新生儿缺氧缺血性脑病血浆及脑脊液一氧化氮水平的变化
作者：张姿英 钱燕 林振浪 温怀凯
单位：(温州医学院附属育英儿童医院，浙江 温州 325027)
关键词：新生儿；一氧化氮；脑缺氧；脑缺血
温州医学院学报000312 [摘要]目的:了解新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)时血浆和脑脊液(CSF)中NO水平的动态变化。方法:采用硝酸根还原酶法，对35例HIE患儿(轻度10例、中度13例、重度12例)分别于急性期、恢复期进行了血浆和CSF NO水平测定。结果:HIE急性期血浆NO水平除轻度组外，中、重度组明显高于对照组，重度组又明显高于轻、中度组；恢复期轻、中、重度组血浆NO水平均降至正常，与对照组比较差异无显著性。CSF中NO水平增加的幅度与血浆成正比。结论:血浆和CSF中NO水平与HIE的脑损伤程度密切相关。
[中图分类号]R722.15+1 [文献标识码]A
, 百拇医药
[文章编号]1000-2138(2000)03-0208-02
Changes of nitric oxide level in plasma and cerebrospinal fluid of newborn infant with hypoxic ischemia encephalopathy
ZHANG Zi-ying Qian Yan LIN Zhen-lang et al
(The Affiliated Yuying Children's Hospital of Wenzhou Medical College,Wenzhou 325027)
Abstract：Objective：To study the dynamic changes of nitric oxide (NO)level in plasma and cerebrospinal fluid (CSF) of newborn infant with hypoxic ischemic encephalopathy(HIE).Methods：In 35 newborn infants with HIE 10、13、12 cases of mild,intermediate and severe degree respectiuely. NO level in plasma and CSF were measured,respectively in their acute phase and recovery phase,with nitrate reductase.Results：In acute phase,the NO level in plasma of the intermediate degree group and the severe degree group were obvioulsly higher than the control,except the mild degree group. NO level in plasma of the severe degree group was much higher than the other two groups. In recovery phase.the NO level in plasmsa of three groups dropped to the normal and there were no significant differences compared with the control. NO level in CSF was correlated positively with plasma.Conclusion：NO level in both plasma and CSF are closely related and reflect the degrees of the brain damage of HIE infants.
, 百拇医药
Key words：newborn infant; nitric oxide; cerebral anoxia; cerebral ischemia
近年来一氧化氮(NO)在中枢神经系统(CNS)中的作用日益受到重视。国外的研究表明[1]，NO参与了CNS中神经元缺血、缺氧性损害过程。但迄今有关新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)时NO变化的研究国内外报道不多。我院对HIE患儿血浆和脑脊液(CSF)中NO水平进行了动态观察，以探讨NO在新生儿HIE时的变化及意义。
1 对象和方法
1.1 对象
1.1.1 HIE组：1997年2月～1998年4月在本院新生儿科住院的HIE患儿35例，均符合新生儿HIE诊断标准[2]。
, 百拇医药
1.1.2 对照组：因鉴别诊断而需腰穿的新生儿15例，无窒息缺氧史。两组病例胎龄均为37～42周，出生体重2000～4000g。
1.2 方法
1.2.1 标本采集：于急性期(日龄3天内)恢复期(日龄第10天)股静脉采血2ml,低温离心，分离血浆，置-20℃保存待测；同期腰穿留取CSF标本。
1.2.2 NO测定：采用硝酸根还原酶法，通过检查NO2/NO3值代表NO水平。
1.3 统计学处理 组间比较用F检验与Q检验，同组急性期与恢复期比较用配对t检验。
2 结果
2.1 各组HIE血浆NO水平的动态变化 由附表可见，急性期各组HIE患儿血浆NO水平除轻度组外，中、重度组均明显高于对照组(P<0.01)，重度组又明显高于轻、中度组(P<0.01)。恢复期轻、中、重度组血浆NO水平均下降，接近正常水平，与对照组比较差异无显著意义(P>0.05)。
, 百拇医药
2.2 各组HIE脑脊液NO水平的动态变化 从附表还可见，HIE急性期CSF中NO水平与HIE轻重程度呈正相关，即HIE程度愈重，NO水平愈高。在恢复期，轻、中、重度组CSF中NO水平随着病情的恢复降至正常水平，与对照组比较差异不显著。
附表 对照组及HIE各组急性期和恢复期血浆、CSF中NO水平 (
±s) 组别
例数
血浆NO(μmol/L)
CSF NO(μmol/L)
急性期
恢复期
急性期
, http://www.100md.com
恢复期
对照组
15
62.10±6.78
55.90±4.95
18.20±2.29
15.00±2.08
HIE轻度组
10
64.20±8.69△△▲▲
56.10±5.35
20.02±2.12△△▲▲
, http://www.100md.com
15.90±1.73
中度组
13
83.90±8.18**
57.10±7.54
32.21±2.22**
16.40±1.27
重度组
12
115.70±12.35**△△
57.55±5.54
, 百拇医药
68.30±5.61**△△
16.70±1.22
F值
92.03
0.67
462.30
2.81
P值
<0.01
>0.05
<0.01
>0.05
, 百拇医药
与对照组比：**P<0.01；与中度组比：△△P<0.01；与重度组比：▲▲P<0.013 讨论
1988年Garthwaite[3]首次提出NO可能作为一种信息传递物质在CNS中具有重要作用，并证实脑组织中存在一氧化氮合酶(NOS)，NO的生物合成主要受NOS调节。1991年Bredt[4]已将脑组织中的NOS克隆出来。近十年NO在CNS中的生理和病理作用正逐步被揭示。NO是CNS中的一种重要神经介质，具有调节脑血管张力，参与细胞信息传递等作用，同时也具有神经毒性作用。NO的这种双重效应究竟何者为主，主要取决于NOS的类型，产生NO的时程以及NO含量的多少。NO是由L-精氨酸在NOS的作用下生成的。NOS分结构型(cNOS)和诱生型(iNOS)两种。cNOS主要存在于脑神经元和血管内皮细胞中，依赖于钙-钙调蛋白，在生理状态下有活性，能引起NO短暂微量释放，发挥神经递质作用；iNOS主要存在于白细胞、巨噬细胞、kupffer细胞和部分胶质细胞，不依赖钙-钙调蛋白，病理性刺激下可导致NO长时间大量释放，产生神经毒性作用。因此，HIE时由于脑缺氧缺血，诱发iNOS表达增强，使NO产生的量和作用时间发生了根本的变化，成为脑损伤的病理基础。国外大量动物实验表明，缺氧缺血性脑损伤与NO过量生成有关，尤其是缺血再灌注后NO的再次上升加重了脑细胞损害。国内应用缺氧缺血新生鼠模型实验亦证实，脑缺氧缺血后血浆NO水平快速上升并与脑水肿、脑损伤的发生密切相关[5]。NO在脑缺氧缺血性损伤中的地位已被肯定，但与新生儿HIE关系如何仍需进一步探讨。本研究显示，HIE中、重度患儿急性期血浆NO明显高于对照组(P<0.01)，重度组升高尤为显著，提示血浆NO水平与新生儿HIE的病情严重程度关系密切，HIE程度愈重，NO水平愈高，CSF中NO也与血浆NO水平同步升高，二者之间呈显著正相关，CSF中NO水平增高幅度重度组是轻度组的3倍多。发病第10天即恢复期，血浆和CSF中NO水平均下降，与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。这些均提示NO参与HIE的病理过程，NO水平的变化可直接反映HIE脑损害程度。
, 百拇医药
通常NO也以极低的生理浓度存在于CNS内，本研究结果显示，在HIE时CNS中NO水平显著增高，其过量生成的NO部分可能直接来源于CNS内源性生成，部分可能来自血源性。因NO造成的神经细胞损伤和内皮细胞受损可致血脑屏障通透性增加，且NO是一种活性自由基，具有良好的弥散性，周围血中的NO水平变化可迅速从CSF中得到反遇，反之亦然。血浆和CSF中NO水平的变化具有高度的一致性，检测结果均可用于估计HIE脑损伤的严重程度。但鉴于腰穿对新生儿具有一定的损伤性，因此建议临床医师对HIE患儿不必进行CSF中NO的检测。
本研究与动物实验结论一致[5]，提示新生儿HIE时无论血浆还是CSF中NO均可达到相当高的水平，NO的过量生成是产生缺氧缺血性脑损害的关键因素。因而推测应用iNOS抑制剂阻止病理状态下NO的过量合成，应用NO清除剂减轻NO的神经毒性作用，可望为新生儿HIE的诊治提供新的思路和手段。
基金项目：浙江省教委科研基金资助项目(961152)
, http://www.100md.com
作者简介：张姿英(1955-)，女，浙江金华人，主任医师。
参考文献
[1] Iadecola C. Nitric Oxide synthase inhition and cerebrovascular regulation[J]. J cereb Blood Flow Metab,1994，14:175-192.
[2] 韩玉昆.新生儿缺氧缺血性脑病诊断依据和临床分度[J].中华儿科杂志，1997,35:99-100.
[3] Garthwaite J, Charles SL，Chess-williams R. Endothelium-derived relaxing factor release on activation of NMDA receptors suggests role as intracellular messenger in the brain[J]. Nature,1988,336:385-388.
, http://www.100md.com
[4] Bredt DS. Glatt CE,Hwang PM,et al. Nitric oxide synthase protein and mRNA are discretely localized in neuronal populations of the mammalian CNS together with NADPH diaphorase[J]. Neuron,1991,7:615-624.
[5] 陈舜年，贲晓明，夏振炜.内皮素和一氧化氮在缺氧缺血新生鼠脑损伤中的作用及高压氧治疗机制[J].中华儿科杂志，1997,35:587-589.
收稿日期：2000-07-01, 百拇医药
单位：(温州医学院附属育英儿童医院，浙江 温州 325027)
关键词：新生儿；一氧化氮；脑缺氧；脑缺血
温州医学院学报000312 [摘要]目的:了解新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)时血浆和脑脊液(CSF)中NO水平的动态变化。方法:采用硝酸根还原酶法，对35例HIE患儿(轻度10例、中度13例、重度12例)分别于急性期、恢复期进行了血浆和CSF NO水平测定。结果:HIE急性期血浆NO水平除轻度组外，中、重度组明显高于对照组，重度组又明显高于轻、中度组；恢复期轻、中、重度组血浆NO水平均降至正常，与对照组比较差异无显著性。CSF中NO水平增加的幅度与血浆成正比。结论:血浆和CSF中NO水平与HIE的脑损伤程度密切相关。
[中图分类号]R722.15+1 [文献标识码]A
, 百拇医药
[文章编号]1000-2138(2000)03-0208-02
Changes of nitric oxide level in plasma and cerebrospinal fluid of newborn infant with hypoxic ischemia encephalopathy
ZHANG Zi-ying Qian Yan LIN Zhen-lang et al
(The Affiliated Yuying Children's Hospital of Wenzhou Medical College,Wenzhou 325027)
Abstract：Objective：To study the dynamic changes of nitric oxide (NO)level in plasma and cerebrospinal fluid (CSF) of newborn infant with hypoxic ischemic encephalopathy(HIE).Methods：In 35 newborn infants with HIE 10、13、12 cases of mild,intermediate and severe degree respectiuely. NO level in plasma and CSF were measured,respectively in their acute phase and recovery phase,with nitrate reductase.Results：In acute phase,the NO level in plasma of the intermediate degree group and the severe degree group were obvioulsly higher than the control,except the mild degree group. NO level in plasma of the severe degree group was much higher than the other two groups. In recovery phase.the NO level in plasmsa of three groups dropped to the normal and there were no significant differences compared with the control. NO level in CSF was correlated positively with plasma.Conclusion：NO level in both plasma and CSF are closely related and reflect the degrees of the brain damage of HIE infants.
, 百拇医药
Key words：newborn infant; nitric oxide; cerebral anoxia; cerebral ischemia
近年来一氧化氮(NO)在中枢神经系统(CNS)中的作用日益受到重视。国外的研究表明[1]，NO参与了CNS中神经元缺血、缺氧性损害过程。但迄今有关新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)时NO变化的研究国内外报道不多。我院对HIE患儿血浆和脑脊液(CSF)中NO水平进行了动态观察，以探讨NO在新生儿HIE时的变化及意义。
1 对象和方法
1.1 对象
1.1.1 HIE组：1997年2月～1998年4月在本院新生儿科住院的HIE患儿35例，均符合新生儿HIE诊断标准[2]。
, 百拇医药
1.1.2 对照组：因鉴别诊断而需腰穿的新生儿15例，无窒息缺氧史。两组病例胎龄均为37～42周，出生体重2000～4000g。
1.2 方法
1.2.1 标本采集：于急性期(日龄3天内)恢复期(日龄第10天)股静脉采血2ml,低温离心，分离血浆，置-20℃保存待测；同期腰穿留取CSF标本。
1.2.2 NO测定：采用硝酸根还原酶法，通过检查NO2/NO3值代表NO水平。
1.3 统计学处理 组间比较用F检验与Q检验，同组急性期与恢复期比较用配对t检验。
2 结果
2.1 各组HIE血浆NO水平的动态变化 由附表可见，急性期各组HIE患儿血浆NO水平除轻度组外，中、重度组均明显高于对照组(P<0.01)，重度组又明显高于轻、中度组(P<0.01)。恢复期轻、中、重度组血浆NO水平均下降，接近正常水平，与对照组比较差异无显著意义(P>0.05)。
, 百拇医药
2.2 各组HIE脑脊液NO水平的动态变化 从附表还可见，HIE急性期CSF中NO水平与HIE轻重程度呈正相关，即HIE程度愈重，NO水平愈高。在恢复期，轻、中、重度组CSF中NO水平随着病情的恢复降至正常水平，与对照组比较差异不显著。
附表 对照组及HIE各组急性期和恢复期血浆、CSF中NO水平 (
±s) 组别例数
血浆NO(μmol/L)
CSF NO(μmol/L)
急性期
恢复期
急性期
, http://www.100md.com
恢复期
对照组
15
62.10±6.78
55.90±4.95
18.20±2.29
15.00±2.08
HIE轻度组
10
64.20±8.69△△▲▲
56.10±5.35
20.02±2.12△△▲▲
, http://www.100md.com
15.90±1.73
中度组
13
83.90±8.18**
57.10±7.54
32.21±2.22**
16.40±1.27
重度组
12
115.70±12.35**△△
57.55±5.54
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68.30±5.61**△△
16.70±1.22
F值
92.03
0.67
462.30
2.81
P值
<0.01
>0.05
<0.01
>0.05
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与对照组比：**P<0.01；与中度组比：△△P<0.01；与重度组比：▲▲P<0.013 讨论
1988年Garthwaite[3]首次提出NO可能作为一种信息传递物质在CNS中具有重要作用，并证实脑组织中存在一氧化氮合酶(NOS)，NO的生物合成主要受NOS调节。1991年Bredt[4]已将脑组织中的NOS克隆出来。近十年NO在CNS中的生理和病理作用正逐步被揭示。NO是CNS中的一种重要神经介质，具有调节脑血管张力，参与细胞信息传递等作用，同时也具有神经毒性作用。NO的这种双重效应究竟何者为主，主要取决于NOS的类型，产生NO的时程以及NO含量的多少。NO是由L-精氨酸在NOS的作用下生成的。NOS分结构型(cNOS)和诱生型(iNOS)两种。cNOS主要存在于脑神经元和血管内皮细胞中，依赖于钙-钙调蛋白，在生理状态下有活性，能引起NO短暂微量释放，发挥神经递质作用；iNOS主要存在于白细胞、巨噬细胞、kupffer细胞和部分胶质细胞，不依赖钙-钙调蛋白，病理性刺激下可导致NO长时间大量释放，产生神经毒性作用。因此，HIE时由于脑缺氧缺血，诱发iNOS表达增强，使NO产生的量和作用时间发生了根本的变化，成为脑损伤的病理基础。国外大量动物实验表明，缺氧缺血性脑损伤与NO过量生成有关，尤其是缺血再灌注后NO的再次上升加重了脑细胞损害。国内应用缺氧缺血新生鼠模型实验亦证实，脑缺氧缺血后血浆NO水平快速上升并与脑水肿、脑损伤的发生密切相关[5]。NO在脑缺氧缺血性损伤中的地位已被肯定，但与新生儿HIE关系如何仍需进一步探讨。本研究显示，HIE中、重度患儿急性期血浆NO明显高于对照组(P<0.01)，重度组升高尤为显著，提示血浆NO水平与新生儿HIE的病情严重程度关系密切，HIE程度愈重，NO水平愈高，CSF中NO也与血浆NO水平同步升高，二者之间呈显著正相关，CSF中NO水平增高幅度重度组是轻度组的3倍多。发病第10天即恢复期，血浆和CSF中NO水平均下降，与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。这些均提示NO参与HIE的病理过程，NO水平的变化可直接反映HIE脑损害程度。
, 百拇医药
通常NO也以极低的生理浓度存在于CNS内，本研究结果显示，在HIE时CNS中NO水平显著增高，其过量生成的NO部分可能直接来源于CNS内源性生成，部分可能来自血源性。因NO造成的神经细胞损伤和内皮细胞受损可致血脑屏障通透性增加，且NO是一种活性自由基，具有良好的弥散性，周围血中的NO水平变化可迅速从CSF中得到反遇，反之亦然。血浆和CSF中NO水平的变化具有高度的一致性，检测结果均可用于估计HIE脑损伤的严重程度。但鉴于腰穿对新生儿具有一定的损伤性，因此建议临床医师对HIE患儿不必进行CSF中NO的检测。
本研究与动物实验结论一致[5]，提示新生儿HIE时无论血浆还是CSF中NO均可达到相当高的水平，NO的过量生成是产生缺氧缺血性脑损害的关键因素。因而推测应用iNOS抑制剂阻止病理状态下NO的过量合成，应用NO清除剂减轻NO的神经毒性作用，可望为新生儿HIE的诊治提供新的思路和手段。
基金项目：浙江省教委科研基金资助项目(961152)
, http://www.100md.com
作者简介：张姿英(1955-)，女，浙江金华人，主任医师。
参考文献
[1] Iadecola C. Nitric Oxide synthase inhition and cerebrovascular regulation[J]. J cereb Blood Flow Metab,1994，14:175-192.
[2] 韩玉昆.新生儿缺氧缺血性脑病诊断依据和临床分度[J].中华儿科杂志，1997,35:99-100.
[3] Garthwaite J, Charles SL，Chess-williams R. Endothelium-derived relaxing factor release on activation of NMDA receptors suggests role as intracellular messenger in the brain[J]. Nature,1988,336:385-388.
, http://www.100md.com
[4] Bredt DS. Glatt CE,Hwang PM,et al. Nitric oxide synthase protein and mRNA are discretely localized in neuronal populations of the mammalian CNS together with NADPH diaphorase[J]. Neuron,1991,7:615-624.
[5] 陈舜年，贲晓明，夏振炜.内皮素和一氧化氮在缺氧缺血新生鼠脑损伤中的作用及高压氧治疗机制[J].中华儿科杂志，1997,35:587-589.
收稿日期：2000-07-01, 百拇医药