乌梅及其混淆品李子的蛋白多肽高效毛细管电泳法鉴别
作者：贾江滨 陈振德 侯连兵 陈志良 许重远
单位：贾江滨(第一军医大学南方医院药学部，广东 广州510515)；陈振德(第一军医大学南方医院药学部，广东 广州510515)；侯连兵(第一军医大学南方医院药学部，广东 广州510515)；陈志良(第一军医大学南方医院药学部，广东 广州510515)；许重远(第一军医大学南方医院药学部，广东 广州510515)
关键词：乌梅；蛋白多肽；高效毛细管电泳
第一军医大学学报000436 摘要: 目的 对乌梅及其混淆品进行蛋白多肽电泳鉴别。方法 采取高效毛细管电泳法对乌梅与其混淆品蛋白多肽进行分析。结果 乌梅及其混淆品蛋白多肽高效毛细管电泳图谱有明显的差异。结论 高效毛细管电泳可作为中药乌梅的生药鉴别方法。
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中图分类号：R284.1 文献标志码：A
文章编号：1000-2588(2000)04-S0024-02
中药乌梅(Fructus Mume)是较常用中药，为蔷薇科植物梅(Prunus mume Sieb. et Zucc)的干燥未成熟果实。具有敛肺涩肠、生津止咳、驱虫止痢的作用[1]。现代药理研究表明，乌梅具有抗菌、抗过敏、抗肿瘤、弛缓平滑肌和增强免疫功能等作用[2]。近年来，因乌梅货源紧缺，商品中常有同科同属植物李、杏、桃等幼果伪充[3、4]。有报道[3、4]从药材外形、显微、理化及pH值测定等几方面，对乌梅及其伪品进行过鉴定研究，但这些方法操作较繁杂，专属性不强。我们拟以中药材细胞中普遍存在的，受遗传基因控制的蛋白多肽分子为指标，用高效毛细管电泳法(HPCE)来探索和论证鉴别乌梅的可行性。
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1 材料与方法
1.1 材料
乌梅来源于广东省药材公司；李子为蔷薇科植物李(Prunus salicina Lindl.)的干燥未成熟果实，采集于广州市。均已得到鉴定。
1.2 仪器与试剂
美国BIO-RAD公司BioFocusTM3000型高效毛细管电泳仪，配有紫外扫描检测器。熔融石英毛细管75μm×60 cm(河北永年光纤厂)。所用试剂均为分析纯。
1.3 电泳条件
电解缓冲液为30 mmol/L硼酸盐溶液(pH 8.5)；电压为20 kV；温度20 ℃；紫外检测波长200 nm；重力进样，时间5 s。开机后先用0.1 mol/L氢氧化钠冲洗毛细管2 min，再用去离子水冲洗5 min，然后用缓冲液冲洗至基线平稳后开始进样。每两次进样之间设定缓冲液冲洗2 min。
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1.4 样品溶液的配制
取生药样品0.5 g，加入蛋白提取液5 ml，在冰浴中研磨成匀浆状，转移至离心管内，以5 000 r/min离心20 min，取上清液备用。Tris-甘氨酸蛋白提取液：Tris 0.6 g，甘氨酸2.9 g，加蒸馏水溶解至1 000 ml；碱性蛋白提取液：Tris-HCL 0.1 mol/L、抗坏血酸56.8 mmol/L、巯基乙醇10 mmol/L，pH 8.0；酸性蛋白提取液：柠檬酸80 mmol/L、Na2HPO4 32 mmol/L、抗坏血酸5 mmol/L、巯基乙醇10 mmol/L，pH 2.8。
2 结果
2.1 在酸性提取液中，乌梅主要在5.60、8.61和10.05 min处各有一吸收峰，其中8.61和10.05 min峰为强吸峰；而李子在5.10、7.49、8.02、8.35和8.66 min处各有一吸收峰，其中8.35和8.66 min峰为强吸峰。
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2.2 在中性提取液中，乌梅在5.18、8.68和9.67 min处各有一吸收峰，其中8.68和9.67 min峰为强吸峰；而李子在4.17、5.19、5.29、6.07、6.88、7.34和9.90 min处各有一吸收峰，其中5.19和6.88 min峰为强吸峰。
2.3 在碱性提取液中，乌梅在5.29、7.39、8.96和9.11 min处各有一吸收峰，其中5.29、7.39和9.11 min峰为强吸峰；而李子在4.73、6.84、7.60、7.91和8.06 min处各有一吸收峰，其中7.91 min峰为强吸峰。
综合3种提取液所检测的图谱，可以看出乌梅与李子的HPCE图谱存在显著差异，容易加以区别。
3 讨论
HPCE是近年来迅速发展起来的一项重要分离技术，已在多肽、蛋白质、核酸、碳水化合物等生物活性物质的分离分析方面显示了极为广阔的前景[5]。胡平等[6]报道提取菟丝子种子植物蛋白用HPCE法进行生药鉴定，结果表明不同种间成分和含量上存在明显差异，认为根据种子植物蛋白的电泳图谱，可有效地鉴别菟丝子的来源。张朝晖等[7]报道对12种海马、海龙类药材采用HPCE进行鉴别，结果表明种间区别较明显，认为该法速度快，分辨力强、重现性好。从我们应用HPCE对乌梅及其混淆品李子蛋白多肽检测结果看，乌梅与其混淆品之间有明显的差异，可有效地加以区分。因此，HPCE作为乌梅的鉴别方法是科学的、可行的。
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作者简介：贾江滨(1973-)，男，内蒙古包头人，1997年毕业于第二军医大学，学士，药师，电话：85142194，E-mail: rivers@fimmu.edu.cn
参考文献:
[1] 江苏新医学院. 中药大辞典(上册)[M]. 北京：人民卫生出版社, 1997.464-5.
[2] 梅全喜，毕焕新. 现代中药药理手册[M]. 北京：中国中医药出版社, 1998.648-50.
[3] 陈德群. 乌梅与李子的鉴别[J]. 中药通报, 1984, (4):16-7.
[4] 滕健昌，刘舞霞，张永萍. 乌梅及其混淆品的鉴定研究[J]. 中草药, 1984, 15(9):37-8.
[5] 李红旗，沈忠耀. 高效毛细管电泳在蛋白质分析上的应用[J]. 生物工程进展，1995, 15(6):40-3.
[6] 胡 平，罗国安，王如骥，等. 中药菟丝子的高效毛细管电泳法鉴别[J]. 药学学报，1997, 32(7):549-51.
[7] 张朝晖，范国荣，徐国钧，等. 12种海马、海龙类药材高效毛细管电泳鉴别[J]. 中国中药杂志，1998, 23(5):259-62.
收稿日期：1999-06-23, 百拇医药
单位：贾江滨(第一军医大学南方医院药学部，广东 广州510515)；陈振德(第一军医大学南方医院药学部，广东 广州510515)；侯连兵(第一军医大学南方医院药学部，广东 广州510515)；陈志良(第一军医大学南方医院药学部，广东 广州510515)；许重远(第一军医大学南方医院药学部，广东 广州510515)
关键词：乌梅；蛋白多肽；高效毛细管电泳
第一军医大学学报000436 摘要: 目的 对乌梅及其混淆品进行蛋白多肽电泳鉴别。方法 采取高效毛细管电泳法对乌梅与其混淆品蛋白多肽进行分析。结果 乌梅及其混淆品蛋白多肽高效毛细管电泳图谱有明显的差异。结论 高效毛细管电泳可作为中药乌梅的生药鉴别方法。
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中图分类号：R284.1 文献标志码：A
文章编号：1000-2588(2000)04-S0024-02
中药乌梅(Fructus Mume)是较常用中药，为蔷薇科植物梅(Prunus mume Sieb. et Zucc)的干燥未成熟果实。具有敛肺涩肠、生津止咳、驱虫止痢的作用[1]。现代药理研究表明，乌梅具有抗菌、抗过敏、抗肿瘤、弛缓平滑肌和增强免疫功能等作用[2]。近年来，因乌梅货源紧缺，商品中常有同科同属植物李、杏、桃等幼果伪充[3、4]。有报道[3、4]从药材外形、显微、理化及pH值测定等几方面，对乌梅及其伪品进行过鉴定研究，但这些方法操作较繁杂，专属性不强。我们拟以中药材细胞中普遍存在的，受遗传基因控制的蛋白多肽分子为指标，用高效毛细管电泳法(HPCE)来探索和论证鉴别乌梅的可行性。
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1 材料与方法
1.1 材料
乌梅来源于广东省药材公司；李子为蔷薇科植物李(Prunus salicina Lindl.)的干燥未成熟果实，采集于广州市。均已得到鉴定。
1.2 仪器与试剂
美国BIO-RAD公司BioFocusTM3000型高效毛细管电泳仪，配有紫外扫描检测器。熔融石英毛细管75μm×60 cm(河北永年光纤厂)。所用试剂均为分析纯。
1.3 电泳条件
电解缓冲液为30 mmol/L硼酸盐溶液(pH 8.5)；电压为20 kV；温度20 ℃；紫外检测波长200 nm；重力进样，时间5 s。开机后先用0.1 mol/L氢氧化钠冲洗毛细管2 min，再用去离子水冲洗5 min，然后用缓冲液冲洗至基线平稳后开始进样。每两次进样之间设定缓冲液冲洗2 min。
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1.4 样品溶液的配制
取生药样品0.5 g，加入蛋白提取液5 ml，在冰浴中研磨成匀浆状，转移至离心管内，以5 000 r/min离心20 min，取上清液备用。Tris-甘氨酸蛋白提取液：Tris 0.6 g，甘氨酸2.9 g，加蒸馏水溶解至1 000 ml；碱性蛋白提取液：Tris-HCL 0.1 mol/L、抗坏血酸56.8 mmol/L、巯基乙醇10 mmol/L，pH 8.0；酸性蛋白提取液：柠檬酸80 mmol/L、Na2HPO4 32 mmol/L、抗坏血酸5 mmol/L、巯基乙醇10 mmol/L，pH 2.8。
2 结果
2.1 在酸性提取液中，乌梅主要在5.60、8.61和10.05 min处各有一吸收峰，其中8.61和10.05 min峰为强吸峰；而李子在5.10、7.49、8.02、8.35和8.66 min处各有一吸收峰，其中8.35和8.66 min峰为强吸峰。
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2.2 在中性提取液中，乌梅在5.18、8.68和9.67 min处各有一吸收峰，其中8.68和9.67 min峰为强吸峰；而李子在4.17、5.19、5.29、6.07、6.88、7.34和9.90 min处各有一吸收峰，其中5.19和6.88 min峰为强吸峰。
2.3 在碱性提取液中，乌梅在5.29、7.39、8.96和9.11 min处各有一吸收峰，其中5.29、7.39和9.11 min峰为强吸峰；而李子在4.73、6.84、7.60、7.91和8.06 min处各有一吸收峰，其中7.91 min峰为强吸峰。
综合3种提取液所检测的图谱，可以看出乌梅与李子的HPCE图谱存在显著差异，容易加以区别。
3 讨论
HPCE是近年来迅速发展起来的一项重要分离技术，已在多肽、蛋白质、核酸、碳水化合物等生物活性物质的分离分析方面显示了极为广阔的前景[5]。胡平等[6]报道提取菟丝子种子植物蛋白用HPCE法进行生药鉴定，结果表明不同种间成分和含量上存在明显差异，认为根据种子植物蛋白的电泳图谱，可有效地鉴别菟丝子的来源。张朝晖等[7]报道对12种海马、海龙类药材采用HPCE进行鉴别，结果表明种间区别较明显，认为该法速度快，分辨力强、重现性好。从我们应用HPCE对乌梅及其混淆品李子蛋白多肽检测结果看，乌梅与其混淆品之间有明显的差异，可有效地加以区分。因此，HPCE作为乌梅的鉴别方法是科学的、可行的。
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作者简介：贾江滨(1973-)，男，内蒙古包头人，1997年毕业于第二军医大学，学士，药师，电话：85142194，E-mail: rivers@fimmu.edu.cn
参考文献:
[1] 江苏新医学院. 中药大辞典(上册)[M]. 北京：人民卫生出版社, 1997.464-5.
[2] 梅全喜，毕焕新. 现代中药药理手册[M]. 北京：中国中医药出版社, 1998.648-50.
[3] 陈德群. 乌梅与李子的鉴别[J]. 中药通报, 1984, (4):16-7.
[4] 滕健昌，刘舞霞，张永萍. 乌梅及其混淆品的鉴定研究[J]. 中草药, 1984, 15(9):37-8.
[5] 李红旗，沈忠耀. 高效毛细管电泳在蛋白质分析上的应用[J]. 生物工程进展，1995, 15(6):40-3.
[6] 胡 平，罗国安，王如骥，等. 中药菟丝子的高效毛细管电泳法鉴别[J]. 药学学报，1997, 32(7):549-51.
[7] 张朝晖，范国荣，徐国钧，等. 12种海马、海龙类药材高效毛细管电泳鉴别[J]. 中国中药杂志，1998, 23(5):259-62.
收稿日期：1999-06-23, 百拇医药