正交试验法优选石榴的提取工艺
作者：安明 赵国君 冯伟华 武晓丽 朝洛蒙
单位：冯伟华(呼和浩特 010059 内蒙古医学院第 一附属医院药局)；安明 赵国君 武晓丽 朝洛蒙(包头 014030 包头市药品检验所)
关键词：正交试验法；石榴；熊果酸；提取工艺
中国现代应用药学000311 摘要 目的：研究石榴中有效成分熊果酸的 最佳提取条件。方法：采用正交试验法，以溶剂用量、提取时间和提取 次数3个因素，每个因素选取了3个水平进行实验。结果：因素B对熊果酸 的含量有显著影响。因素A和因素C则有一定的影响。结论：最佳工艺A 3B2C1，即用10倍量95% EtoH提取1次，每次2h。
The process optimization to extract ursolic acid
, 百拇医药
from pomegranate by the method of orthoonal test
An Ming
(Baotou Institute for Drug COntrol Baotou 014030)
Zhao Guojun
(Baotou Institute for Drug COntrol Baotou 014030)
Feng Weihua
(Baotou Institute for Drug COntrol Baotou 014030)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the best conditions of to extract ursolic acid from pomegranate.METHOD:A or thogonal test method was used,the solvent ovlume,extraction time and extraction times were the three factors in the experiment.We tested each factor at three le vels.RESULTS:The factor B had conspicuous effect on the extraction,a nd the factor A and C had less effects.CONCLUSION:The best extractio n process is A3B2C1,i.e. extracting once by using ten times of EtOH(95%),two hours once.
, 百拇医药
KEY WORDS method of orthogonal test,pomegranate,ursolic acid,the ex tracting process
石榴蒙古名为阿纳日，系常用蒙药材，为石榴科植物 石榴Punica Granatum L的干燥成熟果实。具有调理胃火、消食、开胃、止泄之功效[1 ]，其主要成分为熊果酸。关于石榴中熊果酸的提取方法尚未有报道。为此，根据熊果酸 的理化性质，设计了考察因素及水平，通过正交试验对石榴的提取工艺进行了筛选，在实验 设计范围内筛选出了最佳工艺，为蒙药剂型改革中石榴的提取工艺提供了科学依据。
1 实验材料与仪器
1.1 材料 石榴(呼和浩特市医药 公司，经包头市药品检验所鉴定来源为石榴科植物石榴Punica Granatum L的干燥成熟果实 ，产于江苏)。按《中国药典》1995版一部，山茱萸项下方法测定石榴中熊果酸含量的0.0 5%。熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所)。硅胶G(青岛海洋化工厂)；试剂均为分析 纯。
, http://www.100md.com
1.2 仪器 CS-930型薄层扫描仪(日本岛津)；PBQ-Ⅰ型薄层自 动铺板仪(重庆南岸新力实验电器厂)；AE240型电子分析天平(上海)。
2 实验方法与结果
2.1 对照品溶液和样品溶液的制 备 精取熊果酸1.5mg,加甲醇溶解，转移至2ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，备用 。分别精密称取石榴粗粉9份，过60目筛，每份1.5g按表2安排实验，重复进行3次，将表中 试验号的样品按表2安排的实验条件提取后，加95%乙醇，分别定容于200ml量瓶中，取出50m l,浓缩至近干，用50ml乙醚回流30min,收集滤液，挥干溶剂，残渣用甲醇溶解并定容于5ml 量瓶中，定容至刻度，备用。
表1 石榴提取工艺的因素水平 水 平
因 素
提取时间/A
, http://www.100md.com
95%乙醇用量/B
次数/C
1
1.0
8
1
2
1.5
10
2
3
2.0
12
, http://www.100md.com 3
2.2 薄层层析条件及薄层扫描条件 吸附剂：硅胶G-0.3%,CMC-Na制板 ，于105℃活化30min,置干燥器中备用。展开剂：甲醇-醋酸乙酯-冰醋酸(12∶4∶0.5) [2]。为展开剂，上行展开。显色剂：喷以醋酐-硫酸-乙醇(1∶1∶10),至斑点 清晰,Rf值0.3。
采用反射法双波长锯齿扫描法：狭缝1.2×1.2mm,线 性参数Sx=3,灵敏度中，测定波长:s=530nm,参比波长:R=600nm。
2.3 标准曲线的制备 用定量毛细管吸取上述对照品溶液1.0,2.0,3 .0,4.0和5.0μl于同一块硅胶G薄层板上，按上述条件展开，显色，扫描，求得回归方程:Y=17799.534x-5338.282,r=0.9975。结果表明熊果酸在0.75～3.75μg范围内， 与其峰面积值呈良好的线性关系。
, 百拇医药
2.4 样品测定 分别吸取一定量上 述不同条件下提取所制得的样品溶液8μl点于同一硅胶G薄层板上，随行点对照品溶液 2和4μl,进行展开、显色、扫描，用外标两点法计算出各样品中熊果酸的含量。
2.5 正交设计 根据熊果酸的理化性质及有关文献报道，确定提取时间( h)、提取液用量(倍)及提取次数作为考察的3个因素，每个因素各取3个水平(见表1)。以熊 果酸的含量作为考察指标，选用L9(34)正交表进行实验。
2.6 结果 实验数据及方差分析结果见表2，3。
3 讨 论
石榴主要成分为熊果酸，以其含量为指标可 确定提取工艺的优劣。采用正交设计对其提取工艺筛选了最佳条件，即样品药材中 加入10倍量的95%乙醇提取1次，每次需2h，测得熊果酸含量可达0.187%，为蒙药剂型改革中 石榴的提取工艺提供了科学依据。由于实验条件所限，石榴药材中所含其他成分未作实验， 有待于进一步研究。
, 百拇医药
表2 正交试验设计及试验数据 试验号
因 素
熊果酸含量/%
A
1
B
2
C
3
4
1
1
1
, http://www.100md.com
1
1
0.0570
2
1
2
2
2
0.145
3
1
3
3
3
, 百拇医药
0.104
4
2
1
2
3
0.0784
5
2
2
1
1
0.152
6
, 百拇医药
2
3
3
2
0.0594
7
3
1
3
2
0.108
8
3
2
, 百拇医药
1
3
0.187
9
3
3
2
1
0.0778
Ⅰ
0.306
0.243
0.396
, http://www.100md.com 0.287
Ⅱ
0.290
0.484
0.301
0.375
G= =0.969
Ⅲ
0.372
0.241
0.271
0.369
CT= G2=0.104
, http://www.100md.com
R
0.31612
0.351386
0.320858
0.359155
SS
1.37×10-3
1.31×10-2
2.95×10-3
1.57×10 -2
表3 方差分析 方差来源
, http://www.100md.com
离差平方和
自由度
方差
F值
显著性
P值
A
1.37×10-3
2
2.74×10-3
0.087
*
<0 .1
, http://www.100md.com
B
1.31×10-2
2
2.62×10-2
0.834
***
<0.1
C
2.95×10-3
2
5.90×10-3
0.188
, http://www.100md.com
**
<0.1
误差SSe
1.57×10-2
2
3.14×10-2
参考文献
1，白清云主编.中国医学百科全书蒙医学.上海：上 海科学技术出版社，1992∶191.
2，吕武清，龙新华主编.中成药中的药材薄层色谱鉴别.北 京：人民卫生出版社，1997∶75.
收稿日期：1999-10-15, http://www.100md.com
单位：冯伟华(呼和浩特 010059 内蒙古医学院第 一附属医院药局)；安明 赵国君 武晓丽 朝洛蒙(包头 014030 包头市药品检验所)
关键词：正交试验法；石榴；熊果酸；提取工艺
中国现代应用药学000311 摘要 目的：研究石榴中有效成分熊果酸的 最佳提取条件。方法：采用正交试验法，以溶剂用量、提取时间和提取 次数3个因素，每个因素选取了3个水平进行实验。结果：因素B对熊果酸 的含量有显著影响。因素A和因素C则有一定的影响。结论：最佳工艺A 3B2C1，即用10倍量95% EtoH提取1次，每次2h。
The process optimization to extract ursolic acid
, 百拇医药
from pomegranate by the method of orthoonal test
An Ming
(Baotou Institute for Drug COntrol Baotou 014030)
Zhao Guojun
(Baotou Institute for Drug COntrol Baotou 014030)
Feng Weihua
(Baotou Institute for Drug COntrol Baotou 014030)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the best conditions of to extract ursolic acid from pomegranate.METHOD:A or thogonal test method was used,the solvent ovlume,extraction time and extraction times were the three factors in the experiment.We tested each factor at three le vels.RESULTS:The factor B had conspicuous effect on the extraction,a nd the factor A and C had less effects.CONCLUSION:The best extractio n process is A3B2C1,i.e. extracting once by using ten times of EtOH(95%),two hours once.
, 百拇医药
KEY WORDS method of orthogonal test,pomegranate,ursolic acid,the ex tracting process
石榴蒙古名为阿纳日，系常用蒙药材，为石榴科植物 石榴Punica Granatum L的干燥成熟果实。具有调理胃火、消食、开胃、止泄之功效[1 ]，其主要成分为熊果酸。关于石榴中熊果酸的提取方法尚未有报道。为此，根据熊果酸 的理化性质，设计了考察因素及水平，通过正交试验对石榴的提取工艺进行了筛选，在实验 设计范围内筛选出了最佳工艺，为蒙药剂型改革中石榴的提取工艺提供了科学依据。
1 实验材料与仪器
1.1 材料 石榴(呼和浩特市医药 公司，经包头市药品检验所鉴定来源为石榴科植物石榴Punica Granatum L的干燥成熟果实 ，产于江苏)。按《中国药典》1995版一部，山茱萸项下方法测定石榴中熊果酸含量的0.0 5%。熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所)。硅胶G(青岛海洋化工厂)；试剂均为分析 纯。
, http://www.100md.com
1.2 仪器 CS-930型薄层扫描仪(日本岛津)；PBQ-Ⅰ型薄层自 动铺板仪(重庆南岸新力实验电器厂)；AE240型电子分析天平(上海)。
2 实验方法与结果
2.1 对照品溶液和样品溶液的制 备 精取熊果酸1.5mg,加甲醇溶解，转移至2ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，备用 。分别精密称取石榴粗粉9份，过60目筛，每份1.5g按表2安排实验，重复进行3次，将表中 试验号的样品按表2安排的实验条件提取后，加95%乙醇，分别定容于200ml量瓶中，取出50m l,浓缩至近干，用50ml乙醚回流30min,收集滤液，挥干溶剂，残渣用甲醇溶解并定容于5ml 量瓶中，定容至刻度，备用。
表1 石榴提取工艺的因素水平 水 平
因 素
提取时间/A
, http://www.100md.com
95%乙醇用量/B
次数/C
1
1.0
8
1
2
1.5
10
2
3
2.0
12
, http://www.100md.com 3
2.2 薄层层析条件及薄层扫描条件 吸附剂：硅胶G-0.3%,CMC-Na制板 ，于105℃活化30min,置干燥器中备用。展开剂：甲醇-醋酸乙酯-冰醋酸(12∶4∶0.5) [2]。为展开剂，上行展开。显色剂：喷以醋酐-硫酸-乙醇(1∶1∶10),至斑点 清晰,Rf值0.3。
采用反射法双波长锯齿扫描法：狭缝1.2×1.2mm,线 性参数Sx=3,灵敏度中，测定波长:s=530nm,参比波长:R=600nm。
2.3 标准曲线的制备 用定量毛细管吸取上述对照品溶液1.0,2.0,3 .0,4.0和5.0μl于同一块硅胶G薄层板上，按上述条件展开，显色，扫描，求得回归方程:Y=17799.534x-5338.282,r=0.9975。结果表明熊果酸在0.75～3.75μg范围内， 与其峰面积值呈良好的线性关系。
, 百拇医药
2.4 样品测定 分别吸取一定量上 述不同条件下提取所制得的样品溶液8μl点于同一硅胶G薄层板上，随行点对照品溶液 2和4μl,进行展开、显色、扫描，用外标两点法计算出各样品中熊果酸的含量。
2.5 正交设计 根据熊果酸的理化性质及有关文献报道，确定提取时间( h)、提取液用量(倍)及提取次数作为考察的3个因素，每个因素各取3个水平(见表1)。以熊 果酸的含量作为考察指标，选用L9(34)正交表进行实验。
2.6 结果 实验数据及方差分析结果见表2，3。
3 讨 论
石榴主要成分为熊果酸，以其含量为指标可 确定提取工艺的优劣。采用正交设计对其提取工艺筛选了最佳条件，即样品药材中 加入10倍量的95%乙醇提取1次，每次需2h，测得熊果酸含量可达0.187%，为蒙药剂型改革中 石榴的提取工艺提供了科学依据。由于实验条件所限，石榴药材中所含其他成分未作实验， 有待于进一步研究。
, 百拇医药
表2 正交试验设计及试验数据 试验号
因 素
熊果酸含量/%
A
1
B
2
C
3
4
1
1
1
, http://www.100md.com
1
1
0.0570
2
1
2
2
2
0.145
3
1
3
3
3
, 百拇医药
0.104
4
2
1
2
3
0.0784
5
2
2
1
1
0.152
6
, 百拇医药
2
3
3
2
0.0594
7
3
1
3
2
0.108
8
3
2
, 百拇医药
1
3
0.187
9
3
3
2
1
0.0778
Ⅰ
0.306
0.243
0.396
, http://www.100md.com 0.287
Ⅱ
0.290
0.484
0.301
0.375
G= =0.969
Ⅲ
0.372
0.241
0.271
0.369
CT= G2=0.104
, http://www.100md.com
R
0.31612
0.351386
0.320858
0.359155
SS
1.37×10-3
1.31×10-2
2.95×10-3
1.57×10 -2
表3 方差分析 方差来源
, http://www.100md.com
离差平方和
自由度
方差
F值
显著性
P值
A
1.37×10-3
2
2.74×10-3
0.087
*
<0 .1
, http://www.100md.com
B
1.31×10-2
2
2.62×10-2
0.834
***
<0.1
C
2.95×10-3
2
5.90×10-3
0.188
, http://www.100md.com
**
<0.1
误差SSe
1.57×10-2
2
3.14×10-2
参考文献
1，白清云主编.中国医学百科全书蒙医学.上海：上 海科学技术出版社，1992∶191.
2，吕武清，龙新华主编.中成药中的药材薄层色谱鉴别.北 京：人民卫生出版社，1997∶75.
收稿日期：1999-10-15, http://www.100md.com