腺苷三磷酸对人横纹肌肉瘤细胞系P21和c-myc蛋白表达的影响*
作者：吕桂芝 林仲翔
单位：北京医科大学临床肿瘤学院北京肿瘤防治研究所，北京 100034
关键词：P21蛋白；c-myc产物；免疫荧光；人横纹肌肉瘤细胞；ATP；肌动蛋白骨架和纽蛋白粘着斑
解剖学报980113
摘 要 为进一步研究腺苷三磷酸抑制癌细胞增殖诱导分化的作用机理，用ATP作用
于人横纹肌肉瘤单细胞克隆亚系RDL6细胞，用免疫荧光细胞化学方法观察ATP作用后
的RDL6细胞核内P21蛋白表达增强，c-myc蛋白表达降低，膜下胞质内微丝束-应力纤维
, 百拇医药
组装改善，粘着斑内的主要粘附蛋白——纽蛋白(vinculin)表达增强，正常小鼠成肌细胞
C2C12细胞核内P21蛋白高表达，c-myc蛋白不表达。结果表明：RDL6细胞P21表达的丢失
和c-myc表达的活化与细胞的增殖和分化异常相关，从而表明P21表达增强和c-myc表达
的降低在RDL6细胞表型逆转过程中起重要作用。
腺苷三磷酸对多种癌细胞的增殖都有明显的抑制效应[1～3]，近来又发现它对横纹
肌肉瘤细胞的促分化作用[4]；使人横纹肌肉瘤细胞亚系出现肌丝、肌节、肌管的序列
, 百拇医药
分化，肌专一蛋白表达，间隙连接通讯功能恢复及间隙连接蛋白表达。为了进一步研
究ATP抑制增殖和诱导分化的作用机理，对ATP作用后的RDL6细胞亚系P21蛋白、c-myc
基因以及骨架和粘附蛋白作了进一步观察，并阐明了它们与细胞分化的相互关系。
材料和方法
1.细胞的培养和处理
人横纹肌肉瘤细胞RD系(美国ATCC提供)培养在Eagle′s MEM基质内，加10%胎
牛血清，用有限稀释法分离出单细胞克隆亚系，选其中恶性表型明显的RDL6细胞亚
, 百拇医药
系，经传15代后，增殖速度快，恶性表型稳定，实验前按不同实验要求接种于小平皿
内，次日加入0.23g/LATP(最适浓度)为实验组，每日换液，对照组更换不含ATP的培
养液。小鼠成肌细胞C2C12系来自美国American Type Culture Collection,Rockvilli MD，培养液为Eagle′s MEM，含20%胎牛血清，各项指标与RDL6实验同时进行，以便比
较。
2.细胞生长速度一代龄检查法[5]
两种细胞(RDL6、C2C12)分别种植在5组小平皿内，种植细胞数(Ni)分别为2×105/
, http://www.100md.com
皿、105/皿、5×104/皿、104/皿、5×103/皿。每组3皿(RDL6细胞加入0.23g/LATP为实
验组，加ATP后的次日开始按种植数从高到低的顺序；每日各取1组消化计数，取3皿
平均值(Nf)，t为生长小时数，In为自然对数，根据公式：
Gtn=(t)/(In(Nf/Ni)/In2)
算出每日Gtn,从5日Gtn得到平均代龄Gt值。
3.p21蛋白的免疫荧光技术
, 百拇医药
把3组细胞盖片经PBS液简单漂洗后，用2%福尔马林/PBS固定3min，再经PBS漂洗
后固定于冷甲醇内3min，用0.5% Triton X-100%/PBS在摇床上清洗10min，重复3次后，用p21兔多抗(1∶25/PBS)(Sigma)在37℃温箱内孵育1h，再经tritonX-100/PBS在摇床上清
洗3次，每次10min，经FITC羊抗兔/PBSIgG孵育1h，0.5% Triton X-100/PBS清洗3次后
(在摇床上进行)，用DAPI染核，60%甘油封固，Olympas荧光显微镜和不同波长的滤片
系统进行观察，并用柯达ASA400 TMAX黑白胶片摄片。
4.c-myc基因产物的免疫荧光技术
, 百拇医药
固定、洗涤、孵育(一抗为myc蛋白，二抗为FITC羊抗鼠IgG)核染和封片步骤皆同
上。
5.微丝和纽蛋白(vinculin)的双标记技术
细胞盖片经PBS漂洗后，固定于2%甲醛/PBS内3min，经0.5% Triton X-100/PBS抽
提30min后，与纽蛋白单抗(Sigma)和FITC标记的羊抗鼠IgG(Jackson CD)先后各反应1h，抗体反应后的洗涤同上，用专一性结合蛋白F-肌动蛋白的荧光染料罗丹明-鬼笔环肽
(mol probes co)进行微丝染色。
结 果
, 百拇医药
1.ATP对RDL6细胞亚系生长速度一代龄的影响
ATP连续作用于RDL6细胞5d时的平均代龄值为85h，原RDL6细胞的平均代龄值为
33h，C2C12的平均代龄值为86h，足以说明ATP延缓了RDL6细胞的生长速度，代龄延
长，增殖抑制，与C2C12细胞的生长速度相近似。而RDL6细胞的生长速度快，增殖活
跃，是恶性细胞的重要特征。
2.p21蛋白的表达
, 百拇医药
正常小鼠成肌细胞C2C12核内p21蛋白的免疫荧光呈强阳性反应(图1)，RDL6细胞核
内p21蛋白的免疫荧光呈阴性反应(图2)，经ATP处理48h的RDL6细胞核内的p21蛋白的免
疫荧光恢复，呈较强的阳性反应(图3)，表明恶性细胞核内p21蛋白表达降低或不表达，而ATP作用后的RDL6细胞核内的p21蛋白表达增强，与小鼠的正常成肌细胞C2C12核内
p21蛋白表达相近似。
2.c-myc产物的表达
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C2C12细胞核内c-myc产物的免疫荧光不显示，呈阴性反应(图4)，RDL6细胞核内
c-myc产物的免疫荧光呈强的阳性反应(图5)。ATP处理48h的RDL6细胞核内c-myc产物
的免疫荧光消失，呈阴性反应(图6)。表明RDL6细胞在ATP作用下逆转分化，RDL6细
胞c-myc高表达的特性已消失，与C2C12正常细胞的c-myc产物不表达情况相近似。
5. 纽蛋白表达和微丝组装
C2C12细胞膜下内面粘着斑内密布排列整齐的纽蛋白的免疫荧光(图7)，RDL6细胞
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膜下内面不显示纽蛋白的免疫荧光(图8)，经ATP作用48h的RDL6细胞膜下内面粘着斑
内又出现纽蛋白的免疫荧光(图9)，与正常C2C12细胞的纽蛋白表达相近似。C2C12细胞
膜下胞质内的微丝束沿细胞的纵轴平行排列(图10)，RDL6细胞膜下胞质内微丝束消失，应力纤维解聚成F-actin肌动蛋白小体呈点状分布在细胞浆内(图11)，ATP处理48h的
RDL6细胞浆内微丝束重组，粗大的应力纤维平行排列在细胞膜下的胞浆内，F-actin肌
动蛋白小体消失(图12)。表明RDL6细胞在ATP作用下恶性表型向正常表型逆转，与
, 百拇医药
C2C12细胞的微丝束分布相近似。
讨 论
p21蛋白是参与细胞增殖调控的多功能分子，在细胞周期中发挥重要作用，不仅抑
制调控细胞周期的周期素(cyclin)和与周期素依赖的激酶(CDK)，使细胞停止分裂[6]，而
且与分化直接相关，小鼠成肌细胞C2C12是分化表型明显的细胞系[7,8]，肌丝、肌节、肌管明显分化，肌专一蛋白明显表达，间隙连接通讯功能完善，间隙连接蛋白表达[5]，核内p21蛋白的明显表达，表明p21蛋白是肌分化细胞的重要标志[7,8]。RDL6细胞肌分化
, http://www.100md.com
阻断，增殖和分化偶联失常，肌专一蛋白不表达[5]，p21蛋白不表达，提示p21蛋白表达
的缺陷与恶性表型相关，与增殖速度相关，RDL6细胞在ATP作用下逆转分化，肌丝、肌节、肌管序列分化，肌专一蛋白表达，间隙连接功能恢复、间隙连接蛋白表达[4]，p21蛋白在核内的明显表达，表明它在RDL\-6细胞逆转分化过程中起重要作用。有
人[9,10]报道p21蛋白表达受p53基因的调控，但有人[11,12]也报道了p21蛋白表达对p53基
因的不依赖性，它们的关系究竟如何?有待进一步研究。
, 百拇医药
c-myc基因在细胞的增殖和分化过程中起重要作用，维生素A抑制人食管癌增殖，诱导分化，同时降低c-myc基因的表达[13]，ATP抑制RDL6细胞增殖，诱导其分化，并
同时降低RDL6细胞核内的c-myc基因表达，不仅表明c-myc基因在人横纹肌肉瘤细胞逆
转分化中所起的重要作用，而且表明p21蛋白与c-myc基因表达的反相关性，可能是抑
癌基因与癌基因的协同作用，共同调节细胞的增殖和分化。
纽蛋白是集中在细胞与细胞之间和细胞与底物连接处的116-kD蛋白，是位于细胞
质表面粘着斑内的主要粘附蛋白，微丝末端终止于粘着斑内与纽蛋白相联，在细胞的
, 百拇医药
粘附、固定和信号传导过程中起重要作用，参与细胞增殖和分化。正常的小鼠成肌细
胞C2C12纽蛋白发达，微丝束组装完善，RDL6细胞纽蛋白不发达，微丝束破坏，应力
纤维解聚成肌动蛋白小体[5]，RDL6细胞经ATP处理后肌动蛋白小体消失，微丝束重新
组装，纽蛋白重新表达。正常细胞内微丝骨架聚合/解聚、装配/去装配的动态变化和
平衡是细胞运动、附着及细胞周期的重要调控因素。转化(或肿瘤)细胞微丝束和粘着
斑内正常结构的破坏，往往伴有F-肌动蛋白小体的出现，小体出现的频率与细胞的转
, 百拇医药
移和侵蚀性有关[14]。结果均表明，ATP对RDL6细胞的促分化作用，使RDL6细胞的恶
性表型向正常表型逆转。并证明p21、c-myc基因与纽蛋白和微丝骨架共同调控着正常
细胞、肿瘤细胞、逆转分化细胞的生物学行为。
收稿1996-12 修回 1997-03
本文图1～12见插图第11页
* 国家自然科学基金资助课题(No.39580005) 北京市自然科学基金资助(No.7962002)
图 版 说 明
, 百拇医药
图1C2C12细胞核内p21蛋白的免疫荧光呈强阳性反应 ×518(下同)
图2 RDL6细胞核内p21蛋白免疫荧光呈阴性反应
图3 ATP处理48h的RDL6细胞核内的p21蛋白的免疫荧光呈强阳性反应
图4 C2C12细胞内的c-myc基因产物的免疫荧光呈阴性反应
图5 RDL6细胞核内的c-myc基因产物的免疫荧光呈强阳性反应
图6 ATP处理48h的RDL6细胞核内c-myc基因产物的免疫荧光呈阴性反应
, 百拇医药
图7 C2C12边缘的纽蛋白免疫荧光呈强阳性反应 ×912(下同)
图8 RDL6细胞纽蛋白的免疫荧光消失呈阴性反应
图9 ATP处理48h的RDL6细胞纽蛋白的免疫荧光在细胞边缘重新出现
图10 C2C12细胞膜下胞浆内微丝束纵向平行排列
图11 RDL6细胞微丝束(应力纤维)解聚，F-actin肌动蛋白小体形成
图12 经ATP处理48h的RDL6细胞膜下胞浆内微丝束重新出现
Explanationof figures
, http://www.100md.com
Fig.1 p21immunofluorescence of C2C12 cells. ×518(thesame as follows)
Fig.2 p21 no immunofluorescence of RDL6cells.
Fig.3 p21 immuofluorescence of ATP tereated RDL6cells.
Fig.4 c-myc no immuofluorescence of C2C12 cells.
Fig.5 c-myc immuofluorescence of RDL6 cells.
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Fig.6 c-myc no immuofluorescence of ATP treated RDL6cells
Fig.7 Vinculin immuofluorescence of C2C12 cells. ×912(thesame as follows)
Fig.8 Vinculin no immunofuorescence of RDL6 cells.
Fig.9 Vinculin immunofluorescence of ATP treated RDL6cells.
Fig.10 Microfilament bundle immunofluorescence of C2C12cells.
, 百拇医药
Fig.11 F-actin immunofluorescence of RDL6 cells.
Fig.12 Microfilament bundle immunofluorescence of ATP treated RDL6cells.
参 考 文 献
[1] 吕桂芝，高 燕，黄衍川等.外源性三磷酸腺苷对人胃癌SGC-7901细胞的生物学效
应，解剖学报，1988，19(3)；274
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through expansion of erythrocyte ATPpools. Proc Natl Acad Sci USA, 1989, 86(3):1662
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androgen independent prosate carcinoma. JClin Invest, 1992,89(1):191
[4] 吕桂芝，林仲翔.三磷酸腺苷对人横纹肌肉瘤细胞系诱导分化作用的研究.解剖学
报，1996，27(4)：408
[5] 林仲翔，张志谦，韩亚玲等.连接蛋白基因表达与横纹肌肉瘤分化关系研究.中国科
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学(B辑)，1994，24(6)：623
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the DNA replication and repair factorpCNA. Cell, 1992, 71(3):505
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fatty acid binding protein in C2C12 musclecell. European J Cell Biol, 1996,69(2):135
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phage differentiation. Cancer Res,1995,55(3):668
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改变的研究.中华肿瘤学杂志，1993，15(1)：8
EFFECTSOF ATP ON THE EXPRESSION OF P21 ANDc-myc
, http://www.100md.com
PROTEINS IN HUMAN RHABDOMYOSARCOMA CELLS
Lü Guizhi,LinZhongxiang△(BeijingInstitute for Cancer Research and School of Oncology, BeijingMedical University, Beijing)
We have reported that adenosinetriphosphate (ATP) induced growth inhibition and cell
differentiation in human rhabdomyosarcoma cells. To furtherinvestigate mechanisms involved
in the reverse transformation of rhabdomyosarcoma cells,expression of P21 and c-myc
, 百拇医药
proteins in a subclone RDL6 originated from humanrhabdomyosarcoma cell line, was studied
by using immunofluorescence cytochemical methods. After treatmentwith ATP, increased
nuclear P21 protein immunofluorescence and reducednuclear c-myc product immunofluores-
cence was observed in RDL6 cells. Increased number andorganization of cytoplasmic actin
, http://www.100md.com
stress fibers with vinculin immunofluorescence-positive adhesionplaques at the termini of
stress fibers were also observed. Normal myoblast C2C12 cellsexpressed intense P21 but
negative c-myc while the untreated RDL6 cellsexpressed weak P21 but intense c-myc in the
nuclei.The above results strongly suggested that loss of P21 andactivation of c-myc expression
, http://www.100md.com
correlate with uncontrolled cell growth and aberrantdifferentiation in RDL6 cells.Accordingly,it is indicated that increase of P21 and reduction ofc-myc expression plays important roles in
reverse transformation of phenotypes in RDL6 cells. KEY WORDS P21 protein;c-myc product; immunofluorescence; human rhabdomy-
osarcoma cells; ATP; actin cytoskeleton and vinculin adhesionplaques
_________________________
△Department of Cell Beijing Institute forCancer Research, Beijing 100034, China), 百拇医药
单位：北京医科大学临床肿瘤学院北京肿瘤防治研究所，北京 100034
关键词：P21蛋白；c-myc产物；免疫荧光；人横纹肌肉瘤细胞；ATP；肌动蛋白骨架和纽蛋白粘着斑
解剖学报980113
摘 要 为进一步研究腺苷三磷酸抑制癌细胞增殖诱导分化的作用机理，用ATP作用
于人横纹肌肉瘤单细胞克隆亚系RDL6细胞，用免疫荧光细胞化学方法观察ATP作用后
的RDL6细胞核内P21蛋白表达增强，c-myc蛋白表达降低，膜下胞质内微丝束-应力纤维
, 百拇医药
组装改善，粘着斑内的主要粘附蛋白——纽蛋白(vinculin)表达增强，正常小鼠成肌细胞
C2C12细胞核内P21蛋白高表达，c-myc蛋白不表达。结果表明：RDL6细胞P21表达的丢失
和c-myc表达的活化与细胞的增殖和分化异常相关，从而表明P21表达增强和c-myc表达
的降低在RDL6细胞表型逆转过程中起重要作用。
腺苷三磷酸对多种癌细胞的增殖都有明显的抑制效应[1～3]，近来又发现它对横纹
肌肉瘤细胞的促分化作用[4]；使人横纹肌肉瘤细胞亚系出现肌丝、肌节、肌管的序列
, 百拇医药
分化，肌专一蛋白表达，间隙连接通讯功能恢复及间隙连接蛋白表达。为了进一步研
究ATP抑制增殖和诱导分化的作用机理，对ATP作用后的RDL6细胞亚系P21蛋白、c-myc
基因以及骨架和粘附蛋白作了进一步观察，并阐明了它们与细胞分化的相互关系。
材料和方法
1.细胞的培养和处理
人横纹肌肉瘤细胞RD系(美国ATCC提供)培养在Eagle′s MEM基质内，加10%胎
牛血清，用有限稀释法分离出单细胞克隆亚系，选其中恶性表型明显的RDL6细胞亚
, 百拇医药
系，经传15代后，增殖速度快，恶性表型稳定，实验前按不同实验要求接种于小平皿
内，次日加入0.23g/LATP(最适浓度)为实验组，每日换液，对照组更换不含ATP的培
养液。小鼠成肌细胞C2C12系来自美国American Type Culture Collection,Rockvilli MD，培养液为Eagle′s MEM，含20%胎牛血清，各项指标与RDL6实验同时进行，以便比
较。
2.细胞生长速度一代龄检查法[5]
两种细胞(RDL6、C2C12)分别种植在5组小平皿内，种植细胞数(Ni)分别为2×105/
, http://www.100md.com
皿、105/皿、5×104/皿、104/皿、5×103/皿。每组3皿(RDL6细胞加入0.23g/LATP为实
验组，加ATP后的次日开始按种植数从高到低的顺序；每日各取1组消化计数，取3皿
平均值(Nf)，t为生长小时数，In为自然对数，根据公式：
Gtn=(t)/(In(Nf/Ni)/In2)
算出每日Gtn,从5日Gtn得到平均代龄Gt值。
3.p21蛋白的免疫荧光技术
, 百拇医药
把3组细胞盖片经PBS液简单漂洗后，用2%福尔马林/PBS固定3min，再经PBS漂洗
后固定于冷甲醇内3min，用0.5% Triton X-100%/PBS在摇床上清洗10min，重复3次后，用p21兔多抗(1∶25/PBS)(Sigma)在37℃温箱内孵育1h，再经tritonX-100/PBS在摇床上清
洗3次，每次10min，经FITC羊抗兔/PBSIgG孵育1h，0.5% Triton X-100/PBS清洗3次后
(在摇床上进行)，用DAPI染核，60%甘油封固，Olympas荧光显微镜和不同波长的滤片
系统进行观察，并用柯达ASA400 TMAX黑白胶片摄片。
4.c-myc基因产物的免疫荧光技术
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固定、洗涤、孵育(一抗为myc蛋白，二抗为FITC羊抗鼠IgG)核染和封片步骤皆同
上。
5.微丝和纽蛋白(vinculin)的双标记技术
细胞盖片经PBS漂洗后，固定于2%甲醛/PBS内3min，经0.5% Triton X-100/PBS抽
提30min后，与纽蛋白单抗(Sigma)和FITC标记的羊抗鼠IgG(Jackson CD)先后各反应1h，抗体反应后的洗涤同上，用专一性结合蛋白F-肌动蛋白的荧光染料罗丹明-鬼笔环肽
(mol probes co)进行微丝染色。
结 果
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1.ATP对RDL6细胞亚系生长速度一代龄的影响
ATP连续作用于RDL6细胞5d时的平均代龄值为85h，原RDL6细胞的平均代龄值为
33h，C2C12的平均代龄值为86h，足以说明ATP延缓了RDL6细胞的生长速度，代龄延
长，增殖抑制，与C2C12细胞的生长速度相近似。而RDL6细胞的生长速度快，增殖活
跃，是恶性细胞的重要特征。
2.p21蛋白的表达
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正常小鼠成肌细胞C2C12核内p21蛋白的免疫荧光呈强阳性反应(图1)，RDL6细胞核
内p21蛋白的免疫荧光呈阴性反应(图2)，经ATP处理48h的RDL6细胞核内的p21蛋白的免
疫荧光恢复，呈较强的阳性反应(图3)，表明恶性细胞核内p21蛋白表达降低或不表达，而ATP作用后的RDL6细胞核内的p21蛋白表达增强，与小鼠的正常成肌细胞C2C12核内
p21蛋白表达相近似。
2.c-myc产物的表达
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C2C12细胞核内c-myc产物的免疫荧光不显示，呈阴性反应(图4)，RDL6细胞核内
c-myc产物的免疫荧光呈强的阳性反应(图5)。ATP处理48h的RDL6细胞核内c-myc产物
的免疫荧光消失，呈阴性反应(图6)。表明RDL6细胞在ATP作用下逆转分化，RDL6细
胞c-myc高表达的特性已消失，与C2C12正常细胞的c-myc产物不表达情况相近似。
5. 纽蛋白表达和微丝组装
C2C12细胞膜下内面粘着斑内密布排列整齐的纽蛋白的免疫荧光(图7)，RDL6细胞
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膜下内面不显示纽蛋白的免疫荧光(图8)，经ATP作用48h的RDL6细胞膜下内面粘着斑
内又出现纽蛋白的免疫荧光(图9)，与正常C2C12细胞的纽蛋白表达相近似。C2C12细胞
膜下胞质内的微丝束沿细胞的纵轴平行排列(图10)，RDL6细胞膜下胞质内微丝束消失，应力纤维解聚成F-actin肌动蛋白小体呈点状分布在细胞浆内(图11)，ATP处理48h的
RDL6细胞浆内微丝束重组，粗大的应力纤维平行排列在细胞膜下的胞浆内，F-actin肌
动蛋白小体消失(图12)。表明RDL6细胞在ATP作用下恶性表型向正常表型逆转，与
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C2C12细胞的微丝束分布相近似。
讨 论
p21蛋白是参与细胞增殖调控的多功能分子，在细胞周期中发挥重要作用，不仅抑
制调控细胞周期的周期素(cyclin)和与周期素依赖的激酶(CDK)，使细胞停止分裂[6]，而
且与分化直接相关，小鼠成肌细胞C2C12是分化表型明显的细胞系[7,8]，肌丝、肌节、肌管明显分化，肌专一蛋白明显表达，间隙连接通讯功能完善，间隙连接蛋白表达[5]，核内p21蛋白的明显表达，表明p21蛋白是肌分化细胞的重要标志[7,8]。RDL6细胞肌分化
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阻断，增殖和分化偶联失常，肌专一蛋白不表达[5]，p21蛋白不表达，提示p21蛋白表达
的缺陷与恶性表型相关，与增殖速度相关，RDL6细胞在ATP作用下逆转分化，肌丝、肌节、肌管序列分化，肌专一蛋白表达，间隙连接功能恢复、间隙连接蛋白表达[4]，p21蛋白在核内的明显表达，表明它在RDL\-6细胞逆转分化过程中起重要作用。有
人[9,10]报道p21蛋白表达受p53基因的调控，但有人[11,12]也报道了p21蛋白表达对p53基
因的不依赖性，它们的关系究竟如何?有待进一步研究。
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c-myc基因在细胞的增殖和分化过程中起重要作用，维生素A抑制人食管癌增殖，诱导分化，同时降低c-myc基因的表达[13]，ATP抑制RDL6细胞增殖，诱导其分化，并
同时降低RDL6细胞核内的c-myc基因表达，不仅表明c-myc基因在人横纹肌肉瘤细胞逆
转分化中所起的重要作用，而且表明p21蛋白与c-myc基因表达的反相关性，可能是抑
癌基因与癌基因的协同作用，共同调节细胞的增殖和分化。
纽蛋白是集中在细胞与细胞之间和细胞与底物连接处的116-kD蛋白，是位于细胞
质表面粘着斑内的主要粘附蛋白，微丝末端终止于粘着斑内与纽蛋白相联，在细胞的
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粘附、固定和信号传导过程中起重要作用，参与细胞增殖和分化。正常的小鼠成肌细
胞C2C12纽蛋白发达，微丝束组装完善，RDL6细胞纽蛋白不发达，微丝束破坏，应力
纤维解聚成肌动蛋白小体[5]，RDL6细胞经ATP处理后肌动蛋白小体消失，微丝束重新
组装，纽蛋白重新表达。正常细胞内微丝骨架聚合/解聚、装配/去装配的动态变化和
平衡是细胞运动、附着及细胞周期的重要调控因素。转化(或肿瘤)细胞微丝束和粘着
斑内正常结构的破坏，往往伴有F-肌动蛋白小体的出现，小体出现的频率与细胞的转
, 百拇医药
移和侵蚀性有关[14]。结果均表明，ATP对RDL6细胞的促分化作用，使RDL6细胞的恶
性表型向正常表型逆转。并证明p21、c-myc基因与纽蛋白和微丝骨架共同调控着正常
细胞、肿瘤细胞、逆转分化细胞的生物学行为。
收稿1996-12 修回 1997-03
本文图1～12见插图第11页
* 国家自然科学基金资助课题(No.39580005) 北京市自然科学基金资助(No.7962002)
图 版 说 明
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图1C2C12细胞核内p21蛋白的免疫荧光呈强阳性反应 ×518(下同)
图2 RDL6细胞核内p21蛋白免疫荧光呈阴性反应
图3 ATP处理48h的RDL6细胞核内的p21蛋白的免疫荧光呈强阳性反应
图4 C2C12细胞内的c-myc基因产物的免疫荧光呈阴性反应
图5 RDL6细胞核内的c-myc基因产物的免疫荧光呈强阳性反应
图6 ATP处理48h的RDL6细胞核内c-myc基因产物的免疫荧光呈阴性反应
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图7 C2C12边缘的纽蛋白免疫荧光呈强阳性反应 ×912(下同)
图8 RDL6细胞纽蛋白的免疫荧光消失呈阴性反应
图9 ATP处理48h的RDL6细胞纽蛋白的免疫荧光在细胞边缘重新出现
图10 C2C12细胞膜下胞浆内微丝束纵向平行排列
图11 RDL6细胞微丝束(应力纤维)解聚，F-actin肌动蛋白小体形成
图12 经ATP处理48h的RDL6细胞膜下胞浆内微丝束重新出现
Explanationof figures
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Fig.1 p21immunofluorescence of C2C12 cells. ×518(thesame as follows)
Fig.2 p21 no immunofluorescence of RDL6cells.
Fig.3 p21 immuofluorescence of ATP tereated RDL6cells.
Fig.4 c-myc no immuofluorescence of C2C12 cells.
Fig.5 c-myc immuofluorescence of RDL6 cells.
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Fig.6 c-myc no immuofluorescence of ATP treated RDL6cells
Fig.7 Vinculin immuofluorescence of C2C12 cells. ×912(thesame as follows)
Fig.8 Vinculin no immunofuorescence of RDL6 cells.
Fig.9 Vinculin immunofluorescence of ATP treated RDL6cells.
Fig.10 Microfilament bundle immunofluorescence of C2C12cells.
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Fig.11 F-actin immunofluorescence of RDL6 cells.
Fig.12 Microfilament bundle immunofluorescence of ATP treated RDL6cells.
参 考 文 献
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EFFECTSOF ATP ON THE EXPRESSION OF P21 ANDc-myc
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PROTEINS IN HUMAN RHABDOMYOSARCOMA CELLS
Lü Guizhi,LinZhongxiang△(BeijingInstitute for Cancer Research and School of Oncology, BeijingMedical University, Beijing)
We have reported that adenosinetriphosphate (ATP) induced growth inhibition and cell
differentiation in human rhabdomyosarcoma cells. To furtherinvestigate mechanisms involved
in the reverse transformation of rhabdomyosarcoma cells,expression of P21 and c-myc
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proteins in a subclone RDL6 originated from humanrhabdomyosarcoma cell line, was studied
by using immunofluorescence cytochemical methods. After treatmentwith ATP, increased
nuclear P21 protein immunofluorescence and reducednuclear c-myc product immunofluores-
cence was observed in RDL6 cells. Increased number andorganization of cytoplasmic actin
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stress fibers with vinculin immunofluorescence-positive adhesionplaques at the termini of
stress fibers were also observed. Normal myoblast C2C12 cellsexpressed intense P21 but
negative c-myc while the untreated RDL6 cellsexpressed weak P21 but intense c-myc in the
nuclei.The above results strongly suggested that loss of P21 andactivation of c-myc expression
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correlate with uncontrolled cell growth and aberrantdifferentiation in RDL6 cells.Accordingly,it is indicated that increase of P21 and reduction ofc-myc expression plays important roles in
reverse transformation of phenotypes in RDL6 cells. KEY WORDS P21 protein;c-myc product; immunofluorescence; human rhabdomy-
osarcoma cells; ATP; actin cytoskeleton and vinculin adhesionplaques
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△Department of Cell Beijing Institute forCancer Research, Beijing 100034, China), 百拇医药