根治幽门螺杆菌对胃粘膜上皮p53蛋白表达的影响
作者：张忠 袁媛 高华 吴烨秋 董明 王兰 王梅先 孙俐
单位：张忠(中国医科大学肿瘤研究所第三研究室 沈阳 110001)；袁媛(中国医科大学肿瘤研究所第三研究室 沈阳 110001)；高华(中国医科大学肿瘤研究所第三研究室 沈阳 110001)；吴烨秋(中国医科大学肿瘤研究所第三研究室 沈阳 110001)；董明(中国医科大学肿瘤研究所第三研究室 沈阳 110001)
关键词：幽门螺杆菌；胃癌前病变；p53蛋白
根治幽门螺杆菌对胃粘膜上皮p53蛋白表达的影响 〔摘要〕 目的 研究幽门螺杆菌(Hp)根除治疗对p53蛋白表达的影响，探讨Hp与胃癌的关系。方法 利用免疫组化染色对206例胃粘膜活检组织，包括正常胃粘膜、Hp阴性胃癌前各阶段病变、Hp阳性胃癌前各阶段病变Hp根除治疗前后及胃癌，进行p53蛋白表达的分析。结果 正常胃粘膜未见p53蛋白表达。Hp阳性胃癌前阶段病变p53蛋白表达阳性率显著高于正常胃粘膜及Hp阴性胃癌前阶段病变，其中Hp阳性肠上皮化生p53蛋白表达阳性率显著高于Hp阴性相应病变组，低于Hp阳性异型增生组。Hp阳性胃癌前阶段病变Hp根除治疗后，其p53蛋白表达阳性率显著降低。结论 Hp根除治疗后，胃癌前阶段病变p53蛋白表达阳性率明显降低；Hp感染可促进突变型p53基因表达增强。
, 百拇医药
〔中图分类号〕 R735.2 〔文献标识码〕B
Effect of the eradication of Helicobacter pylori on p53 protein expression in gastric epithelial
ZHANG Zhong,YUAN Yuan,GAO Hua,et al.
(Cancer Institute of China Medical University,Shenyang,110001.)
〔Abstract〕 Objective To investigate the effect of the eradication of Helicobacter pylorei (Hp) on p53 protein expression,and understand the relationship between Hp and gastric carcinoma.Methods p53 protein immunohistochemical staining were used in the research.Total 206 gastric mucosal biopsy specimens,including normal gastric mucosa,Hp-negative gastric precancerous lesions,Hp-positive gastric precancerous lesions before and after eradication of Hp and gastric carcinoma,were studied.Results p53 protein positive experession was not found in normal gastric mucosa.Positivity of p53 protein expression in Hp-positive gastric precancerous lesions was significantly higher than that in normal gastric mucosa and in Hp-negative gastric precancerous lesions;Positivity of p53 expression in Hp-positive metaplasia was significantly higher than that in Hp-negative metaplasia,and lower than that in Hp-positive dysplasia;After eradication of Hp,positivity of p53 experession significantly decreased in Hp-positive gastric precancerous lesions.Conclusions After eradication of Hp,positivity of p53 experession in gastric precancerous lesions significantly decreased.It was supposed that Hp infection caused mutated p53 gene expression to increase.
, 百拇医药
〔Key words〕 Helicobacter pylori;gastric precancerous lesions;p53 protein
p53基因是研究最广泛的抑癌基因，该基因的突变与人类一半以上的肿瘤密切相关。有关胃癌p53基因突变和表达的研究国内外已有较多报道，但幽门螺杆菌(Helicobacter pylori Hp)感染及其根除治疗对胃癌前病变p53蛋白表达的影响则未见报道。本研究采用免疫组织化学染色对胃癌前各阶段病变中Hp阳性病变Hp根除治疗前后及Hp阴性病变胃粘膜上皮和胃癌组织p53蛋白表达进行了分析，旨在探讨Hp根除治疗对胃癌前阶段病变中p53蛋白表达的影响，以期揭示Hp与胃癌的病因学关系。
材料和方法
一、观察对象 本组观察对象选自辽宁省庄河胃癌高发区高危人群接受胃镜筛检者，共206例，其中包括基本正常胃粘膜20例、慢性浅表性胃炎50例、肠上皮化生53例、异型增生51例和胃癌32例。经HE染色及PCR检测，确定观察对象有无Hp感染。上述两法皆阳性者，判为Hp阳性，而皆阴性者判为Hp阴性。对Hp阳性者给予有机铋剂(胃敏胶囊)、甲硝唑、羟氨苄青霉素三联药物治疗，治疗结束后复查胃镜。停药4周后Hp仍保持阴性者为Hp根除。
, http://www.100md.com
二、实验方法 免疫组化染色：采用SP法。SP试剂盒为美国ZYMED公司产品；第一抗体为福州迈新公司即用型p53单克隆抗体。染色前切片于0.05mol/L柠檬酸液中进行微波抗原修复。以PBS代替一抗作阴性对照。统计学处理采用卡方检验。
结果
一、Hp感染对胃粘膜上皮p53蛋白表达的影响 p53蛋白阳性产物局限于细胞核内，在基本正常胃粘膜中未见表达。Hp阳性胃癌前阶段病变包括慢性浅表性胃炎、肠上皮化生和异型增生，其p53蛋白表达阳性率显著高于基本正常胃粘膜(P<0.01)和Hp阴性胃癌前阶段病变(P<0.05)，显著低于胃癌的p53蛋白表达阳性率(P<0.01)。其中，Hp阳性肠上皮化生p53蛋白表达阳性率显著高于基本正常胃粘膜(P<0.01)和Hp阴性相应病变组(P<0.05)，而Hp阴性肠上皮化生与基本正常胃粘膜间无统计学差异，Hp阳性异型增生p53蛋白表达阳性率高于Hp阴性相应病变组(P>0.05)。由肠上皮化生至胃癌，p53蛋白表达阳性率呈现递增趋势。见表1、2。
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表1 Hp感染与不同胃粘膜上皮p53蛋白表达的关系
组 别
总例数
Hp
例数
p53蛋白表
达阳性例(%)
p53蛋白表
达阴性例(%)
基本正常
胃粘膜
20
, 百拇医药 20
0(0.0)
20(100.0)
慢性浅表
性胃炎
50
+
28
0(0.0)
28(100.0)
-
22
0(0.0)
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22(100.0)
肠上皮
化生
53
+
32
14(43.8)△○
18(56.2)
-
21
2(9.5)
19(90.5)
异型增生
, http://www.100md.com
51
+
30
15(50.0)○
15(50.0)
-
21
8(38.1)
13(61.9)
胃 癌
32
32
24(75.0)
, http://www.100md.com
8(25.0)
与基本正常胃粘膜相比P<0.01；△与Hp阴性相应病变相比P<0.05；○与胃癌相比P<0.05 表2 Hp感染对胃癌前阶段病变p53蛋白表达的影响
组 别
例数
p53蛋白表
达阳性例(%)
p53蛋白表
达阴性例(%)
基本正常胃粘膜
20
, 百拇医药
0(0.0)
20(100.0)
Hp阴性胃癌前
阶段病变
64
10(15.6)○
54(84.4)
Hp阳性胃癌前
阶段病变
90
29(32.2)*△○
61(67.8)
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胃癌
32
24(75.0)
8(25.0)
*与基本正常胃粘膜相比P<0.01；△与Hp阴性胃癌前阶段病变相比P<0.05；○与胃癌相比P<0.05
二、Hp根除前后胃癌前阶段病变p53蛋白表达的变化 Hp阳性胃癌前阶段病变经Hp根除治疗后，其p53蛋白表达阳性率显著低于根除治疗前(P<0.05)，与Hp阴性胃癌前阶段病变无统计学差异。详见表3。
表3 Hp根除前后胃癌前阶段病变p53蛋白表达的变化
Hp根除组
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Hp未根除组
治疗前
Hp+
治疗后
Hp-
治疗前
Hp+
治疗后
Hp+
例数
45
45
, http://www.100md.com
45
45
p53蛋白
表达阳性
例
(%)
19
(42.2)
8
(17.8)*
10
(22.2)
12
, 百拇医药
(26.7)
p53蛋白
表达阴性
例
(%)
26
(57.8)
37
(82.2)
35
(77.8)
33
(73.3)
, http://www.100md.com
*与Hp根除组治疗前相比P<0.05
胃癌前阶段病变包括慢性浅表性胃炎、肠上皮化生和异型增生
讨论
流行病学资料表明：Hp感染与胃癌前病变乃至胃癌有密切关系[1]，但Hp的致癌机理至今尚未阐明。
p53基因是位于17p染色体，有11个外显子的肿瘤抑制基因。在正常细胞中，野生型p53基因参与细胞周期的调控，阻止细胞从G1期进入S期，对细胞分裂和增殖起负调节作用。它编码产生一个分子量为53000道尔顿的核磷酸蛋白[2]，但半衰期很短。突变型p53基因产生p53蛋白的半衰期明显延长达1.47小时[3]。利用免疫组化法检测p53蛋白阳性可提示突变型p53基因存在。在正常胃粘膜中未见p53蛋白表达；Hp阳性胃癌前阶段病变p53蛋白表达阳性率显著高于正常胃粘膜和Hp阴性胃癌前阶段病变。在胃癌前各阶段病变中，Hp阳性肠上皮化生的p53蛋白表达阳性率显著高于正常胃粘膜、Hp阳性慢性浅表性胃炎和Hp阴性相应病变组；Hp阳性异型增生p53蛋白表达阳性率高于Hp阳性肠上皮化生和Hp阴性相应病变组，显著低于胃癌。我们发现，Hp阳性胃癌前阶段病变经Hp根除治疗后，其p53蛋白表达阳性率显著降低，接近于Hp阴性胃癌前阶段病变p53蛋白表达的状态。这些表达特点提示，Hp感染可促进突变型p53基因表达增强，并且始于Correa的“正常胃粘膜→慢性浅表性胃炎→肠上皮化生→异型增生→胃癌”这一胃癌发生模式中的早期阶段——肠上皮化生；Hp根除治疗使胃癌前阶段病变p53蛋白表达阳性率降低。研究指出Hp促进p53基因突变和表达增强机制为：Hp感染后可导致胃粘膜一氧化氮合成酶增多、氧自由基释放[4]，进而引起DNA损伤，p53基因突变[5]。随着p53基因突变量和表达量的积累以及其它致癌因素的共同作用，细胞可以无限生长，细胞凋亡减少或不凋亡[6]，最终导致胃癌发生。表明Hp感染可能是导致胃癌发生的一个重要因素。因此预防Hp感染，早期进行Hp根除治疗，对于降低胃癌发生具有现实意义。
, http://www.100md.com
作者简介：张忠，(1968-)，男，辽宁沈阳人，硕士，讲师，从事胃癌的综合防治研究。
王兰(中国医科大学肿瘤研究所第三研究室 沈阳 110001)
王梅先(中国医科大学肿瘤研究所第三研究室 沈阳 110001)
孙俐(沈阳市皇姑区中心医院中医科)
参考文献
1，Correa P.Human gastric carcinogenesis:a multistep and multifactorial process-first American cancer society award lecture on cancer epidemiology and prevention.Cancer Res,1992；52:6735-40
, 百拇医药
2，Lauwers GY.p53 expression in precancerous gastric lesions:An immunohistochemical study of pAb 1801 monoclonal antibody on adenomatous and hyperplastic gastric polyps.Am J Pathol,1993；88(11):1916-21
3，Joypaul BV,Newman EL.Expression of p53 protein in normal,dysplastic and malignant gastric mucosa-an immunohistochemical study.J Pathol,1993；170(3):279-84
4，Moss SF,Calam J,Aagrwal B,et al.Induction of gastric epithelial apoptosis by Helicobacter pylori.Gut,1996；38:498-501
5，Nguyen T,Brunson D,Crespi CL,et al.DNA damage and mutation in human cells exposed to nitric in vitro.Proc Natl Acad Sci USA,1992；89:3030-34
6，Marx J.How p53 suppresses cell growth.Science,1993；262:1644-45
收稿日期：1999-4-9, http://www.100md.com
单位：张忠(中国医科大学肿瘤研究所第三研究室 沈阳 110001)；袁媛(中国医科大学肿瘤研究所第三研究室 沈阳 110001)；高华(中国医科大学肿瘤研究所第三研究室 沈阳 110001)；吴烨秋(中国医科大学肿瘤研究所第三研究室 沈阳 110001)；董明(中国医科大学肿瘤研究所第三研究室 沈阳 110001)
关键词：幽门螺杆菌；胃癌前病变；p53蛋白
根治幽门螺杆菌对胃粘膜上皮p53蛋白表达的影响 〔摘要〕 目的 研究幽门螺杆菌(Hp)根除治疗对p53蛋白表达的影响，探讨Hp与胃癌的关系。方法 利用免疫组化染色对206例胃粘膜活检组织，包括正常胃粘膜、Hp阴性胃癌前各阶段病变、Hp阳性胃癌前各阶段病变Hp根除治疗前后及胃癌，进行p53蛋白表达的分析。结果 正常胃粘膜未见p53蛋白表达。Hp阳性胃癌前阶段病变p53蛋白表达阳性率显著高于正常胃粘膜及Hp阴性胃癌前阶段病变，其中Hp阳性肠上皮化生p53蛋白表达阳性率显著高于Hp阴性相应病变组，低于Hp阳性异型增生组。Hp阳性胃癌前阶段病变Hp根除治疗后，其p53蛋白表达阳性率显著降低。结论 Hp根除治疗后，胃癌前阶段病变p53蛋白表达阳性率明显降低；Hp感染可促进突变型p53基因表达增强。
, 百拇医药
〔中图分类号〕 R735.2 〔文献标识码〕B
Effect of the eradication of Helicobacter pylori on p53 protein expression in gastric epithelial
ZHANG Zhong,YUAN Yuan,GAO Hua,et al.
(Cancer Institute of China Medical University,Shenyang,110001.)
〔Abstract〕 Objective To investigate the effect of the eradication of Helicobacter pylorei (Hp) on p53 protein expression,and understand the relationship between Hp and gastric carcinoma.Methods p53 protein immunohistochemical staining were used in the research.Total 206 gastric mucosal biopsy specimens,including normal gastric mucosa,Hp-negative gastric precancerous lesions,Hp-positive gastric precancerous lesions before and after eradication of Hp and gastric carcinoma,were studied.Results p53 protein positive experession was not found in normal gastric mucosa.Positivity of p53 protein expression in Hp-positive gastric precancerous lesions was significantly higher than that in normal gastric mucosa and in Hp-negative gastric precancerous lesions;Positivity of p53 expression in Hp-positive metaplasia was significantly higher than that in Hp-negative metaplasia,and lower than that in Hp-positive dysplasia;After eradication of Hp,positivity of p53 experession significantly decreased in Hp-positive gastric precancerous lesions.Conclusions After eradication of Hp,positivity of p53 experession in gastric precancerous lesions significantly decreased.It was supposed that Hp infection caused mutated p53 gene expression to increase.
, 百拇医药
〔Key words〕 Helicobacter pylori;gastric precancerous lesions;p53 protein
p53基因是研究最广泛的抑癌基因，该基因的突变与人类一半以上的肿瘤密切相关。有关胃癌p53基因突变和表达的研究国内外已有较多报道，但幽门螺杆菌(Helicobacter pylori Hp)感染及其根除治疗对胃癌前病变p53蛋白表达的影响则未见报道。本研究采用免疫组织化学染色对胃癌前各阶段病变中Hp阳性病变Hp根除治疗前后及Hp阴性病变胃粘膜上皮和胃癌组织p53蛋白表达进行了分析，旨在探讨Hp根除治疗对胃癌前阶段病变中p53蛋白表达的影响，以期揭示Hp与胃癌的病因学关系。
材料和方法
一、观察对象 本组观察对象选自辽宁省庄河胃癌高发区高危人群接受胃镜筛检者，共206例，其中包括基本正常胃粘膜20例、慢性浅表性胃炎50例、肠上皮化生53例、异型增生51例和胃癌32例。经HE染色及PCR检测，确定观察对象有无Hp感染。上述两法皆阳性者，判为Hp阳性，而皆阴性者判为Hp阴性。对Hp阳性者给予有机铋剂(胃敏胶囊)、甲硝唑、羟氨苄青霉素三联药物治疗，治疗结束后复查胃镜。停药4周后Hp仍保持阴性者为Hp根除。
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二、实验方法 免疫组化染色：采用SP法。SP试剂盒为美国ZYMED公司产品；第一抗体为福州迈新公司即用型p53单克隆抗体。染色前切片于0.05mol/L柠檬酸液中进行微波抗原修复。以PBS代替一抗作阴性对照。统计学处理采用卡方检验。
结果
一、Hp感染对胃粘膜上皮p53蛋白表达的影响 p53蛋白阳性产物局限于细胞核内，在基本正常胃粘膜中未见表达。Hp阳性胃癌前阶段病变包括慢性浅表性胃炎、肠上皮化生和异型增生，其p53蛋白表达阳性率显著高于基本正常胃粘膜(P<0.01)和Hp阴性胃癌前阶段病变(P<0.05)，显著低于胃癌的p53蛋白表达阳性率(P<0.01)。其中，Hp阳性肠上皮化生p53蛋白表达阳性率显著高于基本正常胃粘膜(P<0.01)和Hp阴性相应病变组(P<0.05)，而Hp阴性肠上皮化生与基本正常胃粘膜间无统计学差异，Hp阳性异型增生p53蛋白表达阳性率高于Hp阴性相应病变组(P>0.05)。由肠上皮化生至胃癌，p53蛋白表达阳性率呈现递增趋势。见表1、2。
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表1 Hp感染与不同胃粘膜上皮p53蛋白表达的关系
组 别
总例数
Hp
例数
p53蛋白表
达阳性例(%)
p53蛋白表
达阴性例(%)
基本正常
胃粘膜
20
, 百拇医药 20
0(0.0)
20(100.0)
慢性浅表
性胃炎
50
+
28
0(0.0)
28(100.0)
-
22
0(0.0)
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22(100.0)
肠上皮
化生
53
+
32
14(43.8)△○
18(56.2)
-
21
2(9.5)
19(90.5)
异型增生
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51
+
30
15(50.0)○
15(50.0)
-
21
8(38.1)
13(61.9)
胃 癌
32
32
24(75.0)
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8(25.0)
与基本正常胃粘膜相比P<0.01；△与Hp阴性相应病变相比P<0.05；○与胃癌相比P<0.05 表2 Hp感染对胃癌前阶段病变p53蛋白表达的影响
组 别
例数
p53蛋白表
达阳性例(%)
p53蛋白表
达阴性例(%)
基本正常胃粘膜
20
, 百拇医药
0(0.0)
20(100.0)
Hp阴性胃癌前
阶段病变
64
10(15.6)○
54(84.4)
Hp阳性胃癌前
阶段病变
90
29(32.2)*△○
61(67.8)
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胃癌
32
24(75.0)
8(25.0)
*与基本正常胃粘膜相比P<0.01；△与Hp阴性胃癌前阶段病变相比P<0.05；○与胃癌相比P<0.05
二、Hp根除前后胃癌前阶段病变p53蛋白表达的变化 Hp阳性胃癌前阶段病变经Hp根除治疗后，其p53蛋白表达阳性率显著低于根除治疗前(P<0.05)，与Hp阴性胃癌前阶段病变无统计学差异。详见表3。
表3 Hp根除前后胃癌前阶段病变p53蛋白表达的变化
Hp根除组
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Hp未根除组
治疗前
Hp+
治疗后
Hp-
治疗前
Hp+
治疗后
Hp+
例数
45
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45
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p53蛋白
表达阳性
例
(%)
19
(42.2)
8
(17.8)*
10
(22.2)
12
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(26.7)
p53蛋白
表达阴性
例
(%)
26
(57.8)
37
(82.2)
35
(77.8)
33
(73.3)
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*与Hp根除组治疗前相比P<0.05
胃癌前阶段病变包括慢性浅表性胃炎、肠上皮化生和异型增生
讨论
流行病学资料表明：Hp感染与胃癌前病变乃至胃癌有密切关系[1]，但Hp的致癌机理至今尚未阐明。
p53基因是位于17p染色体，有11个外显子的肿瘤抑制基因。在正常细胞中，野生型p53基因参与细胞周期的调控，阻止细胞从G1期进入S期，对细胞分裂和增殖起负调节作用。它编码产生一个分子量为53000道尔顿的核磷酸蛋白[2]，但半衰期很短。突变型p53基因产生p53蛋白的半衰期明显延长达1.47小时[3]。利用免疫组化法检测p53蛋白阳性可提示突变型p53基因存在。在正常胃粘膜中未见p53蛋白表达；Hp阳性胃癌前阶段病变p53蛋白表达阳性率显著高于正常胃粘膜和Hp阴性胃癌前阶段病变。在胃癌前各阶段病变中，Hp阳性肠上皮化生的p53蛋白表达阳性率显著高于正常胃粘膜、Hp阳性慢性浅表性胃炎和Hp阴性相应病变组；Hp阳性异型增生p53蛋白表达阳性率高于Hp阳性肠上皮化生和Hp阴性相应病变组，显著低于胃癌。我们发现，Hp阳性胃癌前阶段病变经Hp根除治疗后，其p53蛋白表达阳性率显著降低，接近于Hp阴性胃癌前阶段病变p53蛋白表达的状态。这些表达特点提示，Hp感染可促进突变型p53基因表达增强，并且始于Correa的“正常胃粘膜→慢性浅表性胃炎→肠上皮化生→异型增生→胃癌”这一胃癌发生模式中的早期阶段——肠上皮化生；Hp根除治疗使胃癌前阶段病变p53蛋白表达阳性率降低。研究指出Hp促进p53基因突变和表达增强机制为：Hp感染后可导致胃粘膜一氧化氮合成酶增多、氧自由基释放[4]，进而引起DNA损伤，p53基因突变[5]。随着p53基因突变量和表达量的积累以及其它致癌因素的共同作用，细胞可以无限生长，细胞凋亡减少或不凋亡[6]，最终导致胃癌发生。表明Hp感染可能是导致胃癌发生的一个重要因素。因此预防Hp感染，早期进行Hp根除治疗，对于降低胃癌发生具有现实意义。
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作者简介：张忠，(1968-)，男，辽宁沈阳人，硕士，讲师，从事胃癌的综合防治研究。
王兰(中国医科大学肿瘤研究所第三研究室 沈阳 110001)
王梅先(中国医科大学肿瘤研究所第三研究室 沈阳 110001)
孙俐(沈阳市皇姑区中心医院中医科)
参考文献
1，Correa P.Human gastric carcinogenesis:a multistep and multifactorial process-first American cancer society award lecture on cancer epidemiology and prevention.Cancer Res,1992；52:6735-40
, 百拇医药
2，Lauwers GY.p53 expression in precancerous gastric lesions:An immunohistochemical study of pAb 1801 monoclonal antibody on adenomatous and hyperplastic gastric polyps.Am J Pathol,1993；88(11):1916-21
3，Joypaul BV,Newman EL.Expression of p53 protein in normal,dysplastic and malignant gastric mucosa-an immunohistochemical study.J Pathol,1993；170(3):279-84
4，Moss SF,Calam J,Aagrwal B,et al.Induction of gastric epithelial apoptosis by Helicobacter pylori.Gut,1996；38:498-501
5，Nguyen T,Brunson D,Crespi CL,et al.DNA damage and mutation in human cells exposed to nitric in vitro.Proc Natl Acad Sci USA,1992；89:3030-34
6，Marx J.How p53 suppresses cell growth.Science,1993；262:1644-45
收稿日期：1999-4-9, http://www.100md.com