子宫内膜癌组织中Bcl-2蛋白表达的免疫组化测定及其临床意义的研究
作者：张爱荣1 孙树三2 张振国2 孔北华2
单位：张爱荣 山东医科大学附属第二医院妇产科，250033 孙树三 张振国 孔北华 山东医科大学附属医院
关键词：子宫内膜肿瘤；蛋白；Bcl-2；免疫组织化学
现代妇产科进展990108 摘要 目的：探讨Bcl-2蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组化法测定对50份子宫内膜癌石蜡包埋标本Bcl-2蛋白的表达。结果：Bcl-2蛋白在子宫内膜癌组织中的表达阳性率为48.00%(24/50)，其阳性表达与子宫内膜癌的组织学分级、肌层浸润深度及患者预后有关(P<0.05)，与子宫内膜癌临床分期、组织学类型及病理学类型无关。结论：Bcl-2蛋白表达与子宫内膜癌的某些病理学特征及生物学行为之间有相关性。应用免疫组化法测定Bcl-2蛋白表达对判断子宫内膜癌患者的预后有一定的价值。
, 百拇医药
Determination of expression of Bcl-2 protein in endometrial carcinoma using immunohistochemistry and its clinical significance.
Zhang Airong1，Sun Shusan2，Zhang Zhenguo2，et al.
The Second Affiliated Hospital of Shandong Medical University，250033，2The Affiliated Hospital of Shandong Medieal University
Abstract Objective：To study the expression of Bcl-2 protein in endometrial carcinoma(EC)and its clinical significance.Methods：Formalin-fixed paraffin-embedded specimens from 50 patients with EC were studied.Bcl-2 protein was detected by immunohistochemical assay using monoclonal antibody.Results：The expression of Bcl-2 protein was found in 24/50(48.00%)of EC.The positive rate of Bcl-2 expression in patients with EC was significantly related to carcinoma cell grade，depth of myometrium invasion and patients prognosis(P<0.05).It was not related to the tissue type，clinical stage and growth type of carcinoma.Conclusions：The expression of Bcl-2 protein is correlated with some pathological characteristics and the biological behavior of EC.The study of expression of Bcl-2 protein using immunohistochemical assay is helpful in evaluating the prognoses of patients with EC.
, 百拇医药
Key words Endometrial neoplasm； Protein，Bcl-2；Immunohistochemistry
近年，子宫内膜癌(endometrial carcinoma，EC)的发生率有逐渐上升的趋势。研究显示，肿瘤的发生、发展与细胞凋亡障碍关系更为密切。研究还证明，Bcl-2是调节细胞凋亡的关键性生物因子。我们采用免疫组织化学方法(immunohistochem
-ical assay ，IHCA)检测了50份EC组织中Bcl-2蛋白的表达状况，旨在探讨Bcl-2基因在EC发生、发展中的作用及其临床意义。
1 资料与方法
1.1 标本来源 随机选择山东医科大学附属医院1979至1988年临床及随访资料完整的EC手术切除经石蜡包埋组织标本50份，其中腺癌34份，腺棘癌10份、腺鳞癌3份、鳞癌2份、浆液性乳头状癌1份。患者平均56.1y，术前均未接受化疗或放疗。按1988年FIGO分期标准，Ⅰ期者30份、Ⅱ期者9份、Ⅲ期者7份、Ⅳ期者4份；组织学分级Ⅰ级20份、Ⅱ级21份、Ⅲ级9份。随访资料显示患者5a内死于本病者10例。
, http://www.100md.com
1.2 试剂 抗Bcl-2蛋白单克隆抗体及SAPC试剂盒购自武汉博士德生物工程公司，抗体工作浓度为1∶100，以PBS代替一抗作阴性对照，以淋巴结效应性增生组织为阳性对照。
1.3 免疫组织化学染色 所有标本均经常规福尔马林固定，石蜡包埋，4μm切片2张，行HE及免疫组化染色。具体方法参照说明书进行。
1.4 结果判定 阳性染色为棕黄色颗粒，综合染色强度和阳性细胞所占比例进行半定量处理。染色强度按后列标准评分：阴性为0分；染色弱，但明显强于阴性对照者为1分；染色清晰者为2分；染色强者为3分。阳性细胞所占比例评定标准：阳性细胞数<10%者为0分；10%～30%者为1分；31%～60%者为2分；≥60%者为3分。两种评分相加，0～1分为(-)，2分为(+)；3～4分为(
)；5～6分为(
)。
, http://www.100md.com
1.5 统计学处理 采用χ2检验
2 结果
2.1 Bcl-2蛋白的分布形式 Bcl-2蛋白主要定位于细胞浆内，阳性细胞呈弥漫性或局灶性分布，肿瘤周围正常子宫内膜腺体细胞及平滑肌组织呈不同程度的染色。
2.2 Bcl-2蛋白在EC组织中的表达 50份EC组织中，24份呈阳性表达，阳性表达率为48.00%，其中9份()，9份()，6份(+)。
2.3 Bcl-2蛋白表达与EC临床-病理特征的关系
2.3.1 Bcl-2蛋白表达与组织学类型的关系 见表1。蛋白表达在EC各组织学类型间差异无显著性(P>0.05)。
, 百拇医药
表1 Bcl-2蛋白在EC各组织学类型中的表达 组织学类型
n
Bcl-2蛋白阳性
n
%
腺癌
腺棘癌
腺鳞癌
鳞癌
浆液性乳头状癌
34
10
3
, http://www.100md.com
2
1
16
6
1
1
0
47.06
60.00
33.33
50.00
0
2.3.2 Bcl-2蛋白表达与组织学分级的关系 见表2。Bcl-2蛋白在ECⅠ、Ⅱ级间表达阳性率差异有显著性(P<0.05)；Ⅱ、Ⅲ级间表达差异无显著性(P>0.05)。表2 Bcl-2蛋白在EC各组织学分级中的表达 组织学分级
, http://www.100md.com
n
Bcl-2蛋白阳性
n
%
Ⅰ级
Ⅱ级
Ⅲ级
20
21
9
13
7
4
65.00
, http://www.100md.com
33.33
44.44
2.3.3 BcL-2蛋白表达与子宫肌层浸润深度间的关系 见表3。子宫肌层浸润深度间表达阳性率差异有显著性(P<0.05)。表3 Bcl-2蛋白在子宫肌层不同浸润深度中的表达 浸润深度
n
Bcl-2蛋白阳性
n
%
浅层(<1/2)
深层(≥1/2)
21
29
, 百拇医药
15
9
71.43
31.03
2.3.4 Bcl-2蛋白表达与EC临床分期间的关系 见表4。Bcl-2蛋白表达率在临床期别间差异无显著性(P>0.05)。
2.3.5 Bcl-2蛋白表达与患者预后的关系 见表5。Bcl-2蛋白表达阳性率在不同预后患者中差异有显著性(P<0.05)。
2.3.6 Bcl-2蛋白表达与EC大体病理类型间的关系 EC病理类型分为局限型和弥漫型两种，Bcl-2蛋白表达阳性率分别为37.50%及52.94%，差异无显著性。表4 Bcl-2蛋白在EC临床分期中的表达 临床期别
n
, http://www.100md.com
Bcl-2蛋白阳性
n
%
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
总计
30
9
7
4
50
15
, 百拇医药
6
2
1
24
50.00
66.67
28.57
25.00
48.00
表5 Bcl-2蛋白表达与EC患者预后的关系 存活年限
n
Bcl-2蛋白阳性
n
, 百拇医药
%
≥5a
<5a
总计
40
10
50
22
2
24
55.00
20.00
48.00
, http://www.100md.com 3 讨论
3.1 Bcl-2的性能 Bcl-2基因是从小鼠B细胞淋巴瘤中分离得到的原癌基因，定位于染色体19q21，编码由239个氨基酸组成的蛋白质，分子量为25～26KD[1]。研究表明，Bcl-2基因参与细胞凋亡的调控过程。Bcl-2蛋白一般分布于线粒体膜内侧，其功能与阻止细胞凋亡、延长细胞生存周期有关[2]。
3.2 Bcl-2与EC的发生、发展 有关EC组织中Bcl-2蛋白表达的研究国内尚未见报道。Gompel等[6]研究发现，Bcl-2蛋白存在于正常增生期子宫内膜，随卵泡的发育，其表达强度逐渐增加，卵泡期末达高峰，黄体期消失，说明正常月经周期内膜的增生与Bcl-2基因的功能密切相关。还有研究表明，子宫内膜复合增生组织中Bcl-2表达阳性率显著高于不典型增生及EC[4]。随子宫内膜由良性增生到恶性增生的转变，Bcl-2表达阳性率逐渐降低，推测在EC发生及发展过程中可能存在一种抑制或减弱Bcl-2蛋白表达的细胞机制[5]。本研究结果显示，EC组织中Bcl-2蛋白表达阳性率为48.00%，Kuvashima等[6]的报道与本结果相近。Bcl-2表达阳性率与组织学分级、子宫肌层浸润深度及患者预后显著相关。本研究表明，Bcl-2表达与组织学类型及临床分期无相关性，需扩大样本，进一步研究方可得出可信结论。
, http://www.100md.com
本研究结果提示，Bcl-2蛋白表达与EC的某些病理学特征及生物学行为有关，应用免疫组化测定Bcl-2蛋白表达对判断患者预后有一定的价值。
(本文承蒙江森教授审阅，谨致谢忱)
参考文献
1.Tsujimono Y，Croce CM.Analysis of the structure transcripts and protein products of Bcl-2 the gene involved in human follicular lymphoma.proc Natl Acad Sci USA 1986；83(14)：5214
2.Hochenberg D，Nunez G，Milliman C，et al.Bcl-2：An inner mitochondrial membrane protein that blocks programmed cell death.Nature 1990；348：334
, http://www.100md.com
3.Gompel A，Sabourin JC，Martin A，et al.Bcl-2 expression in normal endometrium during the menstrual cycle.Am J Pathol 1994;144：1195
4.Theodorf H，Niemann MD，Tracey L，et al.Bc-2 expression in endometrial hyperplasia and carcinoma.Gynecol Oncol 1996；63：318
5.Zheng W，Feng Y，Gandhi M，et al.Persistent expression of Bcl-2 oncoprotein in endometrial carcinoma correlates with hormone receptor positivity.Int J Gynecol Cancer 1996；3：235
6.Kuwashima Y，Hehara T，Kish K，et al.Proliferative and apoptotic status in endometrial adenocarcinoma.Int J Gynecol Pathol 1995；14：45
(收稿日期 1998-10-02), http://www.100md.com(张爱荣1 孙树三2 张振国2 孔北华2)
单位：张爱荣 山东医科大学附属第二医院妇产科，250033 孙树三 张振国 孔北华 山东医科大学附属医院
关键词：子宫内膜肿瘤；蛋白；Bcl-2；免疫组织化学
现代妇产科进展990108 摘要 目的：探讨Bcl-2蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组化法测定对50份子宫内膜癌石蜡包埋标本Bcl-2蛋白的表达。结果：Bcl-2蛋白在子宫内膜癌组织中的表达阳性率为48.00%(24/50)，其阳性表达与子宫内膜癌的组织学分级、肌层浸润深度及患者预后有关(P<0.05)，与子宫内膜癌临床分期、组织学类型及病理学类型无关。结论：Bcl-2蛋白表达与子宫内膜癌的某些病理学特征及生物学行为之间有相关性。应用免疫组化法测定Bcl-2蛋白表达对判断子宫内膜癌患者的预后有一定的价值。
, 百拇医药
Determination of expression of Bcl-2 protein in endometrial carcinoma using immunohistochemistry and its clinical significance.
Zhang Airong1，Sun Shusan2，Zhang Zhenguo2，et al.
The Second Affiliated Hospital of Shandong Medical University，250033，2The Affiliated Hospital of Shandong Medieal University
Abstract Objective：To study the expression of Bcl-2 protein in endometrial carcinoma(EC)and its clinical significance.Methods：Formalin-fixed paraffin-embedded specimens from 50 patients with EC were studied.Bcl-2 protein was detected by immunohistochemical assay using monoclonal antibody.Results：The expression of Bcl-2 protein was found in 24/50(48.00%)of EC.The positive rate of Bcl-2 expression in patients with EC was significantly related to carcinoma cell grade，depth of myometrium invasion and patients prognosis(P<0.05).It was not related to the tissue type，clinical stage and growth type of carcinoma.Conclusions：The expression of Bcl-2 protein is correlated with some pathological characteristics and the biological behavior of EC.The study of expression of Bcl-2 protein using immunohistochemical assay is helpful in evaluating the prognoses of patients with EC.
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Key words Endometrial neoplasm； Protein，Bcl-2；Immunohistochemistry
近年，子宫内膜癌(endometrial carcinoma，EC)的发生率有逐渐上升的趋势。研究显示，肿瘤的发生、发展与细胞凋亡障碍关系更为密切。研究还证明，Bcl-2是调节细胞凋亡的关键性生物因子。我们采用免疫组织化学方法(immunohistochem
-ical assay ，IHCA)检测了50份EC组织中Bcl-2蛋白的表达状况，旨在探讨Bcl-2基因在EC发生、发展中的作用及其临床意义。
1 资料与方法
1.1 标本来源 随机选择山东医科大学附属医院1979至1988年临床及随访资料完整的EC手术切除经石蜡包埋组织标本50份，其中腺癌34份，腺棘癌10份、腺鳞癌3份、鳞癌2份、浆液性乳头状癌1份。患者平均56.1y，术前均未接受化疗或放疗。按1988年FIGO分期标准，Ⅰ期者30份、Ⅱ期者9份、Ⅲ期者7份、Ⅳ期者4份；组织学分级Ⅰ级20份、Ⅱ级21份、Ⅲ级9份。随访资料显示患者5a内死于本病者10例。
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1.2 试剂 抗Bcl-2蛋白单克隆抗体及SAPC试剂盒购自武汉博士德生物工程公司，抗体工作浓度为1∶100，以PBS代替一抗作阴性对照，以淋巴结效应性增生组织为阳性对照。
1.3 免疫组织化学染色 所有标本均经常规福尔马林固定，石蜡包埋，4μm切片2张，行HE及免疫组化染色。具体方法参照说明书进行。
1.4 结果判定 阳性染色为棕黄色颗粒，综合染色强度和阳性细胞所占比例进行半定量处理。染色强度按后列标准评分：阴性为0分；染色弱，但明显强于阴性对照者为1分；染色清晰者为2分；染色强者为3分。阳性细胞所占比例评定标准：阳性细胞数<10%者为0分；10%～30%者为1分；31%～60%者为2分；≥60%者为3分。两种评分相加，0～1分为(-)，2分为(+)；3～4分为(
)；5～6分为()。, http://www.100md.com
1.5 统计学处理 采用χ2检验
2 结果
2.1 Bcl-2蛋白的分布形式 Bcl-2蛋白主要定位于细胞浆内，阳性细胞呈弥漫性或局灶性分布，肿瘤周围正常子宫内膜腺体细胞及平滑肌组织呈不同程度的染色。
2.2 Bcl-2蛋白在EC组织中的表达 50份EC组织中，24份呈阳性表达，阳性表达率为48.00%，其中9份(
)，9份()，6份(+)。2.3 Bcl-2蛋白表达与EC临床-病理特征的关系
2.3.1 Bcl-2蛋白表达与组织学类型的关系 见表1。蛋白表达在EC各组织学类型间差异无显著性(P>0.05)。
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表1 Bcl-2蛋白在EC各组织学类型中的表达 组织学类型
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Bcl-2蛋白阳性
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腺癌
腺棘癌
腺鳞癌
鳞癌
浆液性乳头状癌
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2.3.2 Bcl-2蛋白表达与组织学分级的关系 见表2。Bcl-2蛋白在ECⅠ、Ⅱ级间表达阳性率差异有显著性(P<0.05)；Ⅱ、Ⅲ级间表达差异无显著性(P>0.05)。表2 Bcl-2蛋白在EC各组织学分级中的表达 组织学分级
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Bcl-2蛋白阳性
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2.3.3 BcL-2蛋白表达与子宫肌层浸润深度间的关系 见表3。子宫肌层浸润深度间表达阳性率差异有显著性(P<0.05)。表3 Bcl-2蛋白在子宫肌层不同浸润深度中的表达 浸润深度
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Bcl-2蛋白阳性
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浅层(<1/2)
深层(≥1/2)
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2.3.4 Bcl-2蛋白表达与EC临床分期间的关系 见表4。Bcl-2蛋白表达率在临床期别间差异无显著性(P>0.05)。
2.3.5 Bcl-2蛋白表达与患者预后的关系 见表5。Bcl-2蛋白表达阳性率在不同预后患者中差异有显著性(P<0.05)。
2.3.6 Bcl-2蛋白表达与EC大体病理类型间的关系 EC病理类型分为局限型和弥漫型两种，Bcl-2蛋白表达阳性率分别为37.50%及52.94%，差异无显著性。表4 Bcl-2蛋白在EC临床分期中的表达 临床期别
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Bcl-2蛋白阳性
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Ⅰ
Ⅱ
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总计
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表5 Bcl-2蛋白表达与EC患者预后的关系 存活年限
n
Bcl-2蛋白阳性
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40
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48.00
, http://www.100md.com 3 讨论
3.1 Bcl-2的性能 Bcl-2基因是从小鼠B细胞淋巴瘤中分离得到的原癌基因，定位于染色体19q21，编码由239个氨基酸组成的蛋白质，分子量为25～26KD[1]。研究表明，Bcl-2基因参与细胞凋亡的调控过程。Bcl-2蛋白一般分布于线粒体膜内侧，其功能与阻止细胞凋亡、延长细胞生存周期有关[2]。
3.2 Bcl-2与EC的发生、发展 有关EC组织中Bcl-2蛋白表达的研究国内尚未见报道。Gompel等[6]研究发现，Bcl-2蛋白存在于正常增生期子宫内膜，随卵泡的发育，其表达强度逐渐增加，卵泡期末达高峰，黄体期消失，说明正常月经周期内膜的增生与Bcl-2基因的功能密切相关。还有研究表明，子宫内膜复合增生组织中Bcl-2表达阳性率显著高于不典型增生及EC[4]。随子宫内膜由良性增生到恶性增生的转变，Bcl-2表达阳性率逐渐降低，推测在EC发生及发展过程中可能存在一种抑制或减弱Bcl-2蛋白表达的细胞机制[5]。本研究结果显示，EC组织中Bcl-2蛋白表达阳性率为48.00%，Kuvashima等[6]的报道与本结果相近。Bcl-2表达阳性率与组织学分级、子宫肌层浸润深度及患者预后显著相关。本研究表明，Bcl-2表达与组织学类型及临床分期无相关性，需扩大样本，进一步研究方可得出可信结论。
, http://www.100md.com
本研究结果提示，Bcl-2蛋白表达与EC的某些病理学特征及生物学行为有关，应用免疫组化测定Bcl-2蛋白表达对判断患者预后有一定的价值。
(本文承蒙江森教授审阅，谨致谢忱)
参考文献
1.Tsujimono Y，Croce CM.Analysis of the structure transcripts and protein products of Bcl-2 the gene involved in human follicular lymphoma.proc Natl Acad Sci USA 1986；83(14)：5214
2.Hochenberg D，Nunez G，Milliman C，et al.Bcl-2：An inner mitochondrial membrane protein that blocks programmed cell death.Nature 1990；348：334
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3.Gompel A，Sabourin JC，Martin A，et al.Bcl-2 expression in normal endometrium during the menstrual cycle.Am J Pathol 1994;144：1195
4.Theodorf H，Niemann MD，Tracey L，et al.Bc-2 expression in endometrial hyperplasia and carcinoma.Gynecol Oncol 1996；63：318
5.Zheng W，Feng Y，Gandhi M，et al.Persistent expression of Bcl-2 oncoprotein in endometrial carcinoma correlates with hormone receptor positivity.Int J Gynecol Cancer 1996；3：235
6.Kuwashima Y，Hehara T，Kish K，et al.Proliferative and apoptotic status in endometrial adenocarcinoma.Int J Gynecol Pathol 1995；14：45
(收稿日期 1998-10-02), http://www.100md.com(张爱荣1 孙树三2 张振国2 孔北华2)