吗啡备用根大鼠脊髓组织神经营养活性物质的分离纯化和生物活性测定
作者：李春燕 曾园山 顾熊飞 陈穗君
单位：李春燕(中山医科大学组织学胚胎学教研室神经科学研究室)；曾园山(中山医科大学组织学胚胎学教研室神经科学研究室)；顾熊飞(生物化学教研室，广州 510089)；陈穗君(中山医科大学组织学胚胎学教研室神经科学研究室)
关键词：
解剖学报000424 [中图分类号] D322.81 [文献标识码] D [文章编号] 0529-1356(2000)04-306
我室以往的研究表明，吗啡作用的部分去传入大鼠脊髓组织提取液中，大于10kD组份具有神经营养活性作用，但尚不知道是哪些分子量的蛋白质具有神经营养活性。为了寻找这些物质，本研究用Sephacryl S-200凝胶层析、高效液相色谱(HPLC)、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和组织培养等技术和方法，进一步分离纯化吗啡备用根大鼠部分去传入的脊髓组织提取液，以期获得某些神经营养活性物质，为吗啡促进脊髓可塑性变化的分子基础提供新资料。
SD大鼠40只，分为4组：A组为正常对照大鼠组；B组为备用根手术组，即将大鼠一侧L1～L3\,L5和L6背根切断，保留L4背根为备用根；C组为吗啡组，仅注射吗啡，不做手术；D组为吗啡备用根手术组，在施行备用根模型手术前后都给予吗啡。手术后第5d分别取出B组和D组以及没有手术的A组和C组的腰段脊髓组织，经匀浆、高速离心后取上清液，用于培养鸡胚背根节。计数培养的背根节神经突起的生长密度，发现D组的上清液神经营养活性最强，B组和C组也有较强的神经营养活性，但两者之间无显著性差异。另取SD大鼠30只，按D组的方法获得脊髓组织上清液，超滤后发现大于10kD组份有神经营养活性物质。进一步用Sephacryl S-200凝胶层析分离发现，层析Ⅱ峰和Ⅳ峰的洗脱液有神经营养活性物质。因Ⅳ峰蛋白成分复杂，又继续采用HPLC进行纯化，发现HPLC的A峰洗脱液有神经营养活性。SDS-PAGE显示有神经营养活性作用的物质可能为3种蛋白质，分子量分别约为65kD、30kD和18kD。据分析，它们可能是吗啡促进备用根初级传入纤维在大鼠脊髓内侧支出芽和突触重建的重要因素之一。
[收稿日期] 2000-06-27, 百拇医药
单位：李春燕(中山医科大学组织学胚胎学教研室神经科学研究室)；曾园山(中山医科大学组织学胚胎学教研室神经科学研究室)；顾熊飞(生物化学教研室，广州 510089)；陈穗君(中山医科大学组织学胚胎学教研室神经科学研究室)
关键词：
解剖学报000424 [中图分类号] D322.81 [文献标识码] D [文章编号] 0529-1356(2000)04-306
我室以往的研究表明，吗啡作用的部分去传入大鼠脊髓组织提取液中，大于10kD组份具有神经营养活性作用，但尚不知道是哪些分子量的蛋白质具有神经营养活性。为了寻找这些物质，本研究用Sephacryl S-200凝胶层析、高效液相色谱(HPLC)、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和组织培养等技术和方法，进一步分离纯化吗啡备用根大鼠部分去传入的脊髓组织提取液，以期获得某些神经营养活性物质，为吗啡促进脊髓可塑性变化的分子基础提供新资料。
SD大鼠40只，分为4组：A组为正常对照大鼠组；B组为备用根手术组，即将大鼠一侧L1～L3\,L5和L6背根切断，保留L4背根为备用根；C组为吗啡组，仅注射吗啡，不做手术；D组为吗啡备用根手术组，在施行备用根模型手术前后都给予吗啡。手术后第5d分别取出B组和D组以及没有手术的A组和C组的腰段脊髓组织，经匀浆、高速离心后取上清液，用于培养鸡胚背根节。计数培养的背根节神经突起的生长密度，发现D组的上清液神经营养活性最强，B组和C组也有较强的神经营养活性，但两者之间无显著性差异。另取SD大鼠30只，按D组的方法获得脊髓组织上清液，超滤后发现大于10kD组份有神经营养活性物质。进一步用Sephacryl S-200凝胶层析分离发现，层析Ⅱ峰和Ⅳ峰的洗脱液有神经营养活性物质。因Ⅳ峰蛋白成分复杂，又继续采用HPLC进行纯化，发现HPLC的A峰洗脱液有神经营养活性。SDS-PAGE显示有神经营养活性作用的物质可能为3种蛋白质，分子量分别约为65kD、30kD和18kD。据分析，它们可能是吗啡促进备用根初级传入纤维在大鼠脊髓内侧支出芽和突触重建的重要因素之一。
[收稿日期] 2000-06-27, 百拇医药