牛血小板衍化生长因子盖髓的实验研究
作者：李国华1 朱南洲1 刘 忠1 李 芸1 金 岩2 陈 强2
单位：1.解放军210医院，辽宁 大连 116021; 2.第四军医大学口腔医学院，陕西 西安 710032
关键词：狗；盖髓；血小板衍化生长因子
牙体牙髓牙周病学杂志990210 摘要 目的：观察牛血小板衍化生长因子(bPDGF)覆盖狗暴露牙髓后的盖髓效果。方法：用活体狗牙作直接盖髓实验，并用组织学方法评价其效果。结果：术后6周，bPDGF能够诱导牙髓成纤维细胞、内皮细胞增殖及抑制炎症反应，提高牙髓修复能力。结论：bPDGF促进狗牙髓组织修复。
中图号：R780.2 文献标识码：A 文章编号：1005-2593(1999)02-0117-03
, 百拇医药
[牙体牙髓牙周病学杂志，1999，9(2)：117]
Experimental study on bovine platelet-derived growth
factor as a pulp capping material
Li Guohua, Zhu Nanzhou, Liu Zhong et al
The 210th Hospital of PLA, Dalian 116021
Abstract Aim: To observe the effects of bovine platelet derived growth factor(bPDGF) on the exposed dog pulp. Methods: The results were evaluated histopathologically. Results: Six weeks postoperatively, bPDGF was able to induce the proliferation of the pulp cells (fibroblasts) and endothelial cells, to inhibit the inflammatory reaction of pulp, and to enhance the pulp repairing. Conclusion: bPDGF promotes the repair of dog pulp tissues.
, 百拇医药
Key words dog; pulp capping; PDGF
[Chinese Journal of Conservative Dentistry, 1999,9(2):117]
在牙髓病治疗中，如何促进牙髓、牙体硬组织的生理性修复和再生是课题的中心环节，随着分子生物学技术的飞速发展，动物实验表明：人血小板纯化的血小板衍化生长因子(platelet derived growth factor简称PDGF)可诱导牙髓成纤维细胞发生趋化作用，并促进细胞的DNA合成，对细胞基质有调节作用[1，2]。但是，目前PDGF对于牙髓组织的作用，尤其是对于牙髓牙本质复合体的愈合修复功能有何影响，报道较少。
在血清中，PDGF是一种很强的致丝裂因子，它存在于血小板α颗粒中，国外已成功地从人血小板中分离出高纯度的PDGF[3]。但PDGF的提纯方法较为复杂，尤其是人血小板来源困难，费用较高。故现采用较为简单的方法从牛血小板中提取和纯化了PDGF，作为直接盖髓剂，观察它对创伤牙髓组织修复的作用机制，为PDGF在牙髓病中的治疗学研究提供新的更为直观的形态学依据。
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1 材料和方法
取体重为5～6kg的成年杂种狗3只，雄性，将每只狗全口牙齿随机分为两组：牛PDGF组，牛血清白蛋白组，每组10个牙齿。25g/L戊巴比妥钠腹腔麻醉后，用30ml/L过氧化氢液清洗口腔，10g/L碘酒消毒手术野，在牙齿的唇颊侧距龈缘2mm处制洞，直径约0.5mm，暴露牙髓，生理盐水冲洗，止血后，在牙髓暴露面上直接放置20μg牛PDGF絮状物或牛血清白蛋白絮状物(第四军医大学口腔医学院牙髓生物学研究室)，常规丁香油水门汀垫底，磷酸锌水门汀充填，全部操作均由一人完成。分别于术后4周、5周经25ml/L戊二醛心脏灌注处死动物后，分离上下颌骨，并在100ml/L中性福尔马林液中再固定24h。组织经100g/L EDTA脱钙2～3周后，按常规石蜡包埋切片，HE染色，光镜下进行形态学观察。
2 结果
术后4周，牛PDGF组缺损边缘的修复性牙本质较其它区域略显增厚，并向缺损区延伸(图1)。牙髓血管数量明显增多，纤维细胞数量增多并呈薄膜状将缺损包绕，牙本质缺损区仍明显，暴露处牙髓见轻度慢性炎细胞浸润。牛血清白蛋白组缺损明显，未见牙本质缺损的修复，牙髓暴露处纤维细胞增多，血管充血明显，组织中弥散着大量慢性炎细胞(图2)。
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图1 术后4周，牛PDGF组缺损边缘修复性牙本质较其它区域略显增厚，并向缺损区延伸 HE×40
图2 术后4周，牛血清白蛋白组缺损明显，组织中弥散着大量慢性炎细胞 HE×33
术后6周，牛PDGF组20个牙中，16个牙缺损区周围牙髓基本恢复正常，偶见弥散分布的慢性炎细胞。由于钙化物及新生牙本质的沉积，牙齿的穿孔区已基本修复(图3)。有4个牙穿孔部位修复，可见弥散分布的慢性炎细胞沉积。牛血清白蛋白组，20个牙中，有14个牙牙本质缺损仍明显，缺损区边缘牙本质见少许修复性牙本质形成(图4)。炎细胞数量较前减少，缺损区牙髓纤维化明显，并形成较厚的被膜包绕盖髓材料。4个牙缺损区仍弥散着大量慢性炎细胞，2个牙组织坏死。
, 百拇医药
图3 术后6周，牛PDGF组牙穿孔区由钙化物及新生牙本质修复 HE×33
图4 术后6周，牙本质缺损仍明显，缺损区边缘牙本质见少许修复性牙本质形成 HE×33
3 讨论
PDGF是一种可作用于机体多种组织器官的具有多功能的生长因子，生物学作用主要体现于其对多种细胞的趋化作用、促进细胞增殖和伤口愈合等方面[4，5]，已有体外实验证实PDGF可以促进牙髓、牙周膜成纤维细胞DNA合成[1，2]。近来，已有进一步的实验证实在正常牙髓细胞、牙髓微血管内皮细胞中存在PDGF受体，这更进一步揭示了PDGF可能参予牙髓组织的代谢及生理病理学反应过程。牙髓成纤维细胞是牙髓组织的主要细胞成分，在牙髓组织中有其重要的地位，由于PDGF具有诱导成纤维细胞趋化和增殖的特性[6]，因此PDGF在牙髓组织的创伤修复中可能起重要作用。
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本组结果显示：与对照组比较，牛PDGF在盖髓治疗中的作用是：
①新生的血管数量增多，有利于牙髓的修复及健康。
②纤维细胞的增多(而非胶原纤维)可能有利于牙髓的修复。
③缺损区周围牙髓基本恢复正常，偶见弥散分布的慢性炎细胞。
④修复性牙本质明显增多(牛PDGF本身不能诱导牙本质的形成)有利于缺损恢复。
牛PDGF促进牙髓组织的创伤愈合、修复的机制可能是：
①牛PDGF对成纤维细胞、中性粒细胞、单核细胞等有趋化作用，能促进间充质细胞如成纤维细胞、平滑肌细胞的有丝分裂，快速诱导磷脂酰肌醇的转换，释放游离的花生四烯酸，并形成前列腺素I2和E2，参予炎症过程[7]。
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②牛PDGF使这些细胞向损伤部位聚集，并在那里分化、增殖、合成胶原，形成所需的细胞基质。
③牛PDGF能抑制结缔组织细胞的溶解，延长其存活时间，从而选择性地刺激结缔组织细胞生长及刺激组织收缩[7]。
本组结果表明，PDGF具有诱导牙髓成纤维细胞、血管内皮细胞增殖的特性，并有抑制炎症反应的作用。能够促进牙髓组织创伤修复过程，这为深入探讨PDGF与牙髓组织正常生理过程和愈合修复的关系，以及PDGF应用于临床治疗牙髓病奠定了基础。
参考文献
1 Blom S, Holmstrup P, Dabelsteen E. A comparison of the epidermal growth factor, platelet-derived growth factor, and fibroblast growth factor on rat periodontal ligament fibroblast-like cells's DNA synthesis and morphology. J Periodontol, 1994;65:373
, http://www.100md.com
2 Matsuda N, Lin WL, Kumar NM et al. Mitogenic chemotactic, and synthetic responses of rat periodontal ligament fibroblastic cells to polypeptide growth factor in vitro. J Periodontol, 1992,63:515
3 Antoniades HN, Scher CD, Stiles CD. Parification of human platelet-derived growth factor. Proc Natl Acad Sci USA, 1997;76(4):1809
4 Deuel TF, Senior RM, Humand JS et al. Chemotaxis of monocytes and neutropils to platelet-derived growth factor. J Clin Invest, 1982;69:1046
, 百拇医药
5 Grotendorst GR, Chang T, Seppa HEJ et al. Platelet-deried growth factor is a chemouttractant for vascular smooth muscle cell. J Cell Physiol, 1982;113(2):261
6 Bartold PM, Narayanan, AS, RC, Platelet-derived growth factor reduese the inhibitory effects of lipoplysaccharied an gingival fibroblast prdiferation. J Periodont Res, 1992;27:499
7 陈强，史俊南，金岩. 牛血小板衍化生长因子促进小鼠伤口愈合的研究. 牙体牙髓牙周病学杂志，1995，5(4)：202
收稿日期：1998-01-23, 百拇医药(李国华1 朱南洲1 刘 忠1 李 芸1 金 岩2 陈 强2)
单位：1.解放军210医院，辽宁 大连 116021; 2.第四军医大学口腔医学院，陕西 西安 710032
关键词：狗；盖髓；血小板衍化生长因子
牙体牙髓牙周病学杂志990210 摘要 目的：观察牛血小板衍化生长因子(bPDGF)覆盖狗暴露牙髓后的盖髓效果。方法：用活体狗牙作直接盖髓实验，并用组织学方法评价其效果。结果：术后6周，bPDGF能够诱导牙髓成纤维细胞、内皮细胞增殖及抑制炎症反应，提高牙髓修复能力。结论：bPDGF促进狗牙髓组织修复。
中图号：R780.2 文献标识码：A 文章编号：1005-2593(1999)02-0117-03
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[牙体牙髓牙周病学杂志，1999，9(2)：117]
Experimental study on bovine platelet-derived growth
factor as a pulp capping material
Li Guohua, Zhu Nanzhou, Liu Zhong et al
The 210th Hospital of PLA, Dalian 116021
Abstract Aim: To observe the effects of bovine platelet derived growth factor(bPDGF) on the exposed dog pulp. Methods: The results were evaluated histopathologically. Results: Six weeks postoperatively, bPDGF was able to induce the proliferation of the pulp cells (fibroblasts) and endothelial cells, to inhibit the inflammatory reaction of pulp, and to enhance the pulp repairing. Conclusion: bPDGF promotes the repair of dog pulp tissues.
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Key words dog; pulp capping; PDGF
[Chinese Journal of Conservative Dentistry, 1999,9(2):117]
在牙髓病治疗中，如何促进牙髓、牙体硬组织的生理性修复和再生是课题的中心环节，随着分子生物学技术的飞速发展，动物实验表明：人血小板纯化的血小板衍化生长因子(platelet derived growth factor简称PDGF)可诱导牙髓成纤维细胞发生趋化作用，并促进细胞的DNA合成，对细胞基质有调节作用[1，2]。但是，目前PDGF对于牙髓组织的作用，尤其是对于牙髓牙本质复合体的愈合修复功能有何影响，报道较少。
在血清中，PDGF是一种很强的致丝裂因子，它存在于血小板α颗粒中，国外已成功地从人血小板中分离出高纯度的PDGF[3]。但PDGF的提纯方法较为复杂，尤其是人血小板来源困难，费用较高。故现采用较为简单的方法从牛血小板中提取和纯化了PDGF，作为直接盖髓剂，观察它对创伤牙髓组织修复的作用机制，为PDGF在牙髓病中的治疗学研究提供新的更为直观的形态学依据。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
取体重为5～6kg的成年杂种狗3只，雄性，将每只狗全口牙齿随机分为两组：牛PDGF组，牛血清白蛋白组，每组10个牙齿。25g/L戊巴比妥钠腹腔麻醉后，用30ml/L过氧化氢液清洗口腔，10g/L碘酒消毒手术野，在牙齿的唇颊侧距龈缘2mm处制洞，直径约0.5mm，暴露牙髓，生理盐水冲洗，止血后，在牙髓暴露面上直接放置20μg牛PDGF絮状物或牛血清白蛋白絮状物(第四军医大学口腔医学院牙髓生物学研究室)，常规丁香油水门汀垫底，磷酸锌水门汀充填，全部操作均由一人完成。分别于术后4周、5周经25ml/L戊二醛心脏灌注处死动物后，分离上下颌骨，并在100ml/L中性福尔马林液中再固定24h。组织经100g/L EDTA脱钙2～3周后，按常规石蜡包埋切片，HE染色，光镜下进行形态学观察。
2 结果
术后4周，牛PDGF组缺损边缘的修复性牙本质较其它区域略显增厚，并向缺损区延伸(图1)。牙髓血管数量明显增多，纤维细胞数量增多并呈薄膜状将缺损包绕，牙本质缺损区仍明显，暴露处牙髓见轻度慢性炎细胞浸润。牛血清白蛋白组缺损明显，未见牙本质缺损的修复，牙髓暴露处纤维细胞增多，血管充血明显，组织中弥散着大量慢性炎细胞(图2)。
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图1 术后4周，牛PDGF组缺损边缘修复性牙本质较其它区域略显增厚，并向缺损区延伸 HE×40
图2 术后4周，牛血清白蛋白组缺损明显，组织中弥散着大量慢性炎细胞 HE×33
术后6周，牛PDGF组20个牙中，16个牙缺损区周围牙髓基本恢复正常，偶见弥散分布的慢性炎细胞。由于钙化物及新生牙本质的沉积，牙齿的穿孔区已基本修复(图3)。有4个牙穿孔部位修复，可见弥散分布的慢性炎细胞沉积。牛血清白蛋白组，20个牙中，有14个牙牙本质缺损仍明显，缺损区边缘牙本质见少许修复性牙本质形成(图4)。炎细胞数量较前减少，缺损区牙髓纤维化明显，并形成较厚的被膜包绕盖髓材料。4个牙缺损区仍弥散着大量慢性炎细胞，2个牙组织坏死。
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图3 术后6周，牛PDGF组牙穿孔区由钙化物及新生牙本质修复 HE×33
图4 术后6周，牙本质缺损仍明显，缺损区边缘牙本质见少许修复性牙本质形成 HE×33
3 讨论
PDGF是一种可作用于机体多种组织器官的具有多功能的生长因子，生物学作用主要体现于其对多种细胞的趋化作用、促进细胞增殖和伤口愈合等方面[4，5]，已有体外实验证实PDGF可以促进牙髓、牙周膜成纤维细胞DNA合成[1，2]。近来，已有进一步的实验证实在正常牙髓细胞、牙髓微血管内皮细胞中存在PDGF受体，这更进一步揭示了PDGF可能参予牙髓组织的代谢及生理病理学反应过程。牙髓成纤维细胞是牙髓组织的主要细胞成分，在牙髓组织中有其重要的地位，由于PDGF具有诱导成纤维细胞趋化和增殖的特性[6]，因此PDGF在牙髓组织的创伤修复中可能起重要作用。
, http://www.100md.com
本组结果显示：与对照组比较，牛PDGF在盖髓治疗中的作用是：
①新生的血管数量增多，有利于牙髓的修复及健康。
②纤维细胞的增多(而非胶原纤维)可能有利于牙髓的修复。
③缺损区周围牙髓基本恢复正常，偶见弥散分布的慢性炎细胞。
④修复性牙本质明显增多(牛PDGF本身不能诱导牙本质的形成)有利于缺损恢复。
牛PDGF促进牙髓组织的创伤愈合、修复的机制可能是：
①牛PDGF对成纤维细胞、中性粒细胞、单核细胞等有趋化作用，能促进间充质细胞如成纤维细胞、平滑肌细胞的有丝分裂，快速诱导磷脂酰肌醇的转换，释放游离的花生四烯酸，并形成前列腺素I2和E2，参予炎症过程[7]。
, http://www.100md.com
②牛PDGF使这些细胞向损伤部位聚集，并在那里分化、增殖、合成胶原，形成所需的细胞基质。
③牛PDGF能抑制结缔组织细胞的溶解，延长其存活时间，从而选择性地刺激结缔组织细胞生长及刺激组织收缩[7]。
本组结果表明，PDGF具有诱导牙髓成纤维细胞、血管内皮细胞增殖的特性，并有抑制炎症反应的作用。能够促进牙髓组织创伤修复过程，这为深入探讨PDGF与牙髓组织正常生理过程和愈合修复的关系，以及PDGF应用于临床治疗牙髓病奠定了基础。
参考文献
1 Blom S, Holmstrup P, Dabelsteen E. A comparison of the epidermal growth factor, platelet-derived growth factor, and fibroblast growth factor on rat periodontal ligament fibroblast-like cells's DNA synthesis and morphology. J Periodontol, 1994;65:373
, http://www.100md.com
2 Matsuda N, Lin WL, Kumar NM et al. Mitogenic chemotactic, and synthetic responses of rat periodontal ligament fibroblastic cells to polypeptide growth factor in vitro. J Periodontol, 1992,63:515
3 Antoniades HN, Scher CD, Stiles CD. Parification of human platelet-derived growth factor. Proc Natl Acad Sci USA, 1997;76(4):1809
4 Deuel TF, Senior RM, Humand JS et al. Chemotaxis of monocytes and neutropils to platelet-derived growth factor. J Clin Invest, 1982;69:1046
, 百拇医药
5 Grotendorst GR, Chang T, Seppa HEJ et al. Platelet-deried growth factor is a chemouttractant for vascular smooth muscle cell. J Cell Physiol, 1982;113(2):261
6 Bartold PM, Narayanan, AS, RC, Platelet-derived growth factor reduese the inhibitory effects of lipoplysaccharied an gingival fibroblast prdiferation. J Periodont Res, 1992;27:499
7 陈强，史俊南，金岩. 牛血小板衍化生长因子促进小鼠伤口愈合的研究. 牙体牙髓牙周病学杂志，1995，5(4)：202
收稿日期：1998-01-23, 百拇医药(李国华1 朱南洲1 刘 忠1 李 芸1 金 岩2 陈 强2)