毒蜜中钩吻花粉形态检验方法探讨
作者：劳秀玲 黄万兴
单位：广西凌云县卫生防疫站 533100
关键词：
广西预防医学000216
分类号:R155.5+9文献标识码:B文章编号:1007-158X(2000)02-0105-03
目前，检验含有钩吻花粉的有毒蜂蜜主要按生物碱的检验方法[1]。由于毒蜜含糖量高、成分复杂,给钩吻碱的分离提取带来极大的困难，且操作过程十分繁琐。作者在显微镜下观察，钩吻花粉有非常明显的特征，根据钩吻花粉的形态学，可以确证为含有钩吻花粉的毒蜜，为食用毒蜜中毒提供了一个简易、可靠、快速的鉴定方法。
1 钩吻花粉的形态鉴别
, 百拇医药
钩吻(Gelsemium elegans Benth)是马钱科胡蔓藤属的常绿缠绕藤木的野生植物。全株有毒。在我国广西、广东、云南、贵州、浙江、福建等地区均有生长。钩吻的民间俗名繁多，常称名有野葛、冶葛、胡曼草、断肠草、吻莽、烂肠草、虎狼草、黄藤、大茶叶、大炮叶等等[1]。每年约11月份开花，花小黄色成簇开放于钩吻的顶部。钩吻花粉即花蕊附着的黄色微细粉粒，将花粉粒的内容物分解后，在200倍显微镜下，可以清楚地观察到钩吻花粉非常典型的特征：花粉长球形或近圆形，极面观为三裂圆形，赤道观为长椭圆形，大小约为34.3～38.6×27.8～34.3μ，具三孔沟，沟狭长两端变尖，有很薄的沟膜，内孔明显而大，呈圆形或椭圆形，内孔在左右两侧各有一喙状延长。外壁外层稍厚于内层，表面具网状纹饰，网至沟边缘变细[2](见图1、图2)。
图1 50倍显微镜下钩吻花粉形态
, 百拇医药
图2 200倍显微镜下钩吻花粉形态
2 花粉粒的提取、制片和镜检
2.1 提取 称取已溶化的均匀毒蜜25g，置于100ml烧杯中，加1倍量以上80℃蒸馏水，充分溶解后，离心分取沉淀。向沉淀中加入适量的醋酸酐—浓硫酸(9：1v/v)混合液，置于水浴中煮沸，并随时取少许，在显微镜下检查花粉的内容物是否分解尽。待分解完毕，离心，弃去醋酸酐—浓硫酸混合物，残渣用蒸馏水反复洗3次。离心弃去水，残渣再用无水乙醇脱水3次(注意必须脱净水)。残渣即为花粉粒。
2.2 制片 将提取的花粉粒贮于盛有50%甘油1ml的尖底小试管内，加1%石炭酸溶液3～4滴，混匀。取混悬液1滴置于载玻片上，上盖一块盖玻片(轻轻地从液滴一侧加盖玻片，勿产生气泡)。
2.3 镜检 先于低倍镜(50倍)下观察，发现疑似钩吻花粉者再转高倍镜(200倍)仔细辨认后确证。凡观察到钩吻花粉的蜂蜜，就可判定其中有钩吻花粉存在(图3是一检测实例)。钩吻花粉粒可按下式计算：
, http://www.100md.com
图3 箭头所指的椭圆形物即是中毒样品的钩吻花粉粒
3 检验的可靠性和相似花粉的鉴别及方法
3.1 可靠性 阳性检出是绝对可靠的，不会出现假阳性。
3.2 相似花粉的鉴别 在低倍镜下粗看可能与钩吻花粉相似的植物花粉有两种(1)荞麦花粉。荞麦花粉的形状与钩吻花粉接近，但大小略大于钩吻花粉，内孔横长，外壁厚，层次不清。(2)洋槐花粉的形态、大小和钩吻花粉相似，但孔不明显，表面的颗粒纹饰也不明显。这两种花粉只须仔细观察就能与钩吻花粉区分开，而在高倍镜下差别更显著，不易混淆。
3.3 方法比较 用花粉形态检验法和生物碱定性检验法分别对4份蜂蜜进行检测，结果见表1，两法结果一致。
表1 两种方法结果比较 样品名称
, http://www.100md.com
花粉形态法
生物碱法
中毒者吃剩蜂蜜1＃
检出钩吻花粉
阳性
中毒者吃剩蜂蜜2＃
检出钩吻花粉
阳性
市售蜂蜜1＃
未检出钩吻花粉
阴性
市售蜂蜜2＃
未检出钩吻花粉
阴性
花粉形态法设备简单、易操作、省时、试剂用量少、不受干扰因素影响。
参考文献
1，江 涛主编.法医毒物分析.北京：人民卫生出版社，1987：189
2，翟永信主编.食品掺伪监测方法.北京：北京大学出版社，1989：99
(1999-11-08收稿), http://www.100md.com
单位：广西凌云县卫生防疫站 533100
关键词：
广西预防医学000216
分类号:R155.5+9文献标识码:B文章编号:1007-158X(2000)02-0105-03
目前，检验含有钩吻花粉的有毒蜂蜜主要按生物碱的检验方法[1]。由于毒蜜含糖量高、成分复杂,给钩吻碱的分离提取带来极大的困难，且操作过程十分繁琐。作者在显微镜下观察，钩吻花粉有非常明显的特征，根据钩吻花粉的形态学，可以确证为含有钩吻花粉的毒蜜，为食用毒蜜中毒提供了一个简易、可靠、快速的鉴定方法。
1 钩吻花粉的形态鉴别
, 百拇医药
钩吻(Gelsemium elegans Benth)是马钱科胡蔓藤属的常绿缠绕藤木的野生植物。全株有毒。在我国广西、广东、云南、贵州、浙江、福建等地区均有生长。钩吻的民间俗名繁多，常称名有野葛、冶葛、胡曼草、断肠草、吻莽、烂肠草、虎狼草、黄藤、大茶叶、大炮叶等等[1]。每年约11月份开花，花小黄色成簇开放于钩吻的顶部。钩吻花粉即花蕊附着的黄色微细粉粒，将花粉粒的内容物分解后，在200倍显微镜下，可以清楚地观察到钩吻花粉非常典型的特征：花粉长球形或近圆形，极面观为三裂圆形，赤道观为长椭圆形，大小约为34.3～38.6×27.8～34.3μ，具三孔沟，沟狭长两端变尖，有很薄的沟膜，内孔明显而大，呈圆形或椭圆形，内孔在左右两侧各有一喙状延长。外壁外层稍厚于内层，表面具网状纹饰，网至沟边缘变细[2](见图1、图2)。
图1 50倍显微镜下钩吻花粉形态
, 百拇医药
图2 200倍显微镜下钩吻花粉形态
2 花粉粒的提取、制片和镜检
2.1 提取 称取已溶化的均匀毒蜜25g，置于100ml烧杯中，加1倍量以上80℃蒸馏水，充分溶解后，离心分取沉淀。向沉淀中加入适量的醋酸酐—浓硫酸(9：1v/v)混合液，置于水浴中煮沸，并随时取少许，在显微镜下检查花粉的内容物是否分解尽。待分解完毕，离心，弃去醋酸酐—浓硫酸混合物，残渣用蒸馏水反复洗3次。离心弃去水，残渣再用无水乙醇脱水3次(注意必须脱净水)。残渣即为花粉粒。
2.2 制片 将提取的花粉粒贮于盛有50%甘油1ml的尖底小试管内，加1%石炭酸溶液3～4滴，混匀。取混悬液1滴置于载玻片上，上盖一块盖玻片(轻轻地从液滴一侧加盖玻片，勿产生气泡)。
2.3 镜检 先于低倍镜(50倍)下观察，发现疑似钩吻花粉者再转高倍镜(200倍)仔细辨认后确证。凡观察到钩吻花粉的蜂蜜，就可判定其中有钩吻花粉存在(图3是一检测实例)。钩吻花粉粒可按下式计算：
, http://www.100md.com
图3 箭头所指的椭圆形物即是中毒样品的钩吻花粉粒
3 检验的可靠性和相似花粉的鉴别及方法
3.1 可靠性 阳性检出是绝对可靠的，不会出现假阳性。
3.2 相似花粉的鉴别 在低倍镜下粗看可能与钩吻花粉相似的植物花粉有两种(1)荞麦花粉。荞麦花粉的形状与钩吻花粉接近，但大小略大于钩吻花粉，内孔横长，外壁厚，层次不清。(2)洋槐花粉的形态、大小和钩吻花粉相似，但孔不明显，表面的颗粒纹饰也不明显。这两种花粉只须仔细观察就能与钩吻花粉区分开，而在高倍镜下差别更显著，不易混淆。
3.3 方法比较 用花粉形态检验法和生物碱定性检验法分别对4份蜂蜜进行检测，结果见表1，两法结果一致。
表1 两种方法结果比较 样品名称
, http://www.100md.com
花粉形态法
生物碱法
中毒者吃剩蜂蜜1＃
检出钩吻花粉
阳性
中毒者吃剩蜂蜜2＃
检出钩吻花粉
阳性
市售蜂蜜1＃
未检出钩吻花粉
阴性
市售蜂蜜2＃
未检出钩吻花粉
阴性
花粉形态法设备简单、易操作、省时、试剂用量少、不受干扰因素影响。
参考文献
1，江 涛主编.法医毒物分析.北京：人民卫生出版社，1987：189
2，翟永信主编.食品掺伪监测方法.北京：北京大学出版社，1989：99
(1999-11-08收稿), http://www.100md.com