nm23-H1基因在人贲门癌中的表达
作者：纪振东 张雄基 倪世荣 于淑华
单位：纪振东 张雄基(白求恩医大一院 吉林 长春130021)；倪世荣 于淑华(内蒙古蒙医学院)
关键词：贲门癌；nm23-H1基因；免疫组化
白求恩医科大学学报000214
〔提 要〕 目的：检测转移抑制基因nm23-H1在贲门癌中的表达，探讨其与贲门癌生物学特性和其他病理学指标的关系。方法：应用免疫组化染色技术对28例贲门癌组织中的nm23-H1进行检测并与正常组织对照。结果：贲门癌及其相应的正常组织中nm23-H1蛋白表达率分别为67.9%和71.4%，两者间无显著性差异(P<0.05)。nm23-H1蛋白在贲门癌中的表达，随肿瘤浸润程度的增加而表达下降(P>0.05)；在淋巴结转移阳性组贲门癌中，表达阳性率为46.2%，而淋巴结转移阴性组为92.8%，两者差异显著(P<0.05)。结论：nm23-H1蛋白表达在肿瘤分化程度高组与低组之间，无显著性差异。
, 百拇医药
〔中图分类号〕 Q786 〔文献标识码〕 A
〔文章编号〕 0253-3707(2000)02-0147-03
Expression of nm23-H1 gene in human cardiac carcinoma
Ji Zhendong Zhang Xiongji Ni Shirong Yu Shuhua
(The First Clinical College,NBUMS,Changchun 130021)
(Traditional Mongolia Medical College,The Inner Mongolia.Autonomous Region)
, 百拇医药
〔Abstract〕 Objective:To examine the expression of the anti-metastasis gene nm23-H1 in human cardiac carcinoma,and to study the relations among the expression rates of nm23-H1,cardiac carcinoma biological behaviors and other clinical pathology indicators.Methods:The expression of nm23-H1 gene in fresh human tumor tissue from 28 patients with cardiac cancer was examined by using the immunohistochemical technique and compared to normal tissues.Results:The expression rates of nm23-H1 protein in cancer tissue and normal tissue were 67.9% and 71.4% respectively,and nosignificant difference was found between them(P>0.05).The rates decreased while the depth of tumor infiltration increase(P<0.05).The rate of nm23-H1 protein expression in positive lymph nodes was 46.2%,and that in negative lymph nodes was 92.8%;there was no significant difference(P<0.05).Conclusion:There was no significant difference between high and low differentiation in cardiac carcinoma.
, 百拇医药
〔Key words〕 cardiac carcinoma;nm23-H1 gene;immunohistochemistry
肿瘤的发生和转移是两个既相互关联又各自独立的生物学过程。肿瘤的浸润转移是恶性肿瘤研究中最重要而又了解较少的一面，往往是肿瘤病人死亡的直接原因。肿瘤转移可受其自身的转移基因及转移抑制基因的调控〔1〕。被研究较多的转移抑制基因nm23被认为是最有前途的基因。我们通过对nm23-H1蛋白在贲门癌中表达的检测，试图探讨nm23-H1基因与贲门癌生物学特性及其与临床病理指标的关系。
1 材料与方法
1.1 标本采集 收集本院1995年11月～1997年5月28例贲门癌及其距肿瘤5 cm外的正常胃粘膜标本共56份，其中男性26例，女性2例，年龄55±19.2岁，均经手术及病理确定诊断。标本置液氮中冷冻备用。
, 百拇医药
1.2 主要材料及方法 nm23-单克隆抗体SanTa.Craz公司生产，ABC试剂盒美国Zymecl公司产品。取标本作厚度为5 μm冰冻切片，以PBS缓冲液为空白对照。以正常鼠血清为替代对照。实验步骤参照所用试剂说明进行。
1.3 结果判定 nm23-H1免疫组织化学染色〔2〕。计数5个高倍视野的阳性细胞总数，算出平均每个高倍视野中的阳性细胞数。0(-)；1～10(+)；11～20(
)；≥21(
)。作统计分析时+～均作为阳性表达，即(+)表示。用χ2检验对nm23-H1的染色结果进行统计。
2 结 果
, http://www.100md.com 2.1 nm23-H1蛋白表达 nm23-H1蛋白在贲门癌及相应正常粘膜组织中均有表达，呈棕褐色颗粒，其阳性率分别为69.9%(19/28)和71.4%(20/28)。在肿瘤细胞中，着色主要位于胞浆中，在正常粘膜组织中主要位于腺上皮或基底细胞内。两组未见显著性差异。nm23-H1蛋白表达阳性率在贲门癌的高分化组、中分化组、低分化组分别为71.4%，71.4%和57.1%。三者无显著的统计学差异1(P>0.05)。
2.2 nm23-H1蛋白表达与贲门癌浸润深度关系 由表1可见，随着肿瘤浸润深度的进展，nm23-H1蛋白阳性表达逐渐下降，T4组阳性表达率仅为28.3%，与T1、T2组比较有显著性差异(P<0.01)。T1组与T2组比较无显著性差异(P>0.05)。
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2.3 nm23-H1蛋白表达与淋巴结转移的关系
见表2。依据术中所见结合术后病理，将28例贲门癌分为有淋巴结转移组和无淋巴结转移组。nm23-H1蛋白表达阳性率在淋巴结转移阳性组为46.2%，淋巴结转移阴性组为92.8%，两者差异显著(P<0.05)。在nm23-H1蛋白表达阳性的19例贲门癌中，6例有淋巴结转移；而在9例nm23-H1蛋白表达阴性的贲门癌中，有7例发生了淋巴结转移，其中2例肝转移。
Tab.1 The relations between infiltration and nm23-H1 protein in cardiac carcinoma Infiltration
n
nm23-H1
, 百拇医药
Positive
rate (%)
-
+
T1
1
0
1
T2
13
2
11
84.6
, http://www.100md.com
T3
9
4
5
55.5
T4
5
4
1
25.0
T1 The tumor invades mucous or sub-mucous;T2 The tumor invades muscular coat until sub-serous;T3 The tumor invades out of muscular coat but does not involve adjacent connective tissue;T4 The tumor invades out of serous and involves adjacent connective tissue.Tab.2 The relations between lymph nodes metastases and nm23-H1 protein in cardiac carcinoma Metastases
, 百拇医药
n
nm23-H1
Positive
rate (%)
-
+
Yes
13
7
6
46.2
No
15
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2
13
92.8
3 讨 论
近年的研究发现，人类基因组中存在着一类与肿瘤转移表型抑制相关的基因，称为转移抑制基因，这类基因与肿瘤的转移过程密切相关。nm23-H1基因是近年来分离鉴定的一种转移抑制基因，该基因发现者Steeg等发现〔3〕：在7株具有不同转移能力的鼠K-1735黑色素瘤的细胞中，nm23-H1 mRNA水平与癌细胞转移能力呈负相关，nm23-H1 mRNA水平在低转移癌细胞比高转移癌细胞高出10倍。7株细胞在体内对T细胞、巨噬细胞、NK细胞的反应无明显差异，说明nm23-H1转移抑制作用与免疫监视无关。Bevilaqua〔4〕用Northern杂交和ISH技术检测了27例原发浸润性导管乳腺癌病人的癌组织中nm23-H1 mRNA水平，发现淋巴结出现转移的病人nm23-H1均低水平表达mRNA，无淋巴结转移的乳腺癌nm23-H1 mRNA水平较高。Hennessy〔6〕、 Hrrayamag〔6〕、To-kunage〔7〕等也分别对乳腺癌nm23-H1蛋白表达及与淋巴结转移关系进行了研究，其结果相似。同时也证明了高水平nm23-H1蛋白表达的乳腺癌患者，无病生存期和整体生存期都较低表达者长。赵茜等〔8〕对食管癌的研究及Yasuhiro〔9〕对胃癌的研究表明，nm23-H1蛋白表达在肿瘤和相应的正常粘膜之间无明显差异。同时发现，在有浆膜或外膜浸润和淋巴结转移的患者癌组织中，nm23-H1表达下降(P<0.01)。此结果说明nm23-H1基因表达下降，提示病人预后不佳。一系列研究表明nm23-H1是一种癌转移抑制基因。
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nm23-H1基因与食管癌、胃癌、乳腺癌等诸多癌肿的关系均有研究报道。由于贲门的特殊解剖位置，目前尚未见对贲门癌进行单独报道。我们对28例贲门癌研究结果显示：贲门癌组织中nm23-H1蛋白表达有较高的阳性率(67.9%)，与其相对应的正常粘膜组织中nm23-H1蛋白表达(76.4%)无明显差异(P>0.05)。说明nm23-H1蛋白不仅在癌组织中有表达，在正常组织中也有表达，与Yasuhiro所报告的nm23-H1蛋白在胃癌及正常胃粘膜表达相近。贲门癌nm23-H1蛋白表达与肿瘤的分化程度无显著关系，此结果与赵茜等报道的食管癌相似，但与吴名耀等〔9〕对食管癌研究结果有差异，有待继续深入研究。nm23-H1在贲门癌组织表达与肿瘤浸润程度、淋巴结转移呈负相关，与胃癌、食管癌、乳腺癌等报道相似，说明nm23-H1基因在贲门癌浸润和淋巴结转移中起负调整作用。因此我们认为，检测贲门癌组织中nm23-H1基因的表达状况，不但有助于进一步了解贲门癌的生物学行为，也可作为我们预测肿瘤转移趋势，制定预后的指标之一。
, 百拇医药
〔作者简介〕 纪振东(1941-)，男，吉林省长春市人，教授，硕士生导师，主要从事食管癌、肺癌发病机理和临床诊疗研究。
〔参考文献〕
〔1〕Aznavoorian S,Murphy AN,Stetler Steventson WG,et al.Molecular aspects of tumor cells invasion and metastasis〔J〕.Cancer,1993,71(4):1368～1383.
〔2〕Sawan A,Lascu Z,Vcron M,et al.NDP-K/nm23 expression in human breast cancer in relation to relapse,survival,and other prognostic factors:an immunohistochemical study〔J〕.J Pathol,1994,172(1):27～34.
, http://www.100md.com
〔3〕Steeg PS,Bevilacque G,Kopper L,et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential〔J〕.J Natl Cancer Inst,1988,80(3):200～204.
〔4〕Bevilacqua G,Sobel ME,Liotta LA,et al.Association of low nm23 RNA levels in human primary infiltrating ductal breast carcinomas with lymph node involvement and other histopathological indicators of high metastatic potential〔J〕.Cancar Res,1999,49(18):5185～5190.
〔5〕Hennessy C,Henry JA;May FE,et al.Expression of the antimentustatic gene nm23 in human breast cancer;an association with good prognosis〔J〕.J Natl Cancer Inst,1991,83(4):281～285.
, 百拇医药
〔6〕Hiragama R,Sawai S,Takagi Y,et al.Positive relationship between expression of anti-metastatic factor (nm23 gene product or nucleoside diphosphate Kinase) and good prognosis in human breast cancer〔J〕.J Natl Cancer Inst,1991,83(17):1249～1250.
〔7〕Tokunaga Y,Urano T,Furukawak,et al.Reduced expression of nm23-H1,but not of nm23-H2，is concordant with the frequency of lymph node metastasis of human breast cancer〔J〕.Int J Cancer,1993,55(1):66～71.
〔8〕赵 茜，陈嘉骧，侯景辉，等.nm23基因产物/NDPK在食管癌中的表达及其淋巴结转移的关系〔J〕.肿瘤防治研究，1997，24(5)：275～276.
〔9〕吴名耀，吴贤英，沈 健.nm23基因在食管癌中的表达及其临床病理意义〔J〕.癌症，1997，16(5)：382～383.
〔收稿日期〕 1999-06-23, 百拇医药
单位：纪振东 张雄基(白求恩医大一院 吉林 长春130021)；倪世荣 于淑华(内蒙古蒙医学院)
关键词：贲门癌；nm23-H1基因；免疫组化
白求恩医科大学学报000214
〔提 要〕 目的：检测转移抑制基因nm23-H1在贲门癌中的表达，探讨其与贲门癌生物学特性和其他病理学指标的关系。方法：应用免疫组化染色技术对28例贲门癌组织中的nm23-H1进行检测并与正常组织对照。结果：贲门癌及其相应的正常组织中nm23-H1蛋白表达率分别为67.9%和71.4%，两者间无显著性差异(P<0.05)。nm23-H1蛋白在贲门癌中的表达，随肿瘤浸润程度的增加而表达下降(P>0.05)；在淋巴结转移阳性组贲门癌中，表达阳性率为46.2%，而淋巴结转移阴性组为92.8%，两者差异显著(P<0.05)。结论：nm23-H1蛋白表达在肿瘤分化程度高组与低组之间，无显著性差异。
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〔中图分类号〕 Q786 〔文献标识码〕 A
〔文章编号〕 0253-3707(2000)02-0147-03
Expression of nm23-H1 gene in human cardiac carcinoma
Ji Zhendong Zhang Xiongji Ni Shirong Yu Shuhua
(The First Clinical College,NBUMS,Changchun 130021)
(Traditional Mongolia Medical College,The Inner Mongolia.Autonomous Region)
, 百拇医药
〔Abstract〕 Objective:To examine the expression of the anti-metastasis gene nm23-H1 in human cardiac carcinoma,and to study the relations among the expression rates of nm23-H1,cardiac carcinoma biological behaviors and other clinical pathology indicators.Methods:The expression of nm23-H1 gene in fresh human tumor tissue from 28 patients with cardiac cancer was examined by using the immunohistochemical technique and compared to normal tissues.Results:The expression rates of nm23-H1 protein in cancer tissue and normal tissue were 67.9% and 71.4% respectively,and nosignificant difference was found between them(P>0.05).The rates decreased while the depth of tumor infiltration increase(P<0.05).The rate of nm23-H1 protein expression in positive lymph nodes was 46.2%,and that in negative lymph nodes was 92.8%;there was no significant difference(P<0.05).Conclusion:There was no significant difference between high and low differentiation in cardiac carcinoma.
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〔Key words〕 cardiac carcinoma;nm23-H1 gene;immunohistochemistry
肿瘤的发生和转移是两个既相互关联又各自独立的生物学过程。肿瘤的浸润转移是恶性肿瘤研究中最重要而又了解较少的一面，往往是肿瘤病人死亡的直接原因。肿瘤转移可受其自身的转移基因及转移抑制基因的调控〔1〕。被研究较多的转移抑制基因nm23被认为是最有前途的基因。我们通过对nm23-H1蛋白在贲门癌中表达的检测，试图探讨nm23-H1基因与贲门癌生物学特性及其与临床病理指标的关系。
1 材料与方法
1.1 标本采集 收集本院1995年11月～1997年5月28例贲门癌及其距肿瘤5 cm外的正常胃粘膜标本共56份，其中男性26例，女性2例，年龄55±19.2岁，均经手术及病理确定诊断。标本置液氮中冷冻备用。
, 百拇医药
1.2 主要材料及方法 nm23-单克隆抗体SanTa.Craz公司生产，ABC试剂盒美国Zymecl公司产品。取标本作厚度为5 μm冰冻切片，以PBS缓冲液为空白对照。以正常鼠血清为替代对照。实验步骤参照所用试剂说明进行。
1.3 结果判定 nm23-H1免疫组织化学染色〔2〕。计数5个高倍视野的阳性细胞总数，算出平均每个高倍视野中的阳性细胞数。0(-)；1～10(+)；11～20(
)；≥21()。作统计分析时+～均作为阳性表达，即(+)表示。用χ2检验对nm23-H1的染色结果进行统计。2 结 果
, http://www.100md.com 2.1 nm23-H1蛋白表达 nm23-H1蛋白在贲门癌及相应正常粘膜组织中均有表达，呈棕褐色颗粒，其阳性率分别为69.9%(19/28)和71.4%(20/28)。在肿瘤细胞中，着色主要位于胞浆中，在正常粘膜组织中主要位于腺上皮或基底细胞内。两组未见显著性差异。nm23-H1蛋白表达阳性率在贲门癌的高分化组、中分化组、低分化组分别为71.4%，71.4%和57.1%。三者无显著的统计学差异1(P>0.05)。
2.2 nm23-H1蛋白表达与贲门癌浸润深度关系 由表1可见，随着肿瘤浸润深度的进展，nm23-H1蛋白阳性表达逐渐下降，T4组阳性表达率仅为28.3%，与T1、T2组比较有显著性差异(P<0.01)。T1组与T2组比较无显著性差异(P>0.05)。
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2.3 nm23-H1蛋白表达与淋巴结转移的关系
见表2。依据术中所见结合术后病理，将28例贲门癌分为有淋巴结转移组和无淋巴结转移组。nm23-H1蛋白表达阳性率在淋巴结转移阳性组为46.2%，淋巴结转移阴性组为92.8%，两者差异显著(P<0.05)。在nm23-H1蛋白表达阳性的19例贲门癌中，6例有淋巴结转移；而在9例nm23-H1蛋白表达阴性的贲门癌中，有7例发生了淋巴结转移，其中2例肝转移。
Tab.1 The relations between infiltration and nm23-H1 protein in cardiac carcinoma Infiltration
n
nm23-H1
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Positive
rate (%)
-
+
T1
1
0
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13
2
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84.6
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T3
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T4
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25.0
T1 The tumor invades mucous or sub-mucous;T2 The tumor invades muscular coat until sub-serous;T3 The tumor invades out of muscular coat but does not involve adjacent connective tissue;T4 The tumor invades out of serous and involves adjacent connective tissue.Tab.2 The relations between lymph nodes metastases and nm23-H1 protein in cardiac carcinoma Metastases
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n
nm23-H1
Positive
rate (%)
-
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Yes
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46.2
No
15
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2
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92.8
3 讨 论
近年的研究发现，人类基因组中存在着一类与肿瘤转移表型抑制相关的基因，称为转移抑制基因，这类基因与肿瘤的转移过程密切相关。nm23-H1基因是近年来分离鉴定的一种转移抑制基因，该基因发现者Steeg等发现〔3〕：在7株具有不同转移能力的鼠K-1735黑色素瘤的细胞中，nm23-H1 mRNA水平与癌细胞转移能力呈负相关，nm23-H1 mRNA水平在低转移癌细胞比高转移癌细胞高出10倍。7株细胞在体内对T细胞、巨噬细胞、NK细胞的反应无明显差异，说明nm23-H1转移抑制作用与免疫监视无关。Bevilaqua〔4〕用Northern杂交和ISH技术检测了27例原发浸润性导管乳腺癌病人的癌组织中nm23-H1 mRNA水平，发现淋巴结出现转移的病人nm23-H1均低水平表达mRNA，无淋巴结转移的乳腺癌nm23-H1 mRNA水平较高。Hennessy〔6〕、 Hrrayamag〔6〕、To-kunage〔7〕等也分别对乳腺癌nm23-H1蛋白表达及与淋巴结转移关系进行了研究，其结果相似。同时也证明了高水平nm23-H1蛋白表达的乳腺癌患者，无病生存期和整体生存期都较低表达者长。赵茜等〔8〕对食管癌的研究及Yasuhiro〔9〕对胃癌的研究表明，nm23-H1蛋白表达在肿瘤和相应的正常粘膜之间无明显差异。同时发现，在有浆膜或外膜浸润和淋巴结转移的患者癌组织中，nm23-H1表达下降(P<0.01)。此结果说明nm23-H1基因表达下降，提示病人预后不佳。一系列研究表明nm23-H1是一种癌转移抑制基因。
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nm23-H1基因与食管癌、胃癌、乳腺癌等诸多癌肿的关系均有研究报道。由于贲门的特殊解剖位置，目前尚未见对贲门癌进行单独报道。我们对28例贲门癌研究结果显示：贲门癌组织中nm23-H1蛋白表达有较高的阳性率(67.9%)，与其相对应的正常粘膜组织中nm23-H1蛋白表达(76.4%)无明显差异(P>0.05)。说明nm23-H1蛋白不仅在癌组织中有表达，在正常组织中也有表达，与Yasuhiro所报告的nm23-H1蛋白在胃癌及正常胃粘膜表达相近。贲门癌nm23-H1蛋白表达与肿瘤的分化程度无显著关系，此结果与赵茜等报道的食管癌相似，但与吴名耀等〔9〕对食管癌研究结果有差异，有待继续深入研究。nm23-H1在贲门癌组织表达与肿瘤浸润程度、淋巴结转移呈负相关，与胃癌、食管癌、乳腺癌等报道相似，说明nm23-H1基因在贲门癌浸润和淋巴结转移中起负调整作用。因此我们认为，检测贲门癌组织中nm23-H1基因的表达状况，不但有助于进一步了解贲门癌的生物学行为，也可作为我们预测肿瘤转移趋势，制定预后的指标之一。
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〔作者简介〕 纪振东(1941-)，男，吉林省长春市人，教授，硕士生导师，主要从事食管癌、肺癌发病机理和临床诊疗研究。
〔参考文献〕
〔1〕Aznavoorian S,Murphy AN,Stetler Steventson WG,et al.Molecular aspects of tumor cells invasion and metastasis〔J〕.Cancer,1993,71(4):1368～1383.
〔2〕Sawan A,Lascu Z,Vcron M,et al.NDP-K/nm23 expression in human breast cancer in relation to relapse,survival,and other prognostic factors:an immunohistochemical study〔J〕.J Pathol,1994,172(1):27～34.
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〔3〕Steeg PS,Bevilacque G,Kopper L,et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential〔J〕.J Natl Cancer Inst,1988,80(3):200～204.
〔4〕Bevilacqua G,Sobel ME,Liotta LA,et al.Association of low nm23 RNA levels in human primary infiltrating ductal breast carcinomas with lymph node involvement and other histopathological indicators of high metastatic potential〔J〕.Cancar Res,1999,49(18):5185～5190.
〔5〕Hennessy C,Henry JA;May FE,et al.Expression of the antimentustatic gene nm23 in human breast cancer;an association with good prognosis〔J〕.J Natl Cancer Inst,1991,83(4):281～285.
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〔6〕Hiragama R,Sawai S,Takagi Y,et al.Positive relationship between expression of anti-metastatic factor (nm23 gene product or nucleoside diphosphate Kinase) and good prognosis in human breast cancer〔J〕.J Natl Cancer Inst,1991,83(17):1249～1250.
〔7〕Tokunaga Y,Urano T,Furukawak,et al.Reduced expression of nm23-H1,but not of nm23-H2，is concordant with the frequency of lymph node metastasis of human breast cancer〔J〕.Int J Cancer,1993,55(1):66～71.
〔8〕赵 茜，陈嘉骧，侯景辉，等.nm23基因产物/NDPK在食管癌中的表达及其淋巴结转移的关系〔J〕.肿瘤防治研究，1997，24(5)：275～276.
〔9〕吴名耀，吴贤英，沈 健.nm23基因在食管癌中的表达及其临床病理意义〔J〕.癌症，1997，16(5)：382～383.
〔收稿日期〕 1999-06-23, 百拇医药