阴性组(5.0%)相当，但合并HCV感染及HCV，HBV双重感染差别显著(P<0.05)(16.0% vs 11.0%及6.0% vs 2.0%)，提示TTV与肝炎病毒重叠感染的现象十分严重，尤其是HCV及HBV、HCV双重感染，应该引起我们高度的重视. 至于患者是先感染TTV后更易感染HCV，还是相反，目前尚不清楚，尚待进一步研究.
作者简介：孙脊峰(1962-)，男(汉族)，黑龙江省佳木斯市人. 1985年第四军医大学毕业，硕士，讲师，主治医师，科室副主任. Tel.(029)3577424(O)；3577224(H)
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参考文献：
[1] Nishizawa T,Okamoto H, Keinishi K et al.A novel DNA virus (TTV) associated with elevated transminase levels in post transfusion hepatitis of unknown etiology [J]. Biochem Biophys Res Commum, 1997;241:92-97.
[2] Okamoto H,Nishizawa T,Kato K et al. Molecular cloning and characterization of a novel DNA virus(TTV)associated with post transfusion of unknown etiology[J]. Hepat Res, 1998;10:1-16.
, 百拇医药
[3] 骆抗先，章 廉，王珊珊et al . 一种新型肠传性病毒性肝炎的流行病学、临床、病理和病毒学的初步研究[J] 第一军医大学学报，1998；18(1)：87-90.
[4] Alter MJ, Favero MS, Maynard JE. Impact of infection control strategics on[J]. J Infect Dis, 1998;153:1149-1156.
[5] 金根娣，张东华，陆志檬et al. 上海地区血透患者与供血者中TTV-DNA检测. 全国第五届病毒性肝炎学术会议论文汇编, 254-255.
[6] 马为明，周伯平，王火生et al. 一种新的可经输血传播病毒(TTV)的分子流行病学研究[J] 中华肝脏病杂志，1998;6(3)：167-169.
[7] Simmonds P, Davidson F, Prescott CLE et al .Detection of a novel DNA virus (TTV) in blood and blood products[J]. LANCET, 1998;352(7):18-20.
[8] Hassan AA, Khalil RY. Prevalence of three blood borne virus (HBV,HCV,HIV-1) among hemodialysys patients in Cairo[J]. Saudi Kidney Dis Transplant Bull,1993；4:72-75.
收稿日期:1999-10-14
修回日期:2000-04-12, 百拇医药
单位：孙脊峰(第四军医大学唐都医院 肾脏内科 陕西 西安 710038)；焦凯(第四军医大学唐都医院 内分泌科 陕西 西安 710038)；傅恩清(第四军医大学唐都医院 感染病院 陕西 西安 710038)；李光荫(第四军医大学唐都医院 肾脏内科 陕西 西安 710038)；郑义(第四军医大学唐都医院 肾脏内科 陕西 西安 710038)；张桂林(第四军医大学唐都医院 肾脏内科 陕西 西安 710038)；白雪帆(第四军医大学唐都医院 感染病院陕西 西安 710038)
关键词：血液透析；肝炎病毒；输血传播病毒(TTV)；巢式-聚合酶链反应(Nest-PCR)
第四军医大学学报000639 摘要：目的 观察输血传播病毒(TTV)和肝炎病毒在慢性肾衰(CRF)血液透析(HD)患者中的流行情况和感染相关因素. 方法 应用巢式-聚合酶链反应(Nest-PCR)方法和双抗体夹心ELISA法，检测90例CRF 血透患者和208例西安地区职业献血员及128例对照组血清TTV-DNA,HBV五项 , 并分析TTV与输血次数、HD时间、肝功能损害及其与各型肝炎病毒感染的关系. 结果 ①90例CRF血透患者和208例职业献血员中TTV-DNA阳性率，分别是46.6%和16.8%，明显高于对照组(P<0.01)；②TTV-DNA阳性率与输血次数、HD时间呈显著的正相关(r＝0.586,P<0.01，r＝0.486，P<0.01)，而与年龄、性别、手术史均无显著相关；③90例HD患者中，检出肝炎病毒标志物阳性者66例(感染率73.3%)，明显高于对照组(P<0.01)，其中以HCV阳性(感染率68.1%)最突出，HBV阳性(感染率18.1%)次之，HBV,HCV双重阳性者亦较明显(感染率13.6%)；208例职业献血员中，检出肝炎病毒标志物阳性者14例(感染率6.7%)，与对照组(感染率5.4%)比较无明显差异(P>0.05)；④80例TTV阳性患者中5例合并HBV感染，与TTV阴性组相当，但合并HCV感染及HCV、HBV双重感染差别显著(P<0.05)(16.0% vs 11.0%及6.0% vs 2.0%). 结论 CRF血透患者及西安地区职业献血员中存在着严重的TTV感染；同时也是肝炎病毒感染的高危人群，尤其是HCV及HBV,HCV双重感染；其高发生率可能与血液紧密接触相关.
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中图号：R629.5 文献标识码：A
文章编号：1000-2790(2000)06-0767-03
Transfusion transmitted virus infection in hemodialysis patients with chronic renal failure
SUN Ji-Feng LI Guang-Yin ZHENG Yi ZHANG Gui-Lin
(Department of Nephrology Hospital, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi'an 710038, China)
JIAO Kai
, 百拇医药
(Department of Endocrinology Hospital, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi'an 710038, China)
FU En-Qing BAI Xue-Fan
(Department of Infection Hospital, Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, Xi'an 710038, China)
Abstract: AIM To observe the prevalence and clinical relevance of transfusion transmitted virus (TTV) infection in hemodialysis(HD) patients with chronic renal failure(CRF) and in professional blood donors. METHODS Nest-PCR and sandwich-ELISA were used to detect TTV-DNA, HBV, anti-HCVIgG, anti-HDV, anti-HEVIgG, anti-HGV and anti-HIV in 90 HD patients and 208 professional donors and 128 controls. The relationship between TTV and blood transfusion times, HD duration and liver function was analyzed. RESULTS ①The incidence of TTV infection in 90 HD patients and 208 professional donors were 46.6% and 16.8% respectively, which were significantly higher than that in control; ②The infectious rate of TTV was correlated with blood transfusion times and HD duration. But no significant relationship between TTV infection with their age, sex and operation; ③Hepatitis viruses were detected in 66 of 90 HD cases, particularly HCV, HBV and HBV overlappingly infected HCV, while only 14 cases were infected with hepatitis virus in 208 professional donors; ④HCV or HBV and HCV overlappingly infected patients in TTV positive group were much higher than that in negative group (P<0.05). While the patients with HBV was found no significant difference between TTV positive group and negative group. CONCLUSION There are severe TTV infection in HD patients with CRF and professional donors in Xi'an; and hepatitis virus was highly infected in these group, particularly HCV and HBV overlappingly infected HCV. The infectious rate may be correlated with the times of blood contacting.
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Keywords:hemodialysis; hepatitis virus; transfusion transmitted virus(TTV); nest-PCR
0 引言
1997年Nishizawa等[1]首次报道发现一种以输血传播的人类肝炎相关的DNA病毒(transfusion transmitted virus, TTV)，Okamoto 等[2]进一步研究发现TTV为一单股DNA病毒，基因全序列长3739 bp，含ORF1和ORF2两个开放读码框，分别编码774个与172个氨基酸. TTV主要经输血传播. 我国已在各类病毒肝炎患者及健康人群中检测出TTV-DNA，并发现其可能经肠道传播[3]. CRF血透患者和职业献血员都是与血液有密切接触的血源性传播疾病的高危人群, 迄今未见报道TTV流行病学的研究，现就西安地区慢性肾衰血透患者和职业献血员感染TTV的状况及临床流行特点报告如下.
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1 对象和方法
1.1 对象 ①HD组：均为我院住院的维持性HD患者90(男47，女43)例，平均年龄52.3(24～60)岁，平均存活时间45.6(3～108)mo，其原发病为慢性肾炎(54例)、急进性肾炎(3例)、原发性高血压(9例)、糖尿病(15例)及多囊肾(9例)，全部有输血史. ②职业献血员组：均为我院长期或临时的职业献血员208(男64，女144)例，平均年龄50.2(40～83)岁. ③对照组：我院住院的非肝炎患者128(男71，女57)例，平均的年龄51.2(1～78)岁.
1.2 标本的采集和处理 空腹抽血2 mL置于玻璃试管中，离心分离血清，取20 μL于高压灭菌的1.5 mL塑料管中，加等量裂解液煮沸10 min，再高速离心10 min，保存于-20℃备用.
1.3 引物设计和主要试剂及设备 Taq DNA聚合酶、dNTP、低熔点琼脂糖均购于华美公司，引物参照文献设计，序列为:
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P1为正链5′-GCAGCAGCATATGGATATGT-3′
P2为负链5′-TGACTGTGCTAAAGCCTCTA-3′
P3为正链5′-CATACACATGAATGCCAGGC-3′
P4为负链5′-GTACTTCTTGCTGGTGAAAT-3′
P1与P2为外引物，P3与P4为内引物，两对引物均位于ORF1保守区，内引物扩增片段长度为197 bp. PCR仪为美国PE公司2400型PCR仪.
1.4 TTV-DNA检测方法 用nest-PCR方法，第一次取标本离心上清2 μL做DNA模板，第二轮以第一轮产物2 μL做模板，两次PCR反应体积均为15 μL，含2.5 mmol.L-1 dNTP 1 μL,2.5 mmol.L-1引物各1 μL，Taq酶1.5 μL，10×Taq酶buffer 1.5 μL. 顶部以石腊油封闭，均按下列参数循环：94℃ 30 s，56℃ 30 s，72℃ 30 s，共35个循环. 开始循环前94℃预变性5 min，最后72℃延伸5 min. PCR终产物经1.5 g.L-1琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外线检测仪观察结果，出现197 bp DNA扩增带为阳性.
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1.5 病毒性肝炎标志物和肝功检测 HBV五项和抗-HDV及抗-HGV的检测试剂盒购自北京福瑞生物工程公司；抗-HCV IgG和抗-HEV IgG及抗-HIV的检测试剂盒购自北京高达生物技术研究所，以上操作均按产品说明书严格进行. 肝功的检测由我院检验科采用日立7170自动生化分析仪完成.
2 结果
2.1 TTV-DNA检测和血液接触次数的关系 TTV-DNA阳性血清均在197 bp处出现阳性条带，与预计片段大小一致. 所测3组中TTV-DNA阳性血清例数和比率及与血液接触次数的关系见Tab 1.
表 1 TTV-DNA与接触血液次数的关系
Tab 1 Analysis of the relationship between TTV and blood transfusion times Group
, 百拇医药
n
TTV positive(%)
Times of contact
with blood
HD
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42(46.6)a
328b
PD-BP
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3(2.3)
5
aP<0.01 vs control;bP<0.01,cP<0.01,Analysis of the relationship between TTV and times of contact with blood. 从Tab 1可见，90例血透患者中TTV-DNA阳性42例，阳性率为46.6%，明显高于对照组(P<0.01)，且与血液接触次数呈正相关(r＝0.586,P<0.01)；208例职业献血员中TTV-DNA阳性者35例，阳性率为16.8%，明显高于对照组(P<0.01)，与血液接触次数亦呈正相关(r＝0.486，P<0.01).
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2.2 肝炎病毒标志物检测 90例HD患者中，检出肝炎病毒标志物阳性者66例(感染73%)，其中抗-HBs阳性9例，抗-Hbe阳性3例，抗-HCV阳性45例，抗-HEV IgG阳性3例，抗-HGV IgG阳性6例，其余乙肝五项、抗-HDV和抗-HIV均为阴性，HBV、抗-HCV双重阳性者9例，HBV、抗-HEV IgG双重阳性3例，HBV、抗-HCV、抗-HGV混合阳性者3例. 208例职业献血员中，检出肝炎病毒标志物阳性者14例(感染率6.7%)，其中抗-HBc阳性7例，抗-Hbe阳性1例，HBeAg阳性1例，抗-HCV阳性5例，其余乙肝五项、抗-HDV、抗-HEV IgG、抗-HGV IgG、抗-HIV均为阴性，HBV、抗-HCV双重阳性者4例. 128例住院的非肝炎患者中，检出肝炎病毒标志物阳性者7例(感染率5.4%)，其中乙肝五项、抗-HDV、抗-HEV IgG、抗-HGV IgG、抗-HIV均为阴性，HBV和抗-HCV双重阳性者1例.
2.3 TTV-DNA阳性患者的临床特点分析 TTV-DNA阳性和阴性患者与年龄、性别、手术史均无显著的差别和相关性，而与输血史、HD时间(HD组)关系密切，两组间差别均十分显著(P<0.01)，且TTV-DNA阳性与输血次数、HD时间均呈显著的正相关(r＝0.586,P<0.01,r=0.486,P<0.01). ALT正常者与异常者TTV感染阳性率无统计学差异(P<0.05，Tab 2).
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表 2 TTV-DNA阳性者的与临床特点分析
Tab 2 Analysis of the relationship between TTV and clinical relevance Clinical relevance
total
TTV
TTV negative
n
426
80
346
Age(a)
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57.8±13.3
52.8±10.7
62.8±17.5
Sex(m/f)
192/212
47/43
145/169
Blood contact times(%)
12.2± 4.7
(73.0%)
16.9± 9.5
(100.0%)
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13.8± 5.2
(81.0%)
Operation times(%)
142(39.0%)
22(42.0%)
120(39.0%)
HD duration(mo)
55.6±19.8ac
35.2±15.4
History of ALT abnormal
44(12.0%)
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12(15.0%)b
22( 7.0%)
HBV positive(%)
27( 5.0%)
5( 6.0%)
22( 6.0%)
HCV positive(%)
51( 6.0%)
13(16.0%)b
38(11.0%)
HCV overlap HBV(%)
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14( 3.0%)
6( 6.0%)b
8( 2.0%)
aP<0.01 vs negative;bP<0.05 vs negative;cP<0.01,Analysis of the relationship between TTV and blood transtusion times, hemodialysis duration.2.4 TTV-DNA与肝炎病毒 3组中TTV-DNA阳性者共计80例，其中重叠其它肝炎病毒标志物阳性的24例. 其中HD组42例TTV-DNA阳性者中合并HBV阳性者3例，合并HCV阳性者12例，合并HBV、抗-HCV双重阳性者5例. 职业献血员组35例TTV-DNA阳性者中合并HBV阳性者2例，合并HCV阳性者1例，合并HBV、抗-HCV双重阳性者1例. 对照组3例TTV-DNA阳性者中无合并HBV，HCV阳性者.
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3 讨论
血液透析(HD)是治疗慢性肾衰(CRF)有效的替代方法之一，因肾性贫血需经常输血，而CRF血透患者又常常伴有明显的免疫功能低下，因此HD患者易感染输血传播性疾病，且随HD次数增多危险性明显增大，增加HD患者的并发症、病死率和移植肾失功能，同时也是医务人员易被传染的主要原因[4]. 我们检测HD组TTV-DNA阳性率为46.6%，较上海地区[5]32.5%明显高，这可能与HD组患者均有一次以上输血史有关. 本组西安地区有偿职业献血员TTV基因检测阳性率16.8%，比国内文献[6]报道的9.0%明显高，较上海地区[5]24.5%为低，但也明显高于Simmonds等[7]报道的义务献血员1.5%. 表明尽快实行义务献血及加强血源管理的重要性和必要性.
CRF血透患者和职业献血员是血源性传播疾病的高危人群，尤其是传染性病毒性肝炎. 我们检测的结果显示，在我们的血透中心HD患者中及西安地区职业献血员中感染的肝炎病毒主要是HCV，明显高于文献报道的HD患者3.3～80.0%[8]，提示近年来加强了献血员的HBV检测及乙肝疫苗的广泛应用，乙型肝炎已得到较好的控制，丙型肝炎正成为日益突出的问题. 目前对TTV与肝炎的相关性及其致病性尚不清楚. 本组ALT正常者与异常者TTV感染阳性率无统计学差异(P<0.05)，80例TTV-DNA阳性者中，目前无1例有明显的发病症状，也无1例血清转氨酶(ALT)升高，似乎不支持TTV的单独致病性.
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回顾HD组和职业献血员组近1 a的肝功能检查结果，合并肝炎病毒感染的24例TTV阳性患者中有6例ALT升高史，无合并肝炎病毒感染的53例TTV-DNA阳性者中只有4例ALT升高史(25.0% vs 7.0% P<0.05)，提示TTV与肝炎病毒关系密切. TTV与肝炎病毒的重叠感染可能使患者的肝功能异常进一步加重. 在80例TTV阳性患者中有5例(6.0%)合并HBV感染，与TTV阴性组(5.0%)相当，但合并HCV感染及HCV，HBV双重感染差别显著(P<0.05)(16.0% vs 11.0%及6.0% vs 2.0%)，提示TTV与肝炎病毒重叠感染的现象十分严重，尤其是HCV及HBV、HCV双重感染，应该引起我们高度的重视. 至于患者是先感染TTV后更易感染HCV，还是相反，目前尚不清楚，尚待进一步研究.
作者简介：孙脊峰(1962-)，男(汉族)，黑龙江省佳木斯市人. 1985年第四军医大学毕业，硕士，讲师，主治医师，科室副主任. Tel.(029)3577424(O)；3577224(H)
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参考文献：
[1] Nishizawa T,Okamoto H, Keinishi K et al.A novel DNA virus (TTV) associated with elevated transminase levels in post transfusion hepatitis of unknown etiology [J]. Biochem Biophys Res Commum, 1997;241:92-97.
[2] Okamoto H,Nishizawa T,Kato K et al. Molecular cloning and characterization of a novel DNA virus(TTV)associated with post transfusion of unknown etiology[J]. Hepat Res, 1998;10:1-16.
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[3] 骆抗先，章 廉，王珊珊et al . 一种新型肠传性病毒性肝炎的流行病学、临床、病理和病毒学的初步研究[J] 第一军医大学学报，1998；18(1)：87-90.
[4] Alter MJ, Favero MS, Maynard JE. Impact of infection control strategics on[J]. J Infect Dis, 1998;153:1149-1156.
[5] 金根娣，张东华，陆志檬et al. 上海地区血透患者与供血者中TTV-DNA检测. 全国第五届病毒性肝炎学术会议论文汇编, 254-255.
[6] 马为明，周伯平，王火生et al. 一种新的可经输血传播病毒(TTV)的分子流行病学研究[J] 中华肝脏病杂志，1998;6(3)：167-169.
[7] Simmonds P, Davidson F, Prescott CLE et al .Detection of a novel DNA virus (TTV) in blood and blood products[J]. LANCET, 1998;352(7):18-20.
[8] Hassan AA, Khalil RY. Prevalence of three blood borne virus (HBV,HCV,HIV-1) among hemodialysys patients in Cairo[J]. Saudi Kidney Dis Transplant Bull,1993；4:72-75.
收稿日期:1999-10-14
修回日期:2000-04-12, 百拇医药