玉洁纯、硫酸锌对口腔主要致龋菌生长产酸的影响
作者：孙蕾 冯希平 刘艳玲
单位：上海第二医科大学附属第九人民医院口腔预防科
关键词：龋齿；三氯生；硫酸锌；变形链球菌；远缘链球菌
实用口腔医学杂志000308〔摘要〕 目的：评价玉洁纯、硫酸锌对口腔主要致龋菌的影响，确定抑制细 菌所需的浓度 。方法：使用紫外分光光度计及pH电极检测不同浓度的药物及两者相对配伍使用时对口腔主 要致龋菌-变形链球菌和远缘链球菌的抑制效果。结果：玉洁纯、 硫酸锌均能有效地抑制变 链和远链的生长和产酸，硫酸锌不能增强玉洁纯的抑制效果。结论：初步认为玉洁纯可作为龋病预防用药，硫酸锌在配方中的作用有待进一步探讨。
中图分类号：R780.1 R979.7 文献标识码：A
文章编号：1001-3733(2000)03-0196-03
, http://www.100md.com
The effect of triclosan and zinc sulphate on growth and
acid production of St reptococcus mutans and Streptococcus sobrinus
Sun Lei,Feng Xiping,Liu Yanlin.
(College of Stomatology,Shanghai Second Medical Un iversity,Shanghai 200011)
〔Abstract〕Objective:To evaluate the effect of ticlosan,zinc sulphat e or their combination on the main cariogenic bacteria Streptococcus mutans (S.m) and strep tococcus sobrinus (S.sob) Method:Growth and acid product ion inhibition of the th ree agents at different concentrations on S.m and S.sob were determined with ult raviolet spectrophtometer and pH electrode.Results:Triclos an,zinc sulphate or th eir combination inhibited the growth and acid production of S.m and S.sob .The co mbination of the two agents was not synergic.Conclution:Tr iclosan may be used as a caries prevention agent.
, 百拇医药
Key words Dental cazies;Triclosan,Zinc sulphate,Streptococcus mu tans,streptococcus sobrinus▲
玉洁纯(triclosan)，化学名三氯羟苯醚(2’，4，4’-tricloro-2'hydroxydiphenyl ether)，1968年Furia等发现玉洁纯具有广谱的抗菌作用。由于玉洁纯低毒性、低刺激性的 特点，自80年代末90年代初被考虑用于口腔疾病的治疗。玉洁纯能有效地抑制菌斑的形成， 并有抗炎、减少牙石沉积的多重作用，因此它较多地被考虑用于牙龈炎、牙周炎的防治 〔1〕。作为温和的非离子型抗菌剂，玉洁纯对致龋菌也应具有效的抑制作用，但有关这 方面的报道较为少见。
本研究采用体外细菌学实验方法观察不同浓度的玉洁纯和常与之配伍使用的硫酸锌对口腔主 要致龋菌变形链球菌、远缘链球菌生长和产酸的抑制效果，确定抑制所需的浓度，为研制新 型的防龋制剂提供理论依据。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 制剂准备
玉洁纯：〔汽巴精化(中国)有限公司提供〕，因玉洁纯难溶于水，因此先将 其溶于丙二醇中，再用蒸馏水对半稀释加入培养基。硫酸锌：ZnSO4。7H2O(上海化学试 剂总厂提供)，溶于蒸馏水对半稀释加入培养基。
1.2 细菌培养
选用国际参考菌株变形链球菌(Steptococcus mutans Ingbritt,S.m Ing)、远缘链球 菌(Streptococcus sobrinus 6715,S.m 6715)和变形链球菌、远缘链球菌的临床分离菌 株各4株。临床 分离菌株已经涂片镜检、生化鉴定、葡聚糖凝聚实验及DNA G+C定量测定鉴定为变形链球菌 及远缘链球菌。冷冻保存的菌株活化后转种胰蛋白酶消化大豆培养基，微需氧，φ(N2)= 90%，φ(CO2)=5%，37 ℃培养18 h。
, 百拇医药
1.3 生长抑制实验
实验药品：①玉洁纯原液质量浓度自0.005 g/L连续对半稀释5次至0.00016 g/L；②硫酸锌 原液质量浓度自2.5 g/L 连续对半稀释5次至0.08 g/L；③配伍药液：玉洁纯与硫酸锌 质量浓度由低到高相对配伍。
保存的细菌经活化后，取培养物于无菌离心管2500 r/min离心，用生理盐水洗涤两次制成悬 液，置紫外分光光度计调整菌浓度为吸光度值等于1(λ=450 nm)。
抑制组：用无菌微量加样器吸取不同浓度的药液各0.1 ml，分别加入灭菌的4 ml蛋白胨酵母 葡 萄糖培养基中，加样顺序由低浓度到高浓度；药液加毕后再在每试管中加入0.4 ml菌液，振 荡混匀，微需氧φ(N2)=90%、φ(CO2)=5%、37 ℃培养48 h后取出。培养物经旋涡混合 器混匀，通过紫外分光光度计测定吸光度值，并计算生长抑制率：
, 百拇医药
阳性对照组：培养基中不加药液只加菌液。阴性对照：培养基中只加药液不加菌液。
1.4 产酸抑制实验
在测定了各培养基细菌的生长抑制情况后，原培养基用酸度计(pH-3C型，上海雷磁仪器厂)测定培养液的pH值。
2 结 果
玉洁纯、硫酸锌以及它们的配伍对S.m、S.sob的国际参考菌株和临床分离菌株都有显著 的抑制作用，抑制效果见图1～6。
药物质量浓度序列为： 序列号
1
2
3
, 百拇医药
4
5
6
玉洁纯(g/L)
0.005
0.0025
0.0013
0.00063
0.00031
0.00016
硫酸锌(g/L)
2.5
1.25
, 百拇医药
0.62
0.31
0.16
0.08
3 讨 论
由于龋病是由细菌引起的感染性疾病，因此研究人员考虑在洁牙剂中加入抗菌剂以达到 长 期抑菌的目的。目前常用的洗必太虽然能有效地抑制口腔细菌的生长，但长期使用可引起口 腔 粘膜着色、牙石沉积增多和菌群失调。而玉洁纯应用在口腔中具有以下优点：长期使用含玉 洁纯的洁牙剂不干扰正常口腔菌丛的生态平衡、不引起粘膜着色和牙石沉积增多。另外，玉 洁纯能与现有的洁牙剂配方相容，并在中性pH条件下保持稳定的疏水性结构，且易于被口腔 粘膜吸收。
图1 玉洁纯对各菌的生长抑制率
, 百拇医药
图2 硫酸锌对各菌的生长抑制率
图3 玉洁纯、硫酸锌配伍对各菌的生长抑制率
图4 玉洁纯对培养基pH值的影响
图5 硫酸锌对培养基pH值的影响
图6 玉洁纯、硫酸锌配伍对培养基pH值的影响
从实验结果可见，玉洁纯的质量浓度为0.005 g/L时即可有效地抑制口腔主要致龋菌的生 长和产酸，使培养基pH值高于临界pH值5.5。与之相比硫酸锌的质量浓度为1.25 g/L时才 能达到与玉洁纯相似的效果。这可能由于亲脂性的玉洁纯可直接作用于细菌的胞浆膜，抑制 细菌对必需氨基酸的摄取〔2〕；硫酸锌需通过抑制细菌代谢的酶系统起作用，而离 子状态的锌易与培养基内的蛋白质及菌体表面蛋白结合而影响了它的作用效果〔3〕 。
, http://www.100md.com
本实验结果表明硫酸锌不能增强玉洁纯对变形链球菌和远缘链球菌的抑菌效果，此结果与 Kjrhem〔4〕等人的研究结果一致。但有多项临床研究认为锌离子能增强玉洁纯抑 制菌 斑的效果。由于菌斑的形成是一个非常复杂的过程，所以药物的抑菌效果不能完全代表它们 抑制菌斑的效果。Creeth〔5〕等认为玉洁纯在玉洁纯/锌配方中可获得较高的化学电 势因而更多地进入粘膜贮存库，随后释放进入菌斑的浓度也更高。而锌从粘膜贮存库中释放 的速度慢于玉洁纯，在玉洁纯/锌配方中锌的释放时间又比单纯用锌延长7倍。两种抑菌成分 的共同长时作用在临床上表现为持续、高效的抑菌斑效果。
另外，有学者认为实验室保存的国际参考菌株由于长时间的低温保存和反复传代培养可能导 致某些生物学性状的改变。但从本实验的结果来看，玉洁纯、硫酸锌对变形链球菌、远缘链 球菌的国际参考菌株和临床分离株生长、产酸的抑制情况没有显著的差异(P>0.05)。■
参考文献
, 百拇医药
[1]Rosing B,Wannfors B,Volpe AR,et al.The use of a triclosan/copolymer dent ifrice retard the progression of periodontis.J Clin Periodontol,1997,24(12):873
[2]胡德渝，张锦才，万呼春，等.三氯羟苯醚-共聚体牙膏对牙菌斑、牙龈炎的临床效果观 察.华西口腔医学杂志，1997，15(4)：333
[3]Watson GK,Cummons D,Oudera VD.Inhibition of acid production by Streptococcos m untans NCTC 10449 by zinc and the effect of metal specoation.Caries Res,1991,2 5:431
[4]Kjrheim V,Skaare A,Barkvoll P,et al.Antiplaque,antibacterial,and anti-inf lamm atory properties of triclosan polyviylmether maleic acid (PVM-MA)copolymer.Eur J Oral Sci,1996,104(5～6):529
[5]Creeth JE,Abraham PJ,Barliw JA,et al.Oral delivered and clearance of antip laqu e agents from triclosan-containing dentifrices.Int Dent J,1993,43(4 suppl.1):387
收稿日期：1999-08-03
修稿日期：1999-10-22, 百拇医药
单位：上海第二医科大学附属第九人民医院口腔预防科
关键词：龋齿；三氯生；硫酸锌；变形链球菌；远缘链球菌
实用口腔医学杂志000308〔摘要〕 目的：评价玉洁纯、硫酸锌对口腔主要致龋菌的影响，确定抑制细 菌所需的浓度 。方法：使用紫外分光光度计及pH电极检测不同浓度的药物及两者相对配伍使用时对口腔主 要致龋菌-变形链球菌和远缘链球菌的抑制效果。结果：玉洁纯、 硫酸锌均能有效地抑制变 链和远链的生长和产酸，硫酸锌不能增强玉洁纯的抑制效果。结论：初步认为玉洁纯可作为龋病预防用药，硫酸锌在配方中的作用有待进一步探讨。
中图分类号：R780.1 R979.7 文献标识码：A
文章编号：1001-3733(2000)03-0196-03
, http://www.100md.com
The effect of triclosan and zinc sulphate on growth and
acid production of St reptococcus mutans and Streptococcus sobrinus
Sun Lei,Feng Xiping,Liu Yanlin.
(College of Stomatology,Shanghai Second Medical Un iversity,Shanghai 200011)
〔Abstract〕Objective:To evaluate the effect of ticlosan,zinc sulphat e or their combination on the main cariogenic bacteria Streptococcus mutans (S.m) and strep tococcus sobrinus (S.sob) Method:Growth and acid product ion inhibition of the th ree agents at different concentrations on S.m and S.sob were determined with ult raviolet spectrophtometer and pH electrode.Results:Triclos an,zinc sulphate or th eir combination inhibited the growth and acid production of S.m and S.sob .The co mbination of the two agents was not synergic.Conclution:Tr iclosan may be used as a caries prevention agent.
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Key words Dental cazies;Triclosan,Zinc sulphate,Streptococcus mu tans,streptococcus sobrinus▲
玉洁纯(triclosan)，化学名三氯羟苯醚(2’，4，4’-tricloro-2'hydroxydiphenyl ether)，1968年Furia等发现玉洁纯具有广谱的抗菌作用。由于玉洁纯低毒性、低刺激性的 特点，自80年代末90年代初被考虑用于口腔疾病的治疗。玉洁纯能有效地抑制菌斑的形成， 并有抗炎、减少牙石沉积的多重作用，因此它较多地被考虑用于牙龈炎、牙周炎的防治 〔1〕。作为温和的非离子型抗菌剂，玉洁纯对致龋菌也应具有效的抑制作用，但有关这 方面的报道较为少见。
本研究采用体外细菌学实验方法观察不同浓度的玉洁纯和常与之配伍使用的硫酸锌对口腔主 要致龋菌变形链球菌、远缘链球菌生长和产酸的抑制效果，确定抑制所需的浓度，为研制新 型的防龋制剂提供理论依据。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 制剂准备
玉洁纯：〔汽巴精化(中国)有限公司提供〕，因玉洁纯难溶于水，因此先将 其溶于丙二醇中，再用蒸馏水对半稀释加入培养基。硫酸锌：ZnSO4。7H2O(上海化学试 剂总厂提供)，溶于蒸馏水对半稀释加入培养基。
1.2 细菌培养
选用国际参考菌株变形链球菌(Steptococcus mutans Ingbritt,S.m Ing)、远缘链球 菌(Streptococcus sobrinus 6715,S.m 6715)和变形链球菌、远缘链球菌的临床分离菌 株各4株。临床 分离菌株已经涂片镜检、生化鉴定、葡聚糖凝聚实验及DNA G+C定量测定鉴定为变形链球菌 及远缘链球菌。冷冻保存的菌株活化后转种胰蛋白酶消化大豆培养基，微需氧，φ(N2)= 90%，φ(CO2)=5%，37 ℃培养18 h。
, 百拇医药
1.3 生长抑制实验
实验药品：①玉洁纯原液质量浓度自0.005 g/L连续对半稀释5次至0.00016 g/L；②硫酸锌 原液质量浓度自2.5 g/L 连续对半稀释5次至0.08 g/L；③配伍药液：玉洁纯与硫酸锌 质量浓度由低到高相对配伍。
保存的细菌经活化后，取培养物于无菌离心管2500 r/min离心，用生理盐水洗涤两次制成悬 液，置紫外分光光度计调整菌浓度为吸光度值等于1(λ=450 nm)。
抑制组：用无菌微量加样器吸取不同浓度的药液各0.1 ml，分别加入灭菌的4 ml蛋白胨酵母 葡 萄糖培养基中，加样顺序由低浓度到高浓度；药液加毕后再在每试管中加入0.4 ml菌液，振 荡混匀，微需氧φ(N2)=90%、φ(CO2)=5%、37 ℃培养48 h后取出。培养物经旋涡混合 器混匀，通过紫外分光光度计测定吸光度值，并计算生长抑制率：
, 百拇医药
阳性对照组：培养基中不加药液只加菌液。阴性对照：培养基中只加药液不加菌液。
1.4 产酸抑制实验
在测定了各培养基细菌的生长抑制情况后，原培养基用酸度计(pH-3C型，上海雷磁仪器厂)测定培养液的pH值。
2 结 果
玉洁纯、硫酸锌以及它们的配伍对S.m、S.sob的国际参考菌株和临床分离菌株都有显著 的抑制作用，抑制效果见图1～6。
药物质量浓度序列为： 序列号
1
2
3
, 百拇医药
4
5
6
玉洁纯(g/L)
0.005
0.0025
0.0013
0.00063
0.00031
0.00016
硫酸锌(g/L)
2.5
1.25
, 百拇医药
0.62
0.31
0.16
0.08
3 讨 论
由于龋病是由细菌引起的感染性疾病，因此研究人员考虑在洁牙剂中加入抗菌剂以达到 长 期抑菌的目的。目前常用的洗必太虽然能有效地抑制口腔细菌的生长，但长期使用可引起口 腔 粘膜着色、牙石沉积增多和菌群失调。而玉洁纯应用在口腔中具有以下优点：长期使用含玉 洁纯的洁牙剂不干扰正常口腔菌丛的生态平衡、不引起粘膜着色和牙石沉积增多。另外，玉 洁纯能与现有的洁牙剂配方相容，并在中性pH条件下保持稳定的疏水性结构，且易于被口腔 粘膜吸收。
图1 玉洁纯对各菌的生长抑制率
, 百拇医药
图2 硫酸锌对各菌的生长抑制率
图3 玉洁纯、硫酸锌配伍对各菌的生长抑制率
图4 玉洁纯对培养基pH值的影响
图5 硫酸锌对培养基pH值的影响
图6 玉洁纯、硫酸锌配伍对培养基pH值的影响
从实验结果可见，玉洁纯的质量浓度为0.005 g/L时即可有效地抑制口腔主要致龋菌的生 长和产酸，使培养基pH值高于临界pH值5.5。与之相比硫酸锌的质量浓度为1.25 g/L时才 能达到与玉洁纯相似的效果。这可能由于亲脂性的玉洁纯可直接作用于细菌的胞浆膜，抑制 细菌对必需氨基酸的摄取〔2〕；硫酸锌需通过抑制细菌代谢的酶系统起作用，而离 子状态的锌易与培养基内的蛋白质及菌体表面蛋白结合而影响了它的作用效果〔3〕 。
, http://www.100md.com
本实验结果表明硫酸锌不能增强玉洁纯对变形链球菌和远缘链球菌的抑菌效果，此结果与 Kjrhem〔4〕等人的研究结果一致。但有多项临床研究认为锌离子能增强玉洁纯抑 制菌 斑的效果。由于菌斑的形成是一个非常复杂的过程，所以药物的抑菌效果不能完全代表它们 抑制菌斑的效果。Creeth〔5〕等认为玉洁纯在玉洁纯/锌配方中可获得较高的化学电 势因而更多地进入粘膜贮存库，随后释放进入菌斑的浓度也更高。而锌从粘膜贮存库中释放 的速度慢于玉洁纯，在玉洁纯/锌配方中锌的释放时间又比单纯用锌延长7倍。两种抑菌成分 的共同长时作用在临床上表现为持续、高效的抑菌斑效果。
另外，有学者认为实验室保存的国际参考菌株由于长时间的低温保存和反复传代培养可能导 致某些生物学性状的改变。但从本实验的结果来看，玉洁纯、硫酸锌对变形链球菌、远缘链 球菌的国际参考菌株和临床分离株生长、产酸的抑制情况没有显著的差异(P>0.05)。■
参考文献
, 百拇医药
[1]Rosing B,Wannfors B,Volpe AR,et al.The use of a triclosan/copolymer dent ifrice retard the progression of periodontis.J Clin Periodontol,1997,24(12):873
[2]胡德渝，张锦才，万呼春，等.三氯羟苯醚-共聚体牙膏对牙菌斑、牙龈炎的临床效果观 察.华西口腔医学杂志，1997，15(4)：333
[3]Watson GK,Cummons D,Oudera VD.Inhibition of acid production by Streptococcos m untans NCTC 10449 by zinc and the effect of metal specoation.Caries Res,1991,2 5:431
[4]Kjrheim V,Skaare A,Barkvoll P,et al.Antiplaque,antibacterial,and anti-inf lamm atory properties of triclosan polyviylmether maleic acid (PVM-MA)copolymer.Eur J Oral Sci,1996,104(5～6):529
[5]Creeth JE,Abraham PJ,Barliw JA,et al.Oral delivered and clearance of antip laqu e agents from triclosan-containing dentifrices.Int Dent J,1993,43(4 suppl.1):387
收稿日期：1999-08-03
修稿日期：1999-10-22, 百拇医药