金黄地鼠颊囊癌前病变癌变的综合监测研究——DNA、SPF、AgNOR、PCNA及APO的研究
作者：王文梅 郑际烈 唐巍 周振英 黄晓峰 蒋文晖
单位：王文海，郑际烈，唐巍，黄晓峰，蒋文晖(210008南京，南京大学医学院附属口腔医院)；周振英(江苏省肿瘤病防治研究所)
关键词：癌前状态；监测
临床口腔医学杂志990213 提 要 目的 评价DNA含量(DI)、倍体、S期细胞比例(SPF)、银染核仁形成区(AgNOR)、增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞凋亡指数(APO)在口腔粘膜癌前病变癌变监测中的价值及临床应用意义。方法 应用流式细胞仪(FCM)、免疫组化等方法对DMBA致地鼠颊囊粘膜癌前病变及癌变过程中的DNA含量、倍体、SPF、AgNOR及APO进行定量检测。结果 在Ⅰ—Ⅳ组间(Ⅰ组为正常颊囊粘膜、Ⅱ组为上皮单纯增生、Ⅲ组为上皮异常增生、Ⅳ组为癌肿组)DNA含量、异倍体出现率、SPF、AgNOR计数及PCNA表达依次递增；APO指数随Ⅰ—Ⅲ组依次升高，Ⅳ组时下降。多元逐步判别分析，建立判别函数方程，回代判别准确率为90%。结论 本实验结果提示综合监测为口腔粘膜癌前病变癌变的细胞动力学的动态规律的观察提供有益的资料，并对进一步从分子生物学水平研究癌前病变及其癌变将具有重要价值。
, 百拇医药
Combinationof cell proliferation and apoptosis to predict malig nant potential of Golden Hamster cheek pouch premalignancy Wang Wenme i,Zheng Jilie,Tang Wei,et al.Affiliated Nanjing Stomatology Hospital of Coll ege of Nanjing University,Nanjing 210008
Abstract Objective Combination of cell proliferation and a poptosis to predict malignant potential of DMBA-induced Goledn Hamster cheek pou ch premalignancy.Methods DMBA-induced golden hamster cheek pouch carc inogenesis model was done.There were four histological types of the model incl ouding normal,hyperplasia,dysplasia and carcinoma.DNA Index(DI),SPF,PCNA,AgNOR and apoptosis were detected by flow cytometry(FCM),immunohistochemical and histoche mical methods.Results DI,SPF,PCNA and AgNOR indices were increased from normal to premalignancy but decreased after carcinogenesis.Then the discrimin ant function equation was found using these indices at 90.01 percent of back subs titution accuracy.Conclusion The indices of DI,SPF,PCNA,AgNOR and ap optosis can reflect the cellular dynaic changes of Hamster cheek pouch carcinoge nesis.They revealed the incipient celluar alterations which were not evident in routine pathological examine and contributed to the characterization of different states of carcinogenesis in this model.
, 百拇医药
Key words precancerous conditions forecasting
材料和方法
1.动物模型建立
动物来源：选用上海生物制品研究所提供的叙利亚雄性金黄地鼠30只，鼠龄5～8周，体重80～100g，普通合格级。以全价营养颗粒饲料饲养，在空气流通、室温18～26℃，相对湿度75～80%条件下饲养，每笼5只。
分组：30只地鼠随机分为：空白对照组：5只，不作任何处理，2只于实验开始时，3只于实验结束时处死取材；实验组：25只，根据DMBA涂布周数又分3周组、6周组、9周组、12周组及涂布6周后观察12周组。
模型建立：实验组用0.5%DMBA丙酮液于地鼠双侧颊中央涂抹，每周3次，定期取材，标本部分送常规病检及免疫组化检测，部分送流式细胞仪检测。
, 百拇医药
2.DNA含量、倍体、SPF、AgNOR、PCNA、APO检测
常规病检：标本经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，HE染色后按WHO(1978年)标准诊断分类。
FCM检测：新鲜标本用机械法制成单细胞悬液，再固定、染色。使用美国BD公司生产的型号为FACSCalibur的FCM进行单参数DNA含量定量分析，微机控制程序自动获取10000个细胞/样品，用ModFitLT程序分析细胞DNA含量。
AgNOR检测：AgNOR银染根据Ploton改良的石蜡切片染色方法。计数及分型方法依照1995年第五届全国临床细胞学会议讨论通过的修改后的标准方案。
PCNA检测：采用免疫组化染色(一步法)，特异性抗体为DAKO—PCNA，微波处理〔1〕。
, 百拇医药
3.统计学处理：
各组测定值不呈正态分布，差别显著性用秩和检验。多元逐步判别采用多类Bays判别法。计算机软件：Statisticaloanalysis system。
结果
1.光镜下组织病理学检查(图1～6)：
图1 单纯上皮增生 免疫组化一步法示PCNA 10×40
图2 重度上皮异常增生 免疫组化一步法示PCNA 10×10
, 百拇医药
图3 鳞癌 免疫组化一步法示PCNA 10×40
图4 单纯上皮增生 银染法示AgNOR 10×100
图5 重度上皮异常增生 银染法示AgNOR 10×100
图6 鳞癌 银染法示AgNOR 10×100
DMBA涂布3周时，9侧颊囊为单纯增生，1侧为异常增生；涂布6周时3侧为单纯增生，7侧为异常增生；涂布9周时7侧为异常增生，9侧为癌症；涂布12周时，1侧为异常增生，9侧为癌症；涂布6周观察至12周时，2侧为异常增生，8侧为癌症。
, 百拇医药
2.DNA、SPF、AgNOR、PCNA及APO检测结果。
2.1FCM检测结果示：
癌肿组异倍体检出率最高为70%(14/20)，DNA含量最高，与其它三组比较差异有显著性(表2)。SPF的增加在异常增生组达到顶峰，其与正常粘膜组、单纯增生组比较有显著性差异(P<0.01)；与癌肿组比较无显著性差异(P>0.05)。APO在异常增生组增加显著,与其它三组有显著差异。(P<0.01)；在癌肿组APO下降，与比较有显著性差异(P<0.01)(表1)。
表1 四组各种指标测量结果 组 别
DI
SPF
AgNOR
, 百拇医药 PCNA
APO
±s
1±0
1.23±1.09
3.04±0.51
15.1±5.36
0.99±0.75
Ⅰ组(10侧)
M
1
0.99
, 百拇医药 3.2
16.5
0.96
Qu-QL
0
1.94
0.7
1
1.66±s
1.03±0.07
2.97±1.47
, http://www.100md.com
4.83±0.78
35.58±7.23
0.73±0.83
Ⅱ组(12侧)
M
1
2.99
4.7
36.5
0.51
Qu-QL
0
, 百拇医药
1.24
1.16
12
1.06±s
1.04±1.11
12.14±13.57
6.43±1.49
49.28±13.79
3.02±2.67
Ⅲ组(18侧)
M
, 百拇医药
1
7.26
6.12
51.5
2.71
Qu-QL
0
5.73
1.23
17
4.39±s
, 百拇医药
1.19±0.16
12.37±11.67
7.36±1.42
59.75±9.08
3.31±4.42
Ⅳ组(10侧)
M
1
9.99
7.1
61.5
0.47
, 百拇医药 Qu-QL
0
17.76
2.74
12
6.32
注：±s为均值，M为中位数，Qu-QL为四分位间距。表2 四组参数方差分析结果(秩和检验) 两两比较
DI
倍体
SPF
, 百拇医药
AgNOR
PCNA
APO
Ⅰ与Ⅱ组
-
-
**
**
**
-
Ⅰ与Ⅲ组
-
-
**
, 百拇医药
**
**
**
Ⅰ与Ⅳ组
**
**
**
**
**
-
Ⅱ与Ⅲ组
-
-
**
, 百拇医药
**
**
**
Ⅱ与Ⅳ组
**
**
*
**
**
-
Ⅲ与Ⅳ组
**
**
-
, 百拇医药
*
**
**
注：*:P<0.05 **:P<0.01 -:P>0.05
2.2AgNOR检测结果：
从Ⅰ—Ⅳ组AgNOR计数均值呈递增趋势，差异显著(P<0.05)。正常和单纯增生上皮内AgNOR颗粒大多为单一型，在中、重度异常增生组大多为聚集型，鳞癌病损中AgNOR弥散型，聚集型均可见到，偶见核仁内型(图1～3)。
2.3PCNA检测结果示：
PCNA指数随Ⅰ—Ⅳ组呈逐渐上升趋势，差异显著(P<0.01)。在异常增生组中，PCNA阳性细胞除了基底细胞和棘细胞深层可以观察到外，在棘细胞浅层，甚至颗粒层或上皮全层亦可见到。高分化鳞癌癌巢外层1/3～2/3的细胞PCNA阳性(图4～6)(表1，2)。
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3.各种指标间的相互关系及分类判别分析
DI、SPF、AgNOR及PCNA值间无论在正常粘膜、单纯增生、异常增生还是癌肿组均有明显的正相关关系(P<0.05)，提示这组指标从不同角度反映了细胞增殖活性。APO与其它指标无相关关系(P>0.05)。我们将以上指标作为自变量，临床病理诊断作为应变量，用Bays判别分析，经回代检验发现60例判别分类的准确率为90.01%。
讨论
越来越多的资料表明肿瘤发生与细胞增殖及凋亡关系失调有关。有学者同时从细胞增殖和凋亡水平二方面研究肿瘤和癌前病变〔1〕，有关颊囊粘膜癌前病变的研究尚未见到报道。
本资料经单因素分析显示：DNA含量异常、异倍体的出现主要在癌肿组，和其它三组比较有显著性差异,其它三组间无显著性差异(表2～3)这一结果支持许多学者的观点即：DNA含量和倍体是一个区分良恶性病变的新方法。本工作细胞周期研究中发现①二倍体和异倍体中都有SPF增高者，SPF随Ⅰ—Ⅲ组逐渐升高，组间差异显著(P<0.01)，提示倍体和SPF是独立的指标，在癌前病变中SPF的价值较倍体更明显；②SPF在Ⅲ组与Ⅳ组间无显著性差异,说明癌前病变在不同程度上具有与癌组织相似的增殖活性〔2〕(表1，2)。
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从表1及表2可以看出PCNA、AgNOR指数随着Ⅰ～Ⅳ组有依次增高趋势，每二组间皆有显著性差异,它们的定位和形态在Ⅰ～Ⅳ组间也有明显的不同与以往的报道一致〔1、3〕，这种动态变化的趋势反映了癌前病变癌变是一个连续的从量变到质变的过程，但这二个指标共同的弱点是不同组间个体与个体间的重叠现象较多，给临床的实际操作带来了一定的难度，这就有待于进一步综合分析。
在检测DNA含量，SPF，PCNA和AgNOR的同时，本实验对APO又进行了检测，结果显示异常增生时APO增高明显，与正常组和单纯增生组差异显著(P<0.05)；癌发生时，APO指数下降，与异常增生组比较有显著性差异(表1、2)。提示异常增生期存在细胞增殖和APO共同增高现象，与Rostein等报告一致〔4〕。推测：癌前病变时若基因的调控紊乱，如bc1～2、突变型P53过度表达，野生型P53缺失时，致APO受到抑制，最终导致上皮的癌变〔5〕。
, 百拇医药
上述指标从不同角度反映了细胞动力学变化，以往文献资料对口腔粘膜癌前病变、鳞癌的研究大多为各指标的单因素分析，有一定的局限性。由于癌前病变癌变的发生是多因素协同作用的结果，因此需从不同的角度去研究。对本资料的几个指标进行相关分析发现，除APO外均有明显的相关性。经分类Bays判别分析回代判别与临床病理诊断之符合率为90.01%。检验中我们发现有二例中重度异常增生被判为癌症，这是否反映上二例具有临床癌变的倾向，它在形态学癌变之前可能已有生物学状态的“癌变”，值得进一步探讨，其结果将为癌前病变的监测和早期诊断提供更客观的量化指标，为癌前病变癌变的机制研究提供有益的实验参考数据。
参考文献
[1]黄晓峰，张伟国，宗丽娟.PCNA、P53在口腔粘膜癌前病变及鳞癌中表达的免疫组化研究.上海口腔医学，1997，6：73～74.
[2]曹世龙主编.肿瘤学新理论与新技术.第1版，上海：上海科技教育出版社，1997.548～549，281～282，730.
, http://www.100md.com
[3]Schwinf AE,Foloc A,Morales A,et al.AgNOR mark epithelial foli in m alignant transformation in hamster cheek pouch carcinogenesis.J oral pathol Med. 1996,25:20～24.
[4]Rostein J,Sarma DSR,and Farber E.Sequential alterations in growth control and cell dynamics of rat hepatocytes in early precancerous steps in hep atocarcinogenesis.Cancer Res.1986,46:2377～2385.
[5]许凯黎.细胞凋亡基因异常调控在肿瘤和肺癌发生及发展中的研究进展.中国癌症杂志，1997，7：4～6.
(收稿：1999—01—26), 百拇医药
单位：王文海，郑际烈，唐巍，黄晓峰，蒋文晖(210008南京，南京大学医学院附属口腔医院)；周振英(江苏省肿瘤病防治研究所)
关键词：癌前状态；监测
临床口腔医学杂志990213 提 要 目的 评价DNA含量(DI)、倍体、S期细胞比例(SPF)、银染核仁形成区(AgNOR)、增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞凋亡指数(APO)在口腔粘膜癌前病变癌变监测中的价值及临床应用意义。方法 应用流式细胞仪(FCM)、免疫组化等方法对DMBA致地鼠颊囊粘膜癌前病变及癌变过程中的DNA含量、倍体、SPF、AgNOR及APO进行定量检测。结果 在Ⅰ—Ⅳ组间(Ⅰ组为正常颊囊粘膜、Ⅱ组为上皮单纯增生、Ⅲ组为上皮异常增生、Ⅳ组为癌肿组)DNA含量、异倍体出现率、SPF、AgNOR计数及PCNA表达依次递增；APO指数随Ⅰ—Ⅲ组依次升高，Ⅳ组时下降。多元逐步判别分析，建立判别函数方程，回代判别准确率为90%。结论 本实验结果提示综合监测为口腔粘膜癌前病变癌变的细胞动力学的动态规律的观察提供有益的资料，并对进一步从分子生物学水平研究癌前病变及其癌变将具有重要价值。
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Combinationof cell proliferation and apoptosis to predict malig nant potential of Golden Hamster cheek pouch premalignancy Wang Wenme i,Zheng Jilie,Tang Wei,et al.Affiliated Nanjing Stomatology Hospital of Coll ege of Nanjing University,Nanjing 210008
Abstract Objective Combination of cell proliferation and a poptosis to predict malignant potential of DMBA-induced Goledn Hamster cheek pou ch premalignancy.Methods DMBA-induced golden hamster cheek pouch carc inogenesis model was done.There were four histological types of the model incl ouding normal,hyperplasia,dysplasia and carcinoma.DNA Index(DI),SPF,PCNA,AgNOR and apoptosis were detected by flow cytometry(FCM),immunohistochemical and histoche mical methods.Results DI,SPF,PCNA and AgNOR indices were increased from normal to premalignancy but decreased after carcinogenesis.Then the discrimin ant function equation was found using these indices at 90.01 percent of back subs titution accuracy.Conclusion The indices of DI,SPF,PCNA,AgNOR and ap optosis can reflect the cellular dynaic changes of Hamster cheek pouch carcinoge nesis.They revealed the incipient celluar alterations which were not evident in routine pathological examine and contributed to the characterization of different states of carcinogenesis in this model.
, 百拇医药
Key words precancerous conditions forecasting
材料和方法
1.动物模型建立
动物来源：选用上海生物制品研究所提供的叙利亚雄性金黄地鼠30只，鼠龄5～8周，体重80～100g，普通合格级。以全价营养颗粒饲料饲养，在空气流通、室温18～26℃，相对湿度75～80%条件下饲养，每笼5只。
分组：30只地鼠随机分为：空白对照组：5只，不作任何处理，2只于实验开始时，3只于实验结束时处死取材；实验组：25只，根据DMBA涂布周数又分3周组、6周组、9周组、12周组及涂布6周后观察12周组。
模型建立：实验组用0.5%DMBA丙酮液于地鼠双侧颊中央涂抹，每周3次，定期取材，标本部分送常规病检及免疫组化检测，部分送流式细胞仪检测。
, 百拇医药
2.DNA含量、倍体、SPF、AgNOR、PCNA、APO检测
常规病检：标本经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，HE染色后按WHO(1978年)标准诊断分类。
FCM检测：新鲜标本用机械法制成单细胞悬液，再固定、染色。使用美国BD公司生产的型号为FACSCalibur的FCM进行单参数DNA含量定量分析，微机控制程序自动获取10000个细胞/样品，用ModFitLT程序分析细胞DNA含量。
AgNOR检测：AgNOR银染根据Ploton改良的石蜡切片染色方法。计数及分型方法依照1995年第五届全国临床细胞学会议讨论通过的修改后的标准方案。
PCNA检测：采用免疫组化染色(一步法)，特异性抗体为DAKO—PCNA，微波处理〔1〕。
, 百拇医药
3.统计学处理：
各组测定值不呈正态分布，差别显著性用秩和检验。多元逐步判别采用多类Bays判别法。计算机软件：Statisticaloanalysis system。
结果
1.光镜下组织病理学检查(图1～6)：
图1 单纯上皮增生 免疫组化一步法示PCNA 10×40
图2 重度上皮异常增生 免疫组化一步法示PCNA 10×10
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图3 鳞癌 免疫组化一步法示PCNA 10×40
图4 单纯上皮增生 银染法示AgNOR 10×100
图5 重度上皮异常增生 银染法示AgNOR 10×100
图6 鳞癌 银染法示AgNOR 10×100
DMBA涂布3周时，9侧颊囊为单纯增生，1侧为异常增生；涂布6周时3侧为单纯增生，7侧为异常增生；涂布9周时7侧为异常增生，9侧为癌症；涂布12周时，1侧为异常增生，9侧为癌症；涂布6周观察至12周时，2侧为异常增生，8侧为癌症。
, 百拇医药
2.DNA、SPF、AgNOR、PCNA及APO检测结果。
2.1FCM检测结果示：
癌肿组异倍体检出率最高为70%(14/20)，DNA含量最高，与其它三组比较差异有显著性(表2)。SPF的增加在异常增生组达到顶峰，其与正常粘膜组、单纯增生组比较有显著性差异(P<0.01)；与癌肿组比较无显著性差异(P>0.05)。APO在异常增生组增加显著,与其它三组有显著差异。(P<0.01)；在癌肿组APO下降，与比较有显著性差异(P<0.01)(表1)。
表1 四组各种指标测量结果 组 别
DI
SPF
AgNOR
, 百拇医药 PCNA
APO
±s1±0
1.23±1.09
3.04±0.51
15.1±5.36
0.99±0.75
Ⅰ组(10侧)
M
1
0.99
, 百拇医药 3.2
16.5
0.96
Qu-QL
0
1.94
0.7
1
1.66
±s1.03±0.07
2.97±1.47
, http://www.100md.com
4.83±0.78
35.58±7.23
0.73±0.83
Ⅱ组(12侧)
M
1
2.99
4.7
36.5
0.51
Qu-QL
0
, 百拇医药
1.24
1.16
12
1.06
±s1.04±1.11
12.14±13.57
6.43±1.49
49.28±13.79
3.02±2.67
Ⅲ组(18侧)
M
, 百拇医药
1
7.26
6.12
51.5
2.71
Qu-QL
0
5.73
1.23
17
4.39
±s, 百拇医药
1.19±0.16
12.37±11.67
7.36±1.42
59.75±9.08
3.31±4.42
Ⅳ组(10侧)
M
1
9.99
7.1
61.5
0.47
, 百拇医药 Qu-QL
0
17.76
2.74
12
6.32
注：
±s为均值，M为中位数，Qu-QL为四分位间距。表2 四组参数方差分析结果(秩和检验) 两两比较DI
倍体
SPF
, 百拇医药
AgNOR
PCNA
APO
Ⅰ与Ⅱ组
-
-
**
**
**
-
Ⅰ与Ⅲ组
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**
, 百拇医药
**
**
**
Ⅰ与Ⅳ组
**
**
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**
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-
Ⅱ与Ⅲ组
-
-
**
, 百拇医药
**
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Ⅱ与Ⅳ组
**
**
*
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**
-
Ⅲ与Ⅳ组
**
**
-
, 百拇医药
*
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注：*:P<0.05 **:P<0.01 -:P>0.05
2.2AgNOR检测结果：
从Ⅰ—Ⅳ组AgNOR计数均值呈递增趋势，差异显著(P<0.05)。正常和单纯增生上皮内AgNOR颗粒大多为单一型，在中、重度异常增生组大多为聚集型，鳞癌病损中AgNOR弥散型，聚集型均可见到，偶见核仁内型(图1～3)。
2.3PCNA检测结果示：
PCNA指数随Ⅰ—Ⅳ组呈逐渐上升趋势，差异显著(P<0.01)。在异常增生组中，PCNA阳性细胞除了基底细胞和棘细胞深层可以观察到外，在棘细胞浅层，甚至颗粒层或上皮全层亦可见到。高分化鳞癌癌巢外层1/3～2/3的细胞PCNA阳性(图4～6)(表1，2)。
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3.各种指标间的相互关系及分类判别分析
DI、SPF、AgNOR及PCNA值间无论在正常粘膜、单纯增生、异常增生还是癌肿组均有明显的正相关关系(P<0.05)，提示这组指标从不同角度反映了细胞增殖活性。APO与其它指标无相关关系(P>0.05)。我们将以上指标作为自变量，临床病理诊断作为应变量，用Bays判别分析，经回代检验发现60例判别分类的准确率为90.01%。
讨论
越来越多的资料表明肿瘤发生与细胞增殖及凋亡关系失调有关。有学者同时从细胞增殖和凋亡水平二方面研究肿瘤和癌前病变〔1〕，有关颊囊粘膜癌前病变的研究尚未见到报道。
本资料经单因素分析显示：DNA含量异常、异倍体的出现主要在癌肿组，和其它三组比较有显著性差异,其它三组间无显著性差异(表2～3)这一结果支持许多学者的观点即：DNA含量和倍体是一个区分良恶性病变的新方法。本工作细胞周期研究中发现①二倍体和异倍体中都有SPF增高者，SPF随Ⅰ—Ⅲ组逐渐升高，组间差异显著(P<0.01)，提示倍体和SPF是独立的指标，在癌前病变中SPF的价值较倍体更明显；②SPF在Ⅲ组与Ⅳ组间无显著性差异,说明癌前病变在不同程度上具有与癌组织相似的增殖活性〔2〕(表1，2)。
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从表1及表2可以看出PCNA、AgNOR指数随着Ⅰ～Ⅳ组有依次增高趋势，每二组间皆有显著性差异,它们的定位和形态在Ⅰ～Ⅳ组间也有明显的不同与以往的报道一致〔1、3〕，这种动态变化的趋势反映了癌前病变癌变是一个连续的从量变到质变的过程，但这二个指标共同的弱点是不同组间个体与个体间的重叠现象较多，给临床的实际操作带来了一定的难度，这就有待于进一步综合分析。
在检测DNA含量，SPF，PCNA和AgNOR的同时，本实验对APO又进行了检测，结果显示异常增生时APO增高明显，与正常组和单纯增生组差异显著(P<0.05)；癌发生时，APO指数下降，与异常增生组比较有显著性差异(表1、2)。提示异常增生期存在细胞增殖和APO共同增高现象，与Rostein等报告一致〔4〕。推测：癌前病变时若基因的调控紊乱，如bc1～2、突变型P53过度表达，野生型P53缺失时，致APO受到抑制，最终导致上皮的癌变〔5〕。
, 百拇医药
上述指标从不同角度反映了细胞动力学变化，以往文献资料对口腔粘膜癌前病变、鳞癌的研究大多为各指标的单因素分析，有一定的局限性。由于癌前病变癌变的发生是多因素协同作用的结果，因此需从不同的角度去研究。对本资料的几个指标进行相关分析发现，除APO外均有明显的相关性。经分类Bays判别分析回代判别与临床病理诊断之符合率为90.01%。检验中我们发现有二例中重度异常增生被判为癌症，这是否反映上二例具有临床癌变的倾向，它在形态学癌变之前可能已有生物学状态的“癌变”，值得进一步探讨，其结果将为癌前病变的监测和早期诊断提供更客观的量化指标，为癌前病变癌变的机制研究提供有益的实验参考数据。
参考文献
[1]黄晓峰，张伟国，宗丽娟.PCNA、P53在口腔粘膜癌前病变及鳞癌中表达的免疫组化研究.上海口腔医学，1997，6：73～74.
[2]曹世龙主编.肿瘤学新理论与新技术.第1版，上海：上海科技教育出版社，1997.548～549，281～282，730.
, http://www.100md.com
[3]Schwinf AE,Foloc A,Morales A,et al.AgNOR mark epithelial foli in m alignant transformation in hamster cheek pouch carcinogenesis.J oral pathol Med. 1996,25:20～24.
[4]Rostein J,Sarma DSR,and Farber E.Sequential alterations in growth control and cell dynamics of rat hepatocytes in early precancerous steps in hep atocarcinogenesis.Cancer Res.1986,46:2377～2385.
[5]许凯黎.细胞凋亡基因异常调控在肿瘤和肺癌发生及发展中的研究进展.中国癌症杂志，1997，7：4～6.
(收稿：1999—01—26), 百拇医药