格林-巴利综合征临床、C-jejuni和GM1抗体的相关性
作者：忻琪珺 程源深
单位：(浙江医科大学附属二院神经内科(310009)
关键词：格林-巴利综合征；空肠弯曲菌肠炎；GM1抗体
中国临床神经科学/990102摘要 目的：格林-巴利综合征(GBS)病因及发病机制探讨。方法：ELISA法测定49例GBS病人血清抗空肠弯曲菌抗体(Cj-Ab)及GM1-IgG抗体，并与临床严重程度、预后、电生理进行相关分析。结果：GBS组血清Cj-IgA、IgG，GM1-IgG阳性率与对照组存在显著差异；而GBS组血清Cj抗体、GM1抗体与临床严重程度、预后及电生理均无相关性。结论：Cj近期感染与GBS发病相关；GBS病人血清GM1-IgG亦有显著升高，但与Cj感染无关，可能只是一种神经损害后继发免疫改变，反对Yuki关于Cj感染后自身免疫引起GBS学说。
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Relationship between Clinical Features and Antiboides
to C-jejuni,GM1 in Gullan-Barre Syndrome
Xin Qijun,Chen Yuanshen
Department of Neurology,the 2nd Affillated Hospital
of Zhejiang Medical University,Hang Zhou,310009
Objective:Study on etiology and pathogenesis of Guillain-Barre Syndrome.Methods:ELISA assay was adopted to investigate antibodies of Campylobacter jejuni antigens and glycoconjugates GM1 in the serum of GBS patients. Interelate analysis was made between those antibodies with clinical severity,prognosis and electrophysiology in GBS. Result:Significant difference was found in positive rate of Cj-IgA、Cj-IgG and GM1-IgG between GBS group and the controls,but there was no relation among Cj antibodies,GM1 antibody and clinical severity,prognosis,electrophysiology.Conclusion:There existed relationship between recent Cj infection and GBS,but no relation between GM1-Ab and Cj infection was found. Positive rate of GM1-Ab was higher in GBS group,suggested that secondary immune reaction after neural demage propably exist.We opposed Yuki′s theory of pathogenesis of GBS.
, 百拇医药
Key Words Guillain-Barre Syndrome Antibody GM1 C-jejuni
格林-巴利综合征(Guillain-Barre Syndrome,GBS)是一种周围神经急性炎症性脱髓鞘疾病，其病因及发病机制还不明确，目前倾向认为感染及自身免疫机制与它的发病有关。国外部分学者认为空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,Cj)是GBS病前主要的感染因子之一。感染后主要通过交叉反应导致周围神经损害而导致GBS。国内对GM1抗体、Cj抗体及临床关系的综合研究尚在起步。
本文拟就Cj抗体、GM1抗体与临床、电生理的关系问题进行研究，对GBS病因及发病机制进行讨论。
材料和方法
空肠弯曲菌标准菌株ATCC-1114557(浙江省防疫站)；GM1(Sigma,美国)；GM1-IgG；HRP标记兔抗人IgG抗体(DOKA)。
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临床资料 GBS组49例，来自1996年4月～1998年1月我院及兄弟医院病人。根据Asbury诊断标准[1]纳入本组。排除有糖尿病史及服药后引起的周围神经炎。其中男35例，女14例，平均年龄(36.0±16.8)岁；平均病程(22.7±16.4)d。病前有上感史15例；腹泻史或腹痛，呕吐者10例；风疹病史1例；水痘病史1例；急性无黄疸型乙肝史1例；急性甲肝史1例；服中药史1例；不明原因发热3例；病前无明显诱因者16例。根据1988年Winer JB[2]提出的临床严重程度评分标准：属重型者(4～5分)20例，轻型者(1～3分)29例。伴有颅神经障碍41例，其中IX，X对18例(43.9%)，Ⅶ对11例(26.8%)，Ⅺ对7例(17.1%)，XII对4例(9.8%)，Ⅴ对3例(7.3%)；43例有感觉主诉，其中41例查到痛觉异常客观体征，34例伴有音叉震动觉异常，其程度和部位与浅感觉障碍一致，其中2例还伴有位置觉、运动觉障碍；四肢腱反射消失35例，降低12例；有呼吸肌麻痹6例，其中3例做了气管切开，5例行人工呼吸；有小便潴留5例，尿失禁1例；死亡1例。入院后病程5～90 d内收取血清，部分收取CSF标本，均新鲜分离，放入-37℃冰箱储存备用，入院后2d内做电生理NCV、F波及H反射潜伏期测定。
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对照组(1)Cj抗体血清对照组39例，皆为健康助血员。男27例，女12例，平均年龄(33.6±13.1)岁，其中35.5%来自农村；CSF对照组20例，男12例，女8例，平均年龄(41.2±12.9)岁，均为住院的功能性病损病人，农村来源占54.0%。(2)GM1抗体血清对照组94例，亦为健康助血员。男65例，女29例，平均年龄(35.3±17.3)岁；CSF对照组20例，来源同Cj抗体CSF对照组，其中38.0%来自农村。(3)电生理对照组38例，男26例，女12例；平均年龄(31.6±12.9)岁。其中正常志愿者28例，余也均为住院的功能性病损病人。
Cj抗体测定 ELISA法，在改良Skirrow培养基上收获Cj菌，离心洗涤3次，用0.01 mol/L pH 7.4 PBS稀释成107～8/ml超声粉碎(30 s×5，冰水溶)，2 000×1 pm离心弃沉淀，上清液稀释1∶300包被微孔4℃过夜，次日取出洗涤3次，加入10%小牛血清封闭，37 ℃×30 min，洗涤2次，加入标准品及稀释待检样品(血清IgG 1∶200，IgM、IgA 1∶50稀释；CSF皆为不稀释样品)，0.1 ml/孔，37 ℃×30 min，洗涤3次，加入酶标抗体(IgG 1∶1 600，IgM 1∶1 000，IgA 1∶100)0.1 ml/孔，37 ℃×30 min，洗涤3次后用OPD显色，避光置10 min，2 mol/L硫酸每孔0.05 ml终止反应，选波长492 nm，用空白孔调零，测定各孔OD值，根据标准曲线计算各样值。
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GM1抗体测定 ELISA法，取GM1用无水乙醇溶解，包被于96微孔板，每孔各0.35 μg/50 μl，冷风吹干，用2% BSA-pH 7.4 PBS 0.2 ml/孔，于4℃封闭过夜，洗涤3次，加入1∶100稀释待检血清及CSF(1∶1)每孔0.1 ml，37 ℃×60 min，洗涤5次，加入1∶1 000稀释的HPR标记兔抗人IgG抗体每孔0.1 ml，37 ℃×60 min，洗涤5次，加底物OPD每孔0.1 ml显色，避光置20 min，加终止液每孔0.05 ml，选波长492 nm，空白孔调零，测定各孔OD值。
结果判断 Cj抗体阳性判断：大于等于血清对照组、CSF对照组OD平均值的2.1倍为阳性。GM1抗体阳性判断：大于等于血清对照组、CSF对照组OD平均值的2.1倍为阳性。
电生理结果判断 38例正常人统计各检神经的运动传导速度(MCV)、感觉传导速度(SCV)、H反射、F波潜伏期的平均值加减2SD作为正常范围。NCV<
+2s为减慢，F波/H反射潜伏期>+2s为延长。轻度异常：MCV、SCV比正常值减少<20%；F波/H反射潜伏期延长<20%；中度异常：MCV、SCV比正常值减少20%～39%；F波/H反射潜伏期延长20%～39%；重度异常：MCV、SCV比正常值减少>40%；F波/H反射潜伏期延长>40%。
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预后判断 预后差：一年内不能独立行走或死亡。预后好：一年内基本恢复，可独立行走。
结果
Cj抗体测定结果：血清中Cj抗体测定：血清Cj-IgG：GBS组49例，对照组39例。GBS组血清中Cj-IgG抗体阳性率为44.9%，与对照组7.7%比较，两者存在显著差异(P<0.01)；GBS组血清Cj-IgG浓度(44.20±52.09)u/ml，与对照组(11.32±13.70) u/ml比较亦存在显著差异(P<0.01)。血清Cj-IgA：GBS组45例，对照组39例。GBS组中血清Cj-IgA抗体阳性率24.4%，与对照组7.7%比较，两者存在显著差异(P<0.05)；GBS组血清Cj-IgA浓度(8.87±9.30) u/ml，与对照组(5.68±4.30) u/ml亦存在显著差异(P<0.05)。提示Cj近期感染与GBS发病有关。血清Cj-IgM：GBS组49例，对照组39例。GBS组血清Cj-IgM抗体阳性率6.1%与对照组0.0%比较，无显著差异(P>0.05)；GBS组血清Cj-IgM浓度(18.71±24.03)u/ml，与对照组(11.87±15.93)u/ml比较，亦无显著差异(P>0.05)。
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CSF中Cj抗体测定：CSF中Cj-IgG：GBS组21例，对照组20例。GBS组CSF中Cj-IgG抗体阳性率52.4%，与对照组10.0%比较，两者存在显著差异(P<0.01)；GBS组CSF中Cj-IgG浓度为(3.81±3.83) u/ml，与对照组(2.01±0.31) u/ml比较亦存在显著差异(P<0.05)。CSF中Cj-IgA：GBS组21例，对照组20例。GBS组CSF中Cj-IgA抗体阳性率19.0%，与对照组5.0%比较，两者存在显著差异(P>0.05)；GBS组CSF中Cj-IgA浓度(2.63±1.10) u/ml，与对照组(2.31±0.61) u/ml比较，亦无显著性差异(P>0.05)。CSF中Cj-IgM：GBS组21例，对照组20例。GBS组CSF中Cj-IgM抗体阳性率14.3%，与对照组10.0%比较，两者存在显著差异(P>0.05)；GBS组CSF中Cj-IgM浓度(4.01±1.66) u/ml，与对照组(3.62±0.93) u/ml比较，亦无显著差异(P>0.05)。上述结果提示GBS患者CSF中Cj-IgG抗体的增高可能由于血脑屏障损害所致[3，4]。
, 百拇医药
GM1-IgG抗体测定结果：血清GM1-IgG：GBS组49例，对照组94例。GBS组血清中GM1-IgG阳性率24.5%，与对照组2.1%比较，存在显著差异(P<0.01)，提示GM1-IgG与GBS相关。CSF中GM1-IgG：GBS组21例，对照组20例。GBS组CSF中GM1-IgG阳性率9.5%，与对照组0.0%比较，无显著性差异(P>0.05)。
GBS组病人血清中Cj抗体，GM1抗体相关性分析：GBS组49例病人血清中Cj抗体与GM1抗体统计学分析无相关性，见表1。
表1 GBS病人血清中Cj抗体、GM1抗体相关性分析 GM1-Ab/Cj-Ab
阳性
, 百拇医药
阴性
总计(例)
阳性
3
9
12
阴性
20
17
37
总计(例)
23
26
49
, 百拇医药
χ2=3.07，P>0.05
GBS病人血清Cj抗体及GM1抗体与临床表现严重程度关系：GBS病人血清Cj抗体与临床表现严重程度分析显示两者无相关联系，见表2。
表2 GBS病人血清Cj抗体与临床严重程度相关分析 临床严重程度
例 数
Cj-Ab
阳性
阴性
轻型
29
14
, 百拇医药
15
重型
20
9
11
总计
49
23
26
χ2=0.001，P>0.05
GBS病人血清GM1抗体与临床表现严重程度分析显示两者亦无相关性联系，见表3。
表3 GBS病人血清GM1抗体与临床严重程度相关分析 临床严重程度
, 百拇医药
例 数
GM1-Ab
阳性
阴性
轻型
29
5
24
重型
20
7
13
总计
, 百拇医药
49
12
37
χ2=0.04，P>0.05
从上述结果可知，GBS病人血清Cj抗体、GM1抗体与临床严重程度无相关性联系。
GBS病人血清Cj抗体及GM1抗体与预后关系分析 GBS病人血清Cj抗体与预后关系分析显示两者无相关性联系，见表4。
GBS病人血清GM1抗体与预后关系分析显示两者无相关性联系，见表5
表4 GBS病人血清Cj抗体与疾病预后相关性分析 预 后
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例 数
Cj-Ab
阳性
阴性
好
43
20
23
差
6
3
3
总计
49
, http://www.100md.com
23
26
χ2=0.03，P>0.05
表5 GBS病人血清GM1抗体与疾病预后相关性分析 预 后
例 数
GM1-Ab
阳性
阴性
好
43
9
34
, 百拇医药
差
6
3
3
总计
49
12
37
χ2=2.41，P>0.05
从上述结果可知，GBS病人血清Cj抗体、GM1抗体与疾病预后无相关性联系。
GBS病人血清Cj-Ab及GM1抗体与电生理关系分析 49例GBS病人中有40例进行了MCV、SCV、H反射/F波潜伏期测定。MCV、SCV作为观察周围神经受损指标，F波/H反射潜伏期作为神经根部位受损指标。为便于统计，将电生理值正常及轻度异常作为轻度异常，中重度异常合并为重度异常。GBS病人血清Cj抗体与电生理关系分析结果显示两者无相关性联系，见表6。
, 百拇医药
GBS病人血清GM1抗体与电生理关系分析，结果显示两者无相关性联系，见表7。
从上述结果可知，GBS病人血清Cj抗体、GM1抗体与电生理无相关性联系，提示两者抗体与神经损害部位无关。
表6 GBS病人血清Cj抗体与电生理关系分析 异常程度
MCV*
SCV**
H反射/F波***
Cj-Ab+
Cj-Ab-
Cj-Ab+
, 百拇医药
Cj-Ab-
Cj-Ab+
Cj-Ab-
轻度
14
16
14
14
12
17
重度
4
6
, 百拇医药 4
9
6
5
P值
>0.05
>0.05
>0.05
*：χ2=0.13；*：χ2=1.30；*：χ2=0.56；+阳性；-：阴性
表7 GBS病人血清GM1抗体与电生理关系分析 异常程度
MCV*
, 百拇医药
SCV**
H反射/F波***
GM1-Ab+
GM1-Ab-
GM1-Ab+
GM1-Ab-
GM1-Ab+
GM1-Ab-
轻度
5
, 百拇医药
25
4
24
7
22
重度
4
6
5
8
2
9
P值
>0.05
, 百拇医药
>0.05
>0.05
*：χ2=2.34；**：χ2=2.95；***：χ2=0.16；+：阳性；-：阴性
讨论
空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,Cj)是一种革兰阴性菌，是引起人类腹泻的常见致病菌之一。其传染途径多由于摄入被Cj污染的水、食物或接触感染Cj的家禽。在我国Cj的主要传染源为鸡、猪。
Cj感染后的GBS通常在腹泻1～3 wk后发病，此时大便阳性率很低，因此血清学变化更有利于观察有无Cj感染。根据Kimura[3]的报道，Cj-IgA往往在Cj感染后1个月内存在，IgM存在3个月，而Cj-IgG可长达1年存在于患者血清中。在本实验中我们对49例GBS病人进行血清Cj抗体测定，结果显示血清中IgA阳性率24.4%，与对照组的7.7%存在显著差别(P<0.05)。结合临床，大部分病人(63.5%)来自农村，多在夏秋季发病(6～9月份)，其中53.8%病人有长期鸡、猪接触或病前喝生水等易感史，皆提示本实验GBS病例发病与Cj近期感染有关，阳性率24.4%与国外Kaldor[5]报道的相近。血清Cj-IgM也是一个Cj近期感染的重要指标。据报道[3]Cj-IgM主要反映3个月内Cj感染情况，而Kimura认为Cj-IgA在感染后1个月内即存在，故血清Cj-IgA更能反映近期感染情况。本实验中GBS组血清Cj-IgA与对照组存在显著差别，而Cj-IgM与对照组无显著差别，可能提示本次实验中，近期(病前1个月之内)Cj感染与GBS发病有关，而病前3个月内及以上的感染与GBS发病无关。
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本实验中GBS组血清Cj抗体(IgG，IgA)的浓度与对照组相比亦存在显著差异。浓度这个指标可显示免疫反应性的强弱，所以我们认为阳性率结合浓度对GBS患者Cj感染情况会有更好的描述。本实验中Cj抗原采用标准菌株，型号ATCC-1114557，它具有目前60余种Cj血清型的共同生物学特征。Cj抗原采用此标准菌株的菌体混合抗原，对GBS病因的探讨比较有利，因为目前国内外学者对Cj的致病因素还不明确，有认为是Cj菌膜、Cj菌体、鞭毛抗原等，亦有较多学者认为是Cj-Lps。本实验更能全面地检测Cj感染情况。
从实验结果可见，GBS组血清中，GM1-IgG阳性率与对照组存在显著差别(P<0.05)。提示GM1抗体亦与GBS相关。GBS患者血清GM1-IgG阳性率为24.5%，和Jeremy[6]报道的相近。
本实验中GBS组血清Cj抗体和GM1抗体均比对照组有显著性升高，是否提示两者之间可能存在一定的关联，正如Yuki提到的那样，Cj感染人体后通过交叉反应导致神经损害，为此，我们做了Cj抗体，GM1抗体与GBS患者临床严重程度，预后的相关分析。我们知道，GM1在神经胞膜上最丰富，是一种神经元和轴索上的隐性抗原。理论上血清GM1抗体的出现一般提示轴索或神经元有损害，临床可表现为轴索型GBS，病情严重，预后差，肌电图有轴索变性表现，如果Cj感染与GM1相关，那么Cj感染诱发的GBS病人临床表现也应该比较严重，预后差。而在我们的实验中，血清Cj抗体，GM1抗体与GBS临床严重程度、预后并无相关性。这与Enders[7]、Walsh[8]结果基本一致。因此我们认为Cj感染与GM1没有相关性，且两者抗体与临床严重程度、预后无关，故不能作为一个客观指标。但本实验中GBS组血清GM1抗体确有明显的升高，可能是一种周围神经损害后继发性免疫改变，即继发轴索变性后的GM1释放产生抗体，而且它的高低受个体免疫反应强弱的影响。
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另外，我们发现GBS病人CSF中Cj-IgG抗体阳性率、浓度比对照组显著升高，而Cj-IgA，IgM皆与对照组无差别，提示Cj-IgG抗体在CSF中的出现并不是因为免疫机制在此处有作用。结合这些阳性病例，病程多在6～90d，平均31.2d，我们认为GBS患者CSF中Cj-IgG出现可能是由于血-脑屏障破坏所致，这有待进一步研究。
参考文献
[1].Asbury AK,Cornblath DR.Assessment of current diagnostic criteria for Guillain-Barre syndrome.Ann Neurol.1990,27(suppl):s21.
[2].Winer JB,Hughes RAC,Osmond C.A prospective study of acute idiopathic neuropathy I.Clincal feature and their prognosis value.J Neurol Neurosurg Psychiat.1988,51:605.
, http://www.100md.com
[3].Yuki N,Taki T,Inagaki F, et al. A bacterium lipopolysaccharide that elicits Guillain-Barre syndrome has GM1 ganglioside-like structure.J Exp Med.1993,178:1771.
[4].Simone IL,Annunziata P,Maimone D, et al. Serum and CSF anti-GM1 antibodies in patients with Guillain-Barre syndrome and chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy.J Neurol Sci.1993,114:49.
[5].Kaldor J,Speed BR.Guillain-Barre syndrome and campylobacter jejuni:A serological study.Br Med J.1984,288:1867.
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[6].Jeremy H,Norman A,Richard A.Anti-Ganglioside GM1 antibodies in Guillain-Barre syndrome and their relationship to campylobacter jeuni infection. Ann Neurol.1995,38(5):809.
[7].Enders V,Karch H,Klaus V, et al. The spectrum of immune responses to campylobacter jejuni and glycoconjugates in Guillain-Barre syndrome and in other neuroimmunological disorders.Ann Neurol,1993,34(2):136.
[8].Walsh FS,Cronin M,Koblar S, et al. Association between glycoconjugate antibodies and campylobacter infection in patients with Guillain-Barre syndrome.J Neuroimmunol.1991,34:43.
(1998年6月22日收稿 1998年10月8日修回), 百拇医药
单位：(浙江医科大学附属二院神经内科(310009)
关键词：格林-巴利综合征；空肠弯曲菌肠炎；GM1抗体
中国临床神经科学/990102摘要 目的：格林-巴利综合征(GBS)病因及发病机制探讨。方法：ELISA法测定49例GBS病人血清抗空肠弯曲菌抗体(Cj-Ab)及GM1-IgG抗体，并与临床严重程度、预后、电生理进行相关分析。结果：GBS组血清Cj-IgA、IgG，GM1-IgG阳性率与对照组存在显著差异；而GBS组血清Cj抗体、GM1抗体与临床严重程度、预后及电生理均无相关性。结论：Cj近期感染与GBS发病相关；GBS病人血清GM1-IgG亦有显著升高，但与Cj感染无关，可能只是一种神经损害后继发免疫改变，反对Yuki关于Cj感染后自身免疫引起GBS学说。
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Xin Qijun,Chen Yuanshen
Department of Neurology,the 2nd Affillated Hospital
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Objective:Study on etiology and pathogenesis of Guillain-Barre Syndrome.Methods:ELISA assay was adopted to investigate antibodies of Campylobacter jejuni antigens and glycoconjugates GM1 in the serum of GBS patients. Interelate analysis was made between those antibodies with clinical severity,prognosis and electrophysiology in GBS. Result:Significant difference was found in positive rate of Cj-IgA、Cj-IgG and GM1-IgG between GBS group and the controls,but there was no relation among Cj antibodies,GM1 antibody and clinical severity,prognosis,electrophysiology.Conclusion:There existed relationship between recent Cj infection and GBS,but no relation between GM1-Ab and Cj infection was found. Positive rate of GM1-Ab was higher in GBS group,suggested that secondary immune reaction after neural demage propably exist.We opposed Yuki′s theory of pathogenesis of GBS.
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Key Words Guillain-Barre Syndrome Antibody GM1 C-jejuni
格林-巴利综合征(Guillain-Barre Syndrome,GBS)是一种周围神经急性炎症性脱髓鞘疾病，其病因及发病机制还不明确，目前倾向认为感染及自身免疫机制与它的发病有关。国外部分学者认为空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,Cj)是GBS病前主要的感染因子之一。感染后主要通过交叉反应导致周围神经损害而导致GBS。国内对GM1抗体、Cj抗体及临床关系的综合研究尚在起步。
本文拟就Cj抗体、GM1抗体与临床、电生理的关系问题进行研究，对GBS病因及发病机制进行讨论。
材料和方法
空肠弯曲菌标准菌株ATCC-1114557(浙江省防疫站)；GM1(Sigma,美国)；GM1-IgG；HRP标记兔抗人IgG抗体(DOKA)。
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临床资料 GBS组49例，来自1996年4月～1998年1月我院及兄弟医院病人。根据Asbury诊断标准[1]纳入本组。排除有糖尿病史及服药后引起的周围神经炎。其中男35例，女14例，平均年龄(36.0±16.8)岁；平均病程(22.7±16.4)d。病前有上感史15例；腹泻史或腹痛，呕吐者10例；风疹病史1例；水痘病史1例；急性无黄疸型乙肝史1例；急性甲肝史1例；服中药史1例；不明原因发热3例；病前无明显诱因者16例。根据1988年Winer JB[2]提出的临床严重程度评分标准：属重型者(4～5分)20例，轻型者(1～3分)29例。伴有颅神经障碍41例，其中IX，X对18例(43.9%)，Ⅶ对11例(26.8%)，Ⅺ对7例(17.1%)，XII对4例(9.8%)，Ⅴ对3例(7.3%)；43例有感觉主诉，其中41例查到痛觉异常客观体征，34例伴有音叉震动觉异常，其程度和部位与浅感觉障碍一致，其中2例还伴有位置觉、运动觉障碍；四肢腱反射消失35例，降低12例；有呼吸肌麻痹6例，其中3例做了气管切开，5例行人工呼吸；有小便潴留5例，尿失禁1例；死亡1例。入院后病程5～90 d内收取血清，部分收取CSF标本，均新鲜分离，放入-37℃冰箱储存备用，入院后2d内做电生理NCV、F波及H反射潜伏期测定。
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对照组(1)Cj抗体血清对照组39例，皆为健康助血员。男27例，女12例，平均年龄(33.6±13.1)岁，其中35.5%来自农村；CSF对照组20例，男12例，女8例，平均年龄(41.2±12.9)岁，均为住院的功能性病损病人，农村来源占54.0%。(2)GM1抗体血清对照组94例，亦为健康助血员。男65例，女29例，平均年龄(35.3±17.3)岁；CSF对照组20例，来源同Cj抗体CSF对照组，其中38.0%来自农村。(3)电生理对照组38例，男26例，女12例；平均年龄(31.6±12.9)岁。其中正常志愿者28例，余也均为住院的功能性病损病人。
Cj抗体测定 ELISA法，在改良Skirrow培养基上收获Cj菌，离心洗涤3次，用0.01 mol/L pH 7.4 PBS稀释成107～8/ml超声粉碎(30 s×5，冰水溶)，2 000×1 pm离心弃沉淀，上清液稀释1∶300包被微孔4℃过夜，次日取出洗涤3次，加入10%小牛血清封闭，37 ℃×30 min，洗涤2次，加入标准品及稀释待检样品(血清IgG 1∶200，IgM、IgA 1∶50稀释；CSF皆为不稀释样品)，0.1 ml/孔，37 ℃×30 min，洗涤3次，加入酶标抗体(IgG 1∶1 600，IgM 1∶1 000，IgA 1∶100)0.1 ml/孔，37 ℃×30 min，洗涤3次后用OPD显色，避光置10 min，2 mol/L硫酸每孔0.05 ml终止反应，选波长492 nm，用空白孔调零，测定各孔OD值，根据标准曲线计算各样值。
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GM1抗体测定 ELISA法，取GM1用无水乙醇溶解，包被于96微孔板，每孔各0.35 μg/50 μl，冷风吹干，用2% BSA-pH 7.4 PBS 0.2 ml/孔，于4℃封闭过夜，洗涤3次，加入1∶100稀释待检血清及CSF(1∶1)每孔0.1 ml，37 ℃×60 min，洗涤5次，加入1∶1 000稀释的HPR标记兔抗人IgG抗体每孔0.1 ml，37 ℃×60 min，洗涤5次，加底物OPD每孔0.1 ml显色，避光置20 min，加终止液每孔0.05 ml，选波长492 nm，空白孔调零，测定各孔OD值。
结果判断 Cj抗体阳性判断：大于等于血清对照组、CSF对照组OD平均值的2.1倍为阳性。GM1抗体阳性判断：大于等于血清对照组、CSF对照组OD平均值的2.1倍为阳性。
电生理结果判断 38例正常人统计各检神经的运动传导速度(MCV)、感觉传导速度(SCV)、H反射、F波潜伏期的平均值加减2SD作为正常范围。NCV<
+2s为减慢，F波/H反射潜伏期>+2s为延长。轻度异常：MCV、SCV比正常值减少<20%；F波/H反射潜伏期延长<20%；中度异常：MCV、SCV比正常值减少20%～39%；F波/H反射潜伏期延长20%～39%；重度异常：MCV、SCV比正常值减少>40%；F波/H反射潜伏期延长>40%。, 百拇医药
预后判断 预后差：一年内不能独立行走或死亡。预后好：一年内基本恢复，可独立行走。
结果
Cj抗体测定结果：血清中Cj抗体测定：血清Cj-IgG：GBS组49例，对照组39例。GBS组血清中Cj-IgG抗体阳性率为44.9%，与对照组7.7%比较，两者存在显著差异(P<0.01)；GBS组血清Cj-IgG浓度(44.20±52.09)u/ml，与对照组(11.32±13.70) u/ml比较亦存在显著差异(P<0.01)。血清Cj-IgA：GBS组45例，对照组39例。GBS组中血清Cj-IgA抗体阳性率24.4%，与对照组7.7%比较，两者存在显著差异(P<0.05)；GBS组血清Cj-IgA浓度(8.87±9.30) u/ml，与对照组(5.68±4.30) u/ml亦存在显著差异(P<0.05)。提示Cj近期感染与GBS发病有关。血清Cj-IgM：GBS组49例，对照组39例。GBS组血清Cj-IgM抗体阳性率6.1%与对照组0.0%比较，无显著差异(P>0.05)；GBS组血清Cj-IgM浓度(18.71±24.03)u/ml，与对照组(11.87±15.93)u/ml比较，亦无显著差异(P>0.05)。
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CSF中Cj抗体测定：CSF中Cj-IgG：GBS组21例，对照组20例。GBS组CSF中Cj-IgG抗体阳性率52.4%，与对照组10.0%比较，两者存在显著差异(P<0.01)；GBS组CSF中Cj-IgG浓度为(3.81±3.83) u/ml，与对照组(2.01±0.31) u/ml比较亦存在显著差异(P<0.05)。CSF中Cj-IgA：GBS组21例，对照组20例。GBS组CSF中Cj-IgA抗体阳性率19.0%，与对照组5.0%比较，两者存在显著差异(P>0.05)；GBS组CSF中Cj-IgA浓度(2.63±1.10) u/ml，与对照组(2.31±0.61) u/ml比较，亦无显著性差异(P>0.05)。CSF中Cj-IgM：GBS组21例，对照组20例。GBS组CSF中Cj-IgM抗体阳性率14.3%，与对照组10.0%比较，两者存在显著差异(P>0.05)；GBS组CSF中Cj-IgM浓度(4.01±1.66) u/ml，与对照组(3.62±0.93) u/ml比较，亦无显著差异(P>0.05)。上述结果提示GBS患者CSF中Cj-IgG抗体的增高可能由于血脑屏障损害所致[3，4]。
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GM1-IgG抗体测定结果：血清GM1-IgG：GBS组49例，对照组94例。GBS组血清中GM1-IgG阳性率24.5%，与对照组2.1%比较，存在显著差异(P<0.01)，提示GM1-IgG与GBS相关。CSF中GM1-IgG：GBS组21例，对照组20例。GBS组CSF中GM1-IgG阳性率9.5%，与对照组0.0%比较，无显著性差异(P>0.05)。
GBS组病人血清中Cj抗体，GM1抗体相关性分析：GBS组49例病人血清中Cj抗体与GM1抗体统计学分析无相关性，见表1。
表1 GBS病人血清中Cj抗体、GM1抗体相关性分析 GM1-Ab/Cj-Ab
阳性
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阴性
总计(例)
阳性
3
9
12
阴性
20
17
37
总计(例)
23
26
49
, 百拇医药
χ2=3.07，P>0.05
GBS病人血清Cj抗体及GM1抗体与临床表现严重程度关系：GBS病人血清Cj抗体与临床表现严重程度分析显示两者无相关联系，见表2。
表2 GBS病人血清Cj抗体与临床严重程度相关分析 临床严重程度
例 数
Cj-Ab
阳性
阴性
轻型
29
14
, 百拇医药
15
重型
20
9
11
总计
49
23
26
χ2=0.001，P>0.05
GBS病人血清GM1抗体与临床表现严重程度分析显示两者亦无相关性联系，见表3。
表3 GBS病人血清GM1抗体与临床严重程度相关分析 临床严重程度
, 百拇医药
例 数
GM1-Ab
阳性
阴性
轻型
29
5
24
重型
20
7
13
总计
, 百拇医药
49
12
37
χ2=0.04，P>0.05
从上述结果可知，GBS病人血清Cj抗体、GM1抗体与临床严重程度无相关性联系。
GBS病人血清Cj抗体及GM1抗体与预后关系分析 GBS病人血清Cj抗体与预后关系分析显示两者无相关性联系，见表4。
GBS病人血清GM1抗体与预后关系分析显示两者无相关性联系，见表5
表4 GBS病人血清Cj抗体与疾病预后相关性分析 预 后
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例 数
Cj-Ab
阳性
阴性
好
43
20
23
差
6
3
3
总计
49
, http://www.100md.com
23
26
χ2=0.03，P>0.05
表5 GBS病人血清GM1抗体与疾病预后相关性分析 预 后
例 数
GM1-Ab
阳性
阴性
好
43
9
34
, 百拇医药
差
6
3
3
总计
49
12
37
χ2=2.41，P>0.05
从上述结果可知，GBS病人血清Cj抗体、GM1抗体与疾病预后无相关性联系。
GBS病人血清Cj-Ab及GM1抗体与电生理关系分析 49例GBS病人中有40例进行了MCV、SCV、H反射/F波潜伏期测定。MCV、SCV作为观察周围神经受损指标，F波/H反射潜伏期作为神经根部位受损指标。为便于统计，将电生理值正常及轻度异常作为轻度异常，中重度异常合并为重度异常。GBS病人血清Cj抗体与电生理关系分析结果显示两者无相关性联系，见表6。
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GBS病人血清GM1抗体与电生理关系分析，结果显示两者无相关性联系，见表7。
从上述结果可知，GBS病人血清Cj抗体、GM1抗体与电生理无相关性联系，提示两者抗体与神经损害部位无关。
表6 GBS病人血清Cj抗体与电生理关系分析 异常程度
MCV*
SCV**
H反射/F波***
Cj-Ab+
Cj-Ab-
Cj-Ab+
, 百拇医药
Cj-Ab-
Cj-Ab+
Cj-Ab-
轻度
14
16
14
14
12
17
重度
4
6
, 百拇医药 4
9
6
5
P值
>0.05
>0.05
>0.05
*：χ2=0.13；*：χ2=1.30；*：χ2=0.56；+阳性；-：阴性
表7 GBS病人血清GM1抗体与电生理关系分析 异常程度
MCV*
, 百拇医药
SCV**
H反射/F波***
GM1-Ab+
GM1-Ab-
GM1-Ab+
GM1-Ab-
GM1-Ab+
GM1-Ab-
轻度
5
, 百拇医药
25
4
24
7
22
重度
4
6
5
8
2
9
P值
>0.05
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>0.05
>0.05
*：χ2=2.34；**：χ2=2.95；***：χ2=0.16；+：阳性；-：阴性
讨论
空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,Cj)是一种革兰阴性菌，是引起人类腹泻的常见致病菌之一。其传染途径多由于摄入被Cj污染的水、食物或接触感染Cj的家禽。在我国Cj的主要传染源为鸡、猪。
Cj感染后的GBS通常在腹泻1～3 wk后发病，此时大便阳性率很低，因此血清学变化更有利于观察有无Cj感染。根据Kimura[3]的报道，Cj-IgA往往在Cj感染后1个月内存在，IgM存在3个月，而Cj-IgG可长达1年存在于患者血清中。在本实验中我们对49例GBS病人进行血清Cj抗体测定，结果显示血清中IgA阳性率24.4%，与对照组的7.7%存在显著差别(P<0.05)。结合临床，大部分病人(63.5%)来自农村，多在夏秋季发病(6～9月份)，其中53.8%病人有长期鸡、猪接触或病前喝生水等易感史，皆提示本实验GBS病例发病与Cj近期感染有关，阳性率24.4%与国外Kaldor[5]报道的相近。血清Cj-IgM也是一个Cj近期感染的重要指标。据报道[3]Cj-IgM主要反映3个月内Cj感染情况，而Kimura认为Cj-IgA在感染后1个月内即存在，故血清Cj-IgA更能反映近期感染情况。本实验中GBS组血清Cj-IgA与对照组存在显著差别，而Cj-IgM与对照组无显著差别，可能提示本次实验中，近期(病前1个月之内)Cj感染与GBS发病有关，而病前3个月内及以上的感染与GBS发病无关。
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本实验中GBS组血清Cj抗体(IgG，IgA)的浓度与对照组相比亦存在显著差异。浓度这个指标可显示免疫反应性的强弱，所以我们认为阳性率结合浓度对GBS患者Cj感染情况会有更好的描述。本实验中Cj抗原采用标准菌株，型号ATCC-1114557，它具有目前60余种Cj血清型的共同生物学特征。Cj抗原采用此标准菌株的菌体混合抗原，对GBS病因的探讨比较有利，因为目前国内外学者对Cj的致病因素还不明确，有认为是Cj菌膜、Cj菌体、鞭毛抗原等，亦有较多学者认为是Cj-Lps。本实验更能全面地检测Cj感染情况。
从实验结果可见，GBS组血清中，GM1-IgG阳性率与对照组存在显著差别(P<0.05)。提示GM1抗体亦与GBS相关。GBS患者血清GM1-IgG阳性率为24.5%，和Jeremy[6]报道的相近。
本实验中GBS组血清Cj抗体和GM1抗体均比对照组有显著性升高，是否提示两者之间可能存在一定的关联，正如Yuki提到的那样，Cj感染人体后通过交叉反应导致神经损害，为此，我们做了Cj抗体，GM1抗体与GBS患者临床严重程度，预后的相关分析。我们知道，GM1在神经胞膜上最丰富，是一种神经元和轴索上的隐性抗原。理论上血清GM1抗体的出现一般提示轴索或神经元有损害，临床可表现为轴索型GBS，病情严重，预后差，肌电图有轴索变性表现，如果Cj感染与GM1相关，那么Cj感染诱发的GBS病人临床表现也应该比较严重，预后差。而在我们的实验中，血清Cj抗体，GM1抗体与GBS临床严重程度、预后并无相关性。这与Enders[7]、Walsh[8]结果基本一致。因此我们认为Cj感染与GM1没有相关性，且两者抗体与临床严重程度、预后无关，故不能作为一个客观指标。但本实验中GBS组血清GM1抗体确有明显的升高，可能是一种周围神经损害后继发性免疫改变，即继发轴索变性后的GM1释放产生抗体，而且它的高低受个体免疫反应强弱的影响。
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另外，我们发现GBS病人CSF中Cj-IgG抗体阳性率、浓度比对照组显著升高，而Cj-IgA，IgM皆与对照组无差别，提示Cj-IgG抗体在CSF中的出现并不是因为免疫机制在此处有作用。结合这些阳性病例，病程多在6～90d，平均31.2d，我们认为GBS患者CSF中Cj-IgG出现可能是由于血-脑屏障破坏所致，这有待进一步研究。
参考文献
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[5].Kaldor J,Speed BR.Guillain-Barre syndrome and campylobacter jejuni:A serological study.Br Med J.1984,288:1867.
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[6].Jeremy H,Norman A,Richard A.Anti-Ganglioside GM1 antibodies in Guillain-Barre syndrome and their relationship to campylobacter jeuni infection. Ann Neurol.1995,38(5):809.
[7].Enders V,Karch H,Klaus V, et al. The spectrum of immune responses to campylobacter jejuni and glycoconjugates in Guillain-Barre syndrome and in other neuroimmunological disorders.Ann Neurol,1993,34(2):136.
[8].Walsh FS,Cronin M,Koblar S, et al. Association between glycoconjugate antibodies and campylobacter infection in patients with Guillain-Barre syndrome.J Neuroimmunol.1991,34:43.
(1998年6月22日收稿 1998年10月8日修回), 百拇医药