血小板激活因子对精子的趋化作用及其机制
作者：吴翠娇 周晓彬 Stojanova T O'Neill C
单位：吴翠娇(青岛医学组织学和胚胎学教研室，青岛266021)；周晓彬(青岛医学院预防医学教研室)；StojanovaT O'NeillC(澳大利亚悉尼大学皇家北岸医院人类生殖研究所)
关键词：血小板活化因子；趋化性；受体；小鼠；人
青岛医学院学报990203 【摘要】 ①目的 体外观察血小板激活因子(PAF)对小鼠附睾精子和人成熟精子的趋化作用以及对受精的影响。②方法 在微趋化室下层孔内加入27μL新鲜制备的精子悬液，上层孔内加入不同质量浓度PAF，UR-12519(PAF受体阻断剂)，之间以多聚碳核孔滤网分隔，37℃孵育，用经特殊处理的玻片封闭，反转微趋化室，离心，相差显微镜下计数玻片上的精子数。用UR-12519预处理小鼠精子，通过体外受精技术观察受精率及早期胚胎发育。③结果 随PAF质量浓度的增加，聚集于上层孔内的精子逐渐增多，当PAF≥1.0mg/L时，聚集的精子数量明显增多，与对照组比较，差异有极显著性(z=3.82～4.81，P<0.01)；当UR-12519质量浓度增加(>1.0mg/L)时，PAF吸引精子的作用受抑。体外受精实验显示，经UR-12519预处理的精子，受精率明显低于正常，早期胚胎发育亦明显受抑。④结论 PAF对小鼠附睾精子及人成熟精子有趋化作用，这种作用能被其受体阻断剂所抑制。UR-12519对小鼠精-卵体外受精及其胚胎的早期发育均有抑制作用。
, 百拇医药
中国图书馆分类法分类号 R321-33
CHEMOTACTIC EFFECT OF EXOGENOUS PL ATELET-ACTIVATING
FACTOR ON SPERM AND ITS MECHANISM
Wu Cuijiao, Zhou Xi aobin, Stojanova T, et al
Department of Histology and Embryology, Qingd ao Medical College, Qingdao 266021
【ABSTRACT】 Objective To study the chemotactic effect of e xogenous platelet-activating factor (PAF) on human and mice sperm. Methods 27μL freshly prepared sperm suspension was added in the lower well of micro-chemotaxis-chamber, and different concentrations of PAF, UR-12519 (PAF-receptor antagonist) were put in the upper wells of the chamber, the lower and the upper wells were separated with polycarbonate neocleopore fil ter (D=8μm), incubated at 37℃ and sealed by a piece of pre-coated glass. The micro-chemotaxis-chamber was put upside down and centrifuged at 100g, the numb er of the sperm on the glass was counted under zeiss phase-cotrast microscope. In the in vitro fertilization(IVF) experiment, pre-treated mice sperm with UR- 12519 was used. Fertilized zygote and the development of early embryo to blastoc yst were investigated and compared with those of normal mice sperm. Results Along with the increment of PAF concentration, the accumu lation of sperm in the upper wells was increased, when the dose of PAF≥1.0mg/L, the number of accumulated sperm in the upper well was significantly higher tha n that of the control group (z=3.82-4.81,P<0.01). The attractive effect of P AF on sperm was gradually inhibited when the dose of UR-12519>1.0mg/L. The IVF showed that the formation of fertilized zygote and the development of early embr yo to blastocyst were significantly prevented with the UR-12519 pre-treated sp erm. Conclusion PAF can attract mature human sperm and mice epidydimis sperm which can be prevented by UR-12519, a PAF-receptor antagonist. UR-1251 9 also prevented the formation of fertilized zygote and the development of early embryo to blastocyst.
, 百拇医药
【KEY WORDS】 platelet activating factor; chemotaxis; receptor; ra t; hominidae
哺乳动物射精后，精子通常停留于输卵管的峡部或子宫颈管(人)，等待排卵的发生。一旦排卵，精子可于几分钟内上行至输卵管壶腹部与卵子结合，形成受精卵。目前，对于精子在受精前的运动具有方向性及与排卵同步性的机制尚不清楚。实验结果表明，外源性血小板激活因子(PAF)能增强精子活力，诱发人精子的顶体反应，促进受精的发生〔1〕。但成熟精子是否具有PAF受体，PAF是否通过其特异性受体影响精子的获能，目前尚未见报道。本文通过体外实验观察外源性PAF对小鼠及人成熟精子的趋化作用，以及PAF受体阻断剂对PAF在精子趋化及受精过程的影响，探讨PAF在精子获能过程中的作用及其机制。
1 材料与方法
1.1 精子的采集
, 百拇医药
1.1.1 小鼠精子的采集 取10周龄成年雄性小鼠12只(由悉尼大学动物中心提供)。断颈处死，取附睾，分离脂肪，迅速放置于HTFM(Human Tubal Fluid Modified)培养液内，用无菌针头在附睾上穿刺数孔，放入37℃孵箱内孵育15min，使精子充分游出。在25℃下，1000r/min离心5min，吸取沉淀0.2mL，将其缓缓放入1.8mL平衡好的HTFM培养液中，37℃孵育2h，仔细吸取1mL上层液相，计数上游精子，将精子数调整至2×109/L.
1.1.2 人精子的采集 精液由健康成年男性提供。液化精液后用BWW(Biggers,Whitten and Whittingham)缓冲液按1∶5比例充分混匀，在25℃下，1000r/min离心15min，弃上清，反复洗涤3次。将沉淀物0.2mL移至1.8mL已平衡好的HTFM培养液中，37℃孵育3h，收集1mL上层液相，计数上游精子，将精子数调整至2×109/L.
, 百拇医药
1.2 趋化实验
PAF工作液配制：氮气干燥PAF原液(1g/L，存于氯仿中)100μL，以1∶10倍比稀释，最终质量浓度0.01～100.00mg/L.PAF受体阻断剂UR-12519配制：先配制1g/L的原液，倍比稀释成20.00,2.00,0.20,0.02mg/L工作液，分别取以上各质量浓度的工作液0.5mL与0.5mL的2mg/LPAF工作液混匀。各试管的最终质量浓度：PAF为1mg/L;UR-12519分别为10.00，1.00，0.10，0.01mg/L.
将上述精子悬液27μL加入48孔微趋化室(Micro-Chemotaxis-Chamber)的下层孔内，以一个多聚碳核孔滤网(孔直径8μm)与上层孔分隔。将上层孔内分别加入配制好的BWW，PAF，UR-12519,置37℃孵箱内孵育10min.然后用一张经0.1g/L Polylysine和5.0g/L Spermidine处理的玻片封闭上层孔。反转，室温下1000r/min离心20min.取下玻片，37℃孵箱内干燥，Zeiss相差显微镜下肉眼计数对应于各孔面积上的精子数。实验结果以
±s表示,整体结果比较采用H检验，两组间结果比较采用z检验。
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1.3 体外受精实验
基本步骤同文献〔1，2〕，取2只15周龄雄鼠，断颈处死；取附睾放入1mL已平衡好的HTFM培养液中。用无菌针头在附睾上穿刺数孔，将精子轻轻挤出，一部分作为实验组，加入UR-12519，其最终质量浓度为1mg/L；另一部分用于对照组。然后放入37℃孵箱内孵育40min，使精子充分离散。用血细胞计数器计数活动精子的数量(精子计数=所计精子数×5×104/L)。
10～12周龄雌性小鼠，正常饮食及光照。腹腔注射激素(PMSG/HCG，各10U，间隔48h)诱发排卵。HCG注射后15～17h，取输卵管，放入HTFM冲洗液内。用冲洗液将卵子由输卵管冲出，反复洗涤3次。
将数量相同的卵子迅速加入到已平衡好的含1mL HTFM培养液的Falcon管内(实验组含10μgUR-12519)，迅速加入含有0.5×109/L精子的精子悬液；快速将受精管放入37℃，体积分数为0.05的CO2培养箱。孵育5h后，收集各受精管的卵子。计数具有双原核的受精卵，计算受精率。用HTFM冲洗液将受精卵洗3次，然后移入10μL已平衡好的HTFM培养液内(LUX培养板，每孔10个受精卵)，在37℃体积分数为0.05的CO2培养箱内孵育，于受精12h后计数2个分裂球期的胚卵，120h后计数胚泡，统计学处理采用χ2检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 趋化实验
当在微趋化室上层孔内加入PAF时，随PAF质量浓度递增，聚集于上层孔内的精子逐渐增多，整体结果比较表明，差异有极显著性(H=52.3945,30.4045，P<0.001)。当PAF质量浓度为0.01mg/L时，人精子聚集的数量增多，与对照组相比差异有显著性(z=2.37,P<0.05)；当PAF质量浓度增至1.00,10.00，100.00mg/L时，聚集的小鼠及人的精子均明显增多，与对照组比较，差异有极显著性(z=3.32～4.81，P<0.01)。见表1.
表1 在不同PAF质量浓度作用下微趋化室上层孔聚集的精子数量(±s) PAF(ρ/mg.L-1)
, 百拇医药
小鼠附睾精子
人精子
0
1.28± 2.31
13.50±23.12
0.01
0.88± 0.97
30.08±43.78*
0.10
3.08± 3.98
35.42±40.19
1.00
, 百拇医药
4.20± 2.98**
38.13±25.97**
10.00
5.04± 5.05**
34.46±25.45**
100.00
8.48±11.05**
22.25±17.78**
整体比较,H=52.3945,30.4045，P<0.001；与PAF浓度为0组比较，**z=3.32～4.81，P<0.01；*z=2.37，P<0.05
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当1.00mg/L PAF及不同质量浓度的PAF受体阻断剂UR-12519同时存在时，积聚于上层孔内的精子数量随UR-12519的剂量的加大而逐渐减少(H＝34.5545,29.7445，P<0.001)。当UR-12519质量浓度>1.00mg/L时，明显抑制了PAF对精子的趋化作用。见表2.
表2 不同质量浓度UR-12519对PAF作用影响(±s) PAF
(ρ/mg.L-1)
UR-12519
(ρ/mg.L-1)
小鼠附睾精子
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人精子
0
0
5.93±4.78
47.17±23.87
1.00
0
17.00±13.63
73.94±28.32
1.00
0.01
13.96±9.71
, 百拇医药 70.61±31.01
1.00
0.10
11.71±8.58
66.22±36.05
1.00
1.00
5.93±5.60*
55.33±27.03*
1.00
10.00
7.21±9.37*
, 百拇医药
46.53±20.54*
整体比较，H=34.5545,29.7445，P<0.001；与PAF为1.00mg/L组,UR-12519质量浓度为0组比较,*z=2.79～4.09，P<0.01
2.2 体外受精实验
用10mg/LUR-12519预先处理的精子，受精率明显低于对照组，差异有显著性(χ2=8.94,P<0.01)。受精卵至胚泡期的发育亦明显受抑(χ2=7.41,P<0.01)。见表3.
表3 不同质量浓度UR-12519对小鼠卵子受精及胚胎发育的影响(%) UR-12519
(ρ/mg.L-1)
, 百拇医药
受精卵
2卵裂球胚卵
胚泡
0
64(59/92)
80(47/59)
68(40/59)
0.10
63(60/95)
72(43/60)
42(25/60)
10.00
, 百拇医药
42(44/103)
57(25/44)
41(18/44)
3 讨论
PAF是一种小分子磷脂，是组织细胞的一种自分泌调节因子，广泛参与了精子获能、排卵、受精、胚胎着床等生殖生理过程。文献报道，卵子和卵泡细胞均可产生PAF，PAF是人卵泡液内的一种重要成分，于排卵前水平逐渐升高〔3〕；另有文献报道，卵泡液中含有小分子磷脂，对人的精子具有趋化作用〔4〕；目前，多数学者认为，精子在受精前运动的方向性及与排卵的同步性，是由于排卵时，卵子、卵泡细胞及卵泡液产生和(或)含有的某种或某些成分对精子的趋化作用所致。本文实验结果显示，外源性PAF对小鼠附睾精子及人成熟精子均具明显的趋化作用，提示受精前，精子于雌性生殖道内的运动时相可能与卵子、卵泡细胞和卵泡液释放的PAF密切相关。
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体外观察结果表明，PAF能促进人精子的活力，且对活力较弱的精子作用更为明显；同时，PAF能诱发人精子的顶体反应〔1〕，促使人精子穿过豚鼠卵子的透明带〔5〕。本文结果显示，随着PAF受体阻断剂UR-12519质量浓度的增加，PAF对小鼠附睾精子及人成熟精子的趋化作用逐渐减小，直至完全消失；经受体阻断剂UR-12519处理的小鼠精子，受精率明显降低。提示精子表面有PAF受体存在。我们认为，排卵发生时释放的PAF可作为精-卵相识的一种信号，促使精子趋向于卵子，并随之与精子表面的PAF受体结合，引起细胞内蛋白酶A，K，C及Ca2+质量浓度的变化〔6〕，导致精子活力的改变及顶体反应，从而促进精子获能，进而促进受精。
本文结果同时显示，经UR-12519处理的小鼠精子，其受精卵至胚泡的发育明显受抑。已有研究表明，早期胚胎能够产生胚源性PAF，并能表达PAF受体mRNA〔7〕，对着床及胚胎的正常发育有促进作用〔8〕。本研究中小鼠精子经PAF受体阻断剂处理后，其受精卵PAF受体mRNA的表达受阻，致使受体不能正常合成。但其确切机制尚待进一步探讨。 参考文献
, http://www.100md.com
1 Krausz C, Gervasi G, Forti G,et al. Effect of platelet-activating fa ctor on motility and acrosome reaction of human spermatozoa. Hum Reprod,1994 ,9:471
2 O'Neill C. Evidence for the requirement of autocrine growth factors f or development of mouse preimplantation embryos in vitro. Biol Reprod, 1997, 59:229
3 Amiel ML, Testart J, Benveniste J. Platelet-activating factor is a c omponent of human follicular fluid. Fertil Steril,1991,56:62
, 百拇医药
4 Ralt D, Goldenberg M, Fetterolf P, et al. Sperm attraction of follicu lar factor(s) correlates with human egg fertilizability. Proc Natl Acad Sci US A, 1991, 88:2840
5 Sengoku K, Tamate K, Takaoka Y, et al. Effect of platelet-activating factor on human sperm function in vitro. Hum Reprod, 1993,8:1443
6 Sengoku K, Tamate K, Takuma N, et al. Involvement of protein kinases in platelet-activating factor induced acrosome reaction of human spermatozoa. Mol Hum Reprod， 1996,2(6):401
, 百拇医药
7 O'Neill C. Platelet-activating factor and human disease. Oxford: Blackwell Scientific, 1989.282
8 Roudebush WE, LaMarche MD, Levinen SA,et al. Evidence for the presenc e of the platelet-activating factor receptor in the CFW mouse preimplantation t wo-cell-stage embryo. Biol Reprod, 1997,57: 575
(1998-11-27收稿 1999-03-28修回), http://www.100md.com
单位：吴翠娇(青岛医学组织学和胚胎学教研室，青岛266021)；周晓彬(青岛医学院预防医学教研室)；StojanovaT O'NeillC(澳大利亚悉尼大学皇家北岸医院人类生殖研究所)
关键词：血小板活化因子；趋化性；受体；小鼠；人
青岛医学院学报990203 【摘要】 ①目的 体外观察血小板激活因子(PAF)对小鼠附睾精子和人成熟精子的趋化作用以及对受精的影响。②方法 在微趋化室下层孔内加入27μL新鲜制备的精子悬液，上层孔内加入不同质量浓度PAF，UR-12519(PAF受体阻断剂)，之间以多聚碳核孔滤网分隔，37℃孵育，用经特殊处理的玻片封闭，反转微趋化室，离心，相差显微镜下计数玻片上的精子数。用UR-12519预处理小鼠精子，通过体外受精技术观察受精率及早期胚胎发育。③结果 随PAF质量浓度的增加，聚集于上层孔内的精子逐渐增多，当PAF≥1.0mg/L时，聚集的精子数量明显增多，与对照组比较，差异有极显著性(z=3.82～4.81，P<0.01)；当UR-12519质量浓度增加(>1.0mg/L)时，PAF吸引精子的作用受抑。体外受精实验显示，经UR-12519预处理的精子，受精率明显低于正常，早期胚胎发育亦明显受抑。④结论 PAF对小鼠附睾精子及人成熟精子有趋化作用，这种作用能被其受体阻断剂所抑制。UR-12519对小鼠精-卵体外受精及其胚胎的早期发育均有抑制作用。
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中国图书馆分类法分类号 R321-33
CHEMOTACTIC EFFECT OF EXOGENOUS PL ATELET-ACTIVATING
FACTOR ON SPERM AND ITS MECHANISM
Wu Cuijiao, Zhou Xi aobin, Stojanova T, et al
Department of Histology and Embryology, Qingd ao Medical College, Qingdao 266021
【ABSTRACT】 Objective To study the chemotactic effect of e xogenous platelet-activating factor (PAF) on human and mice sperm. Methods 27μL freshly prepared sperm suspension was added in the lower well of micro-chemotaxis-chamber, and different concentrations of PAF, UR-12519 (PAF-receptor antagonist) were put in the upper wells of the chamber, the lower and the upper wells were separated with polycarbonate neocleopore fil ter (D=8μm), incubated at 37℃ and sealed by a piece of pre-coated glass. The micro-chemotaxis-chamber was put upside down and centrifuged at 100g, the numb er of the sperm on the glass was counted under zeiss phase-cotrast microscope. In the in vitro fertilization(IVF) experiment, pre-treated mice sperm with UR- 12519 was used. Fertilized zygote and the development of early embryo to blastoc yst were investigated and compared with those of normal mice sperm. Results Along with the increment of PAF concentration, the accumu lation of sperm in the upper wells was increased, when the dose of PAF≥1.0mg/L, the number of accumulated sperm in the upper well was significantly higher tha n that of the control group (z=3.82-4.81,P<0.01). The attractive effect of P AF on sperm was gradually inhibited when the dose of UR-12519>1.0mg/L. The IVF showed that the formation of fertilized zygote and the development of early embr yo to blastocyst were significantly prevented with the UR-12519 pre-treated sp erm. Conclusion PAF can attract mature human sperm and mice epidydimis sperm which can be prevented by UR-12519, a PAF-receptor antagonist. UR-1251 9 also prevented the formation of fertilized zygote and the development of early embryo to blastocyst.
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【KEY WORDS】 platelet activating factor; chemotaxis; receptor; ra t; hominidae
哺乳动物射精后，精子通常停留于输卵管的峡部或子宫颈管(人)，等待排卵的发生。一旦排卵，精子可于几分钟内上行至输卵管壶腹部与卵子结合，形成受精卵。目前，对于精子在受精前的运动具有方向性及与排卵同步性的机制尚不清楚。实验结果表明，外源性血小板激活因子(PAF)能增强精子活力，诱发人精子的顶体反应，促进受精的发生〔1〕。但成熟精子是否具有PAF受体，PAF是否通过其特异性受体影响精子的获能，目前尚未见报道。本文通过体外实验观察外源性PAF对小鼠及人成熟精子的趋化作用，以及PAF受体阻断剂对PAF在精子趋化及受精过程的影响，探讨PAF在精子获能过程中的作用及其机制。
1 材料与方法
1.1 精子的采集
, 百拇医药
1.1.1 小鼠精子的采集 取10周龄成年雄性小鼠12只(由悉尼大学动物中心提供)。断颈处死，取附睾，分离脂肪，迅速放置于HTFM(Human Tubal Fluid Modified)培养液内，用无菌针头在附睾上穿刺数孔，放入37℃孵箱内孵育15min，使精子充分游出。在25℃下，1000r/min离心5min，吸取沉淀0.2mL，将其缓缓放入1.8mL平衡好的HTFM培养液中，37℃孵育2h，仔细吸取1mL上层液相，计数上游精子，将精子数调整至2×109/L.
1.1.2 人精子的采集 精液由健康成年男性提供。液化精液后用BWW(Biggers,Whitten and Whittingham)缓冲液按1∶5比例充分混匀，在25℃下，1000r/min离心15min，弃上清，反复洗涤3次。将沉淀物0.2mL移至1.8mL已平衡好的HTFM培养液中，37℃孵育3h，收集1mL上层液相，计数上游精子，将精子数调整至2×109/L.
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1.2 趋化实验
PAF工作液配制：氮气干燥PAF原液(1g/L，存于氯仿中)100μL，以1∶10倍比稀释，最终质量浓度0.01～100.00mg/L.PAF受体阻断剂UR-12519配制：先配制1g/L的原液，倍比稀释成20.00,2.00,0.20,0.02mg/L工作液，分别取以上各质量浓度的工作液0.5mL与0.5mL的2mg/LPAF工作液混匀。各试管的最终质量浓度：PAF为1mg/L;UR-12519分别为10.00，1.00，0.10，0.01mg/L.
将上述精子悬液27μL加入48孔微趋化室(Micro-Chemotaxis-Chamber)的下层孔内，以一个多聚碳核孔滤网(孔直径8μm)与上层孔分隔。将上层孔内分别加入配制好的BWW，PAF，UR-12519,置37℃孵箱内孵育10min.然后用一张经0.1g/L Polylysine和5.0g/L Spermidine处理的玻片封闭上层孔。反转，室温下1000r/min离心20min.取下玻片，37℃孵箱内干燥，Zeiss相差显微镜下肉眼计数对应于各孔面积上的精子数。实验结果以
±s表示,整体结果比较采用H检验，两组间结果比较采用z检验。, http://www.100md.com
1.3 体外受精实验
基本步骤同文献〔1，2〕，取2只15周龄雄鼠，断颈处死；取附睾放入1mL已平衡好的HTFM培养液中。用无菌针头在附睾上穿刺数孔，将精子轻轻挤出，一部分作为实验组，加入UR-12519，其最终质量浓度为1mg/L；另一部分用于对照组。然后放入37℃孵箱内孵育40min，使精子充分离散。用血细胞计数器计数活动精子的数量(精子计数=所计精子数×5×104/L)。
10～12周龄雌性小鼠，正常饮食及光照。腹腔注射激素(PMSG/HCG，各10U，间隔48h)诱发排卵。HCG注射后15～17h，取输卵管，放入HTFM冲洗液内。用冲洗液将卵子由输卵管冲出，反复洗涤3次。
将数量相同的卵子迅速加入到已平衡好的含1mL HTFM培养液的Falcon管内(实验组含10μgUR-12519)，迅速加入含有0.5×109/L精子的精子悬液；快速将受精管放入37℃，体积分数为0.05的CO2培养箱。孵育5h后，收集各受精管的卵子。计数具有双原核的受精卵，计算受精率。用HTFM冲洗液将受精卵洗3次，然后移入10μL已平衡好的HTFM培养液内(LUX培养板，每孔10个受精卵)，在37℃体积分数为0.05的CO2培养箱内孵育，于受精12h后计数2个分裂球期的胚卵，120h后计数胚泡，统计学处理采用χ2检验。
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2 结果
2.1 趋化实验
当在微趋化室上层孔内加入PAF时，随PAF质量浓度递增，聚集于上层孔内的精子逐渐增多，整体结果比较表明，差异有极显著性(H=52.3945,30.4045，P<0.001)。当PAF质量浓度为0.01mg/L时，人精子聚集的数量增多，与对照组相比差异有显著性(z=2.37,P<0.05)；当PAF质量浓度增至1.00,10.00，100.00mg/L时，聚集的小鼠及人的精子均明显增多，与对照组比较，差异有极显著性(z=3.32～4.81，P<0.01)。见表1.
表1 在不同PAF质量浓度作用下微趋化室上层孔聚集的精子数量(
±s) PAF(ρ/mg.L-1), 百拇医药
小鼠附睾精子
人精子
0
1.28± 2.31
13.50±23.12
0.01
0.88± 0.97
30.08±43.78*
0.10
3.08± 3.98
35.42±40.19
1.00
, 百拇医药
4.20± 2.98**
38.13±25.97**
10.00
5.04± 5.05**
34.46±25.45**
100.00
8.48±11.05**
22.25±17.78**
整体比较,H=52.3945,30.4045，P<0.001；与PAF浓度为0组比较，**z=3.32～4.81，P<0.01；*z=2.37，P<0.05
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当1.00mg/L PAF及不同质量浓度的PAF受体阻断剂UR-12519同时存在时，积聚于上层孔内的精子数量随UR-12519的剂量的加大而逐渐减少(H＝34.5545,29.7445，P<0.001)。当UR-12519质量浓度>1.00mg/L时，明显抑制了PAF对精子的趋化作用。见表2.
表2 不同质量浓度UR-12519对PAF作用影响(
±s) PAF(ρ/mg.L-1)
UR-12519
(ρ/mg.L-1)
小鼠附睾精子
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人精子
0
0
5.93±4.78
47.17±23.87
1.00
0
17.00±13.63
73.94±28.32
1.00
0.01
13.96±9.71
, 百拇医药 70.61±31.01
1.00
0.10
11.71±8.58
66.22±36.05
1.00
1.00
5.93±5.60*
55.33±27.03*
1.00
10.00
7.21±9.37*
, 百拇医药
46.53±20.54*
整体比较，H=34.5545,29.7445，P<0.001；与PAF为1.00mg/L组,UR-12519质量浓度为0组比较,*z=2.79～4.09，P<0.01
2.2 体外受精实验
用10mg/LUR-12519预先处理的精子，受精率明显低于对照组，差异有显著性(χ2=8.94,P<0.01)。受精卵至胚泡期的发育亦明显受抑(χ2=7.41,P<0.01)。见表3.
表3 不同质量浓度UR-12519对小鼠卵子受精及胚胎发育的影响(%) UR-12519
(ρ/mg.L-1)
, 百拇医药
受精卵
2卵裂球胚卵
胚泡
0
64(59/92)
80(47/59)
68(40/59)
0.10
63(60/95)
72(43/60)
42(25/60)
10.00
, 百拇医药
42(44/103)
57(25/44)
41(18/44)
3 讨论
PAF是一种小分子磷脂，是组织细胞的一种自分泌调节因子，广泛参与了精子获能、排卵、受精、胚胎着床等生殖生理过程。文献报道，卵子和卵泡细胞均可产生PAF，PAF是人卵泡液内的一种重要成分，于排卵前水平逐渐升高〔3〕；另有文献报道，卵泡液中含有小分子磷脂，对人的精子具有趋化作用〔4〕；目前，多数学者认为，精子在受精前运动的方向性及与排卵的同步性，是由于排卵时，卵子、卵泡细胞及卵泡液产生和(或)含有的某种或某些成分对精子的趋化作用所致。本文实验结果显示，外源性PAF对小鼠附睾精子及人成熟精子均具明显的趋化作用，提示受精前，精子于雌性生殖道内的运动时相可能与卵子、卵泡细胞和卵泡液释放的PAF密切相关。
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体外观察结果表明，PAF能促进人精子的活力，且对活力较弱的精子作用更为明显；同时，PAF能诱发人精子的顶体反应〔1〕，促使人精子穿过豚鼠卵子的透明带〔5〕。本文结果显示，随着PAF受体阻断剂UR-12519质量浓度的增加，PAF对小鼠附睾精子及人成熟精子的趋化作用逐渐减小，直至完全消失；经受体阻断剂UR-12519处理的小鼠精子，受精率明显降低。提示精子表面有PAF受体存在。我们认为，排卵发生时释放的PAF可作为精-卵相识的一种信号，促使精子趋向于卵子，并随之与精子表面的PAF受体结合，引起细胞内蛋白酶A，K，C及Ca2+质量浓度的变化〔6〕，导致精子活力的改变及顶体反应，从而促进精子获能，进而促进受精。
本文结果同时显示，经UR-12519处理的小鼠精子，其受精卵至胚泡的发育明显受抑。已有研究表明，早期胚胎能够产生胚源性PAF，并能表达PAF受体mRNA〔7〕，对着床及胚胎的正常发育有促进作用〔8〕。本研究中小鼠精子经PAF受体阻断剂处理后，其受精卵PAF受体mRNA的表达受阻，致使受体不能正常合成。但其确切机制尚待进一步探讨。 参考文献
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4 Ralt D, Goldenberg M, Fetterolf P, et al. Sperm attraction of follicu lar factor(s) correlates with human egg fertilizability. Proc Natl Acad Sci US A, 1991, 88:2840
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6 Sengoku K, Tamate K, Takuma N, et al. Involvement of protein kinases in platelet-activating factor induced acrosome reaction of human spermatozoa. Mol Hum Reprod， 1996,2(6):401
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(1998-11-27收稿 1999-03-28修回), http://www.100md.com