乌贼墨对H22癌细胞内Ca2+浓度、核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性及c-jun表达的影响
作者：王成斌 孙克任 谢克勤 苏小游
单位：王成斌(中国预防医学科学院环境卫生监测所，北京 100021)；孙克任(山东医科大学山东省毒理学重点实验室)；谢克勤(山东医科大学山东省毒理学重点实验室)；苏小游(山东医科大学山东省毒理学重点实验室)
关键词：Ca2+；Ca2+/Mg2+-ATP酶；c-jun；乌贼墨
卫生研究000213 摘 要：利用荧光探针和免疫组织化学方法，研究了乌贼墨对H22癌细胞内Ca2+浓度、核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性及c-jun表达的影响。结果发现，乌贼墨使H22癌细胞内Ca2+浓度分别降低了69%和79%，核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性分别降低了21%和37%，c-jun表达明显减少。结果提示乌贼墨可能通过降低细胞内Ca2+浓度，继而影响到核膜上Ca2+依赖性Ca2+/Mg2+-ATP酶活性，减少了Ca2+向细胞核内的转运，使Ca2+对c-jun表达的促进作用减弱，抑制了细胞的分裂增殖。这可能是乌贼墨抑制肿瘤生长的机制之一。
, http://www.100md.com
分类号：R73.361 文献标识码：A
文章编号：1000-8020(2000)02-0096-03
Effect of sepia on intracellular Ca2+ concentration，nuclear
Ca2+/Mg2+-ATPase activities and c-jun expression
in H22 cancer cells
Wang Chengbin Sun Keren Xie Keqin Su Xiaoyou
(Institute of Environmental Health Monitoring，Chinese Academy of Preventive Medicine，Beijing 100021，China)
, 百拇医药
Abstract：The effect of sepia on the intracellular Ca2+ concentration，nuclear Ca2+/Mg2+-ATPase activities and the expression of c-jun were studied in H22 cancer cells by using fluorescent probe and immunohistochemical method.The results showed that intracellular Ca2+ concentration decreased 69% and 79%，nuclear Ca2+/Mg2+-ATPase activities diminished 21% and 37%，c-jun expression decreased obviously.The results suggested that sepia probably diminished the intracellular Ca2+ concentration，affected Ca2+-dependent nuclear Ca2+/Mg2+-ATPase activities，thus reduced the amount of Ca2+ transporting into nuclei，so lessened the promoting effect of Ca2+ on c-jun expression，and therefore inhibited cellular differentiation and proliferation.This might be one of the possible anti-cancer mechanisms of sepia.
, 百拇医药
Key words：Ca2+， Ca2+/Mg2+-ATPase， c-jun， sepia
70年代以来，人们发现乌贼墨能抑制肿瘤生长[1]，对乌贼墨抗癌功能的研究逐步深入。现已经发现乌贼墨可提高免疫功能，诱生细胞毒性因子和肿瘤坏死因子，杀伤癌细胞[2，3]。乌贼墨还能降低凝血时间，增强纤溶酶活性，有促凝血作用等[4]。为了进一步研究乌贼墨抗癌的机理，我们利用Fura-2/AM荧光探针标记、免疫组织化学及生化方法，测定H22癌细胞内Ca2+浓度、核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性及c-jun表达的变化，以探讨乌贼墨抗癌的可能机制。
1 材料与方法
1.1 材料
, 百拇医药
昆明种小鼠，体重18～22g，由山东医科大学实验动物中心提供，H22癌细胞由山东省医学科学院药物所提供，Fura-2/AM荧光探针购于Sigma公司，c-jun抗体由美国Oncogene Science公司提供。
1.2 H22癌细胞内Ca2+浓度的测定[5]
小鼠腹腔接种浓度为2.5×107/ml的H22癌细胞悬液0.2ml。8天后，抽取腹水，用冰冷Hank's氏液洗2次，Eagle液(含10%小牛血清)制备成浓度为2×106/ml的细胞悬液，取3ml细胞悬液加入Fura-2/AM荧光探针，37℃恒温振荡45min，细胞悬液中依次加入乌贼墨0、2.5和5.0mg，37℃水浴预温3min，日立850型荧光分光光度计，激发波长350nm，发射波长450nm，测定荧光强度，根据公式计算细胞内游离钙离子浓度：
, 百拇医药
[Ca2+]i=Kd(F-Fmin)/(Fmax-F)。
1.3 H22癌细胞核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性的测定
30只小鼠随机分为3组，每组10只，雌雄各半，右腋皮下接种浓度为2.5×107/ml的H22癌细胞悬液0.2ml。24h后，Ⅰ组(对照组)灌服生理盐水10μl/g BW，Ⅱ组灌服乌贼墨1.25mg/g BW，Ⅲ组灌服乌贼墨2.5mg/g BW，连续10天。10天后，杀死动物，取瘤组织，用冷0.25mol/L蔗糖溶液洗2次，玻璃匀浆器制成匀浆，按苏拔贤等的方法制备并收集细胞核，以上步骤均于4℃下进行[6]。参照徐友涵等的方法测定酶的活性[7]。蛋白定量用Bradford法[8]。
, 百拇医药
1.4 H22癌细胞内c-jun的表达
动物及药物同1.3。杀死动物后，取瘤组织，福尔马林固定，石蜡包埋，制成3～4μm切片，采用ABC(华美公司)法显示c-JUN蛋白免疫阳性细胞。
2 结果
2.1 H22癌细胞内Ca2+浓度的变化
附表显示，H22癌细胞内Ca2+浓度随乌贼墨剂量的增加而明显下降，分别比对照组下降了69%和79%(t=3.12，P<0.01)。
2.2 H22癌细胞核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性的变化
, 百拇医药
经不同剂量的乌贼墨治疗后，Ⅱ、Ⅲ组H22癌细胞核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性分别比对照组下降了21%和37%(t=3.25，P<0.01)。
附表 乌贼墨对H22癌细胞内Ca2+浓度及核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性的影响(n=10，
±s) 组别
乌贼墨剂量
(mg/g BW)
Ca2+浓度
(nmol/L)
, 百拇医药
Ca2+/Mg2+-ATP酶活性
(nmol*mg-1*min-1)
Ⅰ组
0
367.32±31.83
163.55±1.52
Ⅱ组
2.5
112.57±11.06(1)
128.86±1.60(1)
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Ⅲ组
5.0
78.65± 5.88(1)
102.50±1.96(1)
注：(1)与对照组比较P<0.01
2.3 H22癌细胞内c-jun表达的变化
Ⅰ组未经乌贼墨治疗，着色强度较强，细胞核呈棕红色，有弥漫性细颗粒分布，细胞浆中也有分布(图1)。经乌贼墨治疗后，Ⅱ组阳性细胞数目下降，出现阴性细胞及肿瘤细胞坏死碎片(图2)；Ⅲ组出现较多阴性细胞及大量肿瘤细胞坏死碎片(图3)。
, 百拇医药
肿瘤细胞着色较强，未出现阴性细胞
图1 对照组H22癌细胞内c-jun表达(×400)
肿瘤细胞(A)着色与图1相比明显减弱，出现阴性细胞(B)
图2 Ⅱ组H22癌细胞内c-jun表达(×400)
出现肿瘤细胞坏死碎片(A)及大量阴性细胞(B)
图3 Ⅲ组H22癌细胞内c-jun的表达 (×400)
3 讨论
, 百拇医药
c-jun属于一种早期反应基因。其特点是静止细胞受到有丝分裂原刺激，能瞬时性地增强表达。除有丝分裂原外也可受其他诱导剂诱导[9]。c-jun表达后生成39kD的一种蛋白质c-JUN，可与c-fos基因表达的62kd的磷酸化蛋白c-FOS通过亮氨酸拉链结构域平行地相互作用形成二聚体[10]，与DNA结合，作为转录活化因子AP-1(activator protein-1)，然后与TPA反应元件结合，调节基因转录、细胞分裂、分化及增殖[11～14]。
c-jun是核内基因，其表达受许多信号系统的调节，特别是受细胞内Ca2+浓度变化的影响[14]。细胞核内Ca2+浓度受细胞浆内Ca2+浓度和核膜上Ca2+依赖性Ca2+/Mg2+-ATP酶的影响[15～17]。在癌细胞中，细胞内Ca2+浓度升高，引起核膜上的活性升高，使转运到细胞核内的Ca2+增加，细胞核内Ca2+浓度升高。核内的Ca2+与钙调素(CaM)结合，激活后共同作用，升高Ca2+/CaM-依赖性蛋白激酶，特别是Ca2+/CaM-依赖性蛋白激酶Ⅳ的活性，使cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的133位Ser残基发生磷酸化，并活化CREB结合蛋白[18]。二者结合，形成活化的转录因子，从而促进了c-jun的转录[14]。c-jun转录表达增加后，又可促进其它基因的转录，并加快细胞的分化增殖。
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我们通过测定H22癌细胞内Ca2+浓度及核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性，发现乌贼墨可显著降低H22癌细胞内Ca2+浓度和细胞核Ca2+/Mg2+-ATP酶活性，明显减少c-jun的表达，提示乌贼墨可能通过降低H22癌细胞内Ca2+浓度，引起细胞核Ca2+依赖性Ca2+/Mg2+-ATP酶活性降低，导致向细胞核内转运的Ca2+减少，使Ca2+对c-jun表达的促进作用减弱，从而抑制了细胞的分裂增殖。这可能是乌贼墨抑制肿瘤生长的机制之一。
基金项目：山东省卫生厅科学基金资助课题(No.90C0830)
作者简介：王成斌，男，医学硕士，实习研究员
, http://www.100md.com
参考文献：
[1]常敏毅.乌贼墨囊中含有高效抗癌物质.中国海洋药物，1991，4：17—20
[2]吕昌龙，洪明标，钟建国，等.乌贼墨对小鼠移植瘤的抑制作用.实用肿瘤学杂志，1994，1：6—8
[3]吕昌龙，赫
.乌贼墨诱生小鼠细胞毒因子活性的检测.中国医科大学学报，1994，23(4)：322—326
[4]谢光临，吕昌龙，赫.乌贼墨促凝血作用机制的实验研究.中国医科大学学报，1994，23(6)：530—533
[5]李明，王峻峰，韩济生，等.应用Fura-2/AM检测分离的神经细胞内游离钙浓度及变化.药学学报，1991，26(12)：890—894
, 百拇医药
[6]苏拔贤.生物化学制备技术.北京：科学出版社，1982，155—158
[7]徐友涵，宋睦华.一种简便、灵敏的ATPase活性测定法.生物化学与生物物理进展，1986，4：64—66
[8]Bradford MM.A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.Anal Biochem，1976，72:248—254
[9]Sassone-Corsi P，Lamph WW，Kamps M，et al.Fos-associated cellular p39 is related to nuclear transcription factor AP-1.Cell，1988，54:553—560
, http://www.100md.com
[10]陈瑗，周玫.氧化应激与c-fos和c-jun转录和AP-1激活.生物化学与生物物理进展，1995，22(5)：386—390
[11]Piechaczyk M，Bianchard JM.c-fos proto-oncogene regulation and function.Crit Rev Oncol Hemtol，1994，17:93—131
[12]Caubet JF.c-fos proto-oncogene expression in the nervous system during mouse development.Mol Cell Biol，1989，9:2269—2272
[13]Kovary K，Bravo R.Existence of different Fos/Jun complexes during the G0 to G1 transition and during exponential growth in mouse fibroblasts:differential role of Fos proteins.Mol Cell Biol，1992，12:5015—5023
, 百拇医药
[14]Roche E，Prentki M.Calcium regulation of immediate-early response genes.Cell Calcium，1994，16:331—338
[15]Giles EH，Francisco HC, Sangeeta C.Mechanisms controlling gene expression by nuclear calcium signals.Cell Calcium，1998，23(2,3):131—134
[16]Himpens B，de Smedt，Casteels R.Relationship between [Ca2+]changes in nucleus and cytosol.Cell Calcium，1994，16:239—246
[17]Yamaguchi M，Oishi K.Involvement of Ca2+-stimulated adenosine 5′-triphosphatase in the Ca2+ releasing mechanism of rat liver nuclei.Mol Cell Biochem，1994，131:167—172
[18]Jankneche R，Hunter T.Versatile molecular glue.Curr Biol，1996，6:951—954
收稿日期：1999-09-08, http://www.100md.com
单位：王成斌(中国预防医学科学院环境卫生监测所，北京 100021)；孙克任(山东医科大学山东省毒理学重点实验室)；谢克勤(山东医科大学山东省毒理学重点实验室)；苏小游(山东医科大学山东省毒理学重点实验室)
关键词：Ca2+；Ca2+/Mg2+-ATP酶；c-jun；乌贼墨
卫生研究000213 摘 要：利用荧光探针和免疫组织化学方法，研究了乌贼墨对H22癌细胞内Ca2+浓度、核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性及c-jun表达的影响。结果发现，乌贼墨使H22癌细胞内Ca2+浓度分别降低了69%和79%，核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性分别降低了21%和37%，c-jun表达明显减少。结果提示乌贼墨可能通过降低细胞内Ca2+浓度，继而影响到核膜上Ca2+依赖性Ca2+/Mg2+-ATP酶活性，减少了Ca2+向细胞核内的转运，使Ca2+对c-jun表达的促进作用减弱，抑制了细胞的分裂增殖。这可能是乌贼墨抑制肿瘤生长的机制之一。
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分类号：R73.361 文献标识码：A
文章编号：1000-8020(2000)02-0096-03
Effect of sepia on intracellular Ca2+ concentration，nuclear
Ca2+/Mg2+-ATPase activities and c-jun expression
in H22 cancer cells
Wang Chengbin Sun Keren Xie Keqin Su Xiaoyou
(Institute of Environmental Health Monitoring，Chinese Academy of Preventive Medicine，Beijing 100021，China)
, 百拇医药
Abstract：The effect of sepia on the intracellular Ca2+ concentration，nuclear Ca2+/Mg2+-ATPase activities and the expression of c-jun were studied in H22 cancer cells by using fluorescent probe and immunohistochemical method.The results showed that intracellular Ca2+ concentration decreased 69% and 79%，nuclear Ca2+/Mg2+-ATPase activities diminished 21% and 37%，c-jun expression decreased obviously.The results suggested that sepia probably diminished the intracellular Ca2+ concentration，affected Ca2+-dependent nuclear Ca2+/Mg2+-ATPase activities，thus reduced the amount of Ca2+ transporting into nuclei，so lessened the promoting effect of Ca2+ on c-jun expression，and therefore inhibited cellular differentiation and proliferation.This might be one of the possible anti-cancer mechanisms of sepia.
, 百拇医药
Key words：Ca2+， Ca2+/Mg2+-ATPase， c-jun， sepia
70年代以来，人们发现乌贼墨能抑制肿瘤生长[1]，对乌贼墨抗癌功能的研究逐步深入。现已经发现乌贼墨可提高免疫功能，诱生细胞毒性因子和肿瘤坏死因子，杀伤癌细胞[2，3]。乌贼墨还能降低凝血时间，增强纤溶酶活性，有促凝血作用等[4]。为了进一步研究乌贼墨抗癌的机理，我们利用Fura-2/AM荧光探针标记、免疫组织化学及生化方法，测定H22癌细胞内Ca2+浓度、核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性及c-jun表达的变化，以探讨乌贼墨抗癌的可能机制。
1 材料与方法
1.1 材料
, 百拇医药
昆明种小鼠，体重18～22g，由山东医科大学实验动物中心提供，H22癌细胞由山东省医学科学院药物所提供，Fura-2/AM荧光探针购于Sigma公司，c-jun抗体由美国Oncogene Science公司提供。
1.2 H22癌细胞内Ca2+浓度的测定[5]
小鼠腹腔接种浓度为2.5×107/ml的H22癌细胞悬液0.2ml。8天后，抽取腹水，用冰冷Hank's氏液洗2次，Eagle液(含10%小牛血清)制备成浓度为2×106/ml的细胞悬液，取3ml细胞悬液加入Fura-2/AM荧光探针，37℃恒温振荡45min，细胞悬液中依次加入乌贼墨0、2.5和5.0mg，37℃水浴预温3min，日立850型荧光分光光度计，激发波长350nm，发射波长450nm，测定荧光强度，根据公式计算细胞内游离钙离子浓度：
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[Ca2+]i=Kd(F-Fmin)/(Fmax-F)。
1.3 H22癌细胞核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性的测定
30只小鼠随机分为3组，每组10只，雌雄各半，右腋皮下接种浓度为2.5×107/ml的H22癌细胞悬液0.2ml。24h后，Ⅰ组(对照组)灌服生理盐水10μl/g BW，Ⅱ组灌服乌贼墨1.25mg/g BW，Ⅲ组灌服乌贼墨2.5mg/g BW，连续10天。10天后，杀死动物，取瘤组织，用冷0.25mol/L蔗糖溶液洗2次，玻璃匀浆器制成匀浆，按苏拔贤等的方法制备并收集细胞核，以上步骤均于4℃下进行[6]。参照徐友涵等的方法测定酶的活性[7]。蛋白定量用Bradford法[8]。
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1.4 H22癌细胞内c-jun的表达
动物及药物同1.3。杀死动物后，取瘤组织，福尔马林固定，石蜡包埋，制成3～4μm切片，采用ABC(华美公司)法显示c-JUN蛋白免疫阳性细胞。
2 结果
2.1 H22癌细胞内Ca2+浓度的变化
附表显示，H22癌细胞内Ca2+浓度随乌贼墨剂量的增加而明显下降，分别比对照组下降了69%和79%(t=3.12，P<0.01)。
2.2 H22癌细胞核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性的变化
, 百拇医药
经不同剂量的乌贼墨治疗后，Ⅱ、Ⅲ组H22癌细胞核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性分别比对照组下降了21%和37%(t=3.25，P<0.01)。
附表 乌贼墨对H22癌细胞内Ca2+浓度及核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性的影响(n=10，
±s) 组别乌贼墨剂量
(mg/g BW)
Ca2+浓度
(nmol/L)
, 百拇医药
Ca2+/Mg2+-ATP酶活性
(nmol*mg-1*min-1)
Ⅰ组
0
367.32±31.83
163.55±1.52
Ⅱ组
2.5
112.57±11.06(1)
128.86±1.60(1)
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Ⅲ组
5.0
78.65± 5.88(1)
102.50±1.96(1)
注：(1)与对照组比较P<0.01
2.3 H22癌细胞内c-jun表达的变化
Ⅰ组未经乌贼墨治疗，着色强度较强，细胞核呈棕红色，有弥漫性细颗粒分布，细胞浆中也有分布(图1)。经乌贼墨治疗后，Ⅱ组阳性细胞数目下降，出现阴性细胞及肿瘤细胞坏死碎片(图2)；Ⅲ组出现较多阴性细胞及大量肿瘤细胞坏死碎片(图3)。
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肿瘤细胞着色较强，未出现阴性细胞
图1 对照组H22癌细胞内c-jun表达(×400)
肿瘤细胞(A)着色与图1相比明显减弱，出现阴性细胞(B)
图2 Ⅱ组H22癌细胞内c-jun表达(×400)
出现肿瘤细胞坏死碎片(A)及大量阴性细胞(B)
图3 Ⅲ组H22癌细胞内c-jun的表达 (×400)
3 讨论
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c-jun属于一种早期反应基因。其特点是静止细胞受到有丝分裂原刺激，能瞬时性地增强表达。除有丝分裂原外也可受其他诱导剂诱导[9]。c-jun表达后生成39kD的一种蛋白质c-JUN，可与c-fos基因表达的62kd的磷酸化蛋白c-FOS通过亮氨酸拉链结构域平行地相互作用形成二聚体[10]，与DNA结合，作为转录活化因子AP-1(activator protein-1)，然后与TPA反应元件结合，调节基因转录、细胞分裂、分化及增殖[11～14]。
c-jun是核内基因，其表达受许多信号系统的调节，特别是受细胞内Ca2+浓度变化的影响[14]。细胞核内Ca2+浓度受细胞浆内Ca2+浓度和核膜上Ca2+依赖性Ca2+/Mg2+-ATP酶的影响[15～17]。在癌细胞中，细胞内Ca2+浓度升高，引起核膜上的活性升高，使转运到细胞核内的Ca2+增加，细胞核内Ca2+浓度升高。核内的Ca2+与钙调素(CaM)结合，激活后共同作用，升高Ca2+/CaM-依赖性蛋白激酶，特别是Ca2+/CaM-依赖性蛋白激酶Ⅳ的活性，使cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的133位Ser残基发生磷酸化，并活化CREB结合蛋白[18]。二者结合，形成活化的转录因子，从而促进了c-jun的转录[14]。c-jun转录表达增加后，又可促进其它基因的转录，并加快细胞的分化增殖。
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我们通过测定H22癌细胞内Ca2+浓度及核膜Ca2+/Mg2+-ATP酶活性，发现乌贼墨可显著降低H22癌细胞内Ca2+浓度和细胞核Ca2+/Mg2+-ATP酶活性，明显减少c-jun的表达，提示乌贼墨可能通过降低H22癌细胞内Ca2+浓度，引起细胞核Ca2+依赖性Ca2+/Mg2+-ATP酶活性降低，导致向细胞核内转运的Ca2+减少，使Ca2+对c-jun表达的促进作用减弱，从而抑制了细胞的分裂增殖。这可能是乌贼墨抑制肿瘤生长的机制之一。
基金项目：山东省卫生厅科学基金资助课题(No.90C0830)
作者简介：王成斌，男，医学硕士，实习研究员
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[1]常敏毅.乌贼墨囊中含有高效抗癌物质.中国海洋药物，1991，4：17—20
[2]吕昌龙，洪明标，钟建国，等.乌贼墨对小鼠移植瘤的抑制作用.实用肿瘤学杂志，1994，1：6—8
[3]吕昌龙，赫
.乌贼墨诱生小鼠细胞毒因子活性的检测.中国医科大学学报，1994，23(4)：322—326[4]谢光临，吕昌龙，赫
.乌贼墨促凝血作用机制的实验研究.中国医科大学学报，1994，23(6)：530—533[5]李明，王峻峰，韩济生，等.应用Fura-2/AM检测分离的神经细胞内游离钙浓度及变化.药学学报，1991，26(12)：890—894
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[6]苏拔贤.生物化学制备技术.北京：科学出版社，1982，155—158
[7]徐友涵，宋睦华.一种简便、灵敏的ATPase活性测定法.生物化学与生物物理进展，1986，4：64—66
[8]Bradford MM.A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.Anal Biochem，1976，72:248—254
[9]Sassone-Corsi P，Lamph WW，Kamps M，et al.Fos-associated cellular p39 is related to nuclear transcription factor AP-1.Cell，1988，54:553—560
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[10]陈瑗，周玫.氧化应激与c-fos和c-jun转录和AP-1激活.生物化学与生物物理进展，1995，22(5)：386—390
[11]Piechaczyk M，Bianchard JM.c-fos proto-oncogene regulation and function.Crit Rev Oncol Hemtol，1994，17:93—131
[12]Caubet JF.c-fos proto-oncogene expression in the nervous system during mouse development.Mol Cell Biol，1989，9:2269—2272
[13]Kovary K，Bravo R.Existence of different Fos/Jun complexes during the G0 to G1 transition and during exponential growth in mouse fibroblasts:differential role of Fos proteins.Mol Cell Biol，1992，12:5015—5023
, 百拇医药
[14]Roche E，Prentki M.Calcium regulation of immediate-early response genes.Cell Calcium，1994，16:331—338
[15]Giles EH，Francisco HC, Sangeeta C.Mechanisms controlling gene expression by nuclear calcium signals.Cell Calcium，1998，23(2,3):131—134
[16]Himpens B，de Smedt，Casteels R.Relationship between [Ca2+]changes in nucleus and cytosol.Cell Calcium，1994，16:239—246
[17]Yamaguchi M，Oishi K.Involvement of Ca2+-stimulated adenosine 5′-triphosphatase in the Ca2+ releasing mechanism of rat liver nuclei.Mol Cell Biochem，1994，131:167—172
[18]Jankneche R，Hunter T.Versatile molecular glue.Curr Biol，1996，6:951—954
收稿日期：1999-09-08, http://www.100md.com