乳腺导管浸润癌微血管的临床病理
作者：王显亚 孟刚 潘美华
单位：王显亚(安徽省亳州市华佗中医院 236800)；孟刚 潘美华(安徽医科大学第一附属医院病理科，合肥 230022)
关键词：乳腺肿瘤；病理学；癌；浸润性导管；内皮生长因子；淋巴转移
安徽医科大学学报报000508 摘要 目的 探讨乳腺导管浸润癌微血管密度(MVD)与血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的关系以及与其临床病理特点的相关性。方法 应用免疫组化S-P法检测52例乳腺癌组织中微血管密度及VEGF的表达，同时分析其与临床病理特点间的关系。结果 ①癌肿中央MVD为(101.4±30.8)个/mm2，而癌旁组织MVD为(146.3±54.2)个/mm2，两组差异有显著性(P<0.01)；②有腋窝淋巴结转移组MVD为(138.4±52.1)个/mm2，无腋窝淋巴结转移组MVD为(97.8±33.5)个/mm2，两组差异有显著性(P<0.05)；③转移组VEGF表达阳性率为87.7%(28/32)，无转移组为55%(11/20)，两组差异有显著性(P<0.01)；④VEGF阳性组MVD为132.5个/mm2，而VEGF阴性组MVD为91.2个/mm2，MVD和VEGF的表达具有相关性(P<0.01)。结论 肿瘤细胞表达VEGF可能是微血管密度增加的主要因素，乳腺癌血管生成与腋窝淋巴结的转移关系密切。
, http://www.100md.com
中图分类号 R737.9 文献标识码 A
文章编号 1000-1492(2000)05-0348-03
肿瘤的生长和转移不仅依赖于肿瘤实质细胞的增殖，而且与肿瘤间质内新生血管形成有关。近年来的研究表明，在肺癌、前列腺癌、肝癌等恶性肿瘤中，肿瘤微血管密度(MVD)与肿瘤的侵袭转移和预后有密切关系〔1～3〕。血管内皮生长因子(vessel endothelial growth factor,VEGF)是一种强烈的血管生成因子，许多肿瘤细胞VEGF的表达与肿瘤间质中MVD密切相关，而且有预后价值〔2～4〕。MVD及VEGF与乳腺癌的临床病理关系报道较少。本研究用抗FⅧ因子相关抗原抗体测定52例乳腺癌组织中的MVD，并分析其与VEGF及乳腺癌各种病理因素及预后之间的关系。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 材料 收集两院乳腺癌根治或改良根治术标本70例，年龄24～80岁，平均47岁。术前均未接受任何治疗，对其中有腋窝淋巴结记载的导管浸润癌52例进行研究。避开出血及坏死区，在癌灶中央、癌与正常组织交界处各取一块1 cm×1 cm×0.3 cm大小的组织块，用10%福尔马林固定，常规脱水、透明、浸蜡，包埋，4 μm连续切片，一张作HE染色，余切片作免疫组化染色。
1.2 染色方法 免疫组化染色方法采用S-P法
(0.1%胰蛋白酶消化30 min,37℃)；兔抗人FⅧ及VEGF购自福州迈新试剂公司。
1.3 结果判断
1.3.1 计数方法 每张切片选择2个血管最多的肿瘤区域，在200倍视野下用5 mm×5 mm网格测微尺进行计数。每例标本共计数4个视野，并计算出每平方毫米面积内微血管的量。
, 百拇医药
1.3.2 微血管判断标准 不以红细胞的出现来确定是否是血管，亦不以是否出现管腔来计数血管，凡是染成棕色单个内皮细胞或内皮细胞族作为一个血管计数。凡管腔大于8个红细胞大小、带有较厚肌层的血管及硬化区域的血管均不计数。
1.4 统计学处理 各组数据采用
±s表示，分别应用t检验和χ2检验。
2 结果
2.1 微血管在肿瘤组织内的分布 FⅧ免疫组化染色结果表明，癌组织内微血管形态不规则，部分血管无明显管腔，血管的分布靠近癌组织处多见。在3例伴有导管原位癌成分的导管浸润癌中，可见导管原位癌灶周围出现微血管环包绕。血管密度最高区可见于肿瘤组织的任何部位，但以癌组织与正常组织交界处最多见。本组每例标本在癌肿中央及与正常组织交界处分别取材，癌肿中央平均血管密度为101.4个/mm2，而癌肿与正常组织交界区146.3/mm2个，两者差异具有显著性(P<0.01，表1)。
, 百拇医药
表1 52例乳腺癌中央与边缘区血管密度比较
组别
n
血管密度(个/mm2)
范围±s
癌肿中央区
52
32.3～209.3
101.4±30.8
癌肿边缘区
, 百拇医药 52
48.9～225.5
146.3±54.2**
t检验，与中央区组比较：**P<0.01
2.2 微血管密度与肿瘤大小的关系 在乳腺癌切除标本上测量肿瘤最大径线，以肿块最长径频数分布均数的接近值3.5 cm为界，将52例乳腺癌分为两组，即≤3.5 cm组及>3.5 cm组。血管密度在≤3.5 cm组为110.4个/mm2，在>3.5 cm组为118.9个/mm2。经统计学处理两组差异无显著意义(P>0.05，表2)。
2.3 微血管密度与组织学分级的关系 按WHO乳腺癌分级标准，对52例乳腺癌进行分级，经统计学处理，癌组织内血管密度在各组织学级别间差异无显著性(P>0.05，表3)。
, 百拇医药
表2 乳腺癌组织内血管密度与肿瘤大小的关系
组别
n
血管密度(个/mm2)
范围±s
≤3.5 cm
25
38.8～187.9
110.4±33.8
>3.5 cm
27
, 百拇医药
40.1～192.3
118.9±44.2
表3 乳腺癌组织内血管密度与组织学分级的关系
级别
n
血管密度(个/mm2)
范围±s
Ⅰ
8
52.3～176.8
109.4±31.1
, 百拇医药
Ⅱ
25
43.8～204.9
101.3±39.1
Ⅲ
19
43.7～201.8
111.6±45.6
2.4 微血管密度与腋窝淋巴结转移的关系 根据所检腋窝淋巴结有无癌转移，将52例乳腺癌分为有转移组与无转移组。血管密度在有转移组为138.4个/mm2，无转移组为97.8/mm2个，差异有显著性(P<0.01，表4)。
, http://www.100md.com 表4 乳腺癌组织内血管密度与腋窝淋巴结转移的关系
组别
n
血管密度(个/mm2)
范围±s
有转移
32
47.1～213.7
138.4±52.1
无转移
20
, http://www.100md.com
46.5～202.5
97.8±33.5
t检验，与无转移组比较：*P<0.01
2.5 VEGF的表达 VEGF的表达主要见于癌细胞胞浆内，在肿瘤血管内皮细胞上也有弱阳性表达。有淋巴结转移组VEGF表达阳性率为87.7%(28/32)，显著高于无转移组55%(11/20)，两者差异有显著性(P<0.01)。
2.6 VEGF表达与MIVD值的关系 VEGF阳性组MVD为(132.5±43.1)个/mm2，而VEGF阴性组MVD为(91.2±31.2)个/mm2，两组间MVD差异有显著性(P<0.01)。
3 讨论
, 百拇医药 1865年Thiersch就报道恶性肿瘤内血管网明显异常，1981年Frderick对人子宫颈不同病理状态下的微血管形态进行观察，发现不典型增生的子宫颈无明显异常的微血管，而子宫颈原位癌28%有异常微血管，严重浸润子宫颈癌100%有异常微血管。业已证明，FⅧ相关抗原是血管内皮细胞特异的标记物。本实验用FⅧ相关抗原免疫组化染色的结果表明，肿瘤组织内血管形态不规则，部分闭塞状态，分布不均，呈现明显的异质性。
本研究结果表明，癌肿中央区平均血管密度为101.4个/mm2，而癌组织与正常组织交界区平均血管密度为每146.3个/mm2，两者差异有显著性。组织切片的观察可见血管分布以近瘤组织处多见，尤其是3例含导管原位癌成分的浸润癌组织中，微血管围绕着癌变导管呈环状分布(这可能与肿瘤细胞分泌VEGF有关)，上述结果提示肿瘤组织内血管的生成与其生长关系密切。
肿瘤组织内微血管与肿瘤的转移关系密切，Weidner等〔1〕对乳腺癌组织内微血管的研究表明，有腋窝淋巴结转移的乳腺癌组织内微血管密度明显高于无腑窝淋巴结转移者，并认为微血管的密度可以作为判断癌肿是否可能发生转移的一个独立性因素。本研究结果表明，乳腺癌组织内微血管密度在有腑窝淋巴结转移者为138.4个/mm2，无腋窝淋巴结转移者为97.8个/mm2，两者差异有显著性，与Weidner的结果一致。微血管增加癌肿淋巴结转移的机制不十分清楚。
, 百拇医药
肿瘤的血管生成由肿瘤细胞产生及分泌的血管生成因子所调节，其生成过程涉及一系列形态学及生化学改变。其生化学机制涉及到血管生成因子与血管生成抑制因子之间的调节失衡，目前已分离和纯化了20多种血管生成因子和相关因子，在所有的血管生成因子中，VEGF被认为是重要因子之一。VEGF是一种选择性促内皮细胞有丝分裂原(mitogen)，能直接刺激血管生长〔3，5，6〕。本实验发现乳腺癌细胞能分泌VEGF，提示VEGF是血管生成的主要因子。癌组织中VEGF阳性组与阴性组间MVD值差异有显著性(P<0.05)，VEGF阳性组MVD值明显高于VEGF阴性组，显示乳腺癌组织中VEGF状态与MVD值的密切关系。
Clinicopathology on microvessel in dutal invasive breast carcinoma
Wang Xianya Meng Gang，Pan Meihua
, 百拇医药
(Bozhou City Huatuo Chinese Traditional Medicine Hospital,Bozhou Anhui 236800)
Abstract Objective To explore the relationship between the microvessel density and the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF) and clinicopathological features. Methods The microvessel quantitation and expression of VEGF were analyzed by immunohistochemistry using antibody to fator Ⅷ-related antigen and VEGF. Results Node-positive carcinoma demonstrated significantly higher microvessel counts than node-negative carcinomas(138.4±52.1 and 97.8±33.6,respectively;P<0.01) and that connective tissue adjacent to tumor showed significantly higher microvessel counts than connective tissue of tumor center(101.4±30.8 and 145.3±54.2，respectively;P<0.01). The positivity rate of VEGF with node-positive carcinoma was 87.7%, one with node-negative carcinoma 55%. There was significant difference between two groups. MVDs of VEGF positive group and negative group were 132.5 and 91.2, respectively(P<0.01). Conclusion The angiogenesis in invasive breast carcinoma is correlated with the occurrence of metastasis. Expression of vascular endothelial growth factor is related with vascularity.
, http://www.100md.com
MeSH breast neoplasms/pathology;carcinoma,infiltrating duct； endothelial growth factors;lymphatic metastasis
作者简介：王显亚，男，37岁，主治医师；孟刚，男，37岁，副教授
参考文献
1，Weidner N.Intratumor microvessel density as a prognostic factor in cancer. Am J Pathol,1995(1);147:9～15
2，Paola B,Giuseppe V,Arthur K et al. Angiogensis in colorectal tumors:microvessel quantitation in adenomas and carcinomas with clinicopathological correlations. Cancer Res,1995;55(22):5 049～5 053
, 百拇医药
3，Maedn K,Chung YS, Ogawa Y et al. Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in gastric carcinoma. Cancer,1996;77(7):858～863
4，Toi H,Hoshinga S. Association of vascular endothelial growth factor expression with tumor angiogenesis and with early relapse in primary breast cancer. Jpn J Cancer Res,1994;85(6):1 045～1 049
5，Takahashi Y,Kitadai Y,Bucana CD et al. Expression of vascular endothelial growth factor and receptor,KDR,correlate with vascularity,metastasis,and proliferation of human colon cancer. Cancer Res,1995;55(14):3 964～3 968
6，Fontanini G,Vignati S,Boldrini L et al. Vascular endothelial growth factor is associated with neovascularization and influences progression of non-small cell lung carcinoma. Clin Cancer Res,1997;3(4):861～865
2000-06-02收稿
2000-09-06修回, 百拇医药
单位：王显亚(安徽省亳州市华佗中医院 236800)；孟刚 潘美华(安徽医科大学第一附属医院病理科，合肥 230022)
关键词：乳腺肿瘤；病理学；癌；浸润性导管；内皮生长因子；淋巴转移
安徽医科大学学报报000508 摘要 目的 探讨乳腺导管浸润癌微血管密度(MVD)与血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的关系以及与其临床病理特点的相关性。方法 应用免疫组化S-P法检测52例乳腺癌组织中微血管密度及VEGF的表达，同时分析其与临床病理特点间的关系。结果 ①癌肿中央MVD为(101.4±30.8)个/mm2，而癌旁组织MVD为(146.3±54.2)个/mm2，两组差异有显著性(P<0.01)；②有腋窝淋巴结转移组MVD为(138.4±52.1)个/mm2，无腋窝淋巴结转移组MVD为(97.8±33.5)个/mm2，两组差异有显著性(P<0.05)；③转移组VEGF表达阳性率为87.7%(28/32)，无转移组为55%(11/20)，两组差异有显著性(P<0.01)；④VEGF阳性组MVD为132.5个/mm2，而VEGF阴性组MVD为91.2个/mm2，MVD和VEGF的表达具有相关性(P<0.01)。结论 肿瘤细胞表达VEGF可能是微血管密度增加的主要因素，乳腺癌血管生成与腋窝淋巴结的转移关系密切。
, http://www.100md.com
中图分类号 R737.9 文献标识码 A
文章编号 1000-1492(2000)05-0348-03
肿瘤的生长和转移不仅依赖于肿瘤实质细胞的增殖，而且与肿瘤间质内新生血管形成有关。近年来的研究表明，在肺癌、前列腺癌、肝癌等恶性肿瘤中，肿瘤微血管密度(MVD)与肿瘤的侵袭转移和预后有密切关系〔1～3〕。血管内皮生长因子(vessel endothelial growth factor,VEGF)是一种强烈的血管生成因子，许多肿瘤细胞VEGF的表达与肿瘤间质中MVD密切相关，而且有预后价值〔2～4〕。MVD及VEGF与乳腺癌的临床病理关系报道较少。本研究用抗FⅧ因子相关抗原抗体测定52例乳腺癌组织中的MVD，并分析其与VEGF及乳腺癌各种病理因素及预后之间的关系。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 材料 收集两院乳腺癌根治或改良根治术标本70例，年龄24～80岁，平均47岁。术前均未接受任何治疗，对其中有腋窝淋巴结记载的导管浸润癌52例进行研究。避开出血及坏死区，在癌灶中央、癌与正常组织交界处各取一块1 cm×1 cm×0.3 cm大小的组织块，用10%福尔马林固定，常规脱水、透明、浸蜡，包埋，4 μm连续切片，一张作HE染色，余切片作免疫组化染色。
1.2 染色方法 免疫组化染色方法采用S-P法
(0.1%胰蛋白酶消化30 min,37℃)；兔抗人FⅧ及VEGF购自福州迈新试剂公司。
1.3 结果判断
1.3.1 计数方法 每张切片选择2个血管最多的肿瘤区域，在200倍视野下用5 mm×5 mm网格测微尺进行计数。每例标本共计数4个视野，并计算出每平方毫米面积内微血管的量。
, 百拇医药
1.3.2 微血管判断标准 不以红细胞的出现来确定是否是血管，亦不以是否出现管腔来计数血管，凡是染成棕色单个内皮细胞或内皮细胞族作为一个血管计数。凡管腔大于8个红细胞大小、带有较厚肌层的血管及硬化区域的血管均不计数。
1.4 统计学处理 各组数据采用
±s表示，分别应用t检验和χ2检验。2 结果
2.1 微血管在肿瘤组织内的分布 FⅧ免疫组化染色结果表明，癌组织内微血管形态不规则，部分血管无明显管腔，血管的分布靠近癌组织处多见。在3例伴有导管原位癌成分的导管浸润癌中，可见导管原位癌灶周围出现微血管环包绕。血管密度最高区可见于肿瘤组织的任何部位，但以癌组织与正常组织交界处最多见。本组每例标本在癌肿中央及与正常组织交界处分别取材，癌肿中央平均血管密度为101.4个/mm2，而癌肿与正常组织交界区146.3/mm2个，两者差异具有显著性(P<0.01，表1)。
, 百拇医药
表1 52例乳腺癌中央与边缘区血管密度比较
组别
n
血管密度(个/mm2)
范围
±s癌肿中央区
52
32.3～209.3
101.4±30.8
癌肿边缘区
, 百拇医药 52
48.9～225.5
146.3±54.2**
t检验，与中央区组比较：**P<0.01
2.2 微血管密度与肿瘤大小的关系 在乳腺癌切除标本上测量肿瘤最大径线，以肿块最长径频数分布均数的接近值3.5 cm为界，将52例乳腺癌分为两组，即≤3.5 cm组及>3.5 cm组。血管密度在≤3.5 cm组为110.4个/mm2，在>3.5 cm组为118.9个/mm2。经统计学处理两组差异无显著意义(P>0.05，表2)。
2.3 微血管密度与组织学分级的关系 按WHO乳腺癌分级标准，对52例乳腺癌进行分级，经统计学处理，癌组织内血管密度在各组织学级别间差异无显著性(P>0.05，表3)。
, 百拇医药
表2 乳腺癌组织内血管密度与肿瘤大小的关系
组别
n
血管密度(个/mm2)
范围
±s≤3.5 cm
25
38.8～187.9
110.4±33.8
>3.5 cm
27
, 百拇医药
40.1～192.3
118.9±44.2
表3 乳腺癌组织内血管密度与组织学分级的关系
级别
n
血管密度(个/mm2)
范围
±sⅠ
8
52.3～176.8
109.4±31.1
, 百拇医药
Ⅱ
25
43.8～204.9
101.3±39.1
Ⅲ
19
43.7～201.8
111.6±45.6
2.4 微血管密度与腋窝淋巴结转移的关系 根据所检腋窝淋巴结有无癌转移，将52例乳腺癌分为有转移组与无转移组。血管密度在有转移组为138.4个/mm2，无转移组为97.8/mm2个，差异有显著性(P<0.01，表4)。
, http://www.100md.com 表4 乳腺癌组织内血管密度与腋窝淋巴结转移的关系
组别
n
血管密度(个/mm2)
范围
±s有转移
32
47.1～213.7
138.4±52.1
无转移
20
, http://www.100md.com
46.5～202.5
97.8±33.5
t检验，与无转移组比较：*P<0.01
2.5 VEGF的表达 VEGF的表达主要见于癌细胞胞浆内，在肿瘤血管内皮细胞上也有弱阳性表达。有淋巴结转移组VEGF表达阳性率为87.7%(28/32)，显著高于无转移组55%(11/20)，两者差异有显著性(P<0.01)。
2.6 VEGF表达与MIVD值的关系 VEGF阳性组MVD为(132.5±43.1)个/mm2，而VEGF阴性组MVD为(91.2±31.2)个/mm2，两组间MVD差异有显著性(P<0.01)。
3 讨论
, 百拇医药 1865年Thiersch就报道恶性肿瘤内血管网明显异常，1981年Frderick对人子宫颈不同病理状态下的微血管形态进行观察，发现不典型增生的子宫颈无明显异常的微血管，而子宫颈原位癌28%有异常微血管，严重浸润子宫颈癌100%有异常微血管。业已证明，FⅧ相关抗原是血管内皮细胞特异的标记物。本实验用FⅧ相关抗原免疫组化染色的结果表明，肿瘤组织内血管形态不规则，部分闭塞状态，分布不均，呈现明显的异质性。
本研究结果表明，癌肿中央区平均血管密度为101.4个/mm2，而癌组织与正常组织交界区平均血管密度为每146.3个/mm2，两者差异有显著性。组织切片的观察可见血管分布以近瘤组织处多见，尤其是3例含导管原位癌成分的浸润癌组织中，微血管围绕着癌变导管呈环状分布(这可能与肿瘤细胞分泌VEGF有关)，上述结果提示肿瘤组织内血管的生成与其生长关系密切。
肿瘤组织内微血管与肿瘤的转移关系密切，Weidner等〔1〕对乳腺癌组织内微血管的研究表明，有腋窝淋巴结转移的乳腺癌组织内微血管密度明显高于无腑窝淋巴结转移者，并认为微血管的密度可以作为判断癌肿是否可能发生转移的一个独立性因素。本研究结果表明，乳腺癌组织内微血管密度在有腑窝淋巴结转移者为138.4个/mm2，无腋窝淋巴结转移者为97.8个/mm2，两者差异有显著性，与Weidner的结果一致。微血管增加癌肿淋巴结转移的机制不十分清楚。
, 百拇医药
肿瘤的血管生成由肿瘤细胞产生及分泌的血管生成因子所调节，其生成过程涉及一系列形态学及生化学改变。其生化学机制涉及到血管生成因子与血管生成抑制因子之间的调节失衡，目前已分离和纯化了20多种血管生成因子和相关因子，在所有的血管生成因子中，VEGF被认为是重要因子之一。VEGF是一种选择性促内皮细胞有丝分裂原(mitogen)，能直接刺激血管生长〔3，5，6〕。本实验发现乳腺癌细胞能分泌VEGF，提示VEGF是血管生成的主要因子。癌组织中VEGF阳性组与阴性组间MVD值差异有显著性(P<0.05)，VEGF阳性组MVD值明显高于VEGF阴性组，显示乳腺癌组织中VEGF状态与MVD值的密切关系。
Clinicopathology on microvessel in dutal invasive breast carcinoma
Wang Xianya Meng Gang，Pan Meihua
, 百拇医药
(Bozhou City Huatuo Chinese Traditional Medicine Hospital,Bozhou Anhui 236800)
Abstract Objective To explore the relationship between the microvessel density and the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF) and clinicopathological features. Methods The microvessel quantitation and expression of VEGF were analyzed by immunohistochemistry using antibody to fator Ⅷ-related antigen and VEGF. Results Node-positive carcinoma demonstrated significantly higher microvessel counts than node-negative carcinomas(138.4±52.1 and 97.8±33.6,respectively;P<0.01) and that connective tissue adjacent to tumor showed significantly higher microvessel counts than connective tissue of tumor center(101.4±30.8 and 145.3±54.2，respectively;P<0.01). The positivity rate of VEGF with node-positive carcinoma was 87.7%, one with node-negative carcinoma 55%. There was significant difference between two groups. MVDs of VEGF positive group and negative group were 132.5 and 91.2, respectively(P<0.01). Conclusion The angiogenesis in invasive breast carcinoma is correlated with the occurrence of metastasis. Expression of vascular endothelial growth factor is related with vascularity.
, http://www.100md.com
MeSH breast neoplasms/pathology;carcinoma,infiltrating duct； endothelial growth factors;lymphatic metastasis
作者简介：王显亚，男，37岁，主治医师；孟刚，男，37岁，副教授
参考文献
1，Weidner N.Intratumor microvessel density as a prognostic factor in cancer. Am J Pathol,1995(1);147:9～15
2，Paola B,Giuseppe V,Arthur K et al. Angiogensis in colorectal tumors:microvessel quantitation in adenomas and carcinomas with clinicopathological correlations. Cancer Res,1995;55(22):5 049～5 053
, 百拇医药
3，Maedn K,Chung YS, Ogawa Y et al. Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in gastric carcinoma. Cancer,1996;77(7):858～863
4，Toi H,Hoshinga S. Association of vascular endothelial growth factor expression with tumor angiogenesis and with early relapse in primary breast cancer. Jpn J Cancer Res,1994;85(6):1 045～1 049
5，Takahashi Y,Kitadai Y,Bucana CD et al. Expression of vascular endothelial growth factor and receptor,KDR,correlate with vascularity,metastasis,and proliferation of human colon cancer. Cancer Res,1995;55(14):3 964～3 968
6，Fontanini G,Vignati S,Boldrini L et al. Vascular endothelial growth factor is associated with neovascularization and influences progression of non-small cell lung carcinoma. Clin Cancer Res,1997;3(4):861～865
2000-06-02收稿
2000-09-06修回, 百拇医药