穿刺抽取兔骨髓的方法
作者：刘丹平 胡蕴玉 施新猷 孙龙 马生兵
单位：刘丹平(第四军医大学：西京医院全军骨科研究所)；胡蕴玉(第四军医大学：西京医院全军骨科研究所)；施新猷(实验动物中心，陕西 西安 710033)；孙龙(第四军医大学：西京医院全军骨科研究所)；马生兵(第四军医大学：西京医院全军骨科研究所)
关键词：兔；骨髓；穿刺；抽取方法
第四军医大学学报000631 摘要:目的 寻找方便可靠的抽取兔骨髓的方法. 方法 制备兔骨骼标本，观察其后肢骨的局部解剖特点和骨髓腔的大小及分布，利用兔骨骼的体表标志，确定穿刺抽取骨髓的部位和范围. 结果 提出在兔后肢骨的髋骨、股骨、胫骨三块骨上适合骨髓穿刺的4个穿刺点，即①坐骨穿刺点(坐骨结节与坐骨结节外侧突尖端连线的中点)；②股骨上穿刺点(股骨第三转子尖下方0.3～0.5 cm处)；③股骨下穿刺点(膝关节间隙上方1.0～1.5 cm范围的外侧骨面)；④胫骨穿刺点(胫骨上部前内侧骨面，距胫骨平台1.0～2.5 cm范围内). 本文也介绍了在这4个穿刺点抽取骨髓的经验体会. 结论 按照本文提出的程序和规则操作，可顺利地抽出兔骨髓.
, 百拇医药
中图号：R332 文献标识码：B
文章编号：1000-2790(2000)06-0741-04
Aspiration of rabbit bone marrow by bone puncture
LIU Dan-Ping HU Yun-Yu SUN Long MA Sheng-Bing
(Institute of Orthopedics of Chinese PLA, Xijing Hospital)
SHI Xin-You
(Laboratory Aminal Research Center, Fourth Military Medical University, Xi'an 710033, China)
, 百拇医药
Abstract:AIM To probe into better methods to obtain bone marrow (BM) by bone puncture and aspiration from rabbit bones. METHODS: Locations and extents of puncture points(PPs) at rabbit hind limb bones suitable for aspiration of BM were determined by preparation of the skeleton specimen, observations of the topographic features and the size and distribution of BM cavities of these bones and utilization of landmarks on their body surface. RESULTS Four puncture points (PPs) suitable for aspiration of BM on the hip bone, femur and tibia were proposed. They were:①ischium PP: at the middle point between tuberosity of ischium and lateral process of ischial tuberosity; ②superior femoral PP: In the extent of 0.3～0.5 cm below the third trochanter apex of femur; ③inferior femoral PP: In the extent of 1.0～1.5 cm of lateral bone surface up the space of knee joint; ④anterointernal tibial PP: In the extent of 1.0～2.5 cm of anterointernal bone surface below the space of knee joint at the upper part of tibia. In the present paper the author's experience of bone puncture and aspiration of BM at the four PPs was also introduced. CONCLUSION Manipulated according to the procedures and regulations proposed in the present paper, rabbit BM can easily be aspirated from the four points.
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Keywords:rabbit; bone marrow; puncture; aspiration
0 引言
兔是草食性哺乳动物，其骨髓总量的47%在后腿[1]. 在许多实验中，不论是研究骨髓基质干细胞的增殖分化规律[2,3]，还是观察骨髓对某些疾病，如骨折或骨不连[4,5]等的治疗作用，兔骨髓是较好的实验材料. 原因是动物价格低廉，骨髓比较集中，获取方法简单. 因此目前在这方面的研究兔已是仅次于鼠的常用的实验动物. 由于实验要求不同，有些实验在麻醉下或处死动物后，取其骨盆骨或股骨，截成骨块，用无血清培养基冲出骨髓进行研究[3,6]. 这种方法取得的骨髓不被外周血所稀释，是相对纯净的骨髓. 另有一些实验需要保留实验动物，如观察自体骨髓对骨缺损模型的治疗作用[4,5]或利用骨髓进行骨或软骨组织工程方面的研究，这时只能在其骨骼的某些部位选择一点或数点穿刺抽吸而获得骨髓. 本文介绍我们穿刺抽取兔骨髓的方法和体会.
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1 材料和方法
随机取两只健康雌性新西兰白兔，8 mo～1 a龄，体质量分别为 2.08 kg和2.26 kg. 将其中一只处死后取其后肢骨，剥去附丽其上的肌肉及筋膜组织，放入水中煮沸30 min，再进一步清除其上的软组织，使骨骼的表面结构完全暴露，记录并分析这些结构的局部解剖特点，并与另一只兔(活兔)后肢骨骼的体表标志进行对比研究. 将处理过的后肢骨的股骨、胫骨外侧皮质骨用砂轮打磨掉，观察两骨骨髓腔的大小与分布. 再随机取两只健康雄性新西兰白兔，年龄8 mo～1 a龄，体质量分别为1.85 kg和2.12 kg，重复上述处理和观察过程.
2 兔后肢骨的应用解剖
理论上，穿刺针刺入任何骨髓腔均可抽得骨髓，但在实际操作中，应选择骨髓含量多，体表标志明显，易于选点和穿刺的骨骼部位. 兔后肢骨由腰带(一对髋骨)、大腿骨、小腿骨及后脚骨组成[7]，其中以髋骨、股骨和胫骨三块较大的骨块适合穿刺抽取骨髓. 在实验中我们观察到雌性与雄性新西兰白兔后肢骨的局部解剖特点是一致的.
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2.1 髋骨 形状不规则，由髂骨、坐骨、耻骨三块骨组成，三骨汇合处形成髋臼，由于髋臼的存在使此处骨质变得薄而不规则，故髋臼周围不适合穿刺. 髂骨构成骨盆的前侧壁，髂骨翼宽阔而薄扁，虽然在其前缘的髂骨嵴略有增宽，而且也有选择髂骨嵴后部为穿刺点的报道[8]. 但我们体会此处在体表虽可摸到，却不易于纵向穿刺. 坐骨位于髂骨的后方，其长轴与髂骨在一条轴线上，构成骨盆的后部侧壁，坐骨上枝是坐骨体向后的延续，其后方有两个明显的突起分别为坐骨结节和其前侧的坐骨结节外侧突，这两个突起是明显的体表标志，其下为宽厚的坐骨上下枝转折处，此处是一个很好的穿刺部位，我们在此处已进行了8次穿刺，每次均成功穿出骨髓(Fig 1).
2.2 股骨 是兔体内最粗最结实的长骨，其近端是由股骨头、大转子、小转子、第三转子形成的扇状的骨性结构，此处的一个显著特点是大转子与第三转子内侧有一个很深的凹陷即转子窝，它恰在股骨的纵轴上，虽然大转子与第三转子在体表可清楚触及，但由于转子窝的存在使此处骨质变薄，而且在转子窝的上部有大转子骨骺与股骨头骨骺相连，故第三转子近侧不适合骨髓穿刺. 但第三转子下骨质宽阔，髓腔较大，适合穿刺. Paley等[5]报道的从大转子沿股骨轴线刺入股骨干骨髓腔抽取骨髓方法，需穿过大转子，经转子窝，再进入股骨干骺端，不易操作. 股骨远端前面有滑车状关节面与膝盖骨构成关节，后侧的内、外侧髁之间有较深的髁间窝. 股骨内外侧髁骨骺骺线在后侧位于髁间窝的上方，在两侧呈V字型延伸至前侧滑车关节面上部，骺线之上有宽厚的骨质可供穿刺. 股骨中部的股骨干骨皮质很厚，穿刺困难(Fig 2，3).
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2.3 胫骨 与在其下半部与之愈合的腓骨一起构成兔体内最长的长骨. 胫骨上部呈三棱柱状，内前侧为三棱柱的一个侧面，平坦而宽大，是骨髓穿刺选择部位之一. 胫骨上端有骨骺，穿刺时应避开它(Fig 4).
综上所述，兔后肢骨有坐骨，股骨上、下部，胫骨前内侧四处骨髓穿刺点.
3 兔骨髓穿刺的方法及注意事项
3.1 麻醉 我们主张在全麻下，无需捆绑动物,避免挣扎,取其自然放松体位穿刺抽吸，得心应手.
3.2 准确选择穿刺点 动物体表的骨性标志是选好穿刺点的最重要的参照物.
3.2.1 坐骨穿刺点 从兔尾根部向两侧触摸或沿两侧大转子向后触摸，很容易触摸到坐骨结节和坐骨结节外侧突，两者尖端距离约0.8～1.0 cm，在两者尖端连线的中点向内下前方刺入即可(Fig 1).
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3.2.2 股骨穿刺点有两个 A. 股骨上穿刺点 在股骨第三转子尖下方0.3～0.5 cm处，与股骨轴线垂直从外向内上方穿入(Fig 2,3)；B. 股骨下穿刺点 在膝关节间隙上方1.0～1.5 cm处垂直于股骨轴线从外向内后方刺入(Fig 2).
3.2.3 胫骨前内侧穿刺点 在胫骨上部前内侧骨面，距胫骨平台(胫骨近侧关节面)1.0～2.5 cm的范围内穿刺(Fig 4).
3.3 抗凝方法 做骨髓涂片一般不用抗凝剂，但用骨髓做某些研究时(如观察其基质系统的成骨作用)需用肝素抗凝. 方法是将少许肝素抗凝剂抽入空针管并转动空针管使之冲洗管壁；在穿刺前，拨出针蕊，用抗凝剂冲洗一下穿刺针管，这样抗凝效果较好，而初学者多遗忘后一步操作. 有报道[9]肝素抗凝剂的配制方法是用肝素注射液一支(12 500 u)溶于25 mL无菌生理盐水中，即成每毫升含500 u肝素的使用液，但我们观察用上述使用液抽出的兔骨髓有时仍有凝固现象，故我们常把一支肝素注射液溶于20 mL生理盐水中，这样配制的使用液效果较好.
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3.4 穿刺过程分两步进行 在无菌状态下，将骨髓穿刺针先在穿刺点处刺入皮肤，然后再将穿刺针尖抵住穿刺点部位的骨膜，找准方向，以“先轻后重”的方式穿刺，即开始时以转动为主，推力不要过大，以免针头从穿刺处滑脱，待在骨皮质处形成一个小凹陷时，再加大推力，即可刺入骨髓腔. 刺入骨髓腔时有明显的落空感.
3.5 注意事项 穿刺点不要太接近关节面，因为在骺板闭合前，由于骺板的阻隔，骨骺骨髓不与干骺端骨髓相通，若穿刺时穿入骨骺或骺板，很难抽出大量骨髓. 抽吸骨髓时，用力不要过大，但要持续，数秒钟后骨髓即可缓慢流入针管. 这个过程不象抽静脉血那样容易抽出. 抽吸时，穿刺针可不动，也可同时转动方向或向深部骨髓腔刺入，甚至可达对侧骨皮质. 穿刺后需用无菌棉球或纱布压在穿刺点上1～3 min,按压时不要揉搓，以防止血液或骨髓液从针眼处流出,形成皮下血肿. 在抽取胫骨骨髓时更应注意这种情况的发生.
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图 1 兔的左髋骨(外侧面)和坐骨穿刺点
Fig 1 Left hipbone of rabbit (lateral surface) and ischium puncture point
图 2 兔的左股骨(前面)和股骨上、下穿刺点
Fig 2 Left femur of rabbit (anterior surface) and superior and inferior femoral puncture points
图 3 兔的左股骨(后面)和股骨上穿刺点. 大转子与第三转子之间有转子窝向外延伸
Fig 3 Left femur of rabbit (posterior surface) and superior femoral puncture point. Attention to trochanteric fossa which locates between greater trochanter and the third trochanter from the lateral view
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图 4 兔的右胫骨(前面)和胫骨前内侧穿刺点
Fig 4 Right tibia of rabbit (anterior surface) and anterointernal tibial puncture point
4 讨论
我们推荐了在兔后肢骨穿刺抽吸骨髓的4个部位，其中坐骨穿刺点尚未发现有文献报道，其他3个虽有文献提到，但穿刺部位描述不甚具体[5,10，11]. 看来许多学者在兔骨髓穿刺时更注重穿刺抽出骨髓即可，而不强调选择更恰当的部位，因此在穿刺时难免出现失败. 我们推荐的4个穿刺点是建立在局部解剖观察的基础之上，只要穿刺方法得当，成功率高. 因为我们在摸索穿刺部位和方法时出现过把穿刺针抽出的外周血误认为是骨髓进行体外培养的情况，这种情况多由于穿透对侧骨皮质或穿刺针延骨膜滑脱，没进入骨髓腔，而穿刺者误认为已在骨髓腔内.
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在穿刺方法上，胫骨结节前内侧穿刺点最为方便，在股骨穿刺点穿刺针易向两侧滑脱，只要掌握好“先轻后重”的方法即可克服. 在坐骨结节穿刺点穿刺易于穿透骨质，主要原因是方向不对，往往是过于垂直或水平，正确的方法是向内前下方穿刺，多能成功.
此外，我们向读者建议，在一处穿刺点最好抽出容量为2 mL以内的骨髓，若抽出大于5 mL的骨髓，骨髓就明显地被外周血稀释，这可能影响您的实验结果，这一点我们已通过穿刺抽出不同骨髓量的骨髓像和体外培养骨髓形成的成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)克隆数量差异得到证实.
作者简介：刘丹平(1961-)，男(汉族)，吉林省长春市人. 博士后,副教授. 现在锦州医学院工作. Tel.(0416)4168849 Ext.2250
参考文献:
[1] 成令忠. 组织学[M]. 第2版，北京：人民卫生出版社，1994：395-395.
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[2] Owen ME, Cave J, Joyner CJ. Clonal analysis in vitro of osteogenic differentiation of marrow CFU-F[J]. J Cell Sci, 1987; 87(pt5):731-738.
[3] Friedenstein AJ, Chailakhyan RK, Gerasimov U V. Bone marrow osteogenic stem cells: In vitro cultivation and transplantation in diffusion chambers[J]. Cell Tissue Kinet, 1987; 20(3):263-272.
[4] 张效良，陆庄樵，于进祥 et al. 自体骨髓移植促进骨愈合的实验研究[J]. 中华创伤杂志, 1993; 9(6):326-329.
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[5] Paley D, Young MC, Wiley AM et al. Percutaneous bone marrow grafting of fractures and bony defects[J]. Clin Orthop, 1986; 208(7):300-312.
[6] Ashtan BA, Phil D, Allen TD et al. Formation of bone and cartilage by marrow stromal cells in diffusion chambers in vivo[J]. Clin Orthop, 1980; 151(9):294-307.
[7] 杨安峰. 兔的解剖[M]. 北京：科学出版社，1979：30-33.
[8] Connolly J, Guse R, Lippiello L et al. Development of an osteogenic bone marrow preparation[J]. J Bone Joint Surg(Am), 1989; 71(5):684-691.
, 百拇医药
[9] 龚守良. 实用基础医学实验技术[M]. 长春: 吉林科学技术出版社, 1991:63-67.
[10] Ashton BA, Eaglesom CC, Bab I et al. Distribution of fibroblastic colony-forming cells in rabbit bone marrow and assay of their osteogenic potential by an in vivo diffusion chamber method[J]. Calcif Tissue Int, 1984; 36(1):83-86.
[11] 王万明，胡蕴玉，赵广跃et al.培养状态下兔骨髓基质细胞的生长特性[J].第四军医大学学报, 1998; 19(2):159-163.
收稿日期:1999-09-21
修回日期:1999-11-01, 百拇医药
单位：刘丹平(第四军医大学：西京医院全军骨科研究所)；胡蕴玉(第四军医大学：西京医院全军骨科研究所)；施新猷(实验动物中心，陕西 西安 710033)；孙龙(第四军医大学：西京医院全军骨科研究所)；马生兵(第四军医大学：西京医院全军骨科研究所)
关键词：兔；骨髓；穿刺；抽取方法
第四军医大学学报000631 摘要:目的 寻找方便可靠的抽取兔骨髓的方法. 方法 制备兔骨骼标本，观察其后肢骨的局部解剖特点和骨髓腔的大小及分布，利用兔骨骼的体表标志，确定穿刺抽取骨髓的部位和范围. 结果 提出在兔后肢骨的髋骨、股骨、胫骨三块骨上适合骨髓穿刺的4个穿刺点，即①坐骨穿刺点(坐骨结节与坐骨结节外侧突尖端连线的中点)；②股骨上穿刺点(股骨第三转子尖下方0.3～0.5 cm处)；③股骨下穿刺点(膝关节间隙上方1.0～1.5 cm范围的外侧骨面)；④胫骨穿刺点(胫骨上部前内侧骨面，距胫骨平台1.0～2.5 cm范围内). 本文也介绍了在这4个穿刺点抽取骨髓的经验体会. 结论 按照本文提出的程序和规则操作，可顺利地抽出兔骨髓.
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中图号：R332 文献标识码：B
文章编号：1000-2790(2000)06-0741-04
Aspiration of rabbit bone marrow by bone puncture
LIU Dan-Ping HU Yun-Yu SUN Long MA Sheng-Bing
(Institute of Orthopedics of Chinese PLA, Xijing Hospital)
SHI Xin-You
(Laboratory Aminal Research Center, Fourth Military Medical University, Xi'an 710033, China)
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Abstract:AIM To probe into better methods to obtain bone marrow (BM) by bone puncture and aspiration from rabbit bones. METHODS: Locations and extents of puncture points(PPs) at rabbit hind limb bones suitable for aspiration of BM were determined by preparation of the skeleton specimen, observations of the topographic features and the size and distribution of BM cavities of these bones and utilization of landmarks on their body surface. RESULTS Four puncture points (PPs) suitable for aspiration of BM on the hip bone, femur and tibia were proposed. They were:①ischium PP: at the middle point between tuberosity of ischium and lateral process of ischial tuberosity; ②superior femoral PP: In the extent of 0.3～0.5 cm below the third trochanter apex of femur; ③inferior femoral PP: In the extent of 1.0～1.5 cm of lateral bone surface up the space of knee joint; ④anterointernal tibial PP: In the extent of 1.0～2.5 cm of anterointernal bone surface below the space of knee joint at the upper part of tibia. In the present paper the author's experience of bone puncture and aspiration of BM at the four PPs was also introduced. CONCLUSION Manipulated according to the procedures and regulations proposed in the present paper, rabbit BM can easily be aspirated from the four points.
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Keywords:rabbit; bone marrow; puncture; aspiration
0 引言
兔是草食性哺乳动物，其骨髓总量的47%在后腿[1]. 在许多实验中，不论是研究骨髓基质干细胞的增殖分化规律[2,3]，还是观察骨髓对某些疾病，如骨折或骨不连[4,5]等的治疗作用，兔骨髓是较好的实验材料. 原因是动物价格低廉，骨髓比较集中，获取方法简单. 因此目前在这方面的研究兔已是仅次于鼠的常用的实验动物. 由于实验要求不同，有些实验在麻醉下或处死动物后，取其骨盆骨或股骨，截成骨块，用无血清培养基冲出骨髓进行研究[3,6]. 这种方法取得的骨髓不被外周血所稀释，是相对纯净的骨髓. 另有一些实验需要保留实验动物，如观察自体骨髓对骨缺损模型的治疗作用[4,5]或利用骨髓进行骨或软骨组织工程方面的研究，这时只能在其骨骼的某些部位选择一点或数点穿刺抽吸而获得骨髓. 本文介绍我们穿刺抽取兔骨髓的方法和体会.
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1 材料和方法
随机取两只健康雌性新西兰白兔，8 mo～1 a龄，体质量分别为 2.08 kg和2.26 kg. 将其中一只处死后取其后肢骨，剥去附丽其上的肌肉及筋膜组织，放入水中煮沸30 min，再进一步清除其上的软组织，使骨骼的表面结构完全暴露，记录并分析这些结构的局部解剖特点，并与另一只兔(活兔)后肢骨骼的体表标志进行对比研究. 将处理过的后肢骨的股骨、胫骨外侧皮质骨用砂轮打磨掉，观察两骨骨髓腔的大小与分布. 再随机取两只健康雄性新西兰白兔，年龄8 mo～1 a龄，体质量分别为1.85 kg和2.12 kg，重复上述处理和观察过程.
2 兔后肢骨的应用解剖
理论上，穿刺针刺入任何骨髓腔均可抽得骨髓，但在实际操作中，应选择骨髓含量多，体表标志明显，易于选点和穿刺的骨骼部位. 兔后肢骨由腰带(一对髋骨)、大腿骨、小腿骨及后脚骨组成[7]，其中以髋骨、股骨和胫骨三块较大的骨块适合穿刺抽取骨髓. 在实验中我们观察到雌性与雄性新西兰白兔后肢骨的局部解剖特点是一致的.
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2.1 髋骨 形状不规则，由髂骨、坐骨、耻骨三块骨组成，三骨汇合处形成髋臼，由于髋臼的存在使此处骨质变得薄而不规则，故髋臼周围不适合穿刺. 髂骨构成骨盆的前侧壁，髂骨翼宽阔而薄扁，虽然在其前缘的髂骨嵴略有增宽，而且也有选择髂骨嵴后部为穿刺点的报道[8]. 但我们体会此处在体表虽可摸到，却不易于纵向穿刺. 坐骨位于髂骨的后方，其长轴与髂骨在一条轴线上，构成骨盆的后部侧壁，坐骨上枝是坐骨体向后的延续，其后方有两个明显的突起分别为坐骨结节和其前侧的坐骨结节外侧突，这两个突起是明显的体表标志，其下为宽厚的坐骨上下枝转折处，此处是一个很好的穿刺部位，我们在此处已进行了8次穿刺，每次均成功穿出骨髓(Fig 1).
2.2 股骨 是兔体内最粗最结实的长骨，其近端是由股骨头、大转子、小转子、第三转子形成的扇状的骨性结构，此处的一个显著特点是大转子与第三转子内侧有一个很深的凹陷即转子窝，它恰在股骨的纵轴上，虽然大转子与第三转子在体表可清楚触及，但由于转子窝的存在使此处骨质变薄，而且在转子窝的上部有大转子骨骺与股骨头骨骺相连，故第三转子近侧不适合骨髓穿刺. 但第三转子下骨质宽阔，髓腔较大，适合穿刺. Paley等[5]报道的从大转子沿股骨轴线刺入股骨干骨髓腔抽取骨髓方法，需穿过大转子，经转子窝，再进入股骨干骺端，不易操作. 股骨远端前面有滑车状关节面与膝盖骨构成关节，后侧的内、外侧髁之间有较深的髁间窝. 股骨内外侧髁骨骺骺线在后侧位于髁间窝的上方，在两侧呈V字型延伸至前侧滑车关节面上部，骺线之上有宽厚的骨质可供穿刺. 股骨中部的股骨干骨皮质很厚，穿刺困难(Fig 2，3).
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2.3 胫骨 与在其下半部与之愈合的腓骨一起构成兔体内最长的长骨. 胫骨上部呈三棱柱状，内前侧为三棱柱的一个侧面，平坦而宽大，是骨髓穿刺选择部位之一. 胫骨上端有骨骺，穿刺时应避开它(Fig 4).
综上所述，兔后肢骨有坐骨，股骨上、下部，胫骨前内侧四处骨髓穿刺点.
3 兔骨髓穿刺的方法及注意事项
3.1 麻醉 我们主张在全麻下，无需捆绑动物,避免挣扎,取其自然放松体位穿刺抽吸，得心应手.
3.2 准确选择穿刺点 动物体表的骨性标志是选好穿刺点的最重要的参照物.
3.2.1 坐骨穿刺点 从兔尾根部向两侧触摸或沿两侧大转子向后触摸，很容易触摸到坐骨结节和坐骨结节外侧突，两者尖端距离约0.8～1.0 cm，在两者尖端连线的中点向内下前方刺入即可(Fig 1).
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3.2.2 股骨穿刺点有两个 A. 股骨上穿刺点 在股骨第三转子尖下方0.3～0.5 cm处，与股骨轴线垂直从外向内上方穿入(Fig 2,3)；B. 股骨下穿刺点 在膝关节间隙上方1.0～1.5 cm处垂直于股骨轴线从外向内后方刺入(Fig 2).
3.2.3 胫骨前内侧穿刺点 在胫骨上部前内侧骨面，距胫骨平台(胫骨近侧关节面)1.0～2.5 cm的范围内穿刺(Fig 4).
3.3 抗凝方法 做骨髓涂片一般不用抗凝剂，但用骨髓做某些研究时(如观察其基质系统的成骨作用)需用肝素抗凝. 方法是将少许肝素抗凝剂抽入空针管并转动空针管使之冲洗管壁；在穿刺前，拨出针蕊，用抗凝剂冲洗一下穿刺针管，这样抗凝效果较好，而初学者多遗忘后一步操作. 有报道[9]肝素抗凝剂的配制方法是用肝素注射液一支(12 500 u)溶于25 mL无菌生理盐水中，即成每毫升含500 u肝素的使用液，但我们观察用上述使用液抽出的兔骨髓有时仍有凝固现象，故我们常把一支肝素注射液溶于20 mL生理盐水中，这样配制的使用液效果较好.
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3.4 穿刺过程分两步进行 在无菌状态下，将骨髓穿刺针先在穿刺点处刺入皮肤，然后再将穿刺针尖抵住穿刺点部位的骨膜，找准方向，以“先轻后重”的方式穿刺，即开始时以转动为主，推力不要过大，以免针头从穿刺处滑脱，待在骨皮质处形成一个小凹陷时，再加大推力，即可刺入骨髓腔. 刺入骨髓腔时有明显的落空感.
3.5 注意事项 穿刺点不要太接近关节面，因为在骺板闭合前，由于骺板的阻隔，骨骺骨髓不与干骺端骨髓相通，若穿刺时穿入骨骺或骺板，很难抽出大量骨髓. 抽吸骨髓时，用力不要过大，但要持续，数秒钟后骨髓即可缓慢流入针管. 这个过程不象抽静脉血那样容易抽出. 抽吸时，穿刺针可不动，也可同时转动方向或向深部骨髓腔刺入，甚至可达对侧骨皮质. 穿刺后需用无菌棉球或纱布压在穿刺点上1～3 min,按压时不要揉搓，以防止血液或骨髓液从针眼处流出,形成皮下血肿. 在抽取胫骨骨髓时更应注意这种情况的发生.
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图 1 兔的左髋骨(外侧面)和坐骨穿刺点
Fig 1 Left hipbone of rabbit (lateral surface) and ischium puncture point
图 2 兔的左股骨(前面)和股骨上、下穿刺点
Fig 2 Left femur of rabbit (anterior surface) and superior and inferior femoral puncture points
图 3 兔的左股骨(后面)和股骨上穿刺点. 大转子与第三转子之间有转子窝向外延伸
Fig 3 Left femur of rabbit (posterior surface) and superior femoral puncture point. Attention to trochanteric fossa which locates between greater trochanter and the third trochanter from the lateral view
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图 4 兔的右胫骨(前面)和胫骨前内侧穿刺点
Fig 4 Right tibia of rabbit (anterior surface) and anterointernal tibial puncture point
4 讨论
我们推荐了在兔后肢骨穿刺抽吸骨髓的4个部位，其中坐骨穿刺点尚未发现有文献报道，其他3个虽有文献提到，但穿刺部位描述不甚具体[5,10，11]. 看来许多学者在兔骨髓穿刺时更注重穿刺抽出骨髓即可，而不强调选择更恰当的部位，因此在穿刺时难免出现失败. 我们推荐的4个穿刺点是建立在局部解剖观察的基础之上，只要穿刺方法得当，成功率高. 因为我们在摸索穿刺部位和方法时出现过把穿刺针抽出的外周血误认为是骨髓进行体外培养的情况，这种情况多由于穿透对侧骨皮质或穿刺针延骨膜滑脱，没进入骨髓腔，而穿刺者误认为已在骨髓腔内.
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在穿刺方法上，胫骨结节前内侧穿刺点最为方便，在股骨穿刺点穿刺针易向两侧滑脱，只要掌握好“先轻后重”的方法即可克服. 在坐骨结节穿刺点穿刺易于穿透骨质，主要原因是方向不对，往往是过于垂直或水平，正确的方法是向内前下方穿刺，多能成功.
此外，我们向读者建议，在一处穿刺点最好抽出容量为2 mL以内的骨髓，若抽出大于5 mL的骨髓，骨髓就明显地被外周血稀释，这可能影响您的实验结果，这一点我们已通过穿刺抽出不同骨髓量的骨髓像和体外培养骨髓形成的成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)克隆数量差异得到证实.
作者简介：刘丹平(1961-)，男(汉族)，吉林省长春市人. 博士后,副教授. 现在锦州医学院工作. Tel.(0416)4168849 Ext.2250
参考文献:
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收稿日期:1999-09-21
修回日期:1999-11-01, 百拇医药